一种具有抗氧化功能的混合乳酸菌发酵乳其制备方法
阅读说明：本技术 一种具有抗氧化功能的混合乳酸菌发酵乳其制备方法 (Mixed lactobacillus fermented milk with antioxidant function and preparation method thereof ) 是由 孙宁 谢秉锵 李仁芳 伍云 李婕 黄学正 石爱萍 李雯晓 黄丽 李玲 杨攀 于 2021-08-06 设计创作，主要内容包括：本发明涉及生物发酵领域,具体涉及一种具有抗氧化功能的混合乳酸菌发酵乳其制备方法。所述混合乳酸菌发酵乳采用益生乳酸菌L.fermentumPM22：P.acidilacticiPM44为1:2混合发酵制备而成。同时,本发明还提供了所述乳酸菌发酵乳的制备方法。本发明益生乳酸菌筛选自于传统发酵食品且为γ-溶血的安全菌株,同时具有耐胃肠条件、高抗氧化活性的特性。按一定配比益生混合乳酸菌与商业发酵剂复配使用,利用共生机制,不仅提高发酵乳的抗氧化特性,同时减少发酵时间和后酸化等不良影响。(The invention relates to the field of biological fermentation, and in particular relates to mixed lactobacillus fermented milk with an antioxidant function and a preparation method thereof. The mixed lactobacillus fermented milk adopts probiotic lactobacillus L.fermentumPM22: p. acidilacticipM44 is prepared by 1:2 mixed fermentation. Meanwhile, the invention also provides a preparation method of the lactobacillus fermented milk. The probiotic lactic acid bacteria sieve is selected from traditional fermented food and is a gamma-hemolytic safe bacterial strain, and has the characteristics of gastrointestinal condition resistance and high antioxidant activity. The probiotic mixed lactic acid bacteria and the commercial starter are compounded according to a certain proportion, and a symbiotic mechanism is utilized, so that the antioxidant property of the fermented milk is improved, and the adverse effects of fermentation time, post-acidification and the like are reduced.)
技术领域
本发明涉及生物发酵领域，具体涉及一种具有抗氧化功能的混合乳酸菌发酵乳其制备方法。
背景技术
发酵乳一般分为普通、功能和风味型三大类，而风味型一般又分为搅拌型和凝固型。发酵乳与新鲜牛乳相比，含有更加丰富的营养物质和酸甜可口的滋味，深受大众的喜爱。发酵乳还对人体有着独特的作用，如对人体的保健具有极为广泛的作用。例如：发酵乳有丰富食品营养的功能、对肠道内的细菌菌群有改善作用、肠道菌群平衡有助于肝肾脏的健康、对其它的一些疾病预防及治疗作用。随着生产技术的高速发展，人们对于发酵乳的营养健康等功能也逐步加深了了解，同时通过不断改进发酵乳风味，令销量不断上升呈现出快速增长的一个趋势。目前我国人均发酵乳的食用量还是较低的，所以我国发酵乳制品市场有着非常好的前景。近年来，发酵乳虽然已经逐步的呈现出品种系列化，口感、口味多样化，但仍然无法满足消费者，人们已经开始追求健康和营养化。功能食品的出现成为主流的趋势，具有益生特性的发酵乳已成功占据了主要的市场，开发功能性发酵乳制品早已经成为了发展趋势。
