阅读说明：本技术 飞扬肠胃炎胶囊在治疗溃疡性结肠炎中的新用途 (New application of Feiyang gastroenteritis capsule in treating ulcerative colitis ) 是由 李瑶 史萌 郑晓晖 王四旺 于 2019-11-11 设计创作，主要内容包括：本发明涉及飞扬肠胃炎胶囊在治疗溃疡性结肠炎中的新用途。本发明发现飞扬肠胃炎胶囊能缓解溃疡性结肠炎小鼠血便、粘液便情况,逆转结肠长度缩短和体重降低趋势；能有效降低溃疡性结肠炎小鼠血清中MPO及促炎因子IL-1β、IL-6、CCL11、MCP-1和MIP-2的含量,并升高IL-10含量；能降低结肠组织中OSM和OSMR的表达；此外,飞扬肠胃炎胶囊还能改善溃疡性结肠炎小鼠的肠道菌群失衡情况,促进肠道微生态平衡。(The invention relates to a new application of a capsule for treating ulcerative colitis. The invention discovers that the Feiyang gastroenteritis capsule can relieve the bloody stool and mucous stool conditions of an ulcerative colitis mouse and reverse the trend of colon length shortening and weight reduction; can effectively reduce the content of MPO and proinflammatory factors IL-1 beta, IL-6, CCL11, MCP-1 and MIP-2 in the blood serum of an ulcerative colitis mouse and increase the content of IL-10; can reduce the expression of OSM and OSMR in colon tissues; in addition, the Feiyang gastroenteritis capsule can also improve the intestinal flora imbalance condition of ulcerative colitis mice and promote intestinal microecological balance.)

飞扬肠胃炎胶囊在治疗溃疡性结肠炎中的新用途

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及飞扬肠胃炎胶囊在治疗溃疡性结肠炎中的新用途。

背景技术

溃疡性结肠炎是一种主要影响结肠和直肠的炎症性肠病，患者通常伴有明显的腹痛、血便和粘液便等症状。研究表明，遗传因素、宿主免疫系统反应、肠道菌群失调及环境因素都与溃疡性结肠炎的发生具有密切关系。目前，尚没有溃疡性结肠炎的有效治疗药物，临床仍以美沙拉嗪为主，但美沙拉嗪口服并不能大量富集在结肠病变部位，因此应用时需要采用美沙拉嗪肠溶颗粒结合灌肠剂及栓剂同时使用。此外，溃疡性结肠炎极易反复，一旦患病，患者需终生服药。尽管随着医药技术的发展，许多生物制剂如TNF-α拮抗剂英夫利昔等在临床试验中对溃疡性结肠炎的治疗取得了可观效果，但仍有高达40％的患者对这类药物没有反应，且在应用生物制剂时，患者还需承担更高的治疗风险以及可能出现的更严重的副作用。因此寻找更为安全有效的溃疡性结肠炎治疗药物仍然迫切。

飞扬肠胃炎胶囊由飞扬草、火炭母和救必应三味药物组成，能泻火解毒，除湿止痢，是临床常用的治疗急、慢性肠胃炎，细菌性痢疾的中药复方制剂。溃疡性结肠炎属于中医学“痢疾”范畴，中医认为，溃疡性结肠炎的发生与肝、脾、肾三脏密切相关，受寒、湿、热等病理因素的影响，治疗应立足整体，详察病机，按照补虚泻实的原则，以清、和、补等法，通过中药复方、单药、中药灌肠等不同形式的中医药疗法，多途径、多靶点、多层次综合作用于患者。在治疗中多以清热利湿、疏肝理脾、平调寒热、健脾益气、温补脾肾等五类为主。检索中国知网专利数据库，目前尚没有飞扬肠胃炎胶囊治疗溃疡性结肠炎的相关专利。

发明内容

本发明提供一种飞扬肠胃炎胶囊在制备预防和/或治疗溃疡性结肠炎药物中的应用。所述飞扬肠胃炎胶囊在预防和/或治疗溃疡性结肠炎的机制是作用于OSM/OSMR通路。

本发明的另一实施方案提供一种飞扬肠胃炎胶囊在调节、平衡肠道菌中的应用。所述肠道菌选自Bacteroidetes、Firmicutes、Proteobacteria中的一种或几种。增加肠道菌Bacteroidetes，降低肠道菌Proteobacteria。

本发明的另一实施方案提供一种飞扬肠胃炎胶囊在降低血清中MPO、促炎因子IL-1β、IL-6、CCL11、MCP-1和MIP-2的含量中的应用。

本发明的另一实施方案提供一种飞扬肠胃炎胶囊在升高IL-10含量中的应用。

本发明的另一实施方案，提供一种飞扬肠胃炎胶囊在降低结肠组织中OSM和OSMR的表达中的应用。

本发明所述的飞扬肠胃炎胶囊的【处方】：飞扬草1.0-5.0份，火炭母0.2-3.0份，救必应0.1-1.0份，上述份指的是重量份。

本发明所述的飞扬肠胃炎胶囊的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

按照处方量，以上三味药物，取适量救必应粉碎，得细粉，备用。剩余救必应与其他两味药加水煎煮两次，第一次加8倍量水，煎煮2h，第二次加6倍量水，煎煮1h，合并煎液，滤过，滤液浓缩成相对密度1.25-1.30(70℃热测)的稠膏，加上述救必应细粉及辅料(适量赋形剂、稳定剂或表面活性剂)，混匀，制粒，装胶囊，即得成品。

