具体实施方式

下面结合附图与具体实施例对本发明做进一步详细说明。本发明所用试剂和原料均市售可得或可按文献方法制备。以下实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。

以下实施例所用细胞系：

K7M2细胞株：购自中国科学院细胞库，K7M2细胞在培养基(90％DMEM培养基(含10％碳酸钙)、10％胎牛血清、100U/mL青霉素和100mg/L链霉素)中培养，放置于37℃，5％CO₂的培养箱中；每2天更换新鲜培养基；在细胞扩增到铺满培养皿85％左右时，用胰蛋白酶消化然后以1:3的比例传代培养。

MG63细胞株：购自中国科学院细胞库，MG63细胞在培养基(90％DMEM培养基(含10％碳酸钙)、10％胎牛血清、100U/mL青霉素和100mg/L链霉素)中培养，放置于37℃，5％CO₂的培养箱中；每2天更换新鲜培养基；在细胞扩增到铺满培养皿85％左右时，用胰蛋白酶消化然后以1:3的比例传代培养。

统计分析：所有数据均以平均±标准差表示。统计分析(GraphPad软件，美国)的评估采用单因素阳差分析和Tukey多重比较检验，以进一步评估各组间的差异。P＜0.05表示具有统计学意义(^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.005)。P＞0.05表示无显著性差异(ns)。

QRT-PCR(荧光定量PCR)：引物设计和合成：所用引物序列参照相关文献，由苏州金唯智生物科技有限公司合成。序列如表1所示，其中GAPDH为内参序列。将骨肉瘤细胞K7M2分别在微球上和12孔板内培养7d，12孔板内的细胞作为对照组。用PBS洗涤3次后每孔加入Trizol试剂，用移液枪移入1.5mL的EP管内，充分震荡混匀后室温下裂解15min，期间不时混匀。每管加入0.2mL的氯仿，充分震荡混匀后室温下静置10min，离心机4℃下12000rpm离心15min；将EP管中的上清液体移入到新的EP管中，注意吸取的时候切勿吸取到贴壁及中间的白色沉淀，加入等体积的异丙醇，轻轻颠倒混匀后室温静置10min；离心机4℃下12000rpm离心15min，EP管底可见白色沉淀；75％乙醇重悬洗涤RNA沉淀，离心机4℃下7500rpm离心5min，吸去上清后室温晾干，然后再将RNA溶解于适量的DEPC水(20μL)中；58℃水浴加热15min，NanoDrop微量分光光度计检测吸光度及RNA浓度，根据检测的浓度，调整提取的各组样品浓度为1μg/μL。将1μg样品加入EP管中，随后加入5X All-In-One RT MasterMix 4μL和适量的DEPC水，液体总量为20μL。然后进行逆转录反应，反应条件如下：25℃10min，42℃15min，85℃5min，在冰盒上将cDNA用DEPC水稀释5倍，取2.5μL加到96孔PCR反应管中，加入SYBR Green 5μL；上下游引物各0.5μL和适量的DEPC水，液体总量为10μL。PCR仪设置如下反应条件：95℃持续30s，60℃持续30s，72℃持续30s，如此循环40次。

以下实施例所用引物序列如下表1所示：

表1引物序列表

实施例1蜂巢状GelMA微球的制备

实验材料：明胶购自罗赛洛(浙江)有限公司。甲基丙烯酸酐购自阿拉丁试剂(上海)有限公司。

一种用于构建肿瘤模型的蜂巢状GelMA微球的制备方法，具体步骤如下：

(1)GelMA的制备：将40.0g的明胶溶于400mL的PBS(50℃)中，在磁力搅拌器上加速溶解，加入32.0mL的甲基丙烯酸酐，边搅拌边用微量注射泵泵入，用于介导甲基丙烯基与明胶上活跃氨基酸残基上的氨基和羟基上发生置换反应，然后用1600mL的PBS稀释5倍以终止反应。使用截留分子量为10kDa的透析袋透析2周，每天更换ddH₂O，以彻底去除游离的甲基丙烯酸酐，直至液体澄清为止，反应产物即为甲基丙烯酰基取代度为100％的GelMA，经冷冻干燥获得白色泡沫状冻干凝胶可放置-20℃备用。

