阅读说明：本技术 一种噻唑橙苄基类季铵盐衍生物及其制备方法和应用 (A kind of thiazole orange benzyl class quaternary ammonium salt derivative and its preparation method and application ) 是由 佘梦婷 卢宇靖 蔡森源 帅文乐 黄玄贺 李莹 陈翠翠 于 2019-08-13 设计创作，主要内容包括：本发明属于化学和化合物医药技术领域,具体涉及一种噻唑橙苄基类季铵盐衍生物及其制备方法和应用。所述的噻唑橙苄基类季铵盐衍生物为式I化合物或其药学上可接受的盐,以及所述的式I化合物或其药学上可接受的盐的溶剂化合物、对映异构体、非对映异构体、互变异构体或其任意比例的混合物,包括外消旋混合物；该化合物通过噻唑橙类似物经芳香醛缩合后,再与苄基类似物发生取代反应得到,制备方法简单,原料易得。噻唑对FtsZ无作用,将其季铵化后产生了FtsZ作用能力,具有延长细菌形态的能力,经验证,该噻唑橙苄基类季铵盐衍生物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌具有良好的抑菌,杀菌活性。<Image he="590" wi="579" file="DDA0002164498930000011.GIF" imgContent="drawing" imgFormat="GIF" orientation="portrait" inline="no"></Image>(The invention belongs to chemistry and compound pharmaceutical technology fields, and in particular to a kind of thiazole orange benzyl class quaternary ammonium salt derivative and its preparation method and application.The thiazole orange benzyl class quaternary ammonium salt derivative is compound of formula I or its pharmaceutically acceptable salt, and the solvated compounds of the compound of formula I or its pharmaceutically acceptable salt, enantiomter, diastereoisomer, tautomer or its arbitrary proportion mixture, including racemic mixture；The compound is obtained after aromatic aldehyde is condensed, then with benzyl analogs generation substitution reaction by thiazole orange analog, and preparation method is simple, and raw material is easy to get.Thiazole to FtsZ without effect, by its it is quaternized after produce FtsZ ability to function, there is the ability for extending ne ar, verified, which has good antibacterial, bactericidal activity to Escherichia coli, staphylococcus aureus.)

一种噻唑橙苄基类季铵盐衍生物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于化学和化合物医药技术领域，具体涉及一种噻唑橙苄基类季铵盐衍生物及其制备方法和应用。

背景技术

青霉素问世后抗生素成了人类战胜病菌的神奇武器，被用于治疗一系列疾病和器官移植、化疗等许多现代医疗程序的预防或支持用药，挽救了许多人的生命。由于效果明显，价格低廉，抗生素被大剂量，超剂量地应用于一些疾病的治疗。随着抗生素的滥用情况越来越严重，细菌产生了耐药性；抗生素对细菌失去作用或者作用效果变差，如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌等的出现给临床抗菌和抗感染的治疗带来了新的困扰，甚至还出现了“超级细菌”这些对多种抗生素具有耐药性的细菌，并有流行趋势。

总之，细菌耐药性已经严重威胁人类社会的健康财产安全，成为亟待解决的全球性公共卫生问题之一。但是，当前新药开发进展缓慢，现有临床药物疗效逐渐，进一步加剧了细菌耐药性的问题。新型结构抗耐药菌药物分子的开发是解决这一难题的突破口。FtsZ--细丝温度敏感蛋白Z(filamentous temperature-sensitive protein Z)是介导耐药性致病菌(MRSA和VRE)、肺结核菌(TB)和其余敏感菌株等细菌***的关键蛋白，几乎存在于所有的细菌当中，形态上高度保守、不易变异；当其活性受到抑制时，细菌无法完成增殖***形成狭长丝状结构，进而导致细菌死亡，因此被认为是一个十分理想的抗菌药物新靶点，开发出具有FstZ作用的新型结构药物是解决这一问题的重要途径。