近年来，活性氧和自由基与疾病的关系越来越受到重视，已成为生命科学和医学的前沿和热点，与之相应的抗氧化剂开发也成为食品学科的重要课题。从食品安全性上考虑，天然抗氧化物质具有合成抗氧化剂无法比拟的优势，现已成为当今食品和医学专家追求的目标。研究表明，乳酸菌具有整肠、抑菌、抗癌、增强机体免疫力和抗衰老等许多生理功能。因此，无论从安全性还是营养保健价值方面考虑，乳酸菌作为抗氧化剂将具有很大的市场潜力。乳酸菌一般存在于蔬菜、水果、乳制品、肉制品、水产品，尤其是各类发酵食品中。如果能从食源角度筛选出具有抗氧化活性的乳酸菌，用于生产功能性发酵食品、保健品或是开发为抗衰老药品，都将对推动我国益生菌产业及促进人们身体健康具有积极作用，并会带来良好的经济和社会效益。
发明内容
本发明的目的之一在于：提供一种具有抗氧化功能的混合乳酸菌发酵乳其制备方法：
一方面，本发明提供了一种天然益生菌发酵剂，包括益生乳酸菌L. fermentumPM22、P.acidilactici PM44，于2021年5月26日保存于广东省微生物菌种保藏中心，所述的L.fermentum PM22保藏号为GDMCC No：61678，所述的P.acidilactici PM44保藏号为GDMCCNo：61705。
所述的益生乳酸菌体积比为L.fermentum PM22：P.acidilactici PM44为 1:2-2:1。
优选地，所述的益生乳酸菌体积比为L.fermentum PM22：P.acidilactici PM44为1:2。
在2018年至2019年期间，本实验室对广西地区传统发酵食品生榨米粉进行乳酸菌分离于筛选工作，累计分离乳酸菌318株，鉴定乳酸菌294株。对分离得到的乳酸菌进行了体外功能益生特性研究，其中获得2株益生特性良好的乳酸菌株，如表1所示。
表1 2株益生特性良好的乳酸菌
另一方面，本发明提供了一种具有高抗氧化功能的混合乳酸菌发酵乳，其包括上述的益生菌发酵剂中任一组。
进一步地，所述具有高抗氧化功能的混合乳酸菌发酵乳还包括原料乳、商业发酵剂、蔗糖。
另一方面，本发明还提供了一种具有高抗氧化功能的混合乳酸菌发酵乳的制备方法，所述方法步骤包括：1)调配，在原料乳中添加以质量百分数计5％-7％的蔗糖；2)均质，将蔗糖在55℃-70℃下溶解，在18Mpa-20Mpa的压力条件下均质；3)杀菌，在90℃-95℃下杀菌8-11分钟；4)冷却；5)接种，接种权利要求2所述的益生菌发酵剂，同时添加商业发酵剂；6)发酵，在38℃-42℃下发酵至酸乳酸度70°T-80°T；7)冷藏；8)后熟。
所述原料乳为荷斯坦牛乳、娟珊牛乳、牦牛乳、羊乳、水牛乳中一种或多种。
进一步地，所述益生发酵剂接种量为以质量分数计3％-5％，同时添加商业发酵剂接种量为以质量百分数计的0.003％-0.008％。
进一步地，所述商业发酵剂是指直投式发酵剂，尤以科汉森有限公司生产的MiId 1.050U直投发酵剂为佳，含有保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
1、益生乳酸菌L.fermentum PM22、P.acidilactici PM44均筛选自于传统发酵食品且为γ-溶血的安全菌株，同时具有耐胃肠条件、高抗氧化活性的特性。
2、添加量益生菌发酵剂发酵乳的DPPH清除能力均显著高于对照组(p＜ 0.05)，表明添加益生菌使得发酵乳的抗氧化活性显著增加。
3、按一定配比益生混合乳酸菌与商业发酵剂复配使用，利用共生机制，不仅提高发酵乳的抗氧化特性，同时减少发酵时间和后酸化等不良影响。
附图说明
图1为实验例2中混合乳酸菌发酵乳持水力测定结果。
图2为实验例3中混合乳酸菌发酵乳酸度变化测定结果。