(2)蜂巢状GelMA微球的制备：以混入1％光引发剂(PI)(2-羟基-4'-(2-羟基乙氧)-2-甲基苯丙酮)的浓度分别为5％、7.5％和10％的GelMA溶液作为分散相，肉豆蔻酸异丙酯作为连续相，通过微量注射推进泵分别以不同速度注入两相液体，在剪切力的作用下，分散相形成单个连续液体，不同速度差下形成的液滴尺寸不同，将收集的液滴暴露于6.9mW/cm²紫外光下交联1min，经乙醇和ddH₂O清洗后，冷冻干燥形成多孔GelMA水凝胶微球，即得。

以下实施例所述微球均为本实施例制得的多孔GelMA水凝胶微球(蜂巢状GelMA微球)。

实施例2蜂巢状GelMA微球表征的探究

通过倒置荧光显微镜(明场)观察微球大体观并通过ImageJ计算微球的粒径分布；通过离子溅射仪对冷冻干燥后的微球进行喷金处理，随后在SEM下进行观察并通过ImageJ计算孔径分布；通过AFM观察蜂巢状GelMA微球的表面粗糙度。

1、在扫描电子显微镜(SEM)下分别观察GelMA浓度为5％、7.5％和10％的微球微观结构，直径均在350μm左右，然而不同浓度的GelMA所产生的微球形成了不同大小的孔径，5％、7.5％和10％的微球平均孔径分别为25.3±6.5μm、20.1±5.2μm和7.9±2.6μm(支持信息如图1(A)的扫描电镜图像和图1(B)的定量分析结果所示)。

2、为进一步比较不同浓度GelMA形成的蜂巢状微球对细胞生存的影响，我们先是利用原子力学显微镜(AFM)对不同浓度GelMA微球的表面粗糙度进行探索，伴随着GelMA浓度的增加，微球表面的粗糙度RA逐渐增加(5％GelMA RA＝10.9，7.5％GelMA RA＝32.3，10％GelMA RA＝46.5)，当GelMA浓度为7.5％时更接近细胞生长天然环境下的粗糙度。其次，将不同GelMA浓度的微球分别铺满12孔板的板底，同时加入1mL 2×10⁵/mL小鼠骨肉瘤细胞K7M2细胞悬液进行培养，待8h细胞贴壁后将微球转移至新的孔中并补加1mL培养基，培养24h后胰酶消化计数，可见7.5％GelMA微球更有利于K7M2细胞的生长，这可能是粗糙度与孔径大小对细胞生长影响的综合结果。支持信息如图1(C)的AFM图像和图1(D)的计数分析结果所示。在后续的实验中，我们均采用7.5％GelMA微球进行骨肉瘤细胞的培养和研究其生物学特性。

实施例3蜂巢状GelMA微球表征的进一步探究

1、利用光学显微镜观察冷冻干燥前后的微球大体观，可见冻干前后的微球大小均一，形状规则，冻干后直径明显缩小，平均直径从440nm缩小至365nm，冻干后的微球在接触到水后又会恢复至冻干前的直径大小，这一溶胀现象为后续培养细胞时通过溶胀作用吸附细胞提供条件(支持信息如图2(A)、图2(B)所示)。

2、通过乙醇梯度脱水对培养K7M2细胞0、3、5天的微球进行脱水处理，在SEM下进行观察，可见微球孔隙多且分布均匀，内外联通，细胞很好的生长在微球表面和孔隙内，蜂巢样的结构为细胞提供更多的粘附空间，有利于细胞之间的物质交换以及与外界的营养代谢，更加有利于细胞生存(如图2(C)所示)。

