阅读说明：本技术 一种生物素中间体的合成方法 (Synthesis method of biotin intermediate ) 是由 张兴贤 张洪波 刘洪涛 于 2019-08-05 设计创作，主要内容包括：本发明属于药物化学合成领域,具体公开了一种生物素中间体5-((3aS,6aR)-1,3-二苄基-4-羟基-2-氧代己基-1H-呋喃并[3,4-d]咪唑-4-基)-5-烯酸的合成方法,包括：先以(3aS,6aR)-1,3-二苄基四氢-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-2,4-二酮为起始原料,与特定Normant’s试剂XMg(CH<Sub>2</Sub>)<Sub>5</Sub>OMgCl进行格氏加成反应,再在氮氧化物和氧化剂的作用下进行绿色催化氧化制得。本发明方法的反应条件温和、操作简便、收率高、化学选择性好、生产成本低,制得的生物素中间体经过一步反应脱去双苄基即可制得生物素,大大简化了生物素的生产流程。(The invention belongs to the field of pharmaceutical chemistry synthesis, and particularly discloses a biotin intermediate 5- ((3aS, 6aR) -1, 3-dibenzyl-4-hydroxy-2-oxohexyl-1H-furo [3,4-d ]]A method for synthesizing imidazol-4-yl) -5-enoic acid comprising: firstly, (3aS,6aR) -1, 3-dibenzyl tetrahydro-1H-thieno [3,4-d]Imidazole-2, 4-diones as starting material, with specific Normant's reagent XMg (CH) 2 ) 5 And carrying out Grignard addition reaction on the OMgCl, and carrying out green catalytic oxidation under the action of a nitrogen oxide and an oxidant. The method has the advantages of mild reaction conditions, simple and convenient operation, high yield, good chemical selectivity and low production cost, and the prepared biotin intermediate can be used for removing the dibenzyl group through one-step reaction to prepare the biotin, thereby greatly simplifying the production process of the biotin.)

一种生物素中间体的合成方法

技术领域

本发明属于药物化学合成领域，具体涉及生物素中间体5-((3aS， 6aR)-1,3-二苄基-4-羟基-2-氧代己基-1H-呋喃并[3,4-d]咪唑-4-基)-5-烯酸的合成方法。

背景技术

生物素又被称为维生素H，是一种水溶性维生素，其主要存在于动物的内脏、牛奶、蛋黄和酵母中。生物素在生物体中作为各种羧化酶的辅酶，在生物体新陈代谢中发挥重要作用。如果人体内缺乏适当的生物素，会出现贫血、食欲减退、呕吐、皮炎和毛发脱落等生理症状。同样如果牲畜缺少生物素，会导致牲畜发育迟缓，生长缓慢，严重的甚至会导致牲畜死亡。因此，生物素常作为添加剂广泛应用在食品饮料和动物饲料中。

自生物素发现以来人们对d-生物素的产业化研究从未停止。d-生物素结构中含有一个五碳侧链，如何从(3aS,6aR)硫内酯出发，高效引入戊酸侧链是当前研究人员关注的焦点。目前根据引入碳链个数的不同可以分为以下几种：C3+C2、C4+C1、C5+C0、C1+C4、C6-C1。

Goldberg和Sternbach等(US2489236)首次报道了采用C3+C2策略，实现戊酸侧链的引入。首先通过(3aS,6aR)硫内酯的格氏加成反应引入三碳侧链，再经脱水、加氢、酸性水解，生成硫鎓盐，然后与丙二酸二乙酯钠发生亲核取代反应，水解脱羧实现五碳侧链的引入，如下式所示：

陈芬儿(陈芬儿等，d生物素的不对称全合成研究，药学学报， 1999(11):822-827)以炔丙醚为起始原料，与格氏试剂交换形成炔基镁试剂。然后与(3aS,6aR)硫内酯加成，引入三碳侧链，经炔基还原、脱水、催化加氢、水解形成硫鎓盐，最后与丙二酸二乙酯缩合、脱羧，实现五碳侧链的引入，如下式示所示：

专利(US 2489232)通过硫内酯的格氏反应引入一个四碳侧链，经脱水、催化加氢、溴化、氰化、水解引入五碳侧链，如下式所示：

文献(Journal of the Pharmaceutical Society of Japan,1968,88(8): 964-970)采用1,4-二氯丁烷双格氏试剂与硫内酯加成引入四碳侧链，然后与二氯化碳加成，实现五碳侧链的构建，如下式所示：

文献(Advanced Synthesis&Catalysis,2005,347(4):549-554)以甲氧甲基格氏试剂与(3aS,6aR)硫内酯加成引入醛基，经witting反应构建五碳侧链，如下式所示：

陈芬儿等人(Synthesis,2003,2003(14):2155-2160)利用氰基锌有机试剂与(3aS,6aR)硫内酯发生Fukuyama偶联反应引入五碳侧链，如下式所示：

陈芬儿等人(Synthesis,2000，(14):2004-2008)采用C6-C1的策略成功实现戊酸侧链的引入，将缩酮格氏试剂与(3aS，6aR)硫内酯发生Grignard 反应引入侧链，经脱保护、脱水得到烯酮，然后经碘仿反应、加氢完成五碳侧链制备，如下式所示：

