桂花提取物在制备卵巢保养中药产品中的用途
阅读说明：本技术 桂花提取物在制备卵巢保养中药产品中的用途 (Application of sweet osmanthus extract in preparation of ovarian maintenance traditional Chinese medicine product ) 是由 陈心煜 宋萍萍 钱怡云 吕晔 韦敏 颜露 于 2021-10-30 设计创作，主要内容包括：本发明公开了桂花提取物在制备提高卵巢颗粒细胞活性的中药产品中的新用途。本发明根据卵巢功能失调和卵巢颗粒细胞生长不足的发病机制,充分利用中药资源,在制备桂花提取物的基础上,通过药理实验,开发出桂花提取物提高卵巢颗粒细胞活性的新用途,该提取物可以添加至不同剂型的产品中去,通过促进卵巢颗粒细胞增殖和提高卵巢颗粒细胞的雌孕激素分泌水平进而达到保养卵巢的活性,临床上用于治疗卵巢功能失调,具有疗效好、有效成分明确、副作用小、使用方便等优点。(The invention discloses a new application of an osmanthus fragrans extract in preparing a traditional Chinese medicine product for improving the activity of ovarian granulosa cells. According to the invention, according to the pathogenesis of ovarian dysfunction and insufficient growth of ovarian granulosa cells, traditional Chinese medicine resources are fully utilized, on the basis of preparing the osmanthus fragrans extract, a new application of the osmanthus fragrans extract in improving the activity of the ovarian granulosa cells is developed through pharmacological experiments, the extract can be added into products of different formulations, the activity of maintaining the ovaries is achieved by promoting the proliferation of the ovarian granulosa cells and improving the secretion level of estrogen and progestogen of the ovarian granulosa cells, and the osmanthus fragrans extract is clinically used for treating ovarian dysfunction and has the advantages of good curative effect, clear effective components, small side effect, convenience in use and the like.)
技术领域
本发明属于中药医疗领域，具体涉及桂花提取物在制备提高卵巢颗粒细胞活性的中药产品中的新用途。
背景技术
卵巢的生理功能包括排卵和内分泌功能，对女性的生殖功能、身心健康及生活质量具有重要意义。卵巢功能失调可致排卵功能障碍、黄体功能异常及内分泌紊乱等，从而引起多种妇科疾病，如子宫发育不良、不孕症、卵巢早衰、围绝经期综合征等，并可影响到全身其它脏器的生理功能。
卵巢是雌性动物生殖系统的重要生殖器官，具有两方面的重要作用，一是产生成熟卵子，二是分泌类固醇激素。颗粒细胞是卵巢的主要功能细胞，也是卵巢所分泌雌激素，孕激素的重要合成场所。颗粒细胞的增殖和分化可作为卵泡发育的标志。颗粒细胞是成熟卵泡中最大的细胞群、女性体内唯一表达的细胞，卵母细胞的代谢都需要通过颗粒细胞满足。通过间隙连接从周围的颗粒细胞媒介中摄取小分子代谢物如能量底物、核苷酸和氨基酸等。
卵巢功能早衰一定程度上意味着闭锁卵泡增多，生长中的卵泡减少。而卵巢颗粒细胞( GC) 作为卵泡中重要的体细胞，是卵泡发育的重要标志，卵巢颗粒细胞的凋亡在调控卵泡生长、卵细胞成熟和雌激素分泌过程中都起到十分重要的作用。
目前，西医在促卵巢颗粒细胞增殖，调节卵巢功能中主要依靠激素替代、促排卵治疗等手段，收到一定疗效，但却存在许多副作用，而中药有多系统、多环节、多靶点的整体调节作用，且其副作用少，在调节卵巢功能方面具有一定的优势。因此很有必要在中医药理论的指导下开发出一种有效物质明确、疗效确切，副作用小、服用方便的治疗卵巢功能失调和促进卵巢颗粒细胞活性进而保养卵巢的产品。
桂花为木犀科植物木犀Osmanthus fragrans (Thunb.) Lour.的干燥花。9-10月花盛开时采收，阴干。全国各地均产。研究报道，桂花具有疏肝理气、祛痰止咳和顺肺开胃的功效。文献研究表明，桂花含酚类、环烯醚萜类、三萜、木脂素类、苯丙素类、苯乙醇类和生物碱类等多种化学成分，因此它具有良好的药用价值。现代药理研究表明，桂花的药理活性主要包括：抗氧化、抑菌、抗炎、抑制黑色素生成、抗衰老、抗肿瘤和神经保护等作用。目前尚未有报道桂花提取物用于制备提高卵巢颗粒细胞活性的中药产品的用途。
