一种富含复合果纤蛋白的食用菌溶豆制备方法
阅读说明：本技术 一种富含复合果纤蛋白的食用菌溶豆制备方法 (Preparation method of edible fungus soluble bean rich in composite fruit fiber protein ) 是由 程世伦 史德芳 高虹 范秀芝 殷朝敏 姚芬 陈璁 程治 程杨幸子 于 2021-09-03 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种富含复合果纤蛋白的食用菌溶豆制备方法,食用菌溶豆制备方法步骤如下：①、食用菌菌种活化后液态发酵；②、制作培养基；③、发酵菌丝体细胞破碎经冻干和气流粉碎；④、电磁分离；⑤、制作混合水果浆体；⑥、果纤蛋白复合物；⑦、混合体冻干成型。采用以上配方后,本发明具有如下优点：(1)创新蛋白质分离技术。本发明采用发酵富集制备食用菌菌体蛋白,通过超高压-冻干-气流粉碎处理,提高了蛋白质的纯度,降低了蛋白质的损耗；超高压技术有利于菌体细胞破碎,(2)口感更细腻；这种物质结构有利于消化吸收；(3)产品定位凸显了菌类蛋白营养优势,采用物理场技术分离富集蛋白质,融合水果营养释放效果。(The invention relates to a preparation method of edible fungus soluble bean rich in composite fruit fiber protein, which comprises the following steps: activating edible fungus strains and then performing liquid fermentation; ② preparing a culture medium; crushing the somatic cells of the fermentation mycelia, and freeze-drying and airflow crushing; fourthly, electromagnetic separation; fifthly, making mixed fruit pulp; sixthly, a fruit fiber protein compound; and seventhly, freeze-drying and forming the mixture. After the formula is adopted, the invention has the following advantages: (1) a novel protein separation technology is provided. According to the invention, the edible fungus mycoprotein is prepared by fermentation and enrichment, and the purity of the protein is improved and the loss of the protein is reduced by ultrahigh pressure-freeze drying-airflow crushing treatment; the ultrahigh pressure technology is beneficial to the breaking of thallus cells, and (2) the taste is more delicate; the material structure is favorable for digestion and absorption; (3) the product location highlights the nutritional advantages of the fungus proteins, and the physical field technology is adopted to separate and enrich the proteins and fuse the nutritional release effect of fruits.)
