具体实施方式

实施例1

一种阿普斯特微乳，包含药物活性成分和药物载体，所述药物活性成分为阿普斯特，所述药物载体为水包油型微乳液；以质量比计，药物活性成分：药物载体=1:100；以重量百分比计，所述水包油型微乳液原料组成为：混合乳化剂58.6%，水相24.7%，油相16.7%。

所述混合乳化剂包括乳化剂和助乳化剂，乳化剂与助乳化剂的质量比为1:2。

所述油相选自三乙酸甘油酯。

所述助乳化剂选自二乙二醇单乙基醚。

所述乳化剂为吐温-80和C20 聚氧乙烯醚的混合物，质量比为1:1。

所述水相为去离子水。

制备所述的阿普斯特微乳的方法，其具体步骤为：

（1）按比例称取各组分，备用；

（2）37℃下，将阿普斯特、混合乳化剂和油相在搅拌下混合均匀，得混合物I，然后将水相逐滴加入混合物I中，边加边搅拌，直至溶液澄清透明，无泡沫，静置得阿普斯特微乳。搅拌转速为300rmp。

本实施例中，药物活性成分阿普斯特的用量为100mg。

实施例2

一种阿普斯特微乳，包含药物活性成分和药物载体，所述药物活性成分为阿普斯特，所述药物载体为水包油型微乳液；以质量比计，药物活性成分：药物载体=1:100；以重量百分比计，所述水包油型微乳液原料组成为：混合乳化剂 55.8%，水相 30.0%，油相 14.2%。

所述混合乳化剂包括乳化剂和助乳化剂，乳化剂与助乳化剂的质量比为1:2。

所述油相选自三乙酸甘油酯。

所述助乳化剂选自二乙二醇单乙基醚。

所述乳化剂为吐温-80和C20 聚氧乙烯醚的混合物，质量比为1:1。

所述水相为去离子水。

制备所述的阿普斯特微乳的方法，其具体步骤为：

（1）按比例称取各组分，备用；

（2）37℃下，将阿普斯特、混合乳化剂和油相在搅拌下混合均匀，得混合物I，然后将水相逐滴加入混合物I中，边加边搅拌，直至溶液澄清透明，无泡沫，静置得阿普斯特微乳。搅拌转速为300rmp。

本实施例中，药物活性成分阿普斯特的用量为100mg。

实施例3

一种阿普斯特微乳，包含药物活性成分和药物载体，所述药物活性成分为阿普斯特，所述药物载体为水包油型微乳液；以质量比计，药物活性成分：药物载体=1:100；以重量百分比计，所述水包油型微乳液原料组成为：混合乳化剂 70.0%，水相 20.5%，油相 9.5%。

所述混合乳化剂包括乳化剂和助乳化剂，乳化剂与助乳化剂的质量比为1:2。

所述油相选自三乙酸甘油酯。

所述助乳化剂选自二乙二醇单乙基醚。

所述乳化剂为吐温-80和C20 聚氧乙烯醚的混合物，质量比为1:1。

所述水相为去离子水。

制备所述的阿普斯特微乳的方法，其具体步骤为：

（1）按比例称取各组分，备用；

（2）37℃下，将阿普斯特、混合乳化剂和油相在搅拌下混合均匀，得混合物I，然后将水相逐滴加入混合物I中，边加边搅拌，直至溶液澄清透明，无泡沫，静置得阿普斯特微乳。搅拌转速为300rmp。

本实施例中，药物活性成分阿普斯特的用量为100mg。

实施例4

一种阿普斯特微乳，包含药物活性成分和药物载体，所述药物活性成分为阿普斯特，所述药物载体为水包油型微乳液；以质量比计，药物活性成分：药物载体=1:100；以重量百分比计，所述水包油型微乳液原料组成为：混合乳化剂 50.0%，水相 30.0%，油相20.0%。

所述混合乳化剂包括乳化剂和助乳化剂，乳化剂与助乳化剂的质量比为1:1。

所述油相选自肉豆蔻酸异丙酯。

所述助乳化剂选自聚乙二醇400。

所述乳化剂为吐温-80。

所述水相为去离子水。

制备所述的阿普斯特微乳的方法，其具体步骤为：

（1）按比例称取各组分，备用；

（2）37℃下，将阿普斯特、混合乳化剂和油相在搅拌下混合均匀，得混合物I，然后将水相逐滴加入混合物I中，边加边搅拌，直至溶液澄清透明，无泡沫，静置得阿普斯特微乳。搅拌转速为300rmp。