综上所述，现有文献主要是通过Witting反应、Grignard反应以及 Fukuyama偶联反应来实现生物素五碳侧链的引入，但是上述反应存在侧链试剂价格昂贵、反应条件苛刻、操作繁琐、污染严重、收率低以及化学选择性不佳等问题。因此，寻找一种廉价易得、操作简单、成本低的试剂来实现生物素戊酸侧链的构建具有极强的实际意义。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种生物素中间体的合成方法，通过简单的格氏加成反应引入了戊酸侧链，该方法反应条件温和、操作简便、收率高，非常适合工业化大规模生产。

为实现上述目的，本发明采用如下技术路线：

一种生物素中间体的合成方法，包括：将式(I)所示化合物与Norman’ s试剂进行格氏加成反应，再将得到的式(II)所示化合物在氮氧化物和氧化剂的作用下，进行催化氧化得到式(III)所示的生物素中间体，具体反应式如下：

所述Normant’s试剂为XMg(CH₂)₅OMgCl，其中，X为卤素Cl、 Br或I。

本发明方法利用特定结构的Normant’s试剂进行格氏加成反应，一步反应即在硫内酯的C4位上引入了五碳侧链，再通过简单氧化就制得了该生物素中间体，制得的生物素中间体经过一步反应脱去双苄基即可制得生物素，大大简化了生物素的生产流程，适合生物素的工业化大规模生产。

作为优选，所述Normant’s试剂为ClMg(CH₂)₅OMgCl。

所述式(I)所示化合物与Normant’s试剂的摩尔比为1：1.2～3.0，进一步优选为1：1.8～2.2。

所述的氮氧化合物为2,2,6,6-四甲基哌啶氮氧化物(TEMPO)、2-氧基-2-氮代金刚烷(AZADO)、氮杂双环[3.3.1N-烃氧基]壬甲氮氧自由基 (ABNO)中的任意一种或多种，优选为TEMPO和ABNO的混合物。

所述的氧化剂为NaClO、NaClO₂、Ca(ClO)₂、Ca(ClO₂)₂或NaBrO中的任意一种或多种，优选为NaClO和NaClO₂的混合物。

所述式(I)所示化合物、氮氧化合物与氧化剂的摩尔比为1：0.01～0.15： 1～5，优选为1：0.06～0.08：1～3。

所述生物素中间体的合成方法，具体包括以下步骤：

(1)将式(I)所示的化合物溶于有机溶剂A中，于-10～70℃条件下滴加Normant’s试剂反应5～15h，经后处理得到式(II)所示化合物；

(2)将步骤(1)得到的式(II)所示化合物、氮氧化合物和氧化剂溶于有机溶剂B中，于10～60℃条件下反应4～10h，经后处理得到式(III) 所示的生物素中间体。

步骤(1)中，作为优选，于10～15℃条件下滴加Normant’s试剂反应 5～15h。

所述的有机溶剂A为甲苯、***、四氢呋喃或2-甲基四氢呋喃，进一步优选为四氢呋喃。以式(I)所示化合物的质量计，所述的有机溶剂A 的体积用量为5～10mL/g。

步骤(2)中，作为优选，于35～40℃条件下反应4～10h。

所述的有机溶剂B为二氯甲烷、氯仿、甲苯、乙腈或四氢呋喃，优选为四氢呋喃。以式(I)所示化合物的质量计，所述的有机溶剂A的体积用量为3～10mL/g。

在上述优选参数条件下进行反应，可以使反应更充分，能进一步提高反应原料利用率和产物的收率。

步骤(1)中，所述后处理的方法为：反应结束后，向所得反应液中加入饱和氯化铵溶液进行淬灭，静置分层，有机相浓缩，过柱纯化后得到式(II)所示的化合物。

步骤(2)中，所述后处理的方法为：反应结束后，向所得反应液中加入饱和亚硫酸氢钠进行淬灭，静置分层，有机相浓缩，过柱纯化后得到式(III)所示的生物素中间体。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

本发明工艺路线简单，采用廉价易得的(3aS,6aR)-1,3-二苄基四氢 -1h-噻吩并[3,4-d]咪唑-2,4-二酮为起始原料，经格氏加成、催化氧化反应，完成五碳侧链的引入，制得生物素中间体，具有反应条件温和、操作简便、收率高、化学选择性好、生产成本低等优点。该生物素中间体经过一步反应脱去双苄基即可制得生物素，大大简化了生物素的生产流程，非常适合工业化生产，具有较大的实际应用价值和社会经济效益。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明的保护范围并不仅限于此。

(一)制备式(II)所示的(3aS，6aR)-1,3-二苄基-4-羟基-4-(5-羟戊基) 四氢-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-2(3H)-酮：

实施例1：

(1)Normant’s试剂(化合物3)的制备：

将5-氯-1-戊醇(7.6g，62.2mmol)溶于40mL无水THF，冰浴下缓慢滴加甲基氯化镁(24mL，2.5mol/L)，产生大量气泡，滴加完毕后继续反应半小时。

将镁条(2.9g，120.8mmol)加入到20mL无水THF中，升温至70℃，加入0.75mL 1,2-二溴乙烷，引发反应，再缓慢滴加上述氯化物2，滴加完毕后，保持70℃回流反应1小时，静置2小时后得到化合物3备用， Norman’s试剂浓度约为0.65mol/L。

(2)格氏加成反应：

在250mL的三口烧瓶中加入式I所示的硫内酯(3.0g，8.88mmol)，向反应瓶中加入15mL无水THF，氮气保护，在10-15℃条件下滴加新制的化合物3(27.3mL，17.75mmol)，滴加完毕后，移除冰浴，室温搅拌5h，TLC显示原料反应完全。

缓慢加入10mL饱和氯化铵溶液，分液，用30mL×2乙酸乙酯萃取水层，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得黄色油状物3.14g，收率为83％，R_f＝0.35 (石油醚:乙酸乙酯＝1:2)。

¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ:7.33(dd,J＝14.1,7.6Hz,7H),7.27(dd,J ＝12.0,4.7Hz,4H),5.46(t,J＝7.1Hz,1H),4.95(d,J＝15.6Hz,1H),4.81(d, J＝15.3Hz,1H),4.28(d,J＝7.7Hz,1H),4.22(d,J＝15.3Hz,1H),4.13-3.98 (m,2H),3.62(t,J＝6.0Hz,4H),2.96(qd,J＝11.8,4.5Hz,2H),2.08(ddd,J＝ 32.0,14.5,7.3Hz,2H),1.64-1.50(m,5H),1.43(dt,J＝14.3,7.2Hz,4H).