GelMA作为一种类似于ECM的水凝胶材料，其携带的RGD基团更是有利于细胞的粘附和增殖，在医用生物材料上得以广泛利用，如利用GelMA制备的负载NK细胞的水凝胶微球用于肿瘤杀伤以及负载髓核细胞用于治疗椎间盘退变。

3、对GelMA微球的生物相容性进行验证，利用微球培养骨肉瘤细胞MG63，分别在第1、3、7天进行骨架和活死染色，并用倒置荧光显微镜和激光共聚焦显微镜进行观察(支持信息如图3、图4所示)，结果显示微球具有良好的生物相容性，不会对细胞的生长产生毒性作用。

4、进一步研究微球可降解性。

微球的生物降解性：将3g微球分成三个等份，每份加入10mL PBS(2U/mL胶原酶II)，37℃孵育，缓慢搅拌。每隔1周在显微镜下观察并冻干称重。每个时间点得到的三个结果，统计后绘制降解曲线。

将微球放在2U/mL的Ⅱ型胶原酶溶液中，在37℃摇床上放置，每周在光学显微镜下观察形态变化并称重，大约28天时降解超过80％(支持信息如图5(A)、图5(B)所示)。

综上所述，经微流控技术获得蜂巢状GelMA微球具有多孔性、可降解性和良好的生物相容性，可用于肿瘤细胞在内的多种的三维培养。

实施例4蜂巢状GelMA微球的三维培养对骨肉瘤细胞增殖及干性表达的影响

1、建立肿瘤3D培养模型的关键是保持肿瘤的原生态。维持肿瘤细胞的干性不仅为研究肿瘤的发生发展提供依据，也为寻找肿瘤特异性药物提供依据。为了探究基于蜂巢状GelMA微球的三维培养对骨肉瘤细胞增殖及干性的影响，我们将K7M2细胞分别用蜂巢状GelMA微球(MS)和3D普通培养板(TCP)进行培养，培养七天后通过胰酶消化得到两种培养条件(MS和TCP)下的K7M2细胞，通过CCK-8法检测细胞增殖。

细胞增殖试验：使用CCK-8试剂盒来评估微球上的细胞增殖。选择TCP作为对照。在每个时间点(1、2、3和4天)，以10％(V/V)的比例在培养基中加入CCK-8试剂(Dorinda，日本)。孵育4h后，将100μL培养基用移液枪移入清洗干净的96孔板中，使用酶标仪测量450nm处的吸光度。

结果显示基于微球三维培养的K7M2细胞增殖速率显著高于平板培养(如图6(A)所示)。

2、肿瘤干细胞是肿瘤起始、自我增殖和更新的主力，因此肿瘤细胞的增殖与肿瘤细胞的干性基因表达密切相关，Sox2和Nanog是ESCs转录调控的核心因子，其中Sox2是高泳动类非组蛋白盒结构域蛋白，Nanog属于同源盒结构域蛋白，Sox2是通过保持Oct4的适当表达水平稳定ESCs的多能性，Nanog主要是通过阻断ESCs的分化维持多能性，Nucleostemin(核干细胞因子)在维持细胞增殖、细胞周期调控、端粒的稳定性、基因组的完整性及干细胞和肿瘤细胞自我更新中发挥着极其重要的作用。通过QRT-PCR比较两种培养条件下K7M2细胞的干性相关基因，包括Sox2、Nanog和Nucleostemin。

结果显示，基于蜂巢状GelMA微球的三维培养促进了肿瘤干细胞相关基因的表达(如图6(B)所示)。

3、比较两种培养条件下的细胞相应的细胞周期。

细胞周期：收集两种培养条件下的K7M2细胞，利用细胞周期检测试剂盒(凯基生物，中国)进行检测，检测结果通过Moditfit 5.0进行分析。

流式细胞术：所有流式细胞术均在贝克曼流式仪器上进行，利用FlowJo 10进行分析，下同。

相较于细胞培养板培养，基于微球三维培养的K7M2细胞的G0/G1期细胞数目百分比减少，而S期和G2/M期细胞数目百分比增加，这表明基于微球的三维培养促进了K7M2细胞的DNA合成并促使细胞周期从G1期向S期分化，从另一方面也揭示了细胞增殖能力的增强，与前面的结果相吻合(支持信息如图6(C)流式细胞术结果和图6(D)定量分析结果所示)。