发明内容

为了解决上述现有技术存在的不足和缺点，本发明首要目的在于提供一种噻唑橙苄基类季铵盐衍生物，该化合物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌具有良好的抑菌活性。

本发明另一目的在于提供上述噻唑橙苄基类季铵盐衍生物的制备方法，该方法是将噻唑橙(TO)季铵化后得到噻唑橙苄基类季铵盐衍生物。

本发明再一目的在于提供上述噻唑橙苄基类季铵盐衍生物的应用。

本发明的目的通过下述技术方案来实现：

一种噻唑橙苄基类季铵盐衍生物，为式I化合物或其药学上可接受的盐，以及所述的式I化合物或其药学上可接受的盐的溶剂化合物、对映异构体、非对映异构体、互变异构体或其任意比例的混合物，包括外消旋混合物；

其中，n为1～10；R₁、R₂为甲基、乙基或苯基；R₃为氢、异丙基、硝基、甲基、甲硫基、二甲氧基、咪唑-1-基、C原子为1～6的烷基、C原子数为3～6的环烷基、哌啶基、吗啉基或哌嗪基；X₁和X₂为Cl、Br、I或苯磺酸基；

所述的噻唑橙苄基类季铵盐衍生物优选为如下化合物：

所述的R₃分别是苯环的邻位、间位或对位；

所述X₁为I，所述X₂为Br；

所述的药学上可接受的盐优选为式I化合物与盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、醋酸、富马酸、马来酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、柠檬酸、苹果酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、谷氨酸或天冬氨酸形成的盐；

所述的噻唑橙苄基类季铵盐衍生物的制备方法，包含如下步骤：

(1)将4-氯-2-甲基喹啉溶于环丁砜，然后加入碘甲烷；将反应体系加热至55～65℃搅拌反应；反应完成后纯化，得到中间产物Ⅰ；

(2)将2-甲基-苯并噻唑和碘甲烷混合于环丁砜中，将反应体系加热至55～65℃搅拌反应；反应完成后纯化，得到中间产物Ⅱ；

(3)将步骤(1)制得的中间产物Ⅰ和步骤(2)制得的中间产物Ⅱ用溶剂溶解，接着加入催化剂，搅拌反应；反应完成后纯化，得中间产物Ⅲ；

(4)将步骤(3)制得的中间产物Ⅲ与芳香醛类似物用溶剂溶解，加入催化剂，将反应体系加热至125～135℃搅拌反应；反应完成后纯化，得到中间产物Ⅳ；

(5)将步骤(4)制得的中间产物Ⅳ用溶剂溶解，加入催化剂，再加入苄基类似物，将反应体系加热至55～65℃搅拌反应；反应完成后纯化，得到噻唑橙苄基类季铵盐衍生物；

步骤(1)中所述的4-氯-2-甲基喹啉与环丁砜的摩尔比优选为1：(22～30)，所述的环丁砜和碘甲烷体积比为1：(0.15～0.25)，所述的搅拌反应的时间为16～18h；

步骤(1)中所述的纯化的具体操作优选为：

搅拌反应后冷却，然后用溶剂沉淀产物；沉淀后的产物静置抽滤得固体，固体用溶剂洗涤，干燥，得到中间产物Ⅰ；所述的溶剂优选为乙酸乙酯、甲醇、乙醇、正丁醇或乙腈；

步骤(2)中所述的2-甲基-苯并噻唑、环丁砜和碘甲烷的体积比优选为1：(4～6)：(0.8～1.2)，所述的搅拌反应的时间优选为12～14h；

步骤(2)中所述的纯化的具体操作优选为：

搅拌反应后冷却，然后用溶剂沉淀产物；沉淀后的产物静置抽滤得固体，固体用溶剂洗涤，干燥，得到中间产物Ⅱ；所述的溶剂优选为乙酸乙酯、甲醇、乙醇、正丁醇或乙腈；

步骤(3)中所述的中间产物Ⅰ、中间产物Ⅱ和催化剂的摩尔比优选为1:1:(3.6～4.5)，所述的溶剂优选为乙酸乙酯、甲醇、乙醇、正丁醇或乙腈，所述的催化剂优选为碳酸氢钠、三乙胺、4-甲基哌啶或碳酸钾；所述的搅拌反应的时间优选为1.5～3h；