实施例2

在250mL的三口烧瓶中加入式(I)所示的硫内酯(3.0g，8.88mmol)，向反应瓶中加入15mL无水THF，氮气保护，在10-15℃条件下滴加按照实施例1所述方法新制的化合物3(16.5mL，10.7mmol)，滴加完毕后，移除冰浴，室温搅拌5h，TLC显示原料反应完全。

缓慢加入10mL饱和氯化铵溶液，分液，用30mL×2乙酸乙酯萃取水层，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得黄色油状物2.6g，收率为68％，R_f＝0.35 (石油醚:乙酸乙酯＝1:2)。

实施例3

在250mL的三口烧瓶中加入式(I)所示的硫内酯(2.1g，6.21mmol)，向反应瓶中加入15mL无水THF，氮气保护，在10-15℃条件下滴加按照实施例1所述方法新制的化合物3(28.7mL，18.64mmol)，滴加完毕后，移除冰浴，室温搅拌5h，TLC显示原料反应完全。

缓慢加入10mL饱和氯化铵溶液，分液，用30mL×2乙酸乙酯萃取水层，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得黄色油状物2.1g，收率为79％，R_f＝0.35 (石油醚:乙酸乙酯＝1:2)。

实施例4

在250mL的三口烧瓶中加入式(I)所示的硫内酯(2.1g，6.21mmol)，向反应瓶中加入15mL无水THF，氮气保护，在10-15℃条件下滴加按照实施例1所述方法新制的化合物3(17.2mL，11.2mmol)，滴加完毕后，移除冰浴，室温搅拌5h，TLC显示原料反应完全。

缓慢加入10mL饱和氯化铵溶液，分液，用30mL×2乙酸乙酯萃取水层，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得黄色油状物2.15g，收率为81％，R_f＝0.35 (石油醚:乙酸乙酯＝1:2)。

实施例5

在250mL的三口烧瓶中加入式(I)所示的硫内酯(2.6g，7.69mmol)，向反应瓶中加入15mL无水THF，氮气保护，在-10℃条件下滴加按照实施例1所述方法新制的化合物3(23.65mL，15.38mmol)，滴加完毕后，移除冰浴，室温搅拌5h，TLC显示原料反应完全。

缓慢加入10mL饱和氯化铵溶液，分液，用30mL×2乙酸乙酯萃取水层，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得黄色油状物1.9g，收率为58％，R_f＝0.35 (石油醚:乙酸乙酯＝1:2)。

实施例6

在250mL的三口烧瓶中加入式(I)所示的硫内酯(2.6g，7.69mmol)，向反应瓶中加入15mL无水THF，氮气保护，在0℃条件下滴加按照实施例1所述方法新制的化合物3(23.65mL，15.38mmol)，滴加完毕后，移除冰浴，室温搅拌5h，TLC显示原料反应完全。

缓慢加入10mL饱和氯化铵溶液，分液，用30mL×2乙酸乙酯萃取水层，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得黄色油状物2.03g，收率为62％，R_f＝0.35 (石油醚:乙酸乙酯＝1:2)。

实施例7

在250mL的三口烧瓶中加入式(I)所示的硫内酯(1.5g，4.44mmol)，向反应瓶中加入15mL无水THF，氮气保护，在室温条件下滴加按照实施例1所述方法新制的化合物3(13.7mL，8.88mmol)，滴加完毕后，移除冰浴，室温搅拌5h，TLC显示原料反应完全。

缓慢加入10mL饱和氯化铵溶液，分液，用30mL×2乙酸乙酯萃取水层，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得黄色油状物1.42g，收率为75％，R_f＝0.35 (石油醚:乙酸乙酯＝1:2)。

实施例8

在250mL的三口烧瓶中加入式(I)所示的硫内酯(1.5g，4.44mmol)，向反应瓶中加入15mL无水THF，氮气保护，在50℃条件下滴加按照实施例1所述方法新制的化合物3(13.7mL，8.88mmol)，滴加完毕后，移除冰浴，室温搅拌5h，TLC显示原料反应完全。

缓慢加入10mL饱和氯化铵溶液，分液，用30mL×2乙酸乙酯萃取水层，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得黄色油状物1.34g，收率为71％，R_f＝0.35 (石油醚:乙酸乙酯＝1:2)。

实施例9

在250mL的三口烧瓶中加入式(I)所示的硫内酯(1.2g，3.55mmol)，向反应瓶中加入15mL无水THF，氮气保护，在70℃条件下滴加按照实施例1所述方法新制的化合物3(11.0mL，7.10mmol)，滴加完毕后，移除冰浴，室温搅拌5h，TLC显示原料反应完全。

