具有肠道屏障修复作用的昆布多糖类化合物及其制备方法
阅读说明：本技术 具有肠道屏障修复作用的昆布多糖类化合物及其制备方法 (Laminarin compound with intestinal barrier repairing effect and its preparation method ) 是由 张杰良 李云峰 余标 于 2021-09-08 设计创作，主要内容包括：本发明属于生物医药技术领域,具体公开了一种具有肠道屏障修复作用的昆布多糖类化合物及其制备方法与应用,昆布多糖类化合物为经羧酸基团修饰的昆布多糖；其制备方法,包括以下步骤：将昆布多糖、吡啶和/或吡啶的衍生物加入有机溶剂中,反应后进行干燥,得固体产物；将固体产物加入到有机溶剂中溶解,得溶解液；将含羧酸基团的有机物加入有机溶剂中,然后加入溶解液混合,得反应液；将反应液进行加热,经冷却后倒入有机溶剂中,干燥后,得所述昆布多糖类化合物。经羧酸基团修饰的吡啶昆布多糖羧酸盐对肠道屏障修复方面具有良好的效果,不仅可改善肠道纤维化,还能够调节肠道菌群失调。(The invention belongs to the technical field of biological medicines, and particularly discloses a laminarin compound with an intestinal barrier repair function, a preparation method and application thereof, wherein the laminarin compound is laminarin modified by carboxylic acid groups; the preparation method comprises the following steps: adding laminarin, pyridine and/or pyridine derivatives into an organic solvent, reacting, and drying to obtain a solid product; adding the solid product into an organic solvent for dissolving to obtain a dissolved solution; adding an organic matter containing carboxylic acid groups into an organic solvent, and then adding a dissolving solution for mixing to obtain a reaction solution; heating the reaction solution, cooling, pouring into an organic solvent, and drying to obtain the laminarin compound. The pyridine laminarin carboxylate modified by carboxylic acid groups has good effect on repairing intestinal barriers, can improve intestinal fibrosis and can regulate intestinal dysbacteriosis.)
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种具有肠道屏障修复作用的昆布多糖类化合物及其制备方法与应用。
背景技术
随着人们物质生活水平的不断提高，人们在饮食方面的选择不断增多，由于快餐、食品添加剂等的广泛普及和滥用，人们的饮食结构和习惯不断被改变，高盐、高糖、高脂肪的食物越来越多的出现在餐桌上。这样的饮食结构的改变也引起了许许多多肠道疾病的产生，严重威胁肠道健康和稳定，进而影响人们的正常生活和工作。根据流行病学研究，炎症性肠炎主要是由于饮食结构不合理而引起的，炎症性肠炎是一组以慢性炎症和肠道菌群失调为特征的胃肠道疾病，包括克罗恩病和溃疡性结肠炎。目前对于炎症性肠炎主要采用炎症药物、免疫抑制剂、生物药物来进行治疗，但这些药物存在较大的毒副作用。