图3为实验例5中混合乳酸菌发酵乳活菌数变化测定结果。
具体实施方式
下面以实施例作进一步说明，但本发明不局限于这些实施例。
实施例1
将冻存于-80℃冰箱的乳酸菌菌株取出恢复至室温，接种至灭菌后的MRS 液体培养基中，37℃生化培养箱中恒温培养24h。活化至2代，根据乳酸菌的共生调节机制，按表1设计复合比例进行复合，放入4℃冰箱中冷藏备用。
表1复合乳酸菌配比
组别
菌种
添加比例
A
L.fermentum PM22:P.pentosaceus PM44
1:2
D
L.fermentum PM22:P.pentosaceus PM44
2:1
H
L.fermentum PM22:P.pentosaceus PM44
1:1
实施例2
本实施例的具有高抗氧化功能的混合乳酸菌发酵乳的制作工艺如下：
1)原料乳：抗生素会抑制乳酸菌的发酵，故选取无抗生素的新鲜水牛乳作为原料乳；
2)调配：取出部分水牛乳加入所述原料乳总质量5％的蔗糖；
3)均质：将步骤2)所得水牛乳升温至55℃，使得蔗糖溶解后，与其余的水牛乳混合并搅匀，在18Mpa的压力条件下均质，得基料；
4)杀菌：采用巴氏杀菌方式将步骤3)所得的基料进行杀菌，将所述基料加热至90℃，而后保温11min，以杀灭基料中致病菌和有害微生物；
5)接种：将步骤4)杀菌后的基料冷却到40℃，而后取所述原料乳总质量 5％的L.fermentum PM22和P.acidilactici PM44(体积比为1:2)，同时添加0.003％的商业发酵剂接种到冷却后的基料中，搅拌至溶解并混合均匀，得接种奶；
6)分装和发酵：将所得接种奶分装后在42℃条件下恒温发酵，当酸度达到 70°T时停止发酵，得发酵乳初品；
7)冷藏和后熟：将步骤6)发酵后的发酵乳初品置于2-6℃条件下冷藏后熟 24h，即可。
实施例3
本实施例的具有高抗氧化功能的混合乳酸菌发酵乳的制作工艺如下：
1)原料乳：抗生素会抑制乳酸菌的发酵，故选取无抗生素的新鲜荷斯坦乳作为原料乳；
2)调配：取出部分荷斯坦乳加入所述原料乳总质量6％的蔗糖；
3)均质：将步骤2)所得荷斯坦乳升温至65℃，使得蔗糖溶解后，与其余的荷斯坦乳混合并搅匀，在19Mpa的压力条件下均质，得基料；
4)杀菌：采用巴氏杀菌方式将步骤3)所得的基料进行杀菌，将所述基料加热至93℃，而后保温9min，以杀灭基料中致病菌和有害微生物；
5)接种：将步骤4)杀菌后的基料冷却到45℃，而后取所述原料乳总质量 4％的L.fermentum PM22和P.acidilactici PM44(体积比为2:1)，同时添加0.006％的科汉森有限公司生产的MiId 1.0接种到冷却后的基料中，搅拌至溶解并混合均匀，得接种奶；
6)分装和发酵：将所得接种奶分装后在38℃条件下恒温发酵，当酸度达到 75°T时停止发酵，得发酵乳初品；
7)冷藏和后熟：将步骤6)发酵后的发酵乳初品置于2-6℃条件下冷藏后熟 24h，即可。
实施例3
本实施例的具有高抗氧化功能的混合乳酸菌发酵乳的制作工艺如下：
1)原料乳：抗生素会抑制乳酸菌的发酵，故选取无抗生素的新鲜羊乳作为原料乳；
2)调配：取出部分羊乳加入所述原料乳总质量7％的蔗糖；
3)均质：将步骤2)所得羊乳升温至70℃，使得蔗糖溶解后，与其余的羊乳混合并搅匀，在20Mpa的压力条件下均质，得基料；
4)杀菌：采用巴氏杀菌方式将步骤3)所得的基料进行杀菌，将所述基料加热至95℃，而后保温8min，以杀灭基料中致病菌和有害微生物；
5)接种：将步骤4)杀菌后的基料冷却到38℃，而后取所述原料乳总质量 3％的L.fermentum PM22和P.acidilactici PM44(体积比为1:1)，同时添加0.008％的科汉森有限公司生产的MiId 1.0接种到冷却后的基料中，搅拌至溶解并混合均匀，得接种奶；
6)分装和发酵：将所得接种奶分装后在38℃条件下恒温发酵，当酸度达到 80°T时停止发酵，得发酵乳初品；
7)冷藏和后熟：将步骤6)发酵后的发酵乳初品置于2-6℃条件下冷藏后熟 24h，即可。
实施例4
本实施例的具有高抗氧化功能的混合乳酸菌发酵乳的制作工艺如下：
