发明内容

本文发明提供了一种组合物，该组合物是以鱼胶原蛋白肽粉为主要原料，联合红石榴果汁粉和酵母抽提物组成。本研究采用野生型AB品系斑马鱼探究得到该组合物对皮肤弹性、补水保湿及美白作用效果显著。

本发明组合物是由多种成分混合而成，在加工过程中未添加任何辅料和添加剂，因此能最完整地保留原料的营养成分，达到风味浓郁、营养丰富、口感细腻爽滑、易于冲调、产品状态稳定的特点。无论用冷水、温水、开水冲调都可搅拌均匀，并即刻直接食用，而不再需要经过热水煮熟过程。

该组合物的制备工艺简单，各组分配方科学，满足目标人群改善皮肤，达到美白，保湿、增加皮肤弹性等效果，适合推广。

本发明组合物由以下重量份的原料组成：胶原蛋白肽60-90份；红石榴果汁粉8-40份；酵母提取物1-3份。

优选的，本发明组合物由以下重量份的原料组成：胶原蛋白肽60份；红石榴果汁粉38份；酵母提取物2份。

优选的，本发明组合物也可由以下重量份的原料组成：胶原蛋白肽90份；红石榴果汁粉9份；酵母提取物1份。

更优选的，本发明组合物还可由以下重量份的原料组成：胶原蛋白肽83.34份；红石榴果汁粉15份；酵母提取物1.66份。

本发明组合物中所使用的胶原蛋白肽为鱼胶原蛋白肽。

本发明组分中所用的鱼胶原蛋白肽为等量的NLC-500-G和P-FC04两种规格鱼胶原蛋白肽混合组成。

本发明组合物中的红石榴果汁由DSL-1和BS25-1两种规格的红石榴果汁粉混合组成。

本发明组合物优选也可以由如下重量份原料组成：NLC-500-G鱼胶原蛋白肽粉41.67份、P-FC04鱼胶原蛋白肽粉41.67份、DSL-1红石榴果汁粉12份、BS25-1红石榴果汁粉3份、酵母提取物1.66份。

本发明组合物的制剂可以为固体饮料、软体饮料、混合粉、米稀、奶昔、胶囊或片剂。

本发明组合物优选的可制备成为固体饮料。

制备固体饮料的产品工艺为：

a、称量：分别将原辅料鱼胶原蛋白肽粉NLC-500-G、鱼胶原蛋白肽粉P-FC04、红石榴果汁粉DSL-1、红石榴果汁粉BS25-1、酵母抽提物称取备用；

b、混合：取已称量的红石榴果汁粉BS25-1、酵母抽提物混合5min，后与红石榴果汁粉DSL-1混合10min，后与鱼胶原蛋白肽粉NLC-500-G、鱼胶原蛋白肽粉P-FC04混合30分钟，至色泽均匀一致，得总混合粉；

c、包装、检验、入库即得。

本发明组合物服用方便、口感好，满足了目标人群改善皮肤，增加皮肤弹性，美白补水的效果；且便于运输，贮存期长，适于在人群中推广。

为了验证本发明组合物的口感性能以及具体的功效，发明人采用实施例1制得的固体饮料与不同成分配比的对比例1-7进行了试验，具体如下：

试验例1：为了鉴定本发明方法制备固体饮料的性能，由专业人员组成10人的评定小组，对实施例制备的样品，以及对比例1-7制备的样品，进行感官评价实验。根据固体饮料的外观、气味、色泽、溶解性、组织状态进行综合评分，综合评分的计算方法为：五个考察指标满分均为100分，在评价体系中所占权重分别为20%，每个指标得分乘以所占权重比例，得分进行相加得到综合评分，具体结果见下表1:

由表1可知，对比例2、对比例6和实施例得分都远远高于其他样品。

为了考察本发明组合物的功效，特采用野生型AB品系斑马鱼该组合物对皮肤弹性、补水保湿及美白作用进行了功效性评价。

主要仪器和试剂：解剖显微镜（SZX7，OLYMPUS，Japan），与显微镜相连的相机（VertA1，上海土森视觉科技有限公司，中国）；超微量分光光度计（NanoDrop 2000，Thermo，America）；普通PCR扩增仪（T100，Bio-rad，Singapore）；荧光定量PCR仪（CFX Connect，Bio-rad，Singapore）；精密电子天平（CP214，OHAUS，China）；6孔板（Fisher scientific，China）；低位裙边96孔板（透明）（HSP9601，Bio-rad，America）；光学粘性封膜B（MSB1001，Bio-rad，America）。

异丙醇（货号A507048，上海生工）；氯仿（货号T130144，阿拉丁试剂（上海）有限公司）；二甲基亚砜（DMSO，批号SHBH6853，Sigma）；无水乙醇（批号20181210，昆山金诚试剂有限公司）；甲基纤维素（批号079K0054V，Sigma，USA）；iTaq Universal SYBR GreenSupermix（1725121，Bio-rad，America）；FastQuant RT Kit (With gDNase)试剂盒（货号KR106，天根）；TRI reagent（货号1382739，nvitrogen）；Bradford 1x Dye Reagent （#500-0205，BIO-RAD，USA）；Bovine Serum Albumin（BSA）Standard (#500-0206，BIO-RAD，USA）；RIPA裂解液（P0013B，Beyotime）；100 mM PMSF（ST506-2，Beyotime），L-左旋多巴（I1705022，阿拉丁）。