步骤(3)中所述的纯化的具体操作优选为：

搅拌反应后抽滤得固体，固体用溶剂洗涤，干燥，得到中间产物Ⅲ；所述的溶剂优选为乙酸乙酯，甲醇，乙醇，正丁醇或乙腈；

步骤(4)中所述的中间产物Ⅲ、芳香醛类似物(R-CHO)和催化剂的摩尔比优选为1:2:(51～66)，所述的溶剂优选为乙酸乙酯、甲醇、乙醇、正丁醇或乙腈，所述的催化剂优选为碳酸氢钠、三乙胺、4-甲基哌啶或碳酸钾，所述的搅拌反应的时间为2～3h；

步骤(4)中所述的纯化的具体操作优选为：

搅拌反应后冷却，抽滤得固体，固体用溶剂洗涤，干燥，得到中间产物Ⅳ；所述的溶剂为乙酸乙酯、甲醇、乙醇、正丁醇或乙腈；

步骤(5)中所述的中间产物Ⅳ、催化剂和苄基类似物的摩尔比优选为1：(8～12)：(8～12)，所述的溶剂优选为乙酸乙酯、甲醇、乙醇、正丁醇或乙腈，所述的催化剂为碳酸氢钠、三乙胺、4-甲基哌啶或碳酸钾，所述的搅拌反应时间为46～50h；

步骤(5)中所述的纯化的具体操作优选为：

搅拌反应后静置冷却至析出大量晶体，抽滤得固体，固体用溶剂洗涤，干燥，得到噻唑橙苄基类季铵盐衍生物；所述的溶剂为乙酸乙酯、甲醇、乙醇、正丁醇或乙腈；

所述的中间产物Ⅰ的结构式如下所示：

所述的中间产物Ⅱ的结构式如下所示：

所述的中间产物Ⅲ的结构式如下所示：

所述的芳香醛类似物为R-CHO，其中，R为n为0～9；

所述的中间产物Ⅳ的结构式如下所示：

其中，R₁、R₂为甲基、乙基或苯基；

X₁和X₂为Cl、Br、I或苯磺酸基；

所述的苄基类似物的结构式如下所示：

其中，R₃为氢、异丙基、硝基、甲基、甲硫基、二甲氧基、咪唑-1-基、C原子为1～6的烷基、C原子数为3～6的环烷基、哌啶基、吗啉基或哌嗪基；

X₃为Cl、Br或I；

所述的噻唑橙苄基类季铵盐衍生物的合成路线如下：

所述的噻唑橙苄基类季铵盐衍生物在制备抗耐药菌药物中的应用；

所述的抗耐药菌药物优选为抗耐金黄色葡萄球菌的药物或抗耐大肠杆菌的药物；

所述的抗耐药菌药物中含有治疗有效量的噻唑橙苄基类季铵盐衍生物，余量为药用辅料或其它可配伍的药物；

所述的药用辅料是指常规的药用赋形剂，如溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂和粘合剂等；

所述的其它可配伍的药物，指的是以有效剂量的噻唑橙苄基类季铵盐衍生物为药物原料，再配伍其它天然药物或化学药品；

所述的抗耐药菌药物包括多种临床药物剂型，如片剂、注射液、脂质体纳米粒、控释剂、丸剂、胶囊、悬浮剂或乳剂等；

本发明通过噻唑橙类似物经芳香醛缩合后，再与苄基类似物发生取代反应得到噻唑橙苄基类季铵盐衍生物，方法简单，原料易得。噻唑橙苄基类季铵盐衍生物具有FtsZ作用能力，具有延长细菌形态的能力，经验证，该噻唑橙苄基类季铵盐衍生物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等具有良好的抑菌、杀菌活性。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