缓慢加入10mL饱和氯化铵溶液，分液，用30mL×2乙酸乙酯萃取水层，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得黄色油状物1.00g，收率为66％，R_f＝0.35 (石油醚:乙酸乙酯＝1:2)。

实施例10

(1)Normant’s试剂(化合物6)的制备

将5-溴-1-戊醇(10.4g，62.2mmol)溶于40mL无水THF，冰浴下缓慢滴加甲基氯化镁(24mL，2.5mol/L)，产生大量气泡，滴加完毕后继续反应半小时。

将镁条(2.9g，120.8mmol)加入到20mL无水THF中，升温至70℃，加入0.75mL 1,2-二溴乙烷，引发反应，再缓慢滴加上述溴化物5，滴加完毕后，保持70℃回流反应1小时，静置2小时后得到化合物6备用， Normant’s试剂浓度约为0.65mol/L。

(2)格氏加成反应

在250mL的三口烧瓶中加入式(I)所示的硫内酯(3.0g，8.88mmol)，向反应瓶中加入15mL无水THF，氮气保护，在10-15℃条件下滴加新制的化合物6(27.3mL，17.75mmol)，滴加完毕后，移除冰浴，室温搅拌5h，TLC显示原料反应完全。

缓慢加入10mL饱和氯化铵溶液，分液，用30mL×2乙酸乙酯萃取水层，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得黄色油状物2.91g，收率为77％，R_f＝0.35 (石油醚:乙酸乙酯＝1:2)。

实施例11

(1)Normant’s试剂(化合物9)的制备

将5-碘-1-戊醇(13.3g，62.2mmol)溶于40mL无水THF，冰浴下缓慢滴加甲基氯化镁(24mL，2.5mol/L)，产生大量气泡，滴加完毕后继续反应半小时。

将镁条(2.9g，120.8mmol)加入到20mL无水THF中，升温至70℃，加入0.75mL 1,2-二溴乙烷，引发反应，再缓慢滴加上述碘化物8，滴加完毕后，保持70℃回流反应1小时，静置2小时后得到化合物9备用， Normant’s试剂浓度约为0.65mol/L。

(2)格氏加成反应

在250mL的三口烧瓶中加入式(I)所示的硫内酯(3.0g，8.88mmol)，向反应瓶中加入15mL无水THF，氮气保护，在10-15℃条件下滴加新制的化合物9(27.3mL，17.75mmol)，滴加完毕后，移除冰浴，室温搅拌5h，TLC显示原料反应完全。

缓慢加入10mL饱和氯化铵溶液，分液，用30mL×2乙酸乙酯萃取水层，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得黄色油状物2.50g，收率为65％，R_f＝0.35 (石油醚:乙酸乙酯＝1:2)。

(二)5-((3aS，6aR)-1,3-二苄基-4-羟基-2-氧代己基-1H-呋喃并[3,4-d] 咪唑-4-基)五烯酸的制备

实施例12

称取实施例1制得的式(II)所示的化合物2.0g(4.65mmol)于50mL 的三口烧瓶内，向反应瓶内加入6mL乙腈，搅拌溶清，依次向反应瓶中加入0.05g(0.32mmol)TEMPO、1.45g(9.3mmol)NaH₂PO₄、0.84g (9.28mmol)NaClO₂、6mL水、0.3mL 5.0wt％的NaClO溶液，在温度为10℃条件下反应5h后，取反应液TLC检测(甲醇:乙酸乙酯＝1:5) 显示原料已经反应完全。待反应液温度升至室温，向反应液中加入饱和亚硫酸氢钠进行淬灭，静置分层，有机层减压蒸馏，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得白色固体0.8g，得到式(III)所示的生物素中间体，其反应摩尔收率为39％，R_f＝0.51(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)。

mp 91.4-92.8℃,¹H-NMR(500MHz,DMSO)δ:7.42-7.14(m,10H), 4.74(d,J＝15.3Hz,1H),4.36(dd,J＝6.7,3.5Hz,3H),4.15(d,J＝8.2Hz, 1H),4.03-3.88(m,1H),3.70(d,J＝15.3Hz,1H),2.85(d,J＝18.4Hz,1H), 2.73(dd,J＝14.1,2.6Hz,1H),2.42(dd,J＝14.1,9.8Hz,1H),2.28-2.16(m, 1H),1.44-1.28(m,5H),1.25(t,J＝6.5Hz,1H),1.18(dd,J＝15.0,7.6Hz,2H). ¹³C-NMR(125MHz,DMSO)δ:209.10,160.46,138.10,136.98,128.64,128.38,127.80,127.61,127.48,127.05,62.32,60.61,54.10,49.39,46.02, 45.22,43.08,32.39,24.97,22.41.

实施例13

称取实施例1制得的式(II)所示的化合物2.0g(4.65mmol)于50mL 的三口烧瓶内，向反应瓶内加入6mL乙腈，搅拌溶清，依次向反应瓶中加入0.05g(0.32mmol)TEMPO、1.5g(9.3mmol)NaH₂PO₄、0.84g(9.3mmol) NaClO₂、6mL水、0.3mL 5.0wt％的NaClO溶液，在温度为20℃条件下反应5h后，取反应液TLC检测(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)显示原料已经反应完全。待反应液温度至室温，向反应液中加入饱和亚硫酸氢钠进行淬灭，静置分层，有机层减压蒸馏，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得白色固体1.16g，得到式(III)所示的生物素中间体，反应摩尔收率为 57.1％，R_f＝0.51(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)。

