阅读说明：本技术 一种磁微粒储存液及其制备 (A kind of magnetic particle storing liquid and its preparation ) 是由 胡亚辉 唐若愚 王唯 于 2019-07-16 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种磁微粒储存液及其制备,其特征在于,所述磁微粒储存液的组分包括：Tris、氯化钠、Proclin-300、吐温20、海藻糖、酪蛋白、氢氧化钠。本发明通过多种配方的组合,实现了磁微粒试剂在灵敏度、测定范围、重复性、稳定性等方面,性能得以提升。譬如,通过加入酪蛋白、海藻糖,保护了磁微粒上的结合物；加入Proclin-300作为防腐剂,抑制了细菌生长,避免试剂被污染,性能受到影响；pH调整至反应最适合的pH,利于化学发光反应稳定地进行,保证了测试结果的可重复性。综合以上因素,本发明在提升试剂本身性能的同时,保证了磁微粒储存液的长期有效。(The invention discloses a kind of magnetic particle storing liquid and its preparations, which is characterized in that the component of the magnetic particle storing liquid includes: Tris, sodium chloride, Proclin-300, polysorbas20, trehalose, casein, sodium hydroxide.The present invention by the combinations of multiple formulations, realize magnetic particle reagent sensitivity, measurement range, repeatability, in terms of, property can be promoted.For example, by the way that casein, trehalose is added, the conjugate on magnetic particle is protected；Proclin-300 is added as preservative, it is suppressed that bacterial growth avoids reagent contaminated, and performance is affected；PH is adjusted to most suitable pH is reacted, and is steadily carried out conducive to chemiluminescence reaction, be ensure that the repeatability of test result.In summary factor, the present invention ensure that the permanently effective of magnetic particle storing liquid while promoting reagent performance itself.)

一种磁微粒储存液及其制备

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种磁微粒储存液及其制备。

背景技术

磁微粒化学发光法是近些年兴起开始流行的一种新的分析方法。磁微粒化学发光法结合了磁性分离技术、化学发光技术、免疫分析技术，以磁微粒为载体，通过检测化学发光反应的发光强度，计算出被检物的浓度。因灵敏度高、特异性强、测定范围宽、操作简单、无污染等优点，从一系列免疫分析技术中脱颖而出，越来越流行。

然而磁微粒的存储是实现磁微粒化学发光法的一大难点，现有的磁微粒存储液均存在背景值高、发光性能差、稳定性差。因为组分、pH等因素，影响到了化学发光反应的进行，导致试剂本身发光性能的下降。此外，因为缺少对磁微粒以及其上结合物的保护，导致试剂稳定性差，有效期短。

磁微粒的性能往往能影响到整个试剂的稳定性，从而对试剂性能造成影响。此外，不同试剂所检测的对象不一，所使用的检测方法随之变化，不同的抗体、抗原对磁珠、磁珠储存液的要求也有一些差异。

发明内容

由于上述现有技术中的不足，本发明针对磁微粒化学发光法所用磁珠，设计了一种储存液，用于磁微粒化学发光试剂里磁珠的储存、运输、使用。

本发明在提升化学发光反应的发光性能的同时，降低了背景值，相应提高了化学发光试剂的灵敏度，线性范围，此外保证了磁微粒存储的稳定性，延长了磁微粒储存液的有效期。

本发明适用于磁微粒化学发光试剂所用磁微粒，特别针对于预先偶联生物素标记抗体的链霉亲和素磁微粒，使用本发明效果优于其他磁微粒储存液。

本发明为实现上述目的提供一种磁微粒储存液，本发明采用了以下技术方案：

所述磁微粒储存液的组分包括：

Tris、氯化钠、Proclin-300、吐温20、海藻糖、酪蛋白、氢氧化钠。

本技术方案中，通过多种配方的组合，实现了磁微粒储存液在灵敏度、测定范围、重复性、稳定性等方面，性能得以提升。譬如，通过加入酪蛋白、海藻糖，保护了磁微粒上的结合物；加入Proclin-300作为防腐剂，抑制了细菌生长，避免试剂被污染，性能受到影响；pH调整至反应最适合的pH，利于化学发光反应稳定地进行，保证了测试结果的可重复性。综合以上因素，本发明在提升试剂本身性能的同时，保证了磁微粒储存液的长期有效。

优选地，所述组分的含量如下：

1wt％～1.4wt％的Tris、0.7wt％～1.1wt％的氯化钠、0.02vol％～0.2vol％的Proclin-300、0.05vol％～0.15vol％的吐温20、0.1wt％的海藻糖、0.2wt％～0.3w t％的酪蛋白、0.02wt％的氢氧化钠，剩下的含量用水补足至100％。

进一步，所述组分的含量优选如下：

1.2wt％的Tris、0.9wt％的氯化钠、0.05vol％的Proclin-300、0.15vol％的吐温20、0.1wt％的海藻糖、0.25wt％的酪蛋白、0.02wt％的氢氧化钠，剩下的含量用水补足至100％。