(1)本发明的噻唑橙苄基类季铵盐衍生物对多种耐药菌具有显著的抑制作用，特别对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等具有很强的抑制作用。

(2)本发明的噻唑橙苄基类季铵盐衍生物对正常动物细胞毒性较小，在制备抗生素药物的应用中安全性高。

(3)本发明的噻唑橙苄基类季铵盐衍生物的制备方法简单，原料价廉，制备为抗耐药菌生素，具有很大的市场空间。

附图说明

图1是实施例11中空白组的枯草芽孢杆菌生长形态观察图。

图2是加药组(处理药物为化合物Ⅴ-a)的枯草芽孢杆菌生长形态观察图。

图3是加药组(处理药物为化合物Ⅴ-b)的枯草芽孢杆菌生长形态观察图。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。除特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。

实施例1中间产物Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ的合成

(1)称取0.5g(2.8mmol)4-氯-2-甲基喹啉，加入6mL(63mmol)环丁砜溶解后，再加入过量碘甲烷0.9mL(14mmol)；然后将反应体系加热至55℃，搅拌反应16小时后取出冷却至室温，滴加过量乙酸乙酯，摇匀析出大量浅绿色固体，静置抽滤得固体，固体用乙酸乙酯洗涤，干燥3h，得到0.62g墨绿色粉末，即为4-氯-1,2甲基碘代喹啉(中间产物Ⅰ)，收率69％。其核磁共振氢谱结果如下：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.90(s,1H),8.67(d,J＝9.0Hz,1H),8.26(ddd,J＝8.7,7.1,1.4Hz,1H),8.12(t,J＝7.6Hz,1H),8.05(t,J＝7.5Hz,1H),4.43(s,3H),2.99(d,J＝6.2Hz,3H).合成过程如下所示：

(2)称取2mL(16mmol)2-甲基-苯并噻唑，加入8mL(84mmol)环丁砜，并滴加1.6mL(26mmol)碘甲烷；然后将反应体系加热至55℃，搅拌反应12h后取出冷却至室温，加入乙酸乙酯析出大量白色固体，静置抽滤得固体，固体用乙酸乙酯洗涤，干燥3h，得到3.6g白色固体粉末，即为1,2-二甲基碘代苯并噻唑(中间产物Ⅱ)，收率78％。其核磁共振氢谱结果如下：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.44(d,J＝8.1Hz,1H),8.30(d,J＝8.4Hz,1H),7.90(t,J＝7.8Hz,1H),7.81(t,J＝7.7Hz,1H),4.20(s,3H),3.17(s,3H).合成过程如下所示：

(3)取0.578g(1.9mmol)步骤(1)制得的中间产物Ⅰ和0.556g(1.9mmol)步骤(2)制得的中间产物Ⅱ，加入7mL甲醇溶解，接着加入7mL1mmol/mL(7mmol)碳酸氢钠溶液，室温搅拌反应1.5h，反应完成后抽滤得砖红色固体，砖红色固体用乙酸乙酯洗涤，干燥3h，得到0.63g固体粉末，即为中间产物Ⅲ，收率75％。其核磁共振氢谱结果如下：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.77(s,1H),8.18(s,1H),7.99(s,1H),7.74(s,2H),7.59(s,1H),7.39(s,1H),7.33(s,1H),6.84(s,1H),4.06(s,3H),3.98(s,3H),2.87(s,3H).合成过程如下所示：

实施例2中间产物Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ的合成

(1)称取0.5g(2.8mmol)4-氯-2-甲基喹啉，加入7mL(73mmol)环丁砜溶解后，再加入过量碘甲烷1.2mL(19mmol)；然后将反应体系加热至60℃，搅拌反应17小时后取出冷却至室温，滴加过量乙酸乙酯，摇匀析出大量浅绿色固体，静置抽滤得固体，固体用乙酸乙酯洗涤，干燥3h，得到0.7g墨绿色粉末，即为4-氯-1,2甲基碘代喹啉(中间产物Ⅰ)，收率78％。其核磁共振氢谱结果和合成过程同实施例1。