实施例14

称取实施例1制得的式(II)所示的化合物2.4g(5.65mmol)于50mL 的三口烧瓶内，向反应瓶内加入7mL乙腈，搅拌溶清，依次向反应瓶中加入0.06g(0.39mmol)TEMPO、1.76g(11.28mmol)NaH₂PO₄、1.02g(11.28 mmol)NaClO₂、7.5mL水、0.3mL 5.0wt％的NaClO溶液，用油浴锅加热至35℃，反应5h后，取反应液TLC检测(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)显示原料已经反应完全。停止加热，反应液温度降至室温后，向反应液中加入饱和亚硫酸氢钠进行淬灭，静置分层，有机层减压蒸馏，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得白色固体2.2g，得到式(III)所示的生物素中间体，其反应摩尔收率为88.5％，R_f＝0.51(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)。

实施例15

称取实施例1制得的式(II)所示的化合物2.4g(5.65mmol)于50mL 的三口烧瓶内，向反应瓶内加入7mL的乙腈，搅拌澄清，依次向反应瓶中加入0.06g(0.39mmol)TEMPO、1.76g(11.28mmol)NaH₂PO₄、1.02g(11.28mmol)NaClO₂、7.5mL H₂O、0.3mL 5.0wt％的NaClO，用油浴锅加热至50℃，反应5h后，取反应液TLC检测(甲醇:乙酸乙酯＝1: 5)显示原料已经反应完全。停止加热，反应液温度降至室温后，向反应液中加入饱和亚硫酸氢钠进行淬灭，静置分层，有机层减压蒸馏，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得白色固体1.45g，得到式(III)所示的生物素中间体，其反应摩尔收率为58.2％，R_f＝0.51(甲醇:乙酸乙酯＝1: 5)。

实施例16

称取实施例1制得的式(II)所示的化合物1.8g(4.24mmol)于50mL 的三口烧瓶内，向反应瓶内加入5mL乙腈，搅拌溶清，依次向反应瓶中加入0.05g(0.29mmol)TEMPO、1.32g(8.46mmol)NaH₂PO₄、0.77g(8.51 mmol)NaClO₂、5mL水、0.3mL 5.0wt％的NaClO溶液，在温度为60℃条件下反应5h后，取反应液TLC检测(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)显示原料已经反应完全。待反应液温度降至室温，向反应液中加入饱和亚硫酸氢钠进行淬灭，静置分层，有机层减压蒸馏，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得白色固体1.02g，得到式(III)所示的生物素中间体，其反应摩尔收率为54.5％，R_f＝0.51(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)。

实施例17

称取实施例1制得的式(II)所示的化合物1.2g(2.82mmol)于250mL 的三口烧瓶内，向反应瓶内加入3.5mL乙腈，搅拌溶清，依次向反应瓶中加入0.03g(0.19mmol)TEMPO、1.04g(5.64mmol)Na₂HPO₄、0.51g(5.64 mmol)NaClO₂、3.2mL水、0.2mL 5.0wt％的NaClO溶液，在温度为35℃条件下反应5h后，取反应液TLC检测(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)显示原料已经反应完全。待反应液温度降至室温，向反应液中加入饱和亚硫酸氢钠进行淬灭，静置分层，有机层减压蒸馏，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得白色固体0.98g，得到式(III)所示的生物素中间体，其反应摩尔收率为78.8％，R_f＝0.51(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)。

实施例18

称取实施例1制得的式(II)所示的化合物1.2g(2.82mmol)于50mL 的三口烧瓶内，向反应瓶内加入3.5mL乙腈，搅拌溶清，依次向反应瓶中加入0.03g(0.19mmol)TEMPO、1.67g(5.64mmol)K₂HPO₄、0.51g(5.64 mmol)NaClO₂、3.2mL水、0.2mL 5.0wt％的NaClO溶液，在温度为35℃条件下反应5h后，取反应液TLC检测(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)显示原料已经反应完全。待反应液温度降至室温，向反应液中加入饱和亚硫酸氢钠进行淬灭，静置分层，有机层减压蒸馏，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得白色固体0.93g，得到式(III)所示的生物素中间体，其反应摩尔收率为75.0％，R_f＝0.51(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)。

实施例19

称取实施例1制得的式(II)所示的化合物1.5g(3.39mmol)于50mL 的三口烧瓶内，向反应瓶内加入4.0mL乙腈，搅拌溶清，依次向反应瓶中加入0.03g(0.24mmol)TEMPO、0.92g(6.78mmol)KH₂PO₄、0.61g(6.78 mmol)NaClO₂、4.5mL水、0.2mL 5.0wt％的NaClO溶液，在温度为35℃条件下反应5h后，取反应液TLC检测(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)显示原料已经反应完全。待反应液温度降至室温，向反应液中加入饱和亚硫酸氢钠进行淬灭，静置分层，有机层减压蒸馏，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得白色固体1.09g，得到式(III)所示的生物素中间体，其反应摩尔收率为72.8％，R_f＝0.51(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)。

实施例20

称取实施例1制得的式(II)所示的化合物2.6g(6.21mmol)于50mL 的三口烧瓶内，向反应瓶内加入7.5mL乙腈，搅拌溶清，依次向反应瓶中加入0.06g(0.43mmol)DTBN、1.94g(12.43mmol)NaH₂PO₄、1.12g(12.38 mmol)NaClO₂、8.0mL水、0.4mL 5.0wt％的NaClO溶液，用油浴锅加热至35℃，反应5h后，取反应液TLC检测(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)显示原料已经反应完全。停止加热，反应液温度降至室温后，向反应液中加入饱和亚硫酸氢钠进行淬灭，静置分层，有机层减压蒸馏，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得白色固体1.72g，得到式(III)所示的生物素中间体，其反应摩尔收率为62.9％，R_f＝0.51(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)。