技术领域
本发明涉及食用菌技术领域，具体是指一种富含复合果纤蛋白的食用菌溶豆制备方法。
背景技术
食用菌不仅具有较高的营养和保健价值，还具有独特的风味，深受消费者青睐。食用菌人工栽培时间长，且受季节的影响。特别是人工栽培食用菌容易富集金属镉离子，存在一定的重金属污染风险，使得其制备产品具有一定的食用安全风险。近年来液体发酵技术的飞速发展，该技术具有培养周期短、快速增殖菌体细胞和分泌物、显著提高生产效率等优点。通过定向富集食用菌蛋白质发酵技术是获取菌体蛋白质的富有前景的手段。
但是目前食用菌蛋白缺乏有效的提取分离技术。目前常用的食用菌蛋白的提取分离方法为缓冻－传统水提法、超声波辅助碱提法、酶解法等，这些方法的缺点和不足之处为提取液对环境有污染风险且提取率不高，对大规模工业化提取还要大量能源消耗等。亟需一种新型的提取分离技术实现食用菌蛋白富集。
其次，溶豆产品作为一款新型的健康营养产品，受到消费者的喜爱。多数工艺只是以酸奶、牛奶、豆奶为主要原料添加各种营养成分混合或阶段性采用干燥、粉碎、磨浆、均质、浓缩、喷粉等工艺制备而成，这些工艺也比较常见；而且传统的多组分混合配料，不一定并利于人体消化吸收。因此，本发明采用新型物理场(电磁)分离技术分离纯化食用菌菌体蛋白，然后融合水果纤维等制备果纤蛋白体，经冻干后形成食用菌溶豆。
发明内容
鉴于现有技术的不足，本发明提供一种富含复合果纤蛋白的食用菌溶豆制备方法。
为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为：
所述的食用菌溶豆包括食用菌、培养基、发酵菌丝和果纤蛋白复合物，所述的食用菌溶豆制备方法步骤如下：
①、食用菌菌种活化后液态发酵：接种量为8％～12％，发酵条件200～400转/分钟；发酵温度27℃，发酵时间120～144小时；
②、培养基为：蔗糖25～30g/L，玉米粉10～15g/L，豌豆粉10g/L，麸皮5g/L，复合维生素B族10～50mg/L，在发酵中期，加入D－半乳糖10g/L,亮氨酸8g/L；
③、发酵菌丝体细胞破碎经冻干和气流粉碎，高压250～350MPa，处理时间8～12min，
发酵菌丝体冻干后，气流粉碎；
④、电磁分离：粉体通过电磁分离器，收集蛋白粉；
⑤、黄桃、苹果、草莓、柑橘预处理后用纤维素酶处理后，用水冲洗，得到水果浆体，按照质量比1：5：15混合水果浆体；
⑥、果纤蛋白复合物：混合水果浆体和去离子水调节pH值至8.0，加入辛癸酸甘油酯0.8％，搅拌过夜，除去沉淀物，超声处理器超声4min，添加3％的魔芋胶体，最后获得均一的混合体。
⑦、混合体冻干成型
采用以上配方后，本发明具有如下优点：
(1)创新蛋白质分离技术。本发明采用发酵富集制备食用菌菌体蛋白，通过超高压－冻干－气流粉碎处理，提高了蛋白质的纯度，降低了蛋白质的损耗；超高压技术有利于菌体细胞破碎，冻干技术很大程度上降低了蛋白质的降解，而气流粉碎处理使得蛋白质具备电磁分离条件；
(2)果纤蛋白制备技术。通过可控酶解实现了黄桃、苹果、草莓、柑橘等果胶、果肉物质的外露，加入辛癸酸甘油酯，搅拌过夜，除去沉淀物和超声波处理制备成果纤蛋白体，口感更细腻；这种物质结构有利于消化吸收；
(3)产品定位凸显了菌类蛋白营养优势，采用物理场技术分离富集蛋白质，融合水果营养释放效果，体现了绿色清洁化加工导向，是一款富有菌类蛋白成分的新型营养健康产品。
作为改进，食用菌菌种为双孢蘑菇或香菇。
附图说明
图1为本发明实施例一的菌丝体气流粉碎粒径分布图。
图2为本发明实施例一的出果纤蛋白体微观结果效果图。
图3为本发明实施例二的菌丝体气流粉碎粒径分布图。
图4为本发明实施例二的出果纤蛋白体微观结果效果图。
图5为本发明实施例三的菌丝体气流粉碎粒径分布图。
图6为本发明实施例三的出果纤蛋白体微观结果效果图。
图7为本发明实施例四的菌丝体气流粉碎粒径分布图。
图8为本发明实施例四的出果纤蛋白体微观结果效果图。
图9为本发明实施例五的菌丝体气流粉碎粒径分布图。
图10为本发明实施例五的出果纤蛋白体微观结果效果图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明做进一步的详细说明。
