磁珠-核酸复合体洗涤液及应用
阅读说明：本技术 磁珠-核酸复合体洗涤液及应用 (Magnetic bead-nucleic acid complex washing solution and application ) 是由 黄美莹 毕峻龙 刘晓东 李滨 黎明 于 2021-03-24 设计创作，主要内容包括：本发明涉及体外诊断核酸检测领域,提供了一种新的磁珠-核酸复合体洗涤液及应用。本洗涤液由粘度介于1000～50000cs之间的硅油构成。本应用包括将粘度介于1000～50000cs之间的硅油作为磁珠法全自动提取核酸模板的洗涤液。上述硅油作为洗涤液,能够有效的分隔裂解液和扩增液,避免裂解液下渗。而且,不会发生磁珠滞留,能够解决磁珠临界损失问题,避免影响传送到扩增液的核酸模板数量。(The invention relates to the field of in-vitro diagnosis nucleic acid detection, and provides a novel magnetic bead-nucleic acid complex washing solution and application thereof. The cleaning solution is composed of silicone oil with the viscosity of 1000-50000 cs. The application comprises the step of taking silicone oil with the viscosity of 1000-50000 cs as washing liquid for full-automatically extracting the nucleic acid template by a magnetic bead method. The silicone oil is used as a washing liquid, so that the lysis solution and the amplification solution can be effectively separated, and the lysis solution is prevented from leaking downwards. Moreover, the magnetic bead retention can not occur, the problem of critical loss of the magnetic bead can be solved, and the influence on the number of the nucleic acid templates conveyed to the amplification solution can be avoided.)
技术领域
本发明涉及体外诊断核酸检测领域，具体是一种新的磁珠-核酸复合体洗涤液以及应用。
背景技术
磁珠法是核酸检测使用的一种核酸自动提取方法。磁珠法是利用外置磁体和试管内的磁珠的磁吸作用，用外置磁体驱动磁珠在试管内运动，实现磁珠-核酸复合体从裂解液到洗涤液，再从洗涤液到扩增液的运动，从而实现核酸模板自动提取。
磁珠法核酸自动提取中，洗涤液除了去除磁珠-核酸复合体残留的裂解液和样本液，还起到分隔裂解液和扩增液的作用。现有磁珠法核酸自动提取中，存在以下问题：1、容易发生裂解液下渗问题；2、磁珠容易残留在两种液体组分的临界面，即存在磁珠临界损失问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种磁珠-核酸复合体洗涤液及应用，以至少在一定程度解决相关技术存在的上述问题。
发明人研究发现，使用合适粘度的硅油作为磁珠法核酸自动提取中洗涤液，能够有效分隔裂解液和扩增液同时能够解决磁珠临界损失问题，所以提出本专利申请。本发明采用的技术方案如下：
一种磁珠-核酸复合体洗涤液，所述磁珠-核酸复合体洗涤液由粘度介于1000～50000cs之间的硅油构成。其中，硅油的粘度可以是1000～50000cs之间的任意数值，例如1000cs、2000cs、2500cs、3000cs、4000cs、5500cs、6000cs、7000cs、8000cs、9000cs、10000cs、12000cs、13000cs、15000cs、16000cs、18000cs、20000cs、21000cs、23000cs、25000cs、28000cs、30000cs、33000cs、35000cs、37000cs、40000cs、43000cs、45000cs、48000cs、49000cs、50000cs。
硅油粘度优选介于3000～30000cs之间。
硅油粘度还优选介于5000～20000cs之间。
本发明还提供了将粘度介于1000～50000cs之间的硅油作为磁珠法全自动提取核酸模板的洗涤液的应用。
在上述应用中，所述硅油被填装于试管内的裂解液和扩增液之间。
在上述应用中，优选地，所述硅油的深度介于30～60mm之间。
与现有技术相比，本发明至少具有以下有益效果：
经实验，上述粘度区间的硅油作为洗涤液，能够有效的分隔裂解液和扩增液，避免裂解液下渗。而且，不会发生磁珠滞留，能够解决磁珠临界损失问题，避免影响传送到扩增液的核酸模板数量。
附图说明
图1为采用常规洗涤液的分隔效果图；
图2为采用硅油洗涤液的分隔效果图；
图3为采用常规洗涤液的扩增曲线图；
图4为采用硅油作为洗涤液的扩增曲线图；