实施例5蜂巢状GelMA微球的三维培养对骨肉瘤细胞迁移能力的影响

1、骨肉瘤转移是骨肉瘤相关死亡的主要原因，研究表明，非转移性高级别骨肉瘤的患者中伴有继发性肺转移的五年生存率是23％，伴有继发性骨转移的4年生存率是0％，为了探究基于蜂巢状GelMA微球的三维培养对骨肉瘤细胞迁移能力的影响，利用Transwell培养板来模拟肿瘤细胞的迁移，通过测定发生迁移的细胞数目来比较细胞的迁移能力，将两种培养条件下的K7M2细胞在Transwell培养板培养24h，结晶紫染色后光学显微镜下观察小室下层细胞，并通过ImageJ计数来比较迁移细胞数目。结果显示基于蜂巢状GelMA微球的三维培养促进了K7M2细胞的迁移能力(支持信息如图7(A)的光学显微镜图像和图7(B)的定量分析结果所示)。

2、划痕实验通过模拟“伤口愈合”的速度反应细胞的迁移能力，经比较可见基于蜂巢状GelMA微球三维培养的K7M2细胞“愈合”能力更强(支持信息如图7(C)的光学显微镜图像和图7(D)的定量分析结果所示)。

3、为了从基因水平上进一步验证基于蜂巢状GelMA微球的三维培养对骨肉瘤细胞迁移能力的增强，分别比较了两种培养条件下K7M2细胞迁移相关基因的表达，包括FAPα、VEGF、MMP-2和CXCL3。在肿瘤微环境(TME)的形成及变化过程中，正常的成纤维细胞在诸多趋化因子的刺激作用下转变为基质成分的重要组成部分CAF，CAF表面特异性的成纤维细胞激活蛋白α(FAPα)可以通过促进基质重建、参与血管内皮生长因子(VEGF)等信号转导等途径增强肿瘤细胞沿纤维定向侵袭能力、参与肿瘤血管的生成等以形成肿瘤生物屏障并抑制效应T细胞的功能，进而促进肿瘤进展。血管内皮生长因子(VEGF)是一种促进血管内皮细胞迁移和促进细胞外基质变性的特异性生长因子，其作用类似于基质金属蛋白酶-2(MMP-2)。而CXCL3是一种ELR+CXC趋化因子，通过对中性粒细胞的趋化作用，加速局部组织内部血管的形成速度，促进肿瘤的发生发展过程。结果表明蜂巢状GelMA微球培养7天的K7M2细胞FAPα、VEGF、MMP-2和CXCL3的基因表达水平均显著高于培养板生长的细胞(如图8所示)。

4、CD24是在大多数B淋巴细胞和神经细胞表达的唾液糖蛋白，也表达于中性粒细胞和中性粒细胞前体，CD44是一种跨膜糖蛋白，多存在于细胞表面，主要作用是敢于肿瘤细胞的粘附，CD24和CD44均发现在部分肿瘤细胞上表达并且与肿瘤的侵袭和转移有关。我们通过流式分析两种培养条件下K7M2细胞的CD24和CD44的表达，发现基于微球三维培养的细胞CD24表达显著升高，CD44表达虽无显著性差异，但均有90％以上的表达(如图9(A)、图9(B)所示)。CD24和CD44均发现在部分肿瘤上表达且与肿瘤的侵袭和转移有关，其表达的升高可能是因为蜂巢状GelMA微球的三维培养环境更有利于维持骨肉瘤细胞的恶性生物学行为。