优选地，所述磁微粒储存液的颜色为无色透明，没有不溶物。

优选地，所述磁微粒储存液的pH范围为7.1～7.5，所述水为纯化水。

本发明还提供了一种磁微粒储存液的制备，其步骤如下：

S1、量取NaOH、酪蛋白、纯化水搅拌至完全溶解后离心得到上清液；

S2、称取Tris、NaCl、纯化水搅拌至完全溶解；

S3、用移液器吸取盐酸至所述步骤S2中所得的溶液中调节溶液的pH值；

S4、将所述上清液加入到所述步骤S3中所得的溶液中，搅拌均匀；

S5、量取Proclin-300、吐温20、海藻糖至所述步骤S4中所得的溶液中搅拌至完全溶解；

S6、用水将所述步骤S5所得的溶液定容后混匀；

S7、将经过所述步骤S1-S6配制好的溶液进行过滤得到磁微粒储存液。

优选地，所述步骤S1中：所述离心的转速为4000rpm，离心时间为20min。

优选地，所述盐酸的摩尔浓度为5mol/L；所述的用移液器吸取盐酸至所述步骤S2中所得的溶液中调节溶液的pH值至7.3±0.2。

本技术方案中，化学发光反应需要在一定范围的PH下进行，pH值至7.3±0.2既保证了化学发光反应的顺利进行，也避免了磁微粒的性能因强酸强碱受到破坏。

优选地，所述过滤所需的滤膜孔径为0.22μm。

本发明的有益效果在于：

1、本发明通过多种配方的组合，实现了磁微粒试剂在灵敏度、测定范围、重复性、稳定性等方面，性能得以提升。通过加入酪蛋白、海藻糖，保护了磁微粒上的结合物；加入Proclin-300作为防腐剂，抑制了细菌生长，避免试剂被污染，性能受到影响；pH调整至反应最适合的pH，利于化学发光反应稳定地进行，保证了测试结果的可重复性。综合以上因素，本发明在提升试剂本身性能的同时，保证了磁微粒试剂的长期有效。

2、本发明在提升化学发光反应的发光性能的同时，降低了背景值，相应提高了化学发光试剂的灵敏度，线性范围，此外保证了磁微粒存储的稳定性，延长了磁微粒试剂的有效期。

3、本发明适用于磁微粒化学发光试剂所用磁微粒，特别针对于预先偶联生物素标记抗体的链霉亲和素磁微粒，使用本发明效果优于其他磁微粒储存液。

具体实施方式

下面结合具体实施例来进一步描述本发明，但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本技术领域的普通技术人员应该理解的是，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

磁微粒储存液的组分及含量为：1wt％～1.4wt％的Tris、0.7wt％～1.1wt％的氯化钠、0.02vol％～0.2vol％的Proclin-300、0.05vol％～0.15vol％的吐温20、0.1wt％的海藻糖、0.2wt％～0.3wt％的酪蛋白、0.02wt％的氢氧化钠，剩下的含量用水补足至100％。

本发明还提供了一种磁微粒储存液的制备步骤，所述步骤如下：

S1、量取NaOH、酪蛋白、纯化水搅拌至完全溶解后离心得到上清液；

S2、称取Tris、NaCl、超纯水搅拌至完全溶解；

S3、用移液器吸取盐酸至所述步骤S2中所得的溶液中调节溶液的pH值；

S4、将所述上清液加入到所述步骤S3中所得的溶液中，搅拌均匀；

S5、量取Proclin-300、吐温20、海藻糖至所述步骤S4中所得的溶液中搅拌至完全溶解；

S6、用水将所述步骤S5所得的溶液定容后混匀；

S7、将经过所述步骤S1-S6配制好的溶液进行过滤得到磁微粒储存液。

实施例1

本具体实施例公开了本发明一种磁微粒储存液的制备方法：

以配制100mL为例：

1)量取0.02g NaOH、0.38g酪蛋白、7.5mL纯化水，搅拌至溶解，4000rpm，离心20min，取上清。

2)使用量筒取60mL超纯水放入配制容器中；

3)称取1.211g三羟甲基氨基甲烷、0.9g氯化钠，搅拌器搅拌至完全溶解；

4)用移液器量取适量的5mol/L盐酸调节pH至pH 7.3±0.2；

5)加入步骤1)的离心上清5mL，搅拌均匀；

6)用移液枪吸取0.05mL Proclin-300、0.15mL吐温20、0.1mL海藻糖加入至配制容器中，搅拌器搅拌至完全溶解；

7)用超纯水将溶液定容至100mL，混匀；

8)使用过滤器将配制好的溶液进行过滤，滤膜孔径为0.22μm；

9)观察溶液颜色，应为无色透明，没有不溶物。

本实施例通过多种配方的组合，实现了磁微粒试剂在灵敏度、测定范围、重复性、稳定性等方面，性能得以提升。通过加入酪蛋白、海藻糖，保护了磁微粒上的结合物；加入Proclin-300作为防腐剂，抑制了细菌生长，避免试剂被污染，性能受到影响；pH调整至反应最适合的pH，利于化学发光反应稳定地进行，保证了测试结果的可重复性。综合以上因素，本发明在提升试剂本身性能的同时，保证了磁微粒试剂的长期有效。