(2)称取2mL(16mmol)2-甲基-苯并噻唑，加入10mL(105mmol)环丁砜，并滴加2mL(32mmol)碘甲烷溶液；然后将反应体系加热至60℃，搅拌反应13h后取出冷却至室温，加入乙酸乙酯析出大量白色固体，静置抽滤得固体，固体用乙酸乙酯洗涤，干燥3h，得到3.9g白色固体粉末，即为1,2-二甲基碘代苯并噻唑(中间产物Ⅱ)，收率83％。其核磁共振氢谱结果和合成过程同实施例1。

(3)取0.578g(1.9mmol)步骤(1)制得的中间产物Ⅰ和0.556g(1.9mmol)步骤(2)制得的中间产物Ⅱ，加入7mL甲醇溶解，接着加入7.7mL 1mmol/mL(7.7mmol)碳酸氢钠溶液，室温搅拌反应2h，反应完成后抽滤得砖红色固体，砖红色固体用乙酸乙酯洗涤，干燥3h，得到0.63g固体粉末，即为中间产物Ⅲ，收率75％。其核磁共振氢谱结果和合成过程同实施例1。

实施例3中间产物Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ的合成

(1)称取0.5g(2.8mmol)4-氯-2-甲基喹啉，加入9mL(84mmol)环丁砜溶解后，再加入过量碘甲烷2.25mL(36mmol)；然后将反应体系加热至65℃，搅拌反应18小时后取出冷却至室温，滴加过量乙酸乙酯，摇匀析出大量浅绿色固体，静置抽滤得固体，固体用乙酸乙酯洗涤、干燥3h，得到0.67g墨绿色粉末，即为4-氯-1,2甲基碘代喹啉(中间产物Ⅰ)，收率75％。其核磁共振氢谱结果和合成过程同实施例1。

(2)称取2mL(16mmol)2-甲基-苯并噻唑，加入12mL(126mmol)环丁砜，并滴加2.4mL(39mmol)碘甲烷溶液；然后将反应体系加热至65℃，搅拌反应14h后取出冷却至室温，加入乙酸乙酯析出大量白色固体，静置抽滤得固体，固体用乙酸乙酯洗涤，干燥3h，得到3.7g白色固体粉末，即为1,2-二甲基碘代苯并噻唑(中间产物Ⅱ)，收率80％。其核磁共振氢谱结果和合成过程同实施例1。

(3)取0.578g(1.9mmol)步骤(1)制得的中间产物Ⅰ和0.556g(1.9mmol)步骤(2)制得的中间产物Ⅱ，加入7mL甲醇溶解，接着加入8.4mL 1mmol/mL(8.4mmol)碳酸氢钠溶液，室温搅拌反应3h，反应完成后抽滤得砖红色固体，砖红色固体用乙酸乙酯洗涤，干燥3h，得到0.63g固体粉末，即为中间产物Ⅲ，收率75％。其核磁共振氢谱结果和合成过程同实施例1。

实施例4新型噻唑橙Ⅳ-a、目标产物Ⅴ-a的合成

(1)称取0.1302g(0.29mmol)中间产物Ⅲ，加入0.58mmol的芳香醛类似物(对二甲氨基苯甲醛)，用正丁醇溶解，加入15mmol4-甲基哌啶；将反应体系加热至125℃，搅拌反应3h，取出冷却至室温，抽滤得固体，固体用正丁醇洗涤，干燥，得到0.134g带有荧光绿的褐色固体粉末，即为新型噻唑橙Ⅳ-a，收率80％。其核磁共振氢谱结果如下：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.69(d,J＝8.2Hz,1H),8.12(d,J＝8.8Hz,1H),8.02(d,J＝7.8Hz,1H),7.98–7.90(m,1H),7.78(d,J＝8.8Hz,2H),7.74–7.69(m,1H),7.65(dd,J＝12.0,8.0Hz,2H),7.62(d,J＝6.7Hz,1H),7.56(t,J＝7.8Hz,1H),7.42(d,J＝15.6Hz,1H),7.36(t,J＝7.6Hz,1H),6.79(d,J＝8.3Hz,3H),4.13(s,3H),3.94(s,3H),3.04(s,6H).合成过程如下所示：