本发明提供一种飞扬肠胃炎胶囊在预防和治疗溃疡性结肠炎中的应用，其剂量为0.8-3.2g/kg(对小鼠而言)。上述应用，其特征在于所述飞扬肠胃炎胶囊能缓解溃疡性结肠炎小鼠血便、粘液便情况，逆转结肠长度缩短和体重降低趋势；能有效降低溃疡性结肠炎小鼠血清中MPO及促炎因子IL-1β、IL-6、CCL11、MCP-1和MIP-2的含量，并升高IL-10含量；能降低结肠组织中OSM和OSMR的表达；此外，飞扬肠胃炎胶囊还能改善溃疡性结肠炎小鼠的肠道菌群失衡情况，促进肠道微生态平衡。

与现有技术相比，本发明的优点在于：

(1)本发明将飞扬肠胃炎胶囊开发为预防和治疗溃疡性结肠炎的药物，属于老药新用，扩大了飞扬肠胃炎胶囊的新适应症；

(2)本发明发现飞扬肠胃炎胶囊仅口服就能对溃疡性结肠炎产生较为理想的治疗效果，且从抗炎和改善肠道菌群多发面发挥作用，这也体现了中医药配伍使用后的多靶点效应；

(3)本发明对飞扬肠胃炎胶囊在治疗溃疡性结肠炎中的剂量进行探索，发现飞扬肠胃炎胶囊对溃疡性结肠炎的预防和治疗效果呈现剂量依赖性，尤其以中剂量和高剂量效果更为显著，确定了飞扬肠胃炎胶囊的最佳使用剂量。

附图说明

图1是飞扬肠胃炎胶囊对溃疡性结肠炎小鼠的病理改善情况图，(a)第8d各组结肠图；(b)结肠长度统计图；(c)第1-8d小鼠体重变化情况；(d)小鼠血清中MPO含量；(e)第8d各组小鼠结肠组织病理图；(f)结肠组织炎症评分；(g)各组小鼠疾病活动指数。

图2是飞扬肠胃炎胶囊对溃疡性结肠炎小鼠血清中炎症因子的影响图，(a-f)各组小鼠血清中IL-1β、IL-6、IL-10、CCL11、MCP-1和MIP-2含量。

图3是各组小鼠结肠组织中OSM及OSMR表达情况图，(a-c)正常组、模型组及飞扬肠胃炎胶囊高剂量组小鼠结肠中OSM、OSMR和IL6ST的mRNA水平；(d,e)正常组、模型组及飞扬肠胃炎胶囊高剂量组小鼠结肠中IL-6表达水平；(f-i)正常组、模型组及飞扬肠胃炎胶囊高剂量组小鼠结肠中OSM、OSMR和IL6ST的蛋白表达水平。

图4是各组小鼠肠道菌群情况图，(a)chao1指数稀释曲线；(b)PCA图；(c)样品聚类树；(d)Veen图；(e-f)各组小鼠肠道微生物在门及属水平的相对丰度。

具体实施方式

为了便于对本发明的进一步理解，下面提供的实施案例对其做了更详细的说明。但这些实施案例仅为了更好的理解本发明内容，而并非用来限定本发明的范围和实施原则，本发明的实施方式不限于以下内容。

实施材料与方法

实验药物：飞扬肠胃炎胶囊(陕西君碧莎制药有限公司，批准文号：国药准字Z20080523)；美沙拉嗪(上海爱的发制药有限公司，批准文号：H20143164)；葡聚糖硫酸钠(分子量36000-50000，MP Biomedicals，Canada)。

动物：C57BL/6J小鼠48只，雄性，6-8周龄，体重22-24g，购于空军军医大学实验动物中心[SCXK(军)2012-0007]，适应性饲养一周后用于实验。人工控制光照昼夜12h交替，室内温度23℃-25℃，湿度60％-70％。

试剂：小鼠MPO/ELISA检测试剂盒(杭州联科生物)、IL-1β、IL-6、IL-10、MCP-1、MIP-2和CCL11小鼠MILLIPLEX MAP多因子检测试剂盒(Merck Millipore)、E.Z.N.A.