一种富含复合果纤蛋白的食用菌溶豆制备方法，所述的食用菌溶豆包括食用菌、培养基、发酵菌丝和果纤蛋白复合物，所述的食用菌溶豆制备方法步骤如下：
①、食用菌菌种活化后液态发酵：接种量为8％～12％，发酵条件200～400转/分钟；发酵温度27℃，发酵时间120～144小时；
②、培养基为：蔗糖25～30g/L，玉米粉10～15g/L，豌豆粉10g/L，麸皮5g/L，复合维生素B族10～50mg/L，在发酵中期，加入D－半乳糖10g/L,亮氨酸8g/L；
③、发酵菌丝体细胞破碎经冻干和气流粉碎，高压250～350MPa，处理时间8～12min，
发酵菌丝体冻干后，气流粉碎；
④、电磁分离：粉体通过电磁分离器，收集蛋白粉；
⑤、黄桃、苹果、草莓、柑橘预处理后用纤维素酶处理后，用水冲洗，得到水果浆体，按照质量比1：5：15混合水果浆体；
⑥、果纤蛋白复合物：混合水果浆体和去离子水调节pH值至8.0，加入辛癸酸甘油酯0.8％，搅拌过夜，除去沉淀物，超声处理器超声4min，添加3％的魔芋胶体，最后加入蛋白粉获得均一的混合体。
⑦、混合体冻干成型
食用菌菌种为双孢蘑菇或香菇。
实施例一：
①、香菇菌种活化后液态发酵：香菇菌种经活化子培养后，无菌接入50L生产型发酵罐中进行液态发酵，接种量为8％，发酵条件200转/分钟；发酵温度27℃，发酵时间120小时。
②、培养基为：蔗糖25g/L，玉米粉10g/L，豌豆粉10g/L，麸皮5g/L，复合维生素B族10mg/L，在发酵至78h时，补料加入D－半乳糖10g/L，亮氨酸8g/L，继续发酵至终点。香菇菌丝体生物量为48g/L(干重)；
③、香菇菌丝体收集后超高压处理(250MPa，处理时间8min)，菌丝体冻干，气流粉碎(分级机频率30Hz，分级机转速为2400r/min，加料速度8.0kg/h)；
④、电磁分离：粉体通过电磁分离器(电极板距离25cm，电场强度1kV/cm；磁矩15cm；磁感应强度：79.8mT)。收集蛋白粉，纯度为68.6％，回收率10.71％；
⑤、取(黄桃)预处理后用纤维素酶处理(45℃，pH4.8，处理时间5h)后，酶解物用水反复冲洗，得到水果浆体(30％)；按照质量比1：5：15的比例混合水果浆体；
⑥、果纤蛋白复合物：混合水果浆体和去离子水，调节pH值至8.0，加入辛癸酸甘油酯0.8％，搅拌过夜，除去沉淀物，超声处理器超声(有效处理时间4min、高场强超声频率20kHz、振幅和脉冲持续时间分2s超声时间+2s断开时间)，添加3％的魔芋胶体，最后加入蛋白粉获得均一的混合体；
⑦、混合体冻干成型。
使用激光粒度分布仪(APA2000，英国马尔文公司)测定，如图1所示，气流超微粉碎菌丝体后粒径中位径D50为4.369μm，D90为6.778μm，数值均小于20μm，结果表明经过本发明的粉碎技术使得绝大部分菌丝体的细胞都被破碎，保证了后续电磁分离工艺的顺利实施，得出菌丝体气流粉碎粒径分布图。
激光共聚焦扫描显微镜分析：
0.1％异硫氰酸荧光素(溶解于二甲基亚砜中)和0.1％尼罗红(溶解于乙醇中)混合用于蛋白质染色。将20μL染料混合物添加到1mL果纤蛋白混合体中。使用激光共聚焦扫描显微镜检查超声处理乳液的结构。使用在488nm和633nm激发波长下工作的Ar-Kr离子激光器和He-Ne激光器分别对油滴和蛋白质成像。使用油浸物镜以100放大倍率进行观察，得出果纤蛋白体微观结果效果图(图2)。
实施例二：
①、双孢蘑菇菌种活化后液态发酵：双孢蘑菇菌种经活化子培养后，无菌接入50L生产型发酵罐中进行液态发酵，接种量为8％，发酵条件400转/分钟；发酵温度27℃，发酵时间130小时；
②、培养基为：蔗糖25g/L，玉米粉12g/L，豌豆粉10g/L，麸皮5g/L，复合维生素B族30mg/L，在发酵至70h，补料加入D－半乳糖10g/L，亮氨酸8g/L，继续发酵至终点。香菇菌丝体生物量为45g/L(干重)；
③、双孢蘑菇菌丝体收集后超高压处理(350MPa，处理时间10min)，菌丝体冻干，气流粉碎(分级机频率30Hz，分级机转速为2400r/min，加料速度8.0kg/h)；
④、电磁分离：粉体通过电磁分离器(电极板距离25cm，电场强度1kV/cm；磁矩15cm；磁感应强度：79.8mT)。收集蛋白粉，纯度为67.9％，回收率11.7％；