肠内包含一个微生物生态系统，平衡的微生物群对肠黏膜免疫系统健康发展有重要作用。肠道微生物群与肠道性疾病联系密切。临床和实验数据表明，肠道性疾病患者的肠道微生物群的组成和丰度发生了变化。这一现象被称为肠道生物失调。与健康个体相比，肠道性疾病患者的肠道微生物群的特征是微生物多样性低，益生菌(包括双歧杆菌、乳杆菌和粪肠球菌)生长减少，以及炎症相关细菌(如肠杆菌科)的扩张。这些肠道生态失调会增强炎症反应，从而影响肠道健康状态。考虑到肠道菌群失调在肠道性疾病中的影响，肠道菌群被认为是药物靶向治疗的新领域。
因此，亟需研制一种对肠道具有屏障修复作用的药物，对于肠道健康具有重要意义。
发明内容
本发明提出一种具有肠道屏障修复作用的昆布多糖类化合物及其制备方法与应用，以解决现有技术中存在的一个或多个技术问题，至少提供一种有益的选择或创造条件。
为克服上述技术问题，本发明的第一方面提供了一种昆布多糖类化合物或其药学上可接受的盐。
具体的，如式(1)所示的昆布多糖类化合物或其药学上可接受的盐：
其中：n为1-100之间的整数；优选的，n为5-25之间的整数。
本发明以昆布多糖为主体原料，通过在昆布多糖分子中加上吡啶基团，并在吡啶环上再添加上一个羧酸基团，以获得吡啶昆布多糖羧酸盐。昆布为海带科植物海带或或翅藻科植物黑昆布的叶状体，具有具有软坚散结，消痰，利水之功效，其主要成分为多糖、天然蛋白质、脂肪、纤维素、矿物质和核酸等，具有明显的药理学作用，昆布多糖为昆布主要成分之一，是膳食多糖中的一种，而膳食多糖发挥的生物活性又与其结构特征(如基团种类和数量、分子量、组成糖、糖苷键类型及连接顺序等)密切相关，不同结构的膳食多糖，其生物活性也存在一定的差异。本发明在昆布多糖分子的基础上对昆布多糖进行羧酸基团的修饰，改变了昆布多糖的空间结构，引发了昆布多糖的活性变化，通过分析吡啶昆布多糖羧酸盐对肠道屏障的修复作用，证实了具有式(1)结构的吡啶昆布多糖羧酸盐不仅具有改善肠道细胞纤维化程度的作用，还具有调节肠道微生物结构，促进益生菌生长，抑制致病菌增殖的功效。
作为上述方案的进一步改进，制备所述昆布多糖类化合物或其药学上可接受的盐的原料包括昆布多糖、吡啶和/或吡啶的衍生物和含羧酸基团的有机物。
优选的，所述吡啶和/或吡啶的衍生物包括异烟酸甲酯；
优选的，所述含羧酸基团的有机物包括γ-丁内酯或丙炔酸。
作为上述方案的进一步改进，所述昆布多糖与吡啶和/或吡啶的衍生物的质量体积比为1g：(10-20)mL。
进一步优选的，所述昆布多糖与吡啶和/或吡啶的衍生物的质量体积比为1g：15mL。
本发明的第二方面提供了一种昆布多糖类化合物或其药学上可接受的盐的制备方法。
具体的，一种昆布多糖类化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，包括以下步骤：
(1)将昆布多糖、吡啶和/或吡啶的衍生物加入有机溶剂中，反应后进行干燥，得固体产物；
(2)将步骤(1)制得的所述固体产物加入到有机溶剂中溶解，得溶解液；
(3)将含羧酸基团的有机物加入有机溶剂中，然后加入步骤(2)制得的所述溶解液混合，得反应液；
(4)将步骤(3)制得的所述反应液进行加热，经冷却后倒入有机溶剂中，干燥后，得所述昆布多糖类化合物。
具体的，步骤(1)中，当制备原料为昆布多糖和异烟酸甲酯时，所述反应的合成过程如下，其中：Laminarin-Pyridine(LPY)为吡啶昆布多糖：
步骤(3)中，当制备原料为γ-丁内酯和步骤(2)制得的溶解液时，所述反应液的合成过程如下，其中：Laminarin Zwitterion carboxylate(LZC)为吡啶昆布多糖羧酸盐：
作为上述方案的进一步改进，步骤(1)中，所述反应的工艺条件为：温度110-130℃，充惰性气体搅拌回流36-54小时。
优选的，步骤(1)中，所述干燥的工艺条件为：在60-70℃下进行旋蒸干燥。
优选的，步骤(1)中，所述溶剂包括甲苯或无水乙醇。
作为上述方案的进一步改进，步骤(2)中，所述固体产物与所述有机溶剂的质量体积为1g：(5-20)mL。