本实施例中，药物活性成分阿普斯特的用量为100mg。

实施例5

一种阿普斯特微乳，包含药物活性成分和药物载体，所述药物活性成分为阿普斯特，所述药物载体为水包油型微乳液；以质量比计，药物活性成分：药物载体=1:100；以重量百分比计，所述水包油型微乳液原料组成为：混合乳化剂80.0%，水相 15%，油相 5%。

所述混合乳化剂包括乳化剂和助乳化剂，乳化剂与助乳化剂的质量比为1:1。

所述油相选自辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯。

所述助乳化剂选自丙二醇。

所述乳化剂为C20 聚氧乙烯醚的混合物。

所述水相为去离子水。

制备所述的阿普斯特微乳的方法，其具体步骤为：

（1）按比例称取各组分，备用；

（2）37℃下，将阿普斯特、混合乳化剂和油相在搅拌下混合均匀，得混合物I，然后将水相逐滴加入混合物I中，边加边搅拌，直至溶液澄清透明，无泡沫，静置得阿普斯特微乳。搅拌转速为300rmp。

本实施例中，药物活性成分阿普斯特的用量为100mg。

实施例6

一种阿普斯特微乳，包含药物活性成分和药物载体，所述药物活性成分为阿普斯特，所述药物载体为水包油型微乳液；以质量比计，药物活性成分：药物载体=1:100；以重量百分比计，所述水包油型微乳液原料组成为：混合乳化剂60.0%，水相 20%，油相 20%。

所述混合乳化剂包括乳化剂和助乳化剂，乳化剂与助乳化剂的质量比为2:1。

所述油相选自油酸乙酯。

所述助乳化剂选自无水乙醇。

所述乳化剂为乳化剂OP。

所述水相为去离子水。

制备所述的阿普斯特微乳的方法，其具体步骤为：

（1）按比例称取各组分，备用；

（2）37℃下，将阿普斯特、混合乳化剂和油相在搅拌下混合均匀，得混合物I，然后将水相逐滴加入混合物I中，边加边搅拌，直至溶液澄清透明，无泡沫，静置得阿普斯特微乳。搅拌转速为300rmp。

本实施例中，药物活性成分阿普斯特的用量为100mg。

试验例1 阿普斯特微乳的体外经皮渗透实验

1、大鼠离体皮肤的制备

取体重170-200g健康的SD大鼠， 实验前一天用电动剃毛器和脱毛膏去除大鼠背部的毛，用0.9%氯化钠溶液清洗皮肤并擦干。实验当天乙醚麻醉处死，用手术剪小心剪下皮肤，用手术刀清除皮下组织和血管，冲洗干净。灯光下查看皮肤状况，检查皮肤有无针眼、有无厚薄不均过厚或者过薄，若有损伤不能用于实验，完好的皮肤置于0.9%氯化钠溶液中反复漂洗至溶液无浑浊，用滤纸吸干皮肤上的水分，置于铝箔中包裹，放-20℃冰箱保存，临用前解冻至室温使用。

2、体外经皮渗透实验

本发明采用改良的 Franz 扩散池进行实验，水浴温度控制在 32±1 ℃，搅拌转速 300 rmp。皮肤用不锈钢夹子固定在供给池和接收池之间，皮肤的角质层朝向供给池，向接收池内加入接收液，液面与皮肤紧密接触，中间无气泡（接收液预先超声处理，除去液体内的气泡），接收液为30%乙腈-0.9%氯化钠溶液（W/V）。接收池加入接收液后先在水浴内平衡 1 小时，然后再在供给池内加入微乳液 0.5 ml(含有阿普斯特 5 mg)。加入微乳液后于1、 2、 4、 6、 8、 10、 12、15、 18、 24h 从取样口取样 0.5 ml，同时向接收池内加入等量新鲜的接收液。向所取接收液内加入 2 倍体积的乙腈溶液，涡旋 2 min，沉淀蛋白，经0.22 µm 微孔滤膜过滤后 HPLC 法检测阿普斯特的浓度，以下公式为计算药物累计经皮渗透量（Q）：