1)原料乳：抗生素会抑制乳酸菌的发酵，故选取无抗生素的新鲜娟珊牛乳作为原料乳；
2)调配：取出部分羊乳加入所述原料乳总质量6％的蔗糖；
3)均质：将步骤2)所得羊乳升温至60℃，使得蔗糖溶解后，与其余的羊乳混合并搅匀，在20Mpa的压力条件下均质，得基料；
4)杀菌：采用巴氏杀菌方式将步骤3)所得的基料进行杀菌，将所述基料加热至92℃，而后保温10min，以杀灭基料中致病菌和有害微生物；
5)接种：将步骤4)杀菌后的基料冷却到40℃，而后取所述原料乳总质量 3.5％的L.fermentum PM22和P.acidilactici PM44(体积比为1:2)，同时添加 0.005％的科汉森有限公司生产的MiId 1.0接种到冷却后的基料中，搅拌至溶解并混合均匀，得接种奶；
6)分装和发酵：将所得接种奶分装后在39℃条件下恒温发酵，当酸度达到 80°T时停止发酵，得发酵乳初品；
7)冷藏和后熟：将步骤6)发酵后的发酵乳初品置于2-6℃条件下冷藏后熟 24h，即可。
对比例1
本实施例的混合乳酸菌发酵乳的制作工艺如下：
1)原料乳：抗生素会抑制乳酸菌的发酵，故选取无抗生素的新鲜羊乳作为原料乳；
2)调配：取出部分羊乳加入所述原料乳总质量7％的蔗糖；
3)均质：将步骤2)所得羊乳升温至70℃，使得蔗糖溶解后，与其余的羊乳混合并搅匀，在20Mpa的压力条件下均质，得基料；
4)杀菌：采用巴氏杀菌方式将步骤3)所得的基料进行杀菌，将所述基料加热至953℃，而后保温8min，以杀灭基料中致病菌和有害微生物；
5)接种：将步骤4)杀菌后的基料冷却到38℃，而后取所述原料乳总质量 0.008％的科汉森有限公司生产的MiId 1.0接种到冷却后的基料中，搅拌至溶解并混合均匀，得接种奶；
6)分装和发酵：将所得接种奶分装后在38℃条件下恒温发酵，当酸度达到 80°T时停止发酵，得发酵乳初品；
7)冷藏和后熟：将步骤6)发酵后的发酵乳初品置于2-6℃条件下冷藏后熟 24h，即可。
实验例1混合乳酸菌发酵乳抗氧化特性测定
将实施例2(A组)、实施例3(D组)、实施例4(H组)制得具有高抗氧化功能的混合乳酸菌发酵乳进行抗氧化特性、贮藏第1、4、7、10、14天的持水力、质构、活菌数等方面的效果检验，并以未添加益生菌发酵剂为对照组 (对比例1)，进行产品的品质比对。
发酵乳的抗氧化特性测定：
(1)DPPH自由基清除能力的测定
将待测样液用超纯水稀释5倍，取0.5mL蒸馏水加入0.1mmol/LDPPH的无水乙醇溶液0.5mL，充分震荡混匀后于室温下反应30min，在517nm处测定其吸光度为A0，用待测样液代替A0中蒸馏水测得吸光度为A1，用无水乙醇溶液代替A1中DPPH的无水乙醇溶液测得吸光度为A2。
计算公式：
(2)羟自由基清除能力的测定
样品管：于5mL离心管中加入1mmol/L菲罗啉的无水乙醇溶液0.5mL， pH7.40的0.15mol/L磷酸盐缓冲溶液1mL和待测样液0.5mL混匀，混匀后加入0.75mmol/L的FeSO4溶液0.5mL和0.5mLH2O2(体积分数为0.01％)，混匀后水浴60min于37℃条件下。在536nm处测定其吸光度为A样品。
损伤管：以0.5mL蒸馏水代替样品管中待测样液，重复样品管操作步骤，于536nm处测定其吸光度为A损。
未损伤管：以0.5mL蒸馏水代替损伤管中H2O2。重复样品管操作步骤，在 536nm处测定其吸光度为A未损
计算公式为：
(3)还原能力测定
取0.5mL待测样液，加入0.2mol/L的磷酸盐缓冲溶液(pH6.6)1.25mL， 1％铁氰化钾溶液1.25mL，混匀，在50℃条件下水浴20min后，加入10％(W/V) 三氯乙酸1.25mL，混匀后于室温下静置10min。取1.25mL的上清液加入蒸馏水1.25mL，再加入0.1％FeCl3后混合均匀，静置10min后于700nm处测定吸光度。以磷酸盐缓冲液代替待测样液作空白对照。
表2复合乳酸菌和商业发酵剂复配发酵乳抗氧化特性
组别
羟自由基清除率(％)
还原能力A<sub>700</sub>
DPPH清除率(％)
A