实施例21

称取实施例1制得的式(II)所示的化合物2.6g(6.21mmol)于50mL 的三口烧瓶内，向反应瓶内加入7.5mL乙腈，搅拌溶清，依次向反应瓶中加入0.06g(0.43mmol)AZADO、1.94g(12.43mmol)NaH₂PO₄、1.12 g(12.38mmol)NaClO₂、8.0mL水、0.4mL 5.0wt％的NaClO溶液，用油浴锅加热至35℃，反应5h后，取反应液TLC检测(甲醇:乙酸乙酯＝1:5) 显示原料已经反应完全。停止加热，反应液温度降至室温后，向反应液中加入饱和亚硫酸氢钠进行淬灭，静置分层，有机层减压蒸馏，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得白色固体1.79g，得到式(III)所示的生物素中间体，其反应摩尔收率为65.5％，R_f＝0.51(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)。

实施例22

称取实施例1制得的式(II)所示的化合物2.2g(5.08mmol)于50mL 的三口烧瓶内，向反应瓶内加入6.5mL乙腈，搅拌溶清，依次向反应瓶中加入0.81g(0.36mmol)PROXYL、1.58g(10.13mmol)NaH₂PO₄、0.92 g(10.17mmol)NaClO₂、7.0mL水、0.3mL 5.0wt％的NaClO溶液，用油浴锅加热至35℃，反应5h后，取反应液TLC检测(甲醇:乙酸乙酯＝1: 5)显示原料已经反应完全。停止加热，反应液温度降至室温后，向反应液中加入饱和亚硫酸氢钠进行淬灭，静置分层，有机层减压蒸馏，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得白色固体1.61g，得到式(III)所示的生物素中间体，其反应摩尔收率为72.1％，R_f＝0.51(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)。

实施例23

称取实施例1制得的式(II)所示的化合物2.2g(5.08mmol)于50mL 的三口烧瓶内，向反应瓶内加入6.5mL乙腈，搅拌溶清，依次向反应瓶中加入0.05g(0.36mmol)ABNO、1.58g(10.13mmol)NaH₂PO₄、0.92 g(10.17mmol)NaClO₂、7.0mL水、0.3mL 5.0wt％的NaClO溶液，用油浴锅加热至35℃，反应5h后，取反应液TLC检测(甲醇:乙酸乙酯＝1: 5)显示原料已经反应完全。停止加热，反应液温度降至室温后，向反应液中加入饱和亚硫酸氢钠进行淬灭，静置分层，有机层减压蒸馏，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得白色固体1.84g，得到式(III)所示的生物素中间体，其反应摩尔收率为82.4％，R_f＝0.51(甲醇:乙酸乙酯＝1: 5)。

实施例24

称取实施例1制得的式(II)所示的化合物1.68g(3.95mmol)于50mL 的三口烧瓶内，向反应瓶内加入5.0mL乙腈，搅拌溶清，依次向反应瓶中加入0.01g(0.04mmol)TEMPO、1.23g(7.88mmol)NaH₂PO₄、0.71g(7.85 mmol)NaClO₂、5.0mL水、0.24mL 5.0wt％的NaClO溶液，用油浴锅加热至35℃，反应5h后，取反应液TLC检测(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)显示原料已经反应完全。停止加热，反应液温度降至室温后，向反应液中加入饱和亚硫酸氢钠进行淬灭，静置分层，有机层减压蒸馏，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得白色固体0.79g，得到式(III)所示的生物素中间体，其反应摩尔收率为45.3％，R_f＝0.51(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)。

实施例25

称取实施例1制得的式(II)所示的化合物1.68g(3.95mmol)于50mL 的三口烧瓶内，向反应瓶内加入5.0mL乙腈，搅拌溶清，依次向反应瓶中加入0.02g(0.15mmol)TEMPO、1.23g(7.88mmol)NaH₂PO₄、0.71g(7.85 mmol)NaClO₂、5.0mL水、0.2mL 5.0wt％的NaClO溶液，用油浴锅加热至35℃，反应5h后，取反应液TLC检测(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)显示原料已经反应完全。停止加热，反应液温度降至室温后，向反应液中加入饱和亚硫酸氢钠进行淬灭，静置分层，有机层减压蒸馏，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得白色固体1.18g，得到式(III)所示的生物素中间体，其反应摩尔收率为68.1％，R_f＝0.51(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)。

实施例26

称取实施例1制得的式(II)所示的化合物1.68g(3.95mmol)于50mL 的三口烧瓶内，向反应瓶内加入5.0mL乙腈，搅拌溶清，依次向反应瓶中加入0.06g(0.38mmol)TEMPO、1.23g(7.88mmol)NaH₂PO₄、0.71g(7.85 mmol)NaClO₂、5.0mL水、0.2mL 5.0wt％的NaClO溶液，用油浴锅加热至35℃，反应5h后，取反应液TLC检测(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)显示原料已经反应完全。停止加热，反应液温度降至室温后，向反应液中加入饱和亚硫酸氢钠进行淬灭，静置分层，有机层减压蒸馏，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得白色固体1.38g，得到式(III)所示的生物素中间体，其反应摩尔收率为79.3％，R_f＝0.51(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)。