对比例1

本对比例公开了常规磁微粒储存液的制备工艺及其配比，其配比如下：

0.02wt％的磷酸二氢钾、0.29wt％的十二水磷酸氢二钠、0.8wt％氯化钠、0.02wt％的氯化钾、0.1vol％的Proclin-300，剩下的含量用水补足至100％。

以配制100mL为例：

1)使用量筒取80mL超纯水放入配制容器中；

2)使用精密天平称取0.02g磷酸二氢钾、0.29g十二水磷酸氢二钠、0.80g氯化钠、0.02g氯化钾缓慢加入配制容器中，搅拌至完全溶解；

3)用移液器量取0.1mL Proclin-300加入配制容器中，搅拌混匀；

4)用移液器量取适量的5mol/L NaOH调节pH至7.4±0.1；

5)用超纯水将溶液定容至100mL，搅拌混匀15分钟；

6)使用真空过滤器将配制好的溶液进行过滤；

7)观察溶液颜色，应为无色透明，没有不溶物。

实施例2

本具体实施例公开了另一种配比，其制备步骤与实施例1相同，其成分的比例为：1.4wt％Tris、1.1wt％氯化钠、0.2vol％Proclin-300、0.15vol％吐温20、0.1％wt％海藻糖、0.3wt％酪蛋白、0.02wt％氢氧化钠，剩下的含量用水补足至100％。

实施例3

本具体实施例公开了另一种配比，其制备步骤与实施例1相同，其成分的比例为：1wt％Tris、0.7wt％氯化钠、0.02vol％Proclin-300、0.05vol％吐温20、0.1wt％海藻糖、0.2wt％酪蛋白、0.02wt％氢氧化钠，剩下的含量用水补足至100％。

下表是实施例1、2、3与对比例1的发光值与背景值的差异对比，检测步骤如下：将偶联有生物素标记白介素-6抗体的链霉亲和素磁微粒用磁微粒储存液配置成磁微粒工作液，搭配上海彧成生物科技有限公司生产的白介素-6(IL-6)测定试剂盒(磁微粒化学发光法)，使用南京迪格诺斯生物技术有限公司生产的ACL2800全自动化学发光测定仪测试不同浓度的白介素6校准品的发光值，其结果如表1所示。其中，背景值为测量0浓度的物质。

表1

由表1可知，本发明实施例1、2、3的化学发光试剂，相较对比例1的磁微粒储存液，背景值低，发光性能好，高值校准品与低值校准品的发光值比值更大。

本发明在提升化学发光反应的发光性能的同时，降低了背景值，相应提高了化学发光试剂的灵敏度，线性范围。

实施例4

本具体实施例公开了将实施例1所制备的磁微粒储存液和偶联有生物素标记白介素-6抗体的链霉亲和素磁微粒配置成磁微粒工作液，分别放入4℃、37℃储存，于第0、2、5、8天拿出来，搭配同一批白介素6生物素标记抗体、吖啶酯标记抗体，测试同一批白介素6校准品，比较发光值差异，其结果如表3所示：

表2

由表3可知，实施例1所制备的磁微粒储存液，搭配链霉亲和素磁微粒配置成磁微粒工作液，在4℃存放8天后与存放第0天的发光值差异在校准品浓度是5000pg/mL时差异是-1.53％；在校准品浓度是500pg/mL时差异是-7.29％；在校准品浓度是50pg/mL时差异是-7.75％。在37℃存放8天后与4℃存放8天后的发光值差异，在校准品浓度是5000pg/mL时差异是-4.24％；在校准品浓度是500pg/mL时差异是3.80％；在校准品浓度是50pg/mL时差异是5.39％。

实施例5

本具体实施例公开了对比例1所制备的磁微粒储存液和偶联有生物素标记白介素-6抗体的链霉亲和素磁微粒配置成磁微粒工作液，分别放入4℃、37℃储存，于第0、2、5、8天拿出来，搭配同一批白介素6生物素标记抗体、吖啶酯标记抗体，测试同一批白介素6校准品，比较发光值差异，其结果如表3所示：

表3

由表3可知，对比例1所制备的磁微粒储存液在4℃存放8天后与存放第0天的发光值差异，在校准品浓度是5000pg/mL时差异是6.53％；在校准品浓度是500pg/mL时差异是2.79％；在校准品浓度是50pg/mL时差异是2.61％。在37℃存放8天后与4℃存放8天后的发光值差异，在校准品浓度是5000pg/mL时差异是-48.69％；在校准品浓度是500pg/mL时差异是-50.82％；在校准品浓度是50pg/mL时差异是-49.09％。

通过表2与表3的对比可知，实施例1所制备的磁微粒储存液较对比例1所制备的磁微粒储存液在37℃存放8天发光值与4℃存放8天差异不大，4℃存放8天与存放第0天的发光值差异不大，稳定性好。

综上可知，本发明适用于大部分磁微粒化学发光法所用磁微粒，特别针对于预先偶联生物素标记抗体的链霉亲和素磁微粒，使用本发明效果优于其他磁微粒储存液。

以上所述实施例仅表达了本发明的实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。