(2)取0.05g(87μmol)步骤(1)制得的新型噻唑橙(Ⅳ-a)，用1mL乙腈溶解后，加入1mL1mmol/mL(1mmol)碳酸氢钠溶液，再加入700μmol溴化苄；将反应体系加热至55℃，搅拌反应46h，取出静置冷却至析出大量晶体，直接抽滤得固体，固体用乙酸乙酯洗涤，干燥，得到0.048g目标产物Ⅴ-a，收率73％。其核磁共振氢谱结果如下：¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.80(d,J＝8.5Hz,1H),8.19(dt,J＝26.8,13.4Hz,3H),8.11(d,J＝7.9Hz,1H),8.01(dd,J＝17.3,7.7Hz,4H),7.81–7.71(m,3H),7.66–7.58(m,2H),7.49–7.36(m,4H),7.15(d,J＝7.4Hz,2H),6.95(s,1H),5.17(s,2H),4.19(s,3H),4.03(s,3H),3.67(s,6H).合成路线如下所示：

实施例5新型噻唑橙Ⅳ-a、目标产物Ⅴ-a的合成

(1)称取0.1302g(0.29mmol)中间产物Ⅲ，加入0.58mmol的芳香醛类似物(对二甲氨基苯甲醛)，用正丁醇溶解，加入17mmol 4-甲基哌啶；将反应体系加热至130℃，搅拌反应3h，取出冷却至室温，抽滤得固体，固体用正丁醇洗涤，干燥，得到0.143g带有荧光绿的褐色固体粉末，即为噻唑橙Ⅳ-a，收率88％。其核磁共振氢谱结果和合成过程同实施例4。

(2)取0.05g(87μmol)步骤(1)制得的新型噻唑橙(Ⅳ-a)，用1mL乙腈溶解后，加入1mL 1mmol/mL(1mmol)碳酸氢钠溶液，再加入870μmol溴化苄，将反应体系加热至60℃，搅拌反应48h，取出静置冷却至析出大量晶体，直接抽滤得固体，固体用乙酸乙酯洗涤，干燥，得到0.051g目标产物Ⅴ-a，收率78％。其核磁共振氢谱结果和合成过程同实施例4。

实施例6新型噻唑橙Ⅳ-a、目标产物Ⅴ-a的合成

(1)称取0.1302g(0.29mmol)中间产物Ⅲ，加入0.58mmol的芳香醛类似物(对二甲氨基苯甲醛)，用正丁醇溶解，加入19mmol4-甲基哌啶；将反应体系加热至135℃，搅拌反应3h，取出冷却至室温，抽滤得固体，固体用正丁醇洗涤，干燥，得到0.139g带有荧光绿的褐色固体粉末，即为噻唑橙Ⅳ-a，收率83％。其核磁共振氢谱结果和合成过程同实施例4。

(2)取0.05g(87μmol)步骤(1)制得的新型噻唑橙(Ⅳ-a)，用1mL乙腈溶解后，加入1mL 1mmol/mL(1mmol)碳酸氢钠溶液，再加入1050μmol溴化苄，将反应体系加热至65℃，搅拌反应50h，取出静置冷却至析出大量晶体，直接抽滤得固体，固体用乙酸乙酯洗涤，干燥，得到0.049g目标产物Ⅴ-a，收率76％。其核磁共振氢谱结果和合成过程同实施例4。