氯化钠，白色晶体，批号20180803，购自上海沪试；熊果苷，白色粉末，批号为35648，购自阿拉丁试剂（上海）有限公司。

实验方法

为了鉴定本发明组合物的功效，对实施例制备的样品，以及对比例1-7制备的样品，进行功效评价实验。实施例配制成222、667、2000µg/mL高中低三个浓度水溶液，对比例样品均配制成667μg/mL水溶液。参照采用野生型AB品系斑马鱼考察各个样品的皮肤弹性、补水保湿和美白效果，具体如下：

1.对皮肤弹性的影响

随机选取受精后5天野生型AB系斑马鱼于六孔板中，每孔（实验组）均处理30尾斑马鱼。分别水溶给予实施例和对比例样品，同时设置正常对照组，每孔容量为3 mL。平行设置3次实验。供试品处理结束后，使用经典Trizol法提取各组斑马鱼总RNA，通过q-PCR检测目的基因col1a1b的转录水平。用β-actin作为基因表达的内参，计算目的基因的RNA相对表达量。用方差分析和Dunnett’s T-检验进行统计学分析，p < 0.05表明具有显著性差异。

由表2可见，供试品处理斑马鱼后，与正常对照组比较，各剂量组均可加皮肤弹性col1a1b基因相对表达量，有显著性差异（p < 0.01），即本发明固体饮料增加皮肤弹性作用显著。

2.补水保湿作用

随机选取受精后2天黑色素等位基因突变半透明AL品系斑马鱼于六孔板中，每孔（实验组）均处理30尾斑马鱼。水溶给予氯化钠建立斑马鱼微渗缺水模型。分别水溶给予实施例和对比例样品，同时设置正常对照组和模型对照组，每孔容量为3 mL。供试品处理结束后，每组随机取10尾斑马鱼在解剖显微镜下拍照并保存图片，用NIS-Elements D 3.10高级图像处理软件对斑马鱼尾部面积（A）进行分析，以尾部面积的统计学分析结果评价样品对微渗缺水斑马鱼的补水保湿作用，统计学处理结果用mean ± SE表示。采用方差分析和Dunnett’s T-检验进行统计学分析，p < 0.05表明具有显著性差异。

由实验结果可知，本发明组合物固体饮料具有补水保湿作用。

3.美白作用评价

随机选取受精后6小时野生型AB品系斑马鱼于六孔板中，每孔（实验组）均处理30尾斑马鱼，分别水溶给予实施例和对比例样品，阳性对照组熊果苷3000 µg/mL浓度，同时设置正常对照组（养鱼用水处理斑马鱼），每孔容量为3 mL。各实验组处理48小时后，每个实验组随机选取10尾斑马鱼在解剖显微镜下拍照并采集数据，用Image J图像处理软件进行图像分析并采集数据，分析统计斑马鱼头部黑色素光密度总和，以黑色素光密度总和的统计学分析结果评价供试品对斑马鱼的美白作用。

由表4可见，供试品处理斑马鱼后，与正常对照组比较，各剂量组均降低黑色素光密度总和，有显著性差异（p < 0.001），即本发明组合物固体饮料具有明显的美白作用。

4.对酪氨酸酶活性的抑制作用

随机选取受精后6小时野生型AB品系斑马鱼于六孔板中，每孔（实验组）均处理30尾斑马鱼，水溶给予实施例和对比例样品，阳性对照药熊果苷3000 μg/mL浓度，同时设置正常对照组（养鱼用水处理斑马鱼），每个组别平行设置三组，每孔容量为3 mL。各实验组处理48小时后，采用多巴胺氧化法，在475 nm波长处测定吸光度值，每一组别设3个复孔，以吸光度值的统计学分析结果评价供试品对斑马鱼酪氨酸酶活性的抑制作用。

由表5可见，供试品处理斑马鱼后，与正常对照组比较，各剂量组均可降低酪氨酸酶的活性，有显著性差异（p < 0.001），即本发明固体饮料对酪氨酸酶具有明显的抑制作用。

由以上试验结果可知，采用实施例的配方及其制备方法制备的固体饮料，有该品种应有的色泽、溶解性好、口感无异味、酸甜适中、具有本品种的风味，感官评价专家评分在90分以上，而且该组合物对皮肤弹性、补水保湿、美白以及对酪氨酸酶的抑制作用均相对单独的成分相比有显著效果，说明本配方制备的固体饮料效果综合评分高，适合于工业化大生产以及广泛推广。而对比例1-7制备的样品（除对比例2、对比例6以外）专家评分均在80分以下，说明改变配料的比例，对于该固体饮料的外观、气味、色泽等方面会产生较大的影响，直接影响产品的质量。对比例2和对比例6虽然在感官评价中得到的分数最高，但是在功效评价中对皮肤弹性、补水保湿、美白功效以及对酪氨酸酶的抑制作用均明显低于实施例。因此综合以上感官评价和功效评价的结果，本发明所要保护的各原料的用量比例是发明人经过大量的劳动得到的最佳配比范围。

对比例1-7：调整鱼胶原蛋白肽粉和红石榴果汁粉的型号和用量，具体用量见下表：