其中，Cn 为第n个取样点中的药物浓度；V0 为扩散池的体积（本发明所用扩散池容积为 8.2 ml）；Ci 为为第 i 个取样点的浓度；Vi 为取样体积；A 为扩散面积（3.14cm²）。以阿普斯特的累计经皮渗透量 Q 对时间绘制药物累计渗透曲线（如图5所示）。给药24 h 后， 实施例1-3三种微乳中阿普斯特的累计经皮渗透量分别为8.81µg/cm²、3.58µg/cm²、2.97 µg/cm²。

试验例2 阿普斯特微乳在皮肤中的药物截留

体外经皮渗透试验结束后，用棉签将残留在皮肤上的药物轻轻的擦掉，避免伤到皮肤，用生理盐水清洗皮肤表面， 用滤纸吸干表面的水分，剪下经过体外经皮渗透试验的皮肤， 称重，将剪下的皮肤剪成小块，放入离心管中，加入 9 倍量的0.9%氯化钠溶液，用高速匀浆机将皮肤匀浆成匀浆液。精密量取 100 µl 的匀浆液，加入100 µl 的乙腈沉淀蛋白，涡旋 5 min，12000 rmp 高速离心 10 min，分离上层清液，取 10 µl 进行 HPLC 法检测阿普斯特的浓度。

色谱条件：岛津 SPD-20A；Hypersil BDS 反向 C18 柱（5 µm,4.6mm×250 mm）；紫外检测波长230 nm；柱温：室温；流动相：乙腈:水（pH=3.5磷酸溶液）=38:62；进样量：10 µl；流速：0.6 ml/min。

实验结果如表1所示。经皮渗透24 h后，实施例1的累计经皮渗透量 Q24 和药物皮肤截留量 Qskin 是所有微乳处方中最高的，说明实施例1既有良好的皮肤渗透能力，又有优良的药物截留能力。

对本发明获得的阿普斯特微乳进行质量评价，具体如下：

1、载药量测定

用HPLC 法测定阿普斯特浓度微乳处方的载药量为38.98 mg/g±0.192（n=3），表明该处方有优良的载药能力。

2、外观形态

如图1所示，本发明获得的微乳外观为澄清透明状，紫外分光光度计620nm处测定透光率，结果显示透光率为98.22%。

3、离心测试

微乳在4000 rmp离心 10 min，观察微乳的外观，没有发现微乳破裂分层的现象，微乳仍维持澄明状态，说明微乳的稳定性较好。

4、微乳类型的鉴别

向微乳液中分别加入油溶性染料苏丹红和水溶性染料亚甲兰，观察红色和蓝色的扩散速度， 实验发现蓝色的扩散速度快于红色的，说明微乳的类型为O/W 型。

5、pH 值、旋转黏度的测量

参照2020 版《中国药典（四部）》 测定微乳液的 pH 值和旋转黏度。结果显示微乳液的 pH 值为6.9-7.0，在皮肤的 pH 值范围内（ pH 值为 4-7）。采用BROOKFIELD 旋转粘度计，在 25±1℃测定旋转黏度为 20.4 mPa•S（剪切速率为76.8S^-1）。

6、粒径及粒度分布

采用马尔文激光粒度仪测量微乳的粒径及粒度分布，结果如图2所示，平均粒径20.30 nm，多分散指数（PDI）为 0.146，说明粒径分布较窄，呈正态分布。

7、Zeta 电位

如图3所示，微乳的 Zeta 电位为-0. 384 mV，本发明的微乳的乳化剂都是非离子型，助乳化剂为醇类也不产生离子，故微乳整体显电中性。

8、微观形态观察

取微乳1 g，用4 g去离子水稀释，稀释时搅拌要缓慢，防止破坏微乳的结构。用透射电镜专用铜网蘸取适量溶液，自然晾干后再用2%的磷钨酸进行负染，晾干后置于透射电镜内进行观察，结果如图4 所示，微乳呈规则的球形，粒径在20-30nm之间，微乳内部可见包裹物，微乳无粘连现象，说明加水稀释对其影响不大。