⑤、取(苹果)预处理后用纤维素酶处理(45℃，pH4.8，处理时间5h)后，酶解物用水反复冲洗，得到水果浆体(31％)；按照质量比1：5：15的比例混合水果浆体；
⑥、果纤蛋白复合物：混合水果浆体和去离子水，调节pH值至8.0，加入辛癸酸甘油酯0.8％，搅拌过夜，除去沉淀物，超声处理器超声(有效处理时间4min、高场强超声频率20kHz、振幅和脉冲持续时间分2s超声时间+2s断开时间)，添加3％的魔芋胶体，最后加入蛋白粉获得均一的混合体；
⑦、混合体冻干成型。
使用激光粒度分布仪(APA2000，英国马尔文公司)测定，如图3所示，气流超微粉碎菌丝体后粒径中位径D50为10.89μm，D90为15.523μm，数值均小于20μm，结果表明经过本发明的粉碎技术使得绝大部分菌丝体的细胞都被破碎，保证了后续电磁分离工艺的顺利实施。得出菌丝体气流粉碎粒径分布图。
激光共聚焦扫描显微镜分析：
0.1％异硫氰酸荧光素(溶解于二甲基亚砜中)和0.1％尼罗红(溶解于乙醇中)混合用于蛋白质染色。将20μL染料混合物添加到1mL果纤蛋白混合体中。使用激光共聚焦扫描显微镜检查超声处理乳液的结构。使用在488nm和633nm激发波长下工作的Ar-Kr离子激光器和He-Ne激光器分别对油滴和蛋白质成像。使用油浸物镜以100放大倍率进行观察。得出果纤蛋白体微观结果效果图(图4)。
实施例三：
①、双孢蘑菇菌种活化后液态发酵：双孢蘑菇菌种经活化子培养后，无菌接入50L生产型发酵罐中进行液态发酵，接种量为10％，发酵条件350转/分钟；发酵温度27℃，发酵时间140小时；
②、培养基为：蔗糖30g/L，玉米粉15g/L，豌豆粉10g/L，麸皮5g/L，复合维生素B族40mg/L，在发酵至70h，补料加入D－半乳糖10g/L，亮氨酸8g/L，继续发酵至终点。香菇菌丝体生物量为50g/L(干重)；
③、双孢蘑菇菌丝体收集后超高压处理(300MPa，处理时间12min)，菌丝体冻干，气流粉碎(分级机频率30Hz，分级机转速为2400r/min，加料速度8.0kg/h)；
④、电磁分离：粉体通过电磁分离器(电极板距离25cm，电场强度1kV/cm；磁矩15cm；磁感应强度：79.8mT)。收集蛋白粉，纯度为65.9％，回收率10.3％；
⑤、取(草莓)预处理后用纤维素酶处理(45℃，pH4.8，处理时间5h)后，酶解物用水反复冲洗，得到水果浆体(32％)；按照质量比1：5：15的比例混合水果浆体；
⑥、果纤蛋白复合物：混合水果浆体和和去离子水，调节pH值至8.0，加入辛癸酸甘油酯0.8％，搅拌过夜，除去沉淀物，超声处理器超声(有效处理时间4min、高场强超声频率20kHz、振幅和脉冲持续时间分2s超声时间+2s断开时间)，添加3％的魔芋胶体，最后加入蛋白粉获得均一的混合体；
⑦、混合体冻干成型。
使用激光粒度分布仪(APA2000，英国马尔文公司)测定，如图5所示，气流超微粉碎菌丝体后粒径中位径D50为6.183μm，D90为12.576μm，数值均小于20μm，结果表明经过本发明的粉碎技术使得绝大部分菌丝体的细胞都被破碎，保证了后续电磁分离工艺的顺利实施。得出菌丝体气流粉碎粒径分布图。
激光共聚焦扫描显微镜分析：
0.1％异硫氰酸荧光素(溶解于二甲基亚砜中)和0.1％尼罗红(溶解于乙醇中)混合用于蛋白质染色。将20μL染料混合物添加到1mL果纤蛋白混合体中。使用激光共聚焦扫描显微镜检查超声处理乳液的结构。使用在488nm和633nm激发波长下工作的Ar-Kr离子激光器和He-Ne激光器分别对油滴和蛋白质成像。使用油浸物镜以100放大倍率进行观察。得出果纤蛋白体微观结果效果图(图6)。
实施例四：
①、香菇菌种活化后液态发酵：香菇菌种经活化子培养后，无菌接入50L生产型发酵罐中进行液态发酵，接种量为11％，发酵条件200转/分钟；发酵温度27℃，发酵时间135小时。
②、培养基为：蔗糖27g/L，玉米粉15g/L，豌豆粉10g/L，麸皮5g/L，复合维生素B族10mg/L，在发酵至75h时，补料加入D－半乳糖10g/L，亮氨酸8g/L，继续发酵至终点。香菇菌丝体生物量为43g/L(干重)；
③、香菇菌丝体收集后超高压处理(250MPa，处理时间11min)，菌丝体冻干，气流粉碎(分级机频率30Hz，分级机转速为2400r/min，加料速度8.0kg/h)；