实施例6蜂巢状GelMA微球的三维培养对骨肉瘤细胞EMT表达和耐药性的影响

1、上皮细胞间质转化(EMT)是一个复杂的生物过程，通过此过程，上皮细胞失去极性和细胞黏附，获得间质细胞的运动性和侵袭性，与肿瘤的进展、侵袭及转移有关，N-cadherin、Snail、Twist1表达的上调与EMT息息相关，我们对两种培养条件下的K7M2细胞在基因和蛋白水平上进行探究，QRT-PCR和WB结果均显示基于蜂巢状GelMA微球三维培养的K7M2细胞上调了N-cadherin、Snail和Twist的表达(如图10(A)、图10(B)、图10(C)所示)。这表明基于蜂巢状GelMA微球的三维环境促进了骨肉瘤细胞K7M2的上皮-间充质细胞转化过程，这可能与肿瘤的异形有关。通过EMT，上皮细胞失去了细胞极性，失去与基底膜的连接等上皮表型，获得了较高的迁移与侵袭、抗凋亡和降解细胞外基质的能力等间质表型。

2、为了进一步探究其抗凋亡能力的改变，我们选用了临床用于治疗骨肉瘤的一线化疗药物多柔比星(阿霉素，Adriamycin，DOX)作为干预手段，分别以高浓度(100nmol/mL)和低浓度(50nmol/mL)处理两种培养条件下的K7M2细胞24h，再通过Annexin-Ⅴ细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡情况，蜂巢状GelMA微球培养的K7M2细胞在低浓度处理下早期凋亡仅有3.14％，相比于培养板培养情况下的21.6％，抗凋亡能力明显提高，在高浓度处理下，晚期凋亡细胞也远远低于培养板培养的K7M2细胞(支持信息如图10(D)的流式细胞术结果和图10(E)的定量结果所示)。由此可见，基于蜂巢状GelMA微球的三维培养环境增强了骨肉瘤细胞K7M2抵抗药物介导的凋亡的能力，为化疗药物在体内的实际运用提供了更精准的使用剂量。

3、为了进一步验证蜂巢状GelMA微球在培养肿瘤细胞用于药物筛选方面的潜力，我们对蜂巢状GelMA微球培养7天骨肉瘤细胞MG63进行了相同的探索，分别以50nmol/mL的DOX处理两种培养条件下的MG63细胞24h，再通过Annexin-Ⅴ细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡情况，蜂巢状GelMA微球培养的MG63细胞在此浓度处理下早期凋亡仅有23.9％，相比于培养板培养情况下的43.1％，抗凋亡能力明显提高(如图11(A)、图11(B)所示)。细胞的凋亡与众多凋亡相关分子的调控有关，抗凋亡分子和促凋亡分子的平衡与失平衡决定了细胞最终的结局。B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2，BCL2)和BCL2相关蛋白X(BCL2-associated xprotein，Bax)是调控细胞凋亡的主要成员。BCL2会增强细胞对DNA损伤因子的抵抗性以及化疗药物引起的细胞凋亡。当Bax过表达时，会通过形成同源二聚体Bax/Bax而抑制BCL2抗凋亡的作用从而促进细胞凋亡。比较两种培养条件下的MG63细胞的基因表达情况，BCL2在3D蜂巢状GelMA微球环境比细胞培养板环境下高3.22倍，而Bax的表达则无明显统计学差异(如图11(C)所示)。进一步验证了基于蜂巢状GelMA微球的三维培养环境对肿瘤细胞抗凋亡能力的增强。

实施例7蜂巢状GelMA微球的三维培养对骨肉瘤细胞促破骨能力的影响

1、骨肉瘤的发生发展往往会引起骨侵蚀和骨转移，通过促进破骨细胞分化打破骨稳态导致骨量丢失。分别收集基于蜂巢状GelMA微球三维培养和培养板二维培养K7M2细胞的培养上清液，联合巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)与小鼠骨髓来源的单核-巨噬细胞共培养，通过TRAP染色法来观察破骨细胞诱导分化的情况。在M-CSF和RANKL的基础上添加两种培养上清的实验组相较于其他组有着更多的破骨细胞产生，而添加蜂巢状GelMA微球培养上清组产生的破骨细胞更大(支持信息如图12(A)光学显微镜图像和图12(B)的定量分析结果所示)。因此，我们推测骨肉瘤细胞K7M2会分泌促进破骨分化的因子，而蜂巢状GelMA微球的三维培养会使其分泌的因子更多。