Stool DNA提取试剂盒(Omega)、OSM抗体(Invitrogen)、OSMR抗体(abcam)、IL6ST抗体(OriGene)。

实验方法：本发明中小鼠通过自由饮用2.5％葡聚糖硫酸钠溶液建立溃疡性结肠炎模型。小鼠随机分为6组，分别为正常组(图中用Control表示)、模型组(图中用DSS表示)、飞扬肠胃炎胶囊低剂量组(图中用FYCL表示，0.8g/kg)、飞扬肠胃炎胶囊中剂量组(图中用FYCM表示，1.6g/kg)、飞扬肠胃炎胶囊高剂量组(图中用FYCH表示，3.2g/kg)和美沙拉嗪阳性对照组(图中用Mesalazine表示)。正常组小鼠自由饮用自来水，其余组小鼠饮用2.5％葡聚糖硫酸钠溶液，共7d，与此同时，各给药组每天灌胃相应的治疗药物，正常组和模型组灌胃等量生理盐水。

第8d上午，小鼠用***吸入麻醉后，眼底静脉丛采血，分离血清，用于MPO、IL-1β、IL-6、IL-10、CCL11、MCP-1和MIP-2检测。分离结肠，测量长度后，快速分离肠道内容物，用于肠道菌群检测；预冷的生理盐水将结肠清洗干净后，分为两部分，一部分用10％中性甲醛固定，另一部分液氮中冻存，用于组织中OSM和OSMR表达量的检测。

统计分析：所有实验数据采用Means±SD表示，SPSS18.0进行组间差异分析，多组间差异比较用单因素方差分析(One-way ANOVA)，P<0.05即代表有显著性差异。

实验结果

一般指标评价：实验第8d，正常组小鼠大便成形，毛发有光泽，精神状态良好，体重增长，结肠组织肉眼观察无病变；模型组小鼠毛色无光泽，精神萎靡，均出现严重的粘液便和血便，体重明显下降，结肠组织显著缩短，有溃疡面形成；与模型组相比，飞扬肠胃炎胶囊低、中、高剂量干预治疗组小鼠精神状态良好，血便、粘液便减轻，体重降低缓慢，结肠缩短程度减小，并呈现剂量依赖性，以高剂量效果最为显著，见图1a-c，g。

组织病理学评价：组织病理学结果显示，正常组小鼠结肠组织形态结构完整，细胞排列紧密，无炎性细胞浸润；模型组小鼠结肠组织结构紊乱，部分隐窝破坏，细胞坏死，大量炎性细胞浸润；与模型组相比，飞扬肠胃炎胶囊各剂量组结肠组织病理情况有所改善，其中低剂量组粘膜下仍可见大量炎性细胞，但组织结构相对完整，而中剂量和高剂量组结肠组织结构完整，仅可见少量炎性细胞浸润。见图1e-f。

飞扬肠胃炎胶囊对溃疡性结肠炎小鼠血清中MPO和炎症因子的影响：与正常相比，模型组小鼠血清中MPO水平显著增加，炎症因子IL-1β、IL-6、CCL11、MCP-1和MIP-2显著升高，抗炎因子IL-10降低；与模型组相比，飞扬肠胃炎胶囊能够呈剂量依赖性降低溃疡性结肠炎小鼠血清中的MPO及促炎因子IL-1β、IL-6、CCL11、MCP-1和MIP-2水平，并能同时增加抗炎因子IL-10的含量。

飞扬肠胃炎胶囊对溃疡性结肠炎小鼠结肠中OSM和OSMR的影响：RT-PCR和Westernblot技术对小鼠结肠中OSM的mRNA和蛋白水平检测发现，模型组小鼠的OSM蛋白和mRNA水平与正常组相比有所增加。飞扬肠胃炎胶囊治疗后OSM mRNA水平和蛋白质水平降低(见图3a，6g，6f)。进一步评估OSM的下游调节因子，包括OSMR和IL6ST，如图6b和图6c所示，与正常组相比，模型组中OSMR的mRNA水平升高，而经飞扬肠胃炎胶囊治疗后，OSMR的mRNA水平降低。但IL6ST的mRNA水平在所有组中均无明显变化。随后，我们检测了OSMR和IL6ST的蛋白质水平，相似的结果表明模型组的OSMR蛋白质水平与正常组相比显著增加，而IL6ST的蛋白质水平没有变化(图3g，6h，6i)。由此可见，飞扬肠胃炎胶囊通过作用于OSM/OSMR通路对溃疡性结肠炎小鼠发挥治疗作用。

飞扬肠胃炎胶囊对溃疡性结肠炎小鼠肠道菌群的影响：肠道微生物与溃疡性结肠炎的发生具有密切关系。16S rDNA测序发现，与正常组相比，模型组小鼠肠道菌群多样性下降了26.5％，而飞扬肠胃炎胶囊治疗组小鼠肠道菌群多样性逐渐恢复，以高剂量组最显著(见图4a-d)。从门的分类水平上看，正常组小鼠肠道菌以Bacteroidetes和Firmicutes为主，相对丰度分别为51.86％和37.33％，而Proteobacteria相对丰度仅为7.68％；与正常组比较，模型组小鼠Bacteroidetes相对丰度下降为12.43％，而Proteobacteria则显著增加，相对丰度为36.58％。与模型组相比，飞扬肠胃炎胶囊组小鼠肠道菌群逐渐趋于正常组，如飞扬肠胃炎胶囊高剂量组小鼠肠道菌Bacteroidetes相对丰度恢复为60.65％，而Proteobacteria则下降为7.12％(见图4e-f)。

由以上结果可见，飞扬肠胃炎胶囊能呈剂量依赖性的预防和治疗溃疡性结肠炎。