实施例7新型噻唑橙Ⅳ-b、目标产物Ⅴ-b的合成

(1)称取0.1302g(0.29mmol)中间产物Ⅲ，加入0.58mmol的芳香醛类似物(4-二甲基氨基肉桂醛)，用正丁醇溶解，加入15mmol 4-甲基哌啶；将反应体系加热至125℃，操作方法同实施例4。得到0.145g新型噻唑橙Ⅳ-b，收率81％。其核磁共振氢谱结果如下：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.69(d,J＝8.4Hz,1H),8.14–8.08(m,1H),8.04(dd,J＝13.7,8.0Hz,1H),7.94(t,J＝7.8Hz,1H),7.69(q,J＝6.6Hz,2H),7.66–7.54(m,3H),7.47(t,J＝8.0Hz,2H),7.40(dd,J＝15.7,9.0Hz,1H),7.37–7.25(m,1H),7.16(dd,J＝27.1,14.8Hz,3H),6.84–6.72(m,3H),4.05(d,J＝24.1Hz,3H),3.95(s,3H),3.05–2.94(m,6H).合成过程如下所示：

(2)取0.05g(81μmol)步骤(1)制得的新型噻唑橙(Ⅳ-b)，用1mL乙腈溶解，溶解后加入1mL 1mmol/mL(1mmol)碳酸氢钠溶液，再加入650μmol溴化苄；将反应体系加热至55℃操作方法同实施例6，得到0.041g目标产物Ⅴ-b，收率72％。其核磁共振氢谱结果如下：¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.80(d,J＝8.3Hz,1H),8.20(dd,J＝19.5,8.8Hz,4H),8.04(dd,J＝30.8,13.7Hz,6H),7.83–7.71(m,4H),7.69–7.59(m,3H),7.48–7.35(m,5H),7.14(d,J＝7.3Hz,2H),6.97(s,1H),5.14(s,2H),4.05(s,3H),3.65(s,6H).合成路线如下所示：

实施例8新型噻唑橙Ⅳ-b、目标产物Ⅴ-b的合成

(1)称取0.1302g(0.29mmol)中间产物Ⅲ，加入0.58mmol的芳香醛类似物(4-二甲基氨基肉桂醛)，用正丁醇溶解，加入17mmol4-甲基哌啶；将反应体系加热至130℃，操作方法同实施例4。得到0.15g新型噻唑橙Ⅳ-b，收率85％。其核磁共振氢谱结果和合成过程同实施例7。

(2)取0.05g(81μmol)步骤(1)制得的新型噻唑橙(Ⅳ-b)，用1mL乙腈溶解，溶解后加入1mL 1mmol/mL(1mmol)碳酸氢钠溶液，再加入810μmol溴化苄；将反应体系加热至60℃操作方法同实施例6。得到0.0428g目标产物Ⅴ-b，收率76％。其核磁共振氢谱结果和合成过程同实施例4。

实施例9新型噻唑橙Ⅳ-b、目标产物Ⅴ-b的合成

(1)称取0.1302g(0.29mmol)中间产物Ⅲ，加入0.58mmol的芳香醛类似物(4-二甲基氨基肉桂醛)，用正丁醇溶解，加入19mmol4-甲基哌啶；将反应体系加热至135℃，操作方法同实施例4。得到0.148g新型噻唑橙Ⅳ-b，收率83％。其核磁共振氢谱结果和合成过程同实施例7。

(2)取0.05g(81μmol)步骤(1)制得的新型噻唑橙(Ⅳ-b)，用1mL乙腈溶解，溶解后加入1mL 1mmol/mL(1mmol)碳酸氢钠溶液，再加入970μmol溴化苄；将反应体系加热至65℃操作方法同实施例6。得到0.0422g目标产物Ⅴ-b，收率75％。其核磁共振氢谱结果和合成过程同实施例7。

实施例10抗菌活性筛选

1.采用临床和实验室标准协会(CLSI)指南中描述的肉汤微量稀释法测定各受试化合物的最小抑菌浓度MIC(μg/mL)值，受试化合物的结构式如表1所示：

表1噻唑橙苄基类季铵盐衍生物(Ⅴ-a，Ⅴ-b)的结构式

(1)抗菌药物和培养基制备：将待测化合物溶于DMSO配制成浓度为1.6mg/mL的储备液，过滤除菌备用。配好的MH肉汤培养基高压蒸汽灭菌30min，冷却后待用。

(2)种板：菌悬液酶标仪600nm测菌浓度，MH肉汤稀释至浓度相当于0.5麦氏比浊管(含菌量0.5×10⁸CFU/mL)，向96孔板中每孔加100μL菌液，待用。