图5至图7为采用不同粘度的硅油作为洗涤液的扩增曲线图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明做进一步说明。
实施例一：磁珠-核酸复合体洗涤液
磁珠-核酸复合体洗涤液由粘度介于1000～50000cs之间的硅油构成。其中，硅油的粘度可以是1000～50000cs之间的任意数值，例如1000cs、2000cs、2500cs、3000cs、4000cs、5500cs、6000cs、7000cs、8000cs、9000cs、10000cs、12000cs、13000cs、15000cs、16000cs、18000cs、20000cs、21000cs、23000cs、25000cs、28000cs、30000cs、33000cs、35000cs、37000cs、40000cs、43000cs、45000cs、48000cs、49000cs、50000cs。硅油粘度优选介于3000～30000cs之间。硅油粘度还优选介于5000～20000cs之间。
其中，硅油的粘度对洗涤效果和分隔效果存在影响。具体影响如下：当粘度过大时，会导致磁珠在硅油中滞留，影响传送到扩增液中的核酸模板数量，进而会导致扩增效果差，结果不稳定；当粘度过小时，硅油无法在试管中长时间停留，硅油上移，裂解液下渗混入扩增液中导致扩增酶变性失活。
实施例二：
硅油作为磁珠法全自动提取核酸模板的洗涤液的应用。其中，硅油的粘度可以是1000～50000cs之间的任意数值，例如1000cs、2000cs、2500cs、3000cs、4000cs、5500cs、6000cs、7000cs、8000cs、9000cs、10000cs、12000cs、13000cs、15000cs、16000cs、18000cs、20000cs、21000cs、23000cs、25000cs、28000cs、30000cs、33000cs、35000cs、37000cs、40000cs、43000cs、45000cs、48000cs、49000cs、50000cs。硅油粘度优选介于3000～30000cs之间。硅油粘度还优选介于5000～20000cs之间。
在上述应用中，所述硅油被填装于试管内的裂解液和扩增液之间，硅油充当洗涤液除去磁珠-核酸复合体残留的裂解液和样本液。
在上述应用中，所述硅油的深度优选介于30～60mm之间。
实施例三：常规洗涤液和硅油洗涤液的洗涤效果对比实验
常规洗涤液实验：裂解液和洗涤液采用全式金EC601通用型试剂盒，扩增液采用菲鹏公司的MD027扩增液，洗涤效果如图1所示。
硅油洗涤液实验：
裂解液采用全式金EC601通用型试剂盒，扩增液采用菲鹏公司的MD027扩增液，洗涤液采用粘度为15000cs的硅油，洗涤效果如图2所示。
裂解液采用全式金EC601通用型试剂盒，扩增液采用菲鹏公司的MD027扩增液，分别用粘度为5000cs、8000cs、12000cs、20000cs、30000cs、40000cs的硅油作为洗涤液，洗涤效果如图2所示。
图1和图2的试管中，上层为裂解液，下层为扩增液，中间为洗涤液。由图1可见，上层裂解液有不同程度的下渗，底部扩增液中、以及洗涤液和扩增液的临界面均有磁珠残留。由图2可见，裂解液没有明显下渗，扩增液内和两层临界面没有磁珠残留。可见，相比常规洗涤液，上述硅油洗涤液具有良好的分隔效果，能够有效避免裂解液下渗混入扩增液导致扩增酶变性失活；同时，磁珠在硅油洗涤液中无滞留，因此不会影响传送到扩增液的核酸模板数量，因此，上述硅油洗涤液替代传统的核酸洗涤液，实现裂解液和扩增液的分隔同时解决了磁珠的临界损失问题。
实施例四：扩增效果的对比实验
常规洗涤液扩增实验：裂解液和洗涤液采用全式金EC601通用型试剂盒，扩增液采用菲鹏公司的MD027扩增液，使用布氏杆菌为比较样本，扩增曲线如图3所示，其中，纵坐标为荧光强度，横坐标为循环数，ROX为阴性参照。
硅油洗涤液扩增实验：裂解液采用全式金EC601通用型试剂盒，扩增液采用菲鹏公司的MD027扩增液，洗涤液采用粘度为15000cs的硅油，使用布氏杆菌为比较样本，扩增曲线如图4所示，其中，纵坐标为荧光强度，横坐标为循环数，ROX为阴性参照。
对比图3和图4可见，从扩增效果看，硅油对磁珠-核酸复合物的洗涤效果优于常规洗涤液。
实施例五：硅油洗涤液的粘度对扩增效果的对比实验
裂解液采用全式金EC601通用型试剂盒，扩增液采用菲鹏公司的MD027扩增液，洗涤液分别采用粘度为55000cs的硅油、粘度为15000cs的硅油、粘度为800cs的硅油，使用布氏杆菌为比较样本，扩增曲线对应如图5、图6、图7所示，其中，纵坐标为荧光强度，横坐标为循环数，ROX为阴性参照。
由图5、图6、图7可见，采用高粘度硅油作为洗涤液，扩增效果差结果不稳定，其原因可能在于高粘度硅油影响磁珠的运动速度，使磁珠在硅油层中滞留无法把核酸模板带到扩增液中。采用低粘度硅油作为洗涤液，无法扩增，其原因可能在于低粘度的硅油无法在反应管中长时间停留会，硅油上移，裂解液下渗混到扩增液中导致扩增酶变性失活。而合适粘度的硅油作为洗涤液，具有良好的扩增效果。
上述通过具体实施例对本发明进行了详细的说明，这些详细的说明仅仅限于帮助本领域技术人员理解本发明的内容，并不能理解为对本发明保护范围的限制。本领域技术人员在本发明构思下对上述方案进行的各种润饰、等效变换等均应包含在本发明的保护范围内。
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