实施例27

称取实施例1制得的式(II)所示的化合物2.4g(5.64mmol)于50mL 的三口烧瓶内，向反应瓶内加入7.0mL乙腈，搅拌溶清，依次向反应瓶中加入0.09g(0.57mmol)TEMPO、1.76g(11.28mmol)NaH₂PO₄、1.02 g(11.28mmol)NaClO₂、7.5mL水、0.3mL 5.0wt％的NaClO溶液，用油浴锅加热至35℃，反应5h后，取反应液TLC检测(甲醇:乙酸乙酯＝1: 5)显示原料已经反应完全。停止加热，反应液温度降至室温后，向反应液中加入饱和亚硫酸氢钠进行淬灭，静置分层，有机层减压蒸馏，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得白色固体1.94g，得到式(III)所示的生物素中间体，其反应摩尔收率为78.3％，R_f＝0.51(甲醇:乙酸乙酯＝1: 5)。

实施例28

称取实施例1制得的式(II)所示的化合物2.4g(5.64mmol)于50mL 的三口烧瓶内，向反应瓶内加入7.0mL乙腈，搅拌溶清，依次向反应瓶中加入0.13g(0.85mmol)TEMPO、1.76g(11.28mmol)NaH₂PO₄、1.02 g(11.28mmol)NaClO₂、7.5mL水、0.3mL 5.0wt％的NaClO溶液，用油浴锅加热至35℃,反应5h后，取反应液TLC检测(甲醇:乙酸乙酯＝1:5) 显示原料已经反应完全。停止加热，反应液温度降至室温后，向反应液中加入饱和亚硫酸氢钠进行淬灭，静置分层，有机层减压蒸馏，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得白色固体1.62g，得到式(III)所示的生物素中间体，其反应摩尔收率为65.4％，R_f＝0.51(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)。

实施例29

称取实施例1制得的式(II)所示的化合物3.0g(7.05mmol)于50mL 的三口烧瓶内，向反应瓶内加入9.0mL乙腈，搅拌溶清，依次向反应瓶中加入0.08g(0.50mmol)TEMPO、2.20g(14.10mmol)NaH₂PO₄、1.28g (14.15mmol)NaClO₂、9.5mL水，用油浴锅加热至35℃，反应5h后，取反应液TLC检测(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)显示原料已经反应完全。停止加热，反应液温度降至室温后，向反应液中加入饱和亚硫酸氢钠进行淬灭，静置分层，有机层减压蒸馏，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得白色固体2.11g，得到式(III)所示的生物素中间体，其反应摩尔收率为68.1％， R_f＝0.51(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)。

实施例30

称取实施例1制得的式(II)所示的化合物3.0g(7.05mmol)于50mL 的三口烧瓶内，向反应瓶内加入9.0mL乙腈，搅拌溶清，依次向反应瓶中加入0.08g(0.50mmol)TEMPO、22.0g(14.10mmol)NaH₂PO₄、4.3mL 5.0wt％的NaClO溶液、9.5mL水，用油浴锅加热至35℃，反应5h后，取反应液TLC检测(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)显示原料已经反应完全。停止加热，反应液温度降至室温后，向反应液中加入饱和亚硫酸氢钠进行淬灭，静置分层，有机层减压蒸馏，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得白色固体1.72g，得到式(III)所示的生物素中间体，其反应摩尔收率为 55.6％，R_f＝0.51(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)。

实施例31

称取实施例1制得的式(II)所示的化合物1.86g(4.37mmol)于50mL 的三口烧瓶内，向反应瓶内加入5.5mL乙腈，搅拌溶清，依次向反应瓶中加入0.05g(0.31mmol)TEMPO、1.36g(8.72mmol)NaH₂PO₄、1.53g(8.74 mmol)Ca(ClO₂)₂、0.01g(0.09mmol)Ca(CIO)₂、6.0mL水，用油浴锅加热至35℃，反应5h后，取反应液TLC检测(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)显示原料已经反应完全。停止加热，反应液温度降至室温后，向反应液中加入饱和亚硫酸氢钠进行淬灭，静置分层，有机层减压蒸馏，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得白色固体1.09g，得到式(III)所示的生物素中间体，其反应摩尔收率为56.5％，R_f＝0.51(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)。

实施例32

称取实施例1制得的式(II)所示的化合物1.86g(4.37mmol)于50mL 的三口烧瓶内，向反应瓶内加入5.5mL乙腈，搅拌溶清，依次向反应瓶中加入0.05g(0.31mmol)TEMPO、1.36g(8.72mmol)NaH₂PO₄、1.53g(8.74 mmol)Ca(ClO₂)₂、6.0mL水，用油浴锅加热至35℃，反应5h后，取反应液TLC检测(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)显示原料已经反应完全。停止加热，反应液温度降至室温后，向反应液中加入饱和亚硫酸氢钠进行淬灭，静置分层，有机层减压蒸馏，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得白色固体0.80g，得到式(III)所示的生物素中间体，其反应摩尔收率为41.6％， R_f＝0.51(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)。

实施例33

称取实施例1制得的式(II)所示的化合物1.86g(4.37mmol)于50mL 的三口烧瓶内，向反应瓶内加入5.5mL乙腈，搅拌溶清，依次向反应瓶中加入0.05g(0.31mmol)TEMPO、1.36g(8.72mmol)NaH₂PO₄、0.01g(0.09 mmol)Ca(ClO)₂、6.0mL水，用油浴锅加热至35℃，反应5h后，取反应液TLC检测(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)显示原料已经反应完全。停止加热，反应液温度降至室温后，向反应液中加入饱和亚硫酸氢钠进行淬灭，静置分层，有机层减压蒸馏，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得白色固体0.67g，得到式(III)所示的生物素中间体，其反应摩尔收率为34.8％， R_f＝0.51(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)。