90.10±2.69<sup>a</sup>
15.06±0.00<sup>a</sup>
0.53±0.03
D
83.46±1.80<sup>b</sup>
12.27±0.12<sup>b</sup>
0.52±0.01
H
75.09±2.83<sup>c</sup>
12.55±0.51<sup>b</sup>
0.53±0.02
对照组
53.82±0.51<sup>d</sup>
8.24±0.53<sup>c</sup>
0.50±0.04
注：上标不同小写字母表示同一列之间存在显著性差异(p<0.05)
由表2可知，三组实施例的三个体外抗氧化指标数值上均高于对照组。其中实施例1发酵乳的DPPH清除率为90.10％，显著高于其它组(P＜0.05)，在羟自由基清除率上也表现出同样的规律。且添加量益生菌发酵剂发酵乳的DPPH 清除能力均高于对照组(p＜0.05)。这表明添加益生菌使得发酵乳的抗氧化活性显著增加。
实验例2混合乳酸菌发酵乳持水力测定
先称取空的离心管质量记为A0，称取20g发酵乳于离心管中并记下质量为 m，在3℃，6000×g条件下离心20min，弃去上清液，称取管和沉淀的质量记为A1，则持水力为：
结果见图1，可以看出，4组不同发酵剂发酵乳在冷藏期间的持水力皆维持在35％左右，在冷藏过程中，总体上是呈现出上升的趋势，且第7天以后，A、 D、H组的持水力接近或略高于对照组。说明添加益生菌发酵剂，没有明显影响发酵乳的持水力特性。
实验例3混合乳酸菌发酵乳酸度变化测定
参照GB5009.239-2016测定。
结果见图2，可以看出，在1～7d贮藏期间，D和对照组发酵乳的酸度均快速上升至100°T以上，其中D组发酵乳的滴定酸度保持最高为103.63。因为D 和对照组发酵乳的酸度变化趋势较为明显，说明相对于A和H组来比较，D和对照组发酵乳的后酸化能力较强。在贮藏期第10d之后，4组发酵乳都呈现出了下降的趋势。酸度上升是由于菌种发酵产酸所致；酸度下降是因为发酵到一定程度后，酸度达到最高，此时可能产生一些物质对酸有中和或缓冲作用使酸度下降。综上所述，4组发酵乳的酸度都介于GB 5413.34－2010要求的70～110°T之间，说明这4组发酵乳发酵的菌株都属于弱后酸化菌株，可用作发酵乳的生产。
实验例4混合乳酸菌发酵乳胶粘性变化测定
将样品从4℃冰箱中取出恢复至室温后，用FTC专业研究级食品物性分析仪进行质构分析，测定样品的胶粘性。测定参数如下：直径为25.60mm、高为 35.07mm的圆柱形探头、检测速度为60mm/min、形变百分量为20％、起始力为0.05N、力量感应元量程为50N。
结果见表3。
表3贮藏期间发酵乳的胶粘性
组别
第1天
第4天
第7天
第10天
第14天
A
0.21±0.02<sup>bc</sup>
0.41±0.04<sup>a</sup>
0.37±0.02<sup>a</sup>
0.27±0.03<sup>b</sup>
0.23±0.01<sup>b</sup>
D
0.32±0.05<sup>a</sup>
0.40±0.04<sup>a</sup>
0.41±0.03<sup>a</sup>
0.37±0.03<sup>a</sup>
0.37±0.03<sup>a</sup>
H
0.25±0.01<sup>b</sup>
0.33±0.03<sup>a</sup>
0.19±0.02<sup>c</sup>
0.33±0.04<sup>ab</sup>
0.21±0.04<sup>b</sup>
对照组
0.16±0.01<sup>c</sup>
0.18±0.01<sup>b</sup>
0.27±0.02<sup>b</sup>
0.32±0.03<sup>ab</sup>
0.24±0.03<sup>b</sup>
注：上标不同小写字母表示同一列之间存在显著性差异(p<0.05)
从表3可知，在整个14d的贮藏过程中，前4天三组益生菌发酵剂组的胶粘性均大于对照组，而10-14天期间，对照组与多个益生菌组的胶粘性差异不明显，因此可知，添加益生菌，可利于提高发酵乳的胶粘性。