④、电磁分离：粉体通过电磁分离器(电极板距离25cm，电场强度1kV/cm；磁矩15cm；磁感应强度：79.8mT)。收集蛋白粉，纯度为69.5％，回收率11.61％；
⑤、取(柑橘)预处理后用纤维素酶处理(45℃，pH4.8，处理时间5h)后，酶解物用水反复冲洗，得到水果浆体(37％)；按照质量比1：5：15的比例混合水果浆体；
⑥、果纤蛋白复合物：混合水果浆体和去离子水，调节pH值至8.0，加入辛癸酸甘油酯0.8％，搅拌过夜，除去沉淀物，超声处理器超声(有效处理时间4min、高场强超声频率20kHz、振幅和脉冲持续时间分2s超声时间+2s断开时间)，添加3％的魔芋胶体，最后加入蛋白粉获得均一的混合体；
⑦、混合体冻干成型。
使用激光粒度分布仪(APA2000，英国马尔文公司)测定，如图7所示，气流超微粉碎菌丝体后粒径中位径D50为8.217μm，D90为11.391μm，数值均小于20μm，结果表明经过本发明的粉碎技术使得绝大部分菌丝体的细胞都被破碎，保证了后续电磁分离工艺的顺利实施，得出菌丝体气流粉碎粒径分布图。
激光共聚焦扫描显微镜分析：
0.1％异硫氰酸荧光素(溶解于二甲基亚砜中)和0.1％尼罗红(溶解于乙醇中)混合用于蛋白质染色。将20μL染料混合物添加到1mL果纤蛋白混合体中。使用激光共聚焦扫描显微镜检查超声处理乳液的结构。使用在488nm和633nm激发波长下工作的Ar-Kr离子激光器和He-Ne激光器分别对油滴和蛋白质成像。使用油浸物镜以100放大倍率进行观察。得出果纤蛋白体微观结果效果图(图8)。
实施例五：
①、香菇菌种活化后液态发酵：香菇菌种经活化子培养后，无菌接入50L生产型发酵罐中进行液态发酵，接种量为12％，发酵条件200转/分钟；发酵温度27℃，发酵时间144小时。
②、培养基为：蔗糖30g/L，玉米粉15g/L，豌豆粉10g/L，麸皮5g/L，复合维生素B族50mg/L，在发酵至78h时，补料加入D－半乳糖10g/L，亮氨酸8g/L，继续发酵至终点。香菇菌丝体生物量为46g/L(干重)；
③、香菇菌丝体收集后超高压处理(300MPa，处理时间12min)，菌丝体冻干，气流粉碎(分级机频率30Hz，分级机转速为2400r/min，加料速度8.0kg/h)；
④、电磁分离：粉体通过电磁分离器(电极板距离25cm，电场强度1kV/cm；磁矩15cm；磁感应强度：79.8mT)。收集蛋白粉，纯度为70.5％，回收率11.81％；
⑤、取(柑橘)预处理后用纤维素酶处理(45℃，pH4.8，处理时间5h)后，酶解物用水反复冲洗，得到水果浆体(35％)；按照质量比1：5：15的比例混合水果浆体；
⑥、果纤蛋白复合物：混合水果浆体和去离子水，调节pH值至8.0，加入辛癸酸甘油酯0.8％，搅拌过夜，除去沉淀物，超声处理器超声(有效处理时间4min、高场强超声频率20kHz、振幅和脉冲持续时间分2s超声时间+2s断开时间)，添加3％的魔芋胶体，最后加入蛋白粉获得均一的混合体；
⑦、混合体冻干成型。
使用激光粒度分布仪(APA2000，英国马尔文公司)测定，如图9所示，气流超微粉碎菌丝体后粒径中位径D50为9.213μm，D90为15.328μm，数值均小于20μm，结果表明经过本发明的粉碎技术使得绝大部分菌丝体的细胞都被破碎，保证了后续电磁分离工艺的顺利实施，得出菌丝体气流粉碎粒径分布图。
激光共聚焦扫描显微镜分析：
0.1％异硫氰酸荧光素(溶解于二甲基亚砜中)和0.1％尼罗红(溶解于乙醇中)混合用于蛋白质染色。将20μL染料混合物添加到1mL果纤蛋白混合体中。使用激光共聚焦扫描显微镜检查超声处理乳液的结构。使用在488nm和633nm激发波长下工作的Ar-Kr离子激光器和He-Ne激光器分别对油滴和蛋白质成像。使用油浸物镜以100放大倍率进行观察。得出果纤蛋白体微观结果效果图(图10)。
以上对本发明及其实施方式进行了描述，这种描述没有限制性，附图中所示的也只是本发明的实施方式之一，实际的结构并不局限于此。总而言之如果本领域的普通技术人员受其启示，在不脱离本发明创造宗旨的情况下，不经创造性的设计出与该技术方案相似的结构方式及实施例，均应属于本发明的保护范围。
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