优选的，步骤(2)中，所述固体产物与所述有机溶剂的质量体积为1g：10mL。
优选的，步骤(2)中，所述溶剂包括二甲基甲砜或二甲基甲酰胺。
作为上述方案的进一步改进，步骤(3)中，所述含羧酸基团的有机物与所述有机溶剂的体积比为1：(1-10)。
优选的，步骤(3)中，所述含羧酸基团的有机物与所述有机溶剂的体积比为1：5。
优选的，步骤(3)中，所述溶剂包括二甲基甲砜或二甲基甲酰胺。
作为上述方案的进一步改进，步骤(4)中，所述加热的工艺条件为：温度70-90℃下搅拌36-60小时；
优选的，步骤(4)中，所述加热的工艺条件为：温度80℃下搅拌48小时；
优选的，步骤(4)中，所述反应液与所述有机溶剂的体积比为1：(1-10)。
进一步优选的，步骤(4)中，所述反应液与所述有机溶剂的体积比为1：4。
优选的，步骤(4)中，所述溶剂包括丙酮或无水乙醇。
进一步优选的，步骤(4)中，所述溶剂的温度为4℃。
本发明的第三方面提供了昆布多糖类化合物或其药学上可接受的盐的应用。
具体的，上述昆布多糖类化合物或其药学上可接受的盐在制备肠道屏障修复的药物中的应用。
本发明利用硫酸葡聚糖酸钠(DSS)诱导的结肠炎小鼠模型，进行了肠道组织形态学观察和肠道菌群结构组成变化测试，结果证明：吡啶昆布多糖羧酸盐对肠道屏障修复方面具有良好的效果，不仅可改善肠道纤维化，维持肠道结构的稳定性；还能够调节肠道菌群失调，维持肠道菌群的稳定性。
进一步的，所述肠道屏障修复包括改善小鼠结肠损伤情况；提高结肠绒毛结构完整性、上皮细胞排列情况及组织学评分。所述调节肠道菌群失调是指使有益菌群的数量增加和有害菌群的数量减少。其中:有益菌群包括乳酸杆菌、双歧杆菌和乳球菌等；有害菌群包括埃希氏菌、螺杆菌和拟杆菌等。
本发明的上述技术方案相对于现有技术，至少具有如下技术效果或优点：
本发明通过先向昆布多糖分子中引入一个吡啶基团得到中间产物，然后引入羧酸基团的方式，制得吡啶昆布多糖羧酸盐，经羧酸基团修饰的昆布多糖，改变了昆布多糖的空间结构，引发了昆布多糖的活性变化。利用硫酸葡聚糖酸钠(DSS)诱导的结肠炎小鼠模型，进行肠道组织形态学观察和肠道菌群结构组成变化测试，结果证明：吡啶昆布多糖羧酸盐对肠道屏障修复方面具有良好的效果，不仅可改善肠道纤维化，维持肠道结构的稳定性；还能够调节肠道菌群失调，促进肠道益生菌菌群增殖和抑制肠道有害菌的生长，维持肠道菌群的稳定性。为吡啶昆布多糖羧酸盐的生理功能研究提供了理论依据，有利于促进昆布多糖类产业的开发和推广，为肠道疾病的临床治疗提供治疗依据。同时，本发明的制备方法简单，不需要经过复杂的化学合成反应，且反应产物较为单一，产率高，适用于产业化规模生产。
附图说明
图1为昆布多糖及吡啶昆布多糖羧酸盐的红外光谱图；
图2为小鼠喂养流程图；
图3为小鼠结肠组织H&E染色结果图；
图4为小鼠结肠组织马松染色结果图；
图5为肠道菌在门水平上的相对丰度图；
图6为厚壁菌门菌群/拟杆菌门菌群相对丰度的比率图。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明进行具体描述，以便于所属技术领域的人员对本发明的理解，有必要在此特别指出的是，实施例只是用于对本发明做进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，所属领域技术人员，根据上述发明内容对本发明作出的非本质性的改进和调整，应仍属于本发明的保护范围，同时，下述所提及的原料未详细说明的，均为市售产品，未详细提及的工艺步骤或制备方法均为本领域技术人员所知晓的工艺步骤或制备方法。
实施例1
一种昆布多糖类化合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将昆布多糖和异烟酸甲酯加入甲苯中，其中：昆布多糖和异烟酸甲酯的质量体积比为1g：10mL，温度为130℃，充氮气作为保护气，搅拌回流36小时，然后在70℃下旋蒸，得固体产物；
(2)将步骤(1)制得的固体产物加入到二甲基亚砜中溶解，其中：固体产物与二甲基亚砜的质量体积比为1g：15mL，在室温下搅拌均匀，得溶解液；
