阅读说明：本技术 用于治疗糖皮质激素依赖性皮炎的多潜能细胞活性物与富血小板血浆复合物及制法和应用 (Pluripotent cell active matter and platelet-rich plasma compound for treating glucocorticoid-dependent dermatitis as well as preparation method and application thereof ) 是由 马亚东 黄宗堂 曹娜 于 2019-08-12 设计创作，主要内容包括：本发明涉及干细胞制剂技术领域,特别涉及一种用于治疗糖皮质激素依赖性皮炎的外周血多潜能细胞活性物与富血小板血浆的复合物及其制备方法和应用,包括外周血多潜能细胞、间充质干细胞和富血小板血浆。将富血小板血浆与外周血多潜能细胞、间充质干细胞悬液混合,待外周血多潜能细胞、间充质干细胞融入富血小板血浆后,利用兴奋剂使富血小板血浆聚集,形成药物。本发明各个组分相互作用,协同增效,对激素依赖性皮炎具有显著的修复作用,且其体系稳定,功效持久,并且对皮肤没有刺激性。(The invention relates to the technical field of stem cell preparations, in particular to a compound of a peripheral blood multipotential cell active matter and platelet rich plasma for treating glucocorticoid-dependent dermatitis, a preparation method and application thereof, wherein the compound comprises peripheral blood multipotential cells, mesenchymal stem cells and platelet rich plasma. Mixing the platelet-rich plasma with the peripheral blood multipotential cells and the mesenchymal stem cell suspension, and after the peripheral blood multipotential cells and the mesenchymal stem cells are fused into the platelet-rich plasma, utilizing an excitant to aggregate the platelet-rich plasma to form the medicament. The components of the invention interact with each other, have synergistic effect, have obvious repair effect on the hormone-dependent dermatitis, and have stable system, lasting effect and no irritation to the skin.)

用于治疗糖皮质激素依赖性皮炎的多潜能细胞活性物与富血 小板血浆复合物及制法和应用

技术领域

本发明涉及干细胞制剂技术领域，特别涉及一种用于治疗糖皮质激素依赖性皮炎的外周血多潜能细胞活性物与富血小板血浆的复合物及其制备方法和应用。

背景技术

激素依赖性皮炎是因长期反复不当的使用外用激素引起的皮炎。表现为外用糖皮质激素后原发皮损消失，但停用后又出现炎性损害，需反复使用糖皮质激素以控制症状并逐渐加重的一种皮炎。近年来，部分化妆品企业在化妆品中违规添加糖皮质激素，而这些产品虽然短时间内具有快速的效果，但是长期使用容易使得皮肤角质层越来越薄，容易敏感、干燥、发红、发痒、刺痛。

目前有中药成分的药剂治疗，虽然具有较好的修复效果，但普遍中药对皮肤的刺激性，特别是激素依赖性皮炎患者皮肤体表较正常皮肤更为敏感和脆弱，在使用时，若将该种组合物涂抹在皮肤上，特别是含有伤口的皮肤上时，通常会感觉到轻微的刺痛感，更有甚者，这种刺激加剧了病情。

发明内容

针对上述技术问题，本发明的目的在于提供一种用于治疗糖皮质激素依赖性皮炎的外周血多潜能细胞活性物与富血小板血浆的复合物及其制备方法和应用，对用于糖皮质激素依赖性皮炎具有较好的治疗效果。

为解决上述的技术问题，具体技术方案：

一种用于治疗糖皮质激素依赖性皮炎的外周血多潜能细胞活性物与富血小板血浆的复合物，包括外周血多潜能细胞、间充质干细胞和富血小板血浆。

该用于治疗糖皮质激素依赖性皮炎的外周血多潜能细胞活性物与富血小板血浆的复合物的制备方法，包括以下步骤：将富血小板血浆与外周血多潜能细胞、间充质干细胞悬液混合，待外周血多潜能细胞、间充质干细胞融入富血小板血浆后，利用***使富血小板血浆聚集，形成药物。

具体的包括以下步骤：

(1)用第一容器内放入富血小板血浆、外周血多潜能细胞、间充质干细胞悬液和空气，按照体积比3～5∶1～1.5∶1～1.5∶0.5～1，并混合均匀，使外周血多潜能细胞、间充质干细胞融入富血小板血浆中；