(3)96孔板中第1列与第12列不加药，为空白对照。向第2列孔中依次加入8μL步骤(2)中配制好的化合物Ⅴ-a，Ⅴ-b抗菌药物储备液，再分别补充100μL菌液，充分混匀后从第2列中吸取100μL混合液至对应的第3列孔，再次充分混匀后吸取100μL混合液至第4列，重复至第8列时吸取100μL混合液弃掉，即采用倍半稀释法加药使第2列至第11列每孔药物浓度分别为64μg/mL、32μg/mL、16μg/mL、8μg/mL、4μg/mL、2μg/mL、1μg/mL、0.5μg/mL、0.25μg/mL、0.125μg/mL。再以DMSO作为溶剂对照组，以青霉素作为阳性对照组。

(4)孵育：将96孔板放置37℃恒温培养箱孵育24 h。

(5)结果判断：以小孔内完全抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。当空白对照孔(即不含抗生素)内细菌明显生长试验才有意义。

(6)微量肉汤稀释法中使用的细菌包括微量肉汤稀释法中使用的细菌包括对金黄色葡萄球菌(S.aureus ATCC29213)、大肠杆菌(E.coli ATCC29522)和枯草芽孢杆菌(B.subtilis168)(上述菌株均为市购)。

(7)采取以上方法进行抗菌测试，化合物最小抑菌浓度以MIC表示，结果如表2所示：

表2噻唑橙苄基类季铵盐衍生物Ⅴ-a、Ⅴ-b的MIC值(μg/mL)

2.根据表2测得的化合物最小抑菌浓度MIC值，测化合物最小杀菌浓度MBC值。

(1)根据化合物的最小抑菌浓度MIC值，分别吸取试管中大于MIC浓度的所有的菌液10μL。

(2)涂板：用移液枪将菌液滴加于固体培养基上，用涂布棒均匀涂抹。

(3)孵育：将固体培养基放置37℃恒温培养箱孵育24h。

(4)结果判断：以固体培养基内完全杀死细菌的最低药物浓度为MBC值。

(5)采取以上方法进行抗菌测试，化合物最小抑菌浓度以MBC表示，结果如表3所示。结果表明，本发明制得的噻唑橙苄基类季铵盐衍生物在体外能抑制并杀死多种耐药菌，可用于制备抗耐药菌的抗生素药物。

表3噻唑橙苄基类季铵盐衍生物Ⅴ-a,Ⅴ-b的MBC值(μg/mL)

实施例11细菌生长形态观察

用显微镜观察噻唑橙苄基类季铵盐衍生物Ⅴ-a，Ⅴ-b作用下枯草芽孢杆菌(B.subtilis168)的生长形态。

受试化合物如表1所示，指示菌选择枯草芽孢杆菌(B.subtilis168)，空白将配好的MH肉汤培养基高温蒸汽灭菌30min，冷却；将MH肉汤稀释至浓度相当于0.5麦氏比浊管(含菌量0.5×10⁸个/mL)，向96孔板中每孔加150μL菌液；然后分别在96孔板中加入实施例3化合物配置成的化合物储备液，使得每个受试化合物的浓度分别为表2中MIC半值；空白对照组采用DMSO。

结果显示，与空白组对比，加药组的菌体明显延长(图1～图3)，可判定化合物可作用于靶点FtsZ蛋白使细菌无法***繁殖而产生延长。进一步相对量化检测结果见表4。

表4 Ⅴ-a，Ⅴ-b对B.subtilis168生长形态影响

(“+”代表相对空白组延长的程度，其中，一个“+”代表延长10倍。)

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。