(3)将γ-丁内酯加入二甲基亚砜中，其中：γ-丁内酯和二甲基亚砜的体积比为1：4，然后逐滴加入步骤(2)制得的溶解液中，混合均匀，得反应液；
(4)将步骤(3)制得的反应液在90℃下搅拌36小时，冷却至室温后将其倒入4℃的丙酮中，其中反应液和丙酮的体积比为1：10，干燥后，得到本实施例的吡啶昆布多糖羧酸盐。
本实施例制得的吡啶昆布多糖羧酸盐，产率为73％，其结构式为式(1)，其中：n的值为20。
实施例2
一种昆布多糖类化合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将昆布多糖和异烟酸甲酯加入甲苯中，其中：昆布多糖和异烟酸甲酯的质量体积比为1g：20mL，温度为110℃，充氮气作为保护气，搅拌回流54小时，然后在60℃下旋蒸，得固体产物；
(2)将步骤(1)制得的固体产物加入到二甲基亚砜中溶解，其中：固体产物与二甲基亚砜的质量体积比为1g：5mL，在室温下搅拌均匀，得溶解液；
(3)将γ-丁内酯加入二甲基亚砜中，其中：γ-丁内酯和二甲基亚砜的体积比为1：10，然后逐滴加入步骤(2)制得的溶解液中，混合均匀，得反应液；
(4)将步骤(3)制得的反应液在70℃下搅拌60小时，冷却至室温后将其倒入4℃的丙酮中，其中反应液和丙酮的体积比为1：4，干燥后，得到本实施例的吡啶昆布多糖羧酸盐。
本实施例制得的吡啶昆布多糖羧酸盐，产率为71％，其结构式为式(1)，其中：n的值为25。
实施例3
一种昆布多糖类化合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将昆布多糖和异烟酸甲酯加入甲苯中，其中：昆布多糖和异烟酸甲酯的质量体积比为1g：15mL，温度为120℃，充氮气作为保护气，搅拌回流48小时，然后在65℃下旋蒸，得固体产物；
(2)将步骤(1)制得的固体产物加入到二甲基亚砜中溶解，其中：固体产物与二甲基亚砜的质量体积比为1g：10mL，在室温下搅拌均匀，得溶解液；
(3)将γ-丁内酯加入二甲基亚砜中，其中：γ-丁内酯和二甲基亚砜的体积比为1：5，然后逐滴加入步骤(2)制得的溶解液中，混合均匀，得反应液；
(4)将步骤(3)制得的反应液在80℃下搅拌48小时，冷却至室温后将其倒入4℃的丙酮中，其中反应液和丙酮的体积比为1：5，干燥后，得到本实施例的吡啶昆布多糖羧酸盐。
本实施例制得的吡啶昆布多糖羧酸盐，产率为67％，其结构式为式(1)，其中：n的值为18。
实施例4-7所采用的吡啶昆布多糖羧酸盐均为实施例1所制得的吡啶昆布多糖羧酸盐。
实施例4
本实施例为吡啶昆布多糖羧酸盐的结构分析。
取实施例1制备的干燥的啶昆布多糖羧酸盐0.5mg与50mg干燥的溴化钾(KBr)粉末充分混合进行研磨，利用模具与压片机将粉末压制成压片。在样品测定之前先进行背景扫描去除干扰因素，在400-4000cm-1进行红外光谱扫描(FT-IR)分析。
昆布多糖红外光谱如图1所示，图中LAMINARIN为昆布多糖，作为对照组；LZC为吡啶昆布多糖羧酸盐，作为实验组，横坐标Wavenumbers为波数。其中：LAMINARIN在3382cm-1处具有O-H伸缩振动的特征吸收峰，由于分子内或分子内的氢键缔合而使吸收峰加宽，说明存在分子内或者分子间氢键；1200cm-1-950cm-1处为吡喃糖环的醚键(C-O-C)和羟基(C-O-H)的特征吸收峰；2893cm-1处具有-CH3或-CH2基团的C-H伸缩振动吸收峰，这些结构区都是昆布多糖的重要表征之一。
LZC组在昆布多糖组的基础上，在1635cm-1和1373cm-1处显示出特征吸收峰，这些位置的吸收峰表明羧酸盐C＝O和羧酸盐C-O的伸缩振动，以上吸收峰与目标产物预期出现的吸收峰相吻合，也验证了该昆布多糖羧酸盐的存在。
实施例5
本实施例为结肠炎小鼠模型的建立。
把实验对象小鼠(C57BL/6小鼠)随机分为3组(小鼠间无明显差异)。每组各有五只小鼠，三个小组分别为空白对照组、DSS结肠炎模型组、昆布多糖类化合物组。
实验过程中的喂养流程如2所示，图2中的A为空白对照组；B为DSS结肠炎组；C为昆布多糖类化合物组。实验周期约为21天，对照组在整个实验周期中全程给小鼠喂养生理盐水；DSS组，在7-14天时喂养适量的硫酸葡聚糖钠盐，其余时间段也给小鼠喂养生理盐水；而昆布多糖类化合物组在7-14天时喂养本发明中制得的昆布多糖化合物，其余时间段喂养生理盐水。