实施例34

称取实施例1制得的式(II)所示的化合物0.96g(2.26mmol)于50mL 的三口烧瓶内，向反应瓶内加入3.0mL乙腈，搅拌溶清，依次向反应瓶中加入0.03g(0.16mmol)TEMPO、0.35g(2.24mmol)NaH₂PO₄、0.41g(4.53 mmol)NaClO₂、0.1mL 5.0wt％的NaClO溶液、3.0mL水，用油浴锅加热至35℃，反应5h后，取反应液TLC检测(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)显示原料已经反应完全。停止加热，反应液温度降至室温后，向反应液中加入饱和亚硫酸氢钠进行淬灭，静置分层，有机层减压蒸馏,减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得白色固体0.63g，得到式(III)所示的生物素中间体，其反应摩尔收率为63.7％，R_f＝0.51(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)。

实施例35

称取实施例1制得的式(II)所示的化合物0.96g(2.26mmol)于50mL 的三口烧瓶内，向反应瓶内加入3.0mL乙腈，搅拌溶清，依次向反应瓶中加入0.02g(0.16mmol)TEMPO、1.05g(6.73mmol)NaH₂PO₄、0.41g(4.53 mmol)NaClO₂、0.1mL 5.0wt％的NaClO溶液、3.0mL水，用油浴锅加热至35℃，反应5h后，取反应液TLC检测(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)显示原料已经反应完全。停止加热，反应液温度降至室温后，向反应液中加入饱和亚硫酸氢钠进行淬灭，静置分层，有机层减压蒸馏，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得白色固体0.31g，得到式(III)所示的生物素中间体，其反应摩尔收率为31.3％，R_f＝0.51(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)。

实施例36

称取实施例1制得的式(II)所示的化合物1.6g(3.67mmol)于50mL 的三口烧瓶内，向反应瓶内加入4.5mL乙腈，搅拌溶清，依次向反应瓶中加入0.04g(0.26mmol)TEMPO、1.15g(7.37mmol)NaH₂PO₄、0.33g(3.65 mmol)NaClO₂、0.2mL 5.0wt％的NaClO溶液、5.0mL水，用油浴锅加热至35℃，反应5h后，取反应液TLC检测(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)显示原料已经反应完全。停止加热，反应液温度降至室温后，向反应液中加入饱和亚硫酸氢钠进行淬灭，静置分层，有机层减压蒸馏，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得白色固体1.06g，得到式(III)所示的生物素中间体，其反应摩尔收率为65.9％，R_f＝0.51(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)。

实施例37

称取实施例1制得的式(II)所示的化合物1.6g(3.67mmol)于50mL 的三口烧瓶内，向反应瓶内加入4.5mL乙腈，搅拌溶清，依次向反应瓶中加入0.04g(0.26mmol)TEMPO、1.15g(7.37mmol)NaH₂PO₄、1.66 g(18.35mmol)NaClO₂、0.2mL 5.0wt％的NaClO溶液、5.0mL水，用油浴锅加热至35℃，反应5h后，取反应液TLC检测(甲醇:乙酸乙酯＝1: 5)显示原料已经反应完全。停止加热，反应液温度降至室温后，向反应液中加入饱和亚硫酸氢钠进行淬灭，静置分层，有机层减压蒸馏，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得白色固体0.63g，得到式(III)所示的生物素中间体，其反应摩尔收率为39.3％，R_f＝0.51(甲醇:乙酸乙酯＝1: 5)。

实施例38

称取实施例1制得的式(II)所示的化合物2.1g(4.79mmol)于50mL 的三口烧瓶内，向反应瓶内加入4.5mL甲苯，搅拌溶清，依次向反应瓶中加入0.05g(0.34mmol)TEMPO、1.5g(9.62mmol)NaH₂PO₄、0.87g(9.62 mmol)NaClO₂、0.3mL 5.0wt％的NaClO溶液、6.5mL水，用油浴锅加热至35℃，反应5h后，取反应液TLC检测(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)显示原料已经反应完全。停止加热，反应液温度降至室温后，向反应液中加入饱和亚硫酸氢钠进行淬灭，静置分层，有机层减压蒸馏，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得白色固体0.91g，得到式(III)所示的生物素中间体，其反应摩尔收率为43.0％，R_f＝0.51(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)。

实施例39

称取实施例1制得的式(II)所示的化合物2.1g(4.79mmol)于50mL 的三口烧瓶内，向反应瓶内加入4.5mL四氢呋喃，搅拌溶清，依次向反应瓶中加入0.053g(0.34mmol)TEMPO、1.50g(9.62mmol)NaH₂PO₄、0.87 g(9.62mmol)NaClO₂、3.0mL 5.0wt％的NaClO溶液、6.5mL水，用油浴锅加热至35℃，反应5h后，取反应液TLC检测(甲醇:乙酸乙酯＝1:5) 显示原料已经反应完全。停止加热，反应液温度降至室温后，向反应液中加入饱和亚硫酸氢钠进行淬灭，静置分层，有机层减压蒸馏，有机层减压蒸馏，减压浓缩得到黄色油状物，柱层析后得白色固体1.4g，得到式(III) 所示的生物素中间体，其反应摩尔收率为66.7％，R_f＝0.51(甲醇:乙酸乙酯＝1:5)。

需要指出的是，上述实验实例仅为说明本发明的构思及特点，其目的是让熟悉本发明的人了解本实验并据以实施，并不能限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质做出的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。