(2)用第二容器量取***溶液；

(3)两个容器分别将其内的物质匀速地注入混合容器中，使外周血多潜能细胞、间充质干细胞和富血小板血浆聚合成胶状的复合物。

所述的外周血多潜能细胞的浓度为10⁶～10⁸，所述的间充质干细胞悬液的浓度为10⁶～10⁸个/mL。

所述的***溶液中的***为凝血酶，凝血酶的酶活力为2000～ 3500U/mL。

所述的***与富血小板血浆的体积比为1～2∶3～5。

该复合物用于制备治疗糖皮质激素依赖性皮炎的药物。

与现有技术相比，本发明提供的一种用于治疗糖皮质激素依赖性皮炎的外周血多潜能细胞活性物与富血小板血浆的复合物，各个组分相互作用，协同增效，对激素依赖性皮炎具有显著的修复作用，且其体系稳定，功效持久，并且对皮肤没有刺激性。

具体实施方式

为了使本领域相关技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面将结合本发明实施方式，对本发明实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施方式仅仅是本发明一部分实施方式，而不是全部的实施方式。

一种用于治疗糖皮质激素依赖性皮炎的外周血多潜能细胞活性物与富血小板血浆的复合物，包括外周血多潜能细胞、间充质干细胞和富血小板血浆。

该用于治疗糖皮质激素依赖性皮炎的外周血多潜能细胞活性物与富血小板血浆的复合物的制备方法，具体的包括以下步骤：

(1)用第一容器内放入富血小板血浆、外周血多潜能细胞、间充质干细胞悬液和空气，按照体积比3∶1∶1∶0.5，并混合均匀，使外周血多潜能细胞、间充质干细胞融入富血小板血浆中；

(2)用第二容器量取***溶液；***与富血小板血浆的体积比为1∶ 3。

(3)两个容器分别将其内的物质匀速地注入混合容器中，使外周血多潜能细胞、间充质干细胞和富血小板血浆聚合成胶状的复合物。

所述的外周血多潜能细胞的浓度为10⁶～10⁸，所述的间充质干细胞悬液的浓度为10⁶～10⁸个/mL。

所述的***溶液中的***为凝血酶，凝血酶的酶活力为2000～ 3500U/mL。

其中，外周血多潜能细胞获得的方法为：

取m/v为1.073％的Percoll分离液7ml，加入离心管中，再加入稀释后的静脉血，两者等体积，静脉血缓慢滴加到Percoll液面上，保持两液间界面清楚，然后2000转/分钟离心，处理20分钟。

离心管内分层，自上到下依次为血清、单核细胞与淋巴细胞的混合细胞层、淋巴细胞分离液层、红细胞层；吸取混合细胞层，用磷酸盐缓冲液和 RPMI1640培养液依次分别清洗；

清洗后的细胞用含有7％胎牛血清的RPMI1640培养液悬浮细胞，移入细胞培养板；并加入巨噬细胞集落刺激因子加速细胞生长；

培养3天后将贴壁细胞继续以培养体系培养；在培养中加有血小板生成素促进细胞增殖，使外周血干细胞加速生长直至融合；

在细胞融合至80％～90％后，进行传代培养获得第三代外周血多潜能细胞。

间充质干细胞的获得的方法为：

获取脐带组织，在无菌条件下，去除组织上的动静脉及外膜，PBS清洗后剪成段，并再次清洗去除血液；然后处理成肉糜状，水浴消化；加入基础培养基反复吹打，基础培养基为DMEM/F12培养基过滤；

收集滤液离心，弃去上清液，将沉淀的细胞接种于完全培养基中进行培养；24h后首次换液，之后每间隔1～2天换液一次；

待细胞融合至80％～90％后，不完全消化后，进行传代纯化，获得第三代间充质干细胞。

为验证效果，采取临床试验：

收集20名志愿者参与测试，随机分为两组，每组10，第一组为治疗组，采用以上实施例的药物皮下注射，10天为一个疗程，1个月内回访并记录复发情况。第二组为对比组，采用传统的外敷药治疗，10天为一个疗程，1个月内回访并记录复发情况。

疗效判定标准：疗效观察指标包括皮损(红斑、丘疹、痤疮性损害、毛细血管扩张)和瘙痒。

评分标准：各项指标均按4级评分法进行评分：0分＝无，1分＝轻度，2 分＝中度，3分＝重度。根据疗效指数进行评价，疗效指数＝(治疗前积分-治疗后积分)/治疗前积分×100％。

痊愈：皮损和症状消失，疗效指数＞90％；显效：皮损大部分消退，症状明显减轻，疗效指数为60％～90％；好转：皮损和症状减轻，疗效指数为 20％～59％；无效：皮损和症状无明显改善，疗效指数＜20％。

疗效见表1。

表1试验疗效统计

	痊愈	显效	好转	无效
					治疗组	6	3	1	0
对照组	3	4	2	1

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。