在实验过程中，每天观察小鼠体重、饮食、精神状态等情况，连续14天。末次喂养后禁食24h，处死，收集结肠，结肠内容物和血清备用。
实施例6
本实施例为肠道组织形态学观察。
1.石蜡切片制作：
(1)取样:取小鼠结肠组织，所选取的组织块尽量符合大小适宜、厚薄均匀、形状规整等条件，在夹取结肠组织时也应当注意动作轻柔，以避免选取组织受到机械性损伤；
(2)固定：选择10％中性福尔马林溶液作为固定液，将小鼠结肠组织放入固定液中固定24-48h；
(3)脱水：使用不同酒精浓度的酒精对固定后的组织进行脱水，包含使用50％、70％、80％、90％和95％酒精脱水各2h；100％Ⅰ和100％Ⅱ酒精脱水各1.5h；
(4)透明：让组织块在100％酒精+二甲苯(1：1)中贮藏20min，在二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各贮藏15min；
(5)浸蜡：控制温度在58℃左右，然后让组织块分别在石蜡和甲苯混合液中浸30min，石蜡Ⅰ、Ⅱ中各浸2-3h；
(6)包埋：60℃温度条件下，将组织包埋入石蜡，并逐渐凝固成块；
(7)切片：将蜡块于切片机上固定后，使用锋利的刀片切得厚薄均匀的组织切片；
(8)贴片、烤片：把切片铺在温水上，等切片展开后用载玻片把切片从水中捞出，然后把贴好切片的载玻片竖立放置排去多余水分，然后在65℃温度下将载玻片烘烤20min左右。
2.H&E染色：
(1)染色：将切片浸入二甲苯Ⅰ、Ⅱ各15min，二甲苯+100％酒精(1：1)，100％酒精Ⅰ、Ⅱ，浓度分别为95％、90％、80％、70％、50％的酒精，蒸馏水各2min，苏木精染液5-10min，水洗后分化入1％盐酸酒精5s，自来水，1％氨水蓝化，自来水，50％酒精，70％酒精，80％酒精，90％酒精和95％酒精各2min，1％伊红染液5min，95％酒精，100％酒精Ⅰ、Ⅱ，100％酒精+二甲苯(1：1)，二甲苯Ⅰ、Ⅱ各2min。
(2)封片：封片后使用中性树胶封固，封片后放入温箱中烤2h左右。
小鼠结肠组织H&E染色(苏木精-伊红染色法)结果如图3所示，其中：图3中的A为对照组；B为DSS介导组；C为吡啶昆布多糖羧酸盐组。由图3可知：DSS结肠炎组切片中杯状细胞相较于对照组缺失大量面积，细胞间浸润大量黏液，肌肉纤维出现分离；昆布多糖羧酸盐化合物组细胞相较于DSS组细胞排列更加紧密，细胞更加饱满，在细胞的形态和排列方面也与对照组有更多的相似性。
3.马松染色
(1)切片脱蜡至水；
(2)用配置好的Weigert苏木精染液染色5-10min；
(3)酸性乙醇分化液分化5-15s，水洗；
(4)Masson蓝化液返蓝3-5min，水洗。蒸馏水洗1min；
(5)丽春红品红染液染色5-10min；
(6)冰醋酸洗1min；
(7)95％乙醇快速脱水2-3s，无水乙醇脱水3次，每次5-10s；
(8)二甲苯透明3次，每次1-2min，中性树胶封固。
小鼠结肠组织马松染色结果如图4所示，其中：图4中的A为对照组；B为DSS介导组；C为吡啶昆布多糖羧酸盐组。由图4可知：相较与空白对照组，DSS诱导组中的结肠组织中的蓝色部分(胶原纤维部分)的占比较高，说明肠道组织中胶原纤维的纤维化程度升高；而在昆布多糖类化合物组中，蓝色的胶原纤维组分的占比较DSS组有所下降，说明该昆布多糖类化合物能够改善肠道纤维化，对维持肠道屏障结构的稳定有重要作用。
实施例7
本实施例为肠道菌群结构组成变化的测定。
1.DNA(脱氧核糖核酸)提取及测序：取出提前从小鼠粪便中分离并冻存在80℃冰箱中的菌体，采用DNA抽提试剂盒对样本的基因组DNA进行提取，之后利用琼脂糖凝胶电泳和微量紫外分光光度计(NanoDrop2000)检测DNA的浓度。以基因组DNA为模板，根据测序区域的选择，使用带barcode(条形码)的特异引物，Takara公司的Tks Gflex DNA Polymerase聚合酶进行PCR(聚合酶链式反应)，确保扩增效率和准确性；