实验例5混合乳酸菌发酵乳活菌数变化测定
参照GB 4789.35-2016测定发酵乳中乳酸菌总数，结果见图3。
由图3可知，在4℃条件下贮藏14d过程中，随着贮藏时间的延长乳酸菌数呈现出先上升后下降的趋势。其中A组和D组发酵乳中乳酸菌数变化趋势较为相似，均为在第7d达到峰值后开始呈现下降趋势，但A组发酵乳中乳酸菌数在贮藏期时间内始终比对照组发酵乳中乳酸菌数多。说明A组发酵乳中添加复合乳酸菌作为辅助发酵剂起到了一定的作用。H组发酵乳中的乳酸菌数在贮藏期第7d到第10d内快速增长，乳酸菌数由17.7×108CFU/g增加到了22.4×108 CFU/g，在第10d达到峰值后逐渐下降。由图3可知，本研究中的4组发酵乳中乳酸菌数在储藏期14d内活菌数均在1×108CFU/g以上，活菌数保持在FAO 建议水平之上(>1×107CFU/g)，符合GB19302-2010中乳酸菌数的限量要求。说明这4组发酵乳中的复合乳酸菌都有较好的活力，和商业发酵剂中的菌种有互利共生的作用，因此具有可作为发酵乳的优良发酵剂的潜力。
实验例6混合乳酸菌发酵乳感官评价
由10人食品相关专业人士组成评价小组，从色泽、滋味和气味、组织状态三方面进行酸奶的感官评价，满分100分。评分标准参照文献“黄丽，李玲，杨攀，等.响应面法优化聚葡萄糖酸水牛奶的发酵工艺.食品工业， 2016(11):100-103”。
表4贮藏期间酸奶的感官评价
第1天
第4天
第7天
第10天
第14天
A
85.17±9.68<sup>aA</sup>
79.00±3.74<sup>bAB</sup>
84.50±3.08<sup>aA</sup>
77.67±4.59<sup>aAB</sup>
72.00±8.41<sup>bB</sup>
D
86.17±7.19<sup>aA</sup>
80.67±5.65<sup>bA</sup>
81.83±2.71<sup>abA</sup>
84.33±5.82<sup>bA</sup>
79.50±8.57<sup>abA</sup>
H
84.50±5.61<sup>aA</sup>
81.83±3.97<sup>bA</sup>
80.33±1.97<sup>abA</sup>
82.50±3.51<sup>abA</sup>
82.00±6.00<sup>aA</sup>
对照组
78.50±11.27<sup>aB</sup>
88.00±4.73<sup>aA</sup>
78.00±6.23<sup>bB</sup>
82.33±6.12<sup>abAB</sup>
77.67±6.19<sup>abB</sup>
注：小写字母表示同列间存在显著性差异(p<0.05)，大写字母表示同行间存在显著性差异(p<0.05)
由表4可知，在贮藏期第1d时，4组发酵乳的感官评价结果并无显著性差异(p>0.05)，说明在贮藏期第1d时4组发酵乳在色泽、滋味和气味、组织状态上没有太大的区别。到了贮藏期第4d时，A、D、H发酵乳的得分要显著低于对照组发酵乳，而在贮藏期第7d时，A组发酵乳的得分为84.5要显著高于对照组的78，说明在贮藏期过程中，添加了复合乳酸菌作为辅助发酵剂的A组发酵乳风味要比单一商业发酵剂的对照组发酵乳更加受到喜爱。
随着14d贮藏期的延长，对照组发酵乳在贮藏期第4d时得分88.00要显著高于其余贮藏时间时的感官评价得分(p<0.05)，说明其在整个贮藏期过程中第 4d时为风味最好，最受人们喜爱。而D和H组发酵乳在整个贮藏期时间内感官评价得分不存在显著性差异(P>0.05)，说明它们在14d贮藏期内风味还较为稳定，没有产生较大的风味变化。从整体上看，H组发酵乳的感官评价得分最高，在14d贮藏期之间都高于80分，说明其风味在14d贮藏期内一直较好，比较受到人们喜爱。
基于以上综合评价，添加益生乳酸菌发酵剂作为商业发酵剂的辅助发酵剂，能提高发酵乳的抗氧化特性和贮藏期特性，适宜用于发酵乳的生产。
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