2、为了进一步验证这一说法，收集经两种上清处理的BMM细胞，检测破骨相关基因的表达，包括DC-STAMP、CTSK、TRAP等。结果显示基于蜂巢状GelMA微球三维培养的K7M2细胞刺激的BMM细胞破骨相关基因均升高(如图12(C)所示)。

3、RANKL是破骨细胞分化过程中重要的生物分子，促进破骨相关基因的转录和表达，通过WB在蛋白水平上检测两种培养条件下K7M2细胞是否表达RANKL，结果显示二者均表达RANKL，且基于蜂巢状GelMA微球三维培养的K7M2细胞表达的更为显著(如图12(D)、图12(E)所示)。我们进一步比较了两种培养条件下的K7M2细胞的RANKL基因表达情况，发现蜂巢状GelMA微球培养条件下的K7M2细胞相较于培养板培养的K7M2细胞有着更高的RANKL基因表达(如图12(F)所示)。这说明蜂巢状GelMA微球的三维培养环境促进了骨肉瘤细胞K7M2的RANKL表达，从而激活破骨细胞参与骨肉瘤细胞的骨侵蚀。

实施例8通过体内实验进一步验证蜂巢状GelMA微球构建骨肉瘤模型的优势

体内实验：动物实验遵循动物管理条例规定并得到苏州大学实验动物委员会的批准，从苏州大学实验动物中心购入5周龄的BALB/c雌性小鼠。正常饲养动物一周，用75％酒精消毒液擦拭小鼠右侧腋下后，用1mL注射器分别在实验小鼠腋下皮下注射事先用无菌PBS溶液混匀的1×10⁷cells/mL的两种培养条件下的K7M2细胞悬液100μL，每天观察小鼠肿瘤生长情况。在长出肿瘤后进行为期21天的观察，通过测量肿瘤的长度和宽度来评估肿瘤的大小；21天后，处死动物，收集组织进行组织病理学检查。动物实验经苏州大学实验动物委员会批准。

组织病理学：收集肿瘤组织置于4wt％甲醛缓冲液中，然后脱水，石蜡包埋。通过切片仪获得厚度5μm的连续切片，预先准备好H&E、TUNEL、Ki67和αSMA进行染色。

1、将两种培养条件下的K7M2细胞以1×10⁶/只皮下注射6周龄的BALB/c小鼠，注射基于蜂巢状GelMA微球三维培养的K7M2细胞的小鼠(MS组)在第7天就形成肉眼可见的肿瘤凸起，而注射培养板培养的K7M2细胞的小鼠(TCP组)在第13天才形成肉眼可见的肿瘤凸起，此后每隔三天记录小鼠肿瘤体积变化，在第28天每组各取一半数量实验小鼠进行取材分析，取出的肿瘤组织大体观上有着明显的体积差异，MS组肿瘤大小明显高于TCP组，结合两组皮下荷瘤小鼠的肿瘤体积变化曲线，表明在造模时间相同的情况下，MS组小鼠肿瘤形成和生长速度要快与TCP组(如图13(A)、图13(B)、图13(C)所示)。各组剩余实验小鼠均正常饲养观察存活曲线，结果表明MS组小鼠的死亡率更高(如图13(D)所示)。从组织形态学进行分析，分别对两组小鼠肿瘤切片做H&E染色，可见MS组肿瘤组织更为紧密，而TCP组肿瘤组织的斑片状坏死区域更多(如图13(E)所示)。TUNEL染色和Ki67染色结果表明MS组肿瘤组织相较于TCP组有着更少的细胞凋亡和更多的细胞增殖情况，αSMA免疫荧光染色表明MS组肿瘤组织有更多的α-平滑肌肌动蛋白(如图13(F)、图13(G)所示)。因此，基于蜂巢状GelMA微球三维培养的K7M2细胞造模更具有原发肿瘤的特征。