2.PCR扩增:选择16S rRNA的V3-V4区域进行PCR扩增,引物为细菌16s前端引物为343F(5’-TACGGRAGGCAGCAG-3’)，后端引物为798R(5’-AGGGTATCTAATCCT-3’)。扩增体系30μL:包括15μL 2×Gflex PCR缓冲液、3.2μL 2.5mmol/L dNTP(脱氧核糖核苷三磷酸)、0.6μL1.25U/μL Tks Gflex DNA聚合酶、前后端引物各5pmol/μL、50ng模板DNA、ddH2O(双蒸水)。反应条件：在94℃下先预变性5min,然后94℃下变性1min，5℃复性45s后，72℃下延伸1min，上述步骤循环30次,最后在72℃下延伸10min。
3.16S rRNA测序:使用Illumina测序系统对PCR扩增产物进行高通量测序，使用QIIME软件对原始数据进行质量筛选，得到有效的数据，用生物信息学手段对数据结果进行分析
4.生物信息学分析：使用Trimmomatic软件对原始双端序列进行去杂。去杂参数为：检测并截去模糊碱基N；并采用滑窗法检查平均碱基质量，当质量低于20时，截取前面高质序列。去杂后的双端序列利用FLASH软件进行。拼接参数为：最小的overlap(交叠)为10bp、最大的Overlap为200bp、最大错配率为20％。为保证结果的准确性，可进行精准去杂，去除含有模糊碱基(ambiguous)、单碱基高重复区(homologous)的序列以及长度过短的序列。精准去杂的参数为：去掉含有N碱基的序列，保留碱基质量分数Q20达到至少75％的序列。同时，利用UCHIME检测并去除序列中的嵌合体序列。测序数据进行预处理生成优质序列之后，采用Vsearch软件，根据序列的相似性，将序列归为多个OTU。参数为序列相似度大于或等于97％被归为一个OTU单元。使用QIIME软件包的挑选出各个OTU的代表序列，并将所有代表序列与数据库进行比对注释。16S使用Greengenes或者Silva(version123)数据库比对，物种比对注释使用RDP classifier软件，保留置信区间大于0.7的注释结果。ITS使用Unite数据库比对。物种比对注释使用blast软件。
5.门水平菌群组成及物种差异性分析针对小鼠粪便样本进行了各分类水平菌群组成分析拟杆菌门，在门水平上，拟杆菌门(Bacteroidetes)及厚壁菌门(Firmicutes)通常占据主导地位；同时通过过Stamp软件Tukey-Kramer算法对厚壁菌门/拟杆菌门比值进行分析。
肠道菌门水平上的的拟杆菌门的相对丰度如图5所示，图中：NC为对照组；DSS为硫酸葡聚糖钠盐介导组；LLZC为低浓度昆布多糖羧酸盐组(1mg/mL)；MLZC为中浓度昆布多糖羧酸盐组(5mg/mL)；HLZC为高浓度昆布多糖羧酸盐组(10mg/mL)。由图5可知：随着该昆布多糖类化合物的使用，益生菌的生长被促进，而致病菌的生长被抑制。具体表现为：随着该昆布多糖类化合物的使用，小鼠肠道菌中拟杆菌门菌(Bacteroidetes)等益生菌的相对丰度与DSS组相比较有明显上升，与之相反的是厚壁菌门(Firmicutes)菌种的相对丰度与DSS组相比较有明显下降。同时，由于Firmicutes/Bacteroidetes可以反映肠道菌群紊乱程度。
厚壁菌门菌群/拟杆菌门菌群相对丰度的比率如图6所示，图中：NC为对照组；DSS为硫酸葡聚糖钠盐介导组；LLAM为低浓度昆布多糖组(1mg/mL)；MLAM为中浓度昆布多糖组(5mg/mL)；HLAM为高浓度昆布多糖组(10mg/mL)；LLZC为低浓度昆布多糖羧酸盐组(1mg/mL)；MLZC为中浓度昆布多糖羧酸盐组(5mg/mL)；HLZC为高浓度昆布多糖羧酸盐组(10mg/mL)；F/B ratio为厚壁菌门菌群与拟杆菌门菌群相对丰度。由图6可知：该昆布多糖类化合物组中厚壁菌门菌(Firmicutes)与拟杆菌门菌(Bacteroidetes)相对丰度的比例相较于DSS介导组急剧下降，与空白对照组和昆布多糖组相比较也有一定下降，说明该昆布多糖类化合物能够调节肠道菌群失调，对维持肠道菌群的稳定有重要的作用。
显然，上述实施例仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之中。