2、骨肉瘤的骨侵蚀性会导致骨肉瘤患者的骨量丢失，从而加剧骨转移的速度。为了探究两组实验小鼠的骨量丢失情况，通过Micro-CT扫描分析了实验小鼠的股骨远端骨量情况。

Micro-CT：将小鼠右下肢从多聚甲醛中取出，吸干表面液体，放入Micro-CT成像仪(SkyScan，阿尔特斯拉尔，比利时)中，观察检测位置是否放置妥当后，设置过滤片参数：AL＝0.5，调节分辨率为High，扫描角度设置为翻转1800°，设置像素大小为9μm，最后开始扫描。通过CT结果分析软件对股骨做相关参数的形态统计，包括BMD(mg/cm³)、BV/TV(％)、BS/BV(％)、Tb.Th(mm)等。

首先比较两组实验小鼠Micro-CT扫描得到的二维和三维重建图像，MS组的骨量远低于TCP组(如图14(A)、图14(B)所示)。其次，在感兴趣部位定量分析相同体积股骨的骨密度，MS组同样低于TCP组。最后，在其他骨形态学相关指标方面，相较于TCP组，MS组在BV/TV和Tb.Th参数方面显著下降，BS/BV参数显著提高(如图14(C)所示)，可见基于蜂巢状GelMA微球三维培养的K7M2细胞造模小鼠骨侵蚀能力更强。

序列表

<110> 苏州大学附属第一医院

<120> 一种蜂巢状GelMA微球在构建肿瘤模型中的应用

<160> 34

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

cacagtttgc ctagttctga gg 22

<210> 2

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

gcaagaatag ttctcgggat gaa 23

<210> 3

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

gcggagtgga aacttttgtc c 21

<210> 4

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

gggaagcgtg tacttatcct tct 23

<210> 5

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

aaagcgagta aacgtatgac ctg 23

<210> 6

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

agcactattt ggaacacctg g 21

<210> 7

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

gcacatagag agaatgagct tcc 23

<210> 8

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

ctccgctctg aacaaggct 19

<210> 9

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

ccagttccag aaatgatagc c 21

<210> 10

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

gacaggactg agacattctg c 21

<210> 11

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

ggttagtgaa cgtcaagtgc t 21

<210> 12

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 12

ccccataatc gtagggagag gt 22

<210> 13

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 13

tggcaagtac ggcttctgtc 20

<210> 14

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 14

ttcttgtcgc ggtcgtagtc 20

<210> 15

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 15

tcaggcgtct gtagaggctt 20

<210> 16

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

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atgcacatcc ttcgataaga ctg 23

<210> 17

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

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cacacgctgc cttgtgtct 19

<210> 18

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<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

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ggtcagcaaa agcacggtt 19

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<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 19

ggacaagctg agcaagattc a 21

<210> 20

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 20

cggagaaggc gtagctgag 19

<210> 21

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 21

ggataacgga ggctgggat 19

<210> 22

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 22

ggcaggcatg ttgacttcac 20

<210> 23

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 23

gaggatgatt gccgccgtgg aca 23

<210> 24

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 24

gtccacggcg gcaatcatc 19

<210> 25

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 25

cgctctgttc ctgtactttc g 21

<210> 26

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 26

gagtcctgca aatctgcgtt 20

<210> 27

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 27

tcctccatga acaaacagtt ccaa 24

<210> 28

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 28

agacgtggtt taggaatgca gctc 24

<210> 29

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 29

aatacctccc tctcgatcct aca 23

<210> 30

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 30

tggttcttga ctggagtaac gta 23

<210> 31

<211> 16

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 31

agacccaatg ccaccc 16

<210> 32

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 32

ggacctccaa gttcttatc 19

<210> 33

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 33

ctgaacggga agctcactgg 20

<210> 34

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 34

tgaggtccac caccctgttg 20