发明内容
本发明的目的是探索桂花提取物用于制备提高卵巢颗粒细胞活性的中药产品的用途。
为了实现上述目的，本发明采取的技术方案为：桂花水提取物，该提取物的制备方法为：取桂花药材粉碎过筛，加入适量水浸泡，热回流提取2-4个小时，提取液减压浓缩得到的固体粉末干燥后即为桂花水提取物。
所述的桂花提取物，除了以上制备方法得到的，还可通过市售购买得到桂花水提取物。
本发明涉及桂花提取物主要是通过促进卵巢颗粒细胞的增殖和提高卵巢颗粒细胞雌孕激素分泌水平来达到提高卵巢颗粒细胞活性进而调控卵巢功能失调从而达到滋养卵巢的目的。
本发明应用的桂花提取物可以和药学上允许的任意一种辅料或药物赋形剂制成的产品，其制剂可以是药学上允许的任意一种剂型，包括但不限于片剂、凝胶、乳膏剂、丸剂、液体制剂、颗粒剂、冲剂、软胶丸、软胶囊、滴丸剂或软膏剂；或者作为活性成分和其他调节卵巢功能的中药提取物以及常用辅料配制成滋养卵巢制剂上允许的任意一种剂型。所用的辅料可以采用所述剂型常用辅料，复配所用的其他中药提取物（醇提物或水提物），如当归提取物、女贞提取物、党参提取物、地黄提取物、菟丝子提取物等。
与现有技术比较本发明的有益效果：桂花提取物对卵巢颗粒细胞具有显著的增殖作用，能显著提高卵巢颗粒细胞的雌孕激素分泌水平进而达到滋养卵巢的功效。桂花提取物可用于制备提高卵巢颗粒细胞活性的中药产品，调节卵巢功能。 本发明为桂花提取物提供了新用途，扩大了其应用范围。
具体实施方式
以下通过具体实施方式对本发明效果做进一步说明：
实施例1：制备桂花水提取物
取桂花干燥药材粉碎过筛，加入10倍水浸泡，热回流提取2-4个小时，提取液减压浓缩得到的固体干燥粉末即为桂花水提取物，提取率为10.07％。
实施例2：桂花提取物对卵巢颗粒细胞的活性研究
1 材料
1.1 实验材料
22-27日龄雌性大鼠，实验动物饲养室室温（22±2）℃ ，湿度55%～65% ，光照昼夜交替，通风良好。CO2培养箱，0.22μm微孔滤膜，细胞培养板，净化工作台，酶联免疫检测仪，电子天平，倒置生物显微镜，电热恒温水槽，全自动离心机。
孕马血清促性腺激素( PMSG)，DMEM为美国GIBCO公司产品,小牛血清（DBCS）为JRHbiosciences公司产品；二甲亚砜: 南京化学试剂有限公司；MTT: 噻唑蓝(MTT)由Ultrapuregrade，Amresco分装，临用前用磷酸盐缓冲液(PBS)配制成50mg/LMTT溶液，于4℃冰箱保存；青霉素；链霉素；DMEM-F12培养液。
1.2 实验样品
样品组1为实施例1；样品组2为桂花水提取物10：1（提取方法为热水提取，喷雾干燥所得提取物干燥粉末，得率为10%），购买于西安百川生物科技有限公司。
2 实验方法与步骤
2.1 卵巢颗粒细胞的分离与原代培养
取22-27日龄雌性大鼠（提前48h皮下注射PMSG, 66U/只），常规饲养48 h后颈椎脱臼法处死，无菌摘取大鼠的双侧卵巢，将卵巢破碎使颗粒细胞释放，用2mL含青霉素和链霉素的DMEM-F12培养液中稀释，并轻轻吹打，使其分散成单个细胞。离心过滤收集颗粒细胞。
2.2 卵巢颗粒细胞增殖功能分析
将一定浓度细胞悬液接种于24孔板，每孔80μl，每孔再加120μl培养液调整细胞密度至200μl/孔，每组设6个平行孔。将其置于5% CO2培养箱中培养24h。取CO2培养箱内培养了24 h的颗粒细胞悬液，每孔先后加入造模浓度氯化镉和样品（2 mg·mL-1），平行设定正常对照组（生理盐水）和模型组（氯化镉和生理盐水）。常规培养20 h后于每孔中加入MTT溶液（5mg·mL-1）20 µL继续培养4 h，每孔加入80 µL的三联液，过夜培养，选择570 nm波长，在酶联免疫检测仪上测定各孔吸光度，实验结果以`x±ｓ表示。采用 SPSS16. 0 统计软件处理数据，组间比较采用 t 检验。P < 0. 05 有统计学意义。
2.3 卵巢颗粒细胞雌孕激素分泌能力分析
样品与对照组处理同方法2.2，过夜培养后，采用放射免疫法（检测细胞悬液上清中雌二醇（E2）和孕酮（P）的含量。
3 实验结果与分析
3.1 样品对离体卵巢颗粒细胞的增殖作用
对卵巢颗粒细胞而言，2个样品均具有增殖作用，对于模型组而言均有极显著性差异（p<0.01）。说明桂花水提取物均具有促进卵巢颗粒细胞增殖的活性。
表1提取物对离体卵巢颗粒细胞的增殖作用（n=6）
*P<0.05，**P<0.01 vs 模型组.
3.2 卵巢颗粒细胞雌孕激素分泌能力分析
样品与对照组处理同方法，过夜培养后，采用放射免疫法（检测细胞悬液上清中雌二醇（E2）和孕酮（P）的含量，结果见表2。
表2提取物对离体卵巢颗粒细胞的雌孕激素分泌作用（n=3）
*P<0.05，**P<0.01 vs 模型组.
结论：对卵巢颗粒细胞而言，2个样品对具有提高卵巢颗粒细胞雌孕激素分泌的能力，对于模型组而言均有极显著性差异或显著性差异（p<0.01或p<0.05）。说明桂花提取物可显著提高离体卵巢颗粒细胞雌孕激素的分泌能力。
实施例3：桂花提取物乳膏
桂花提取物1g，硬脂酸100g，十六醇20g，单硬脂酸甘油酯10g，液体石腊10g，羟苯甲酯0.8g，羟苯丁酯0.2g，甘油140g，氢氧化钾5g，乙醇10g，蒸馏水加至1000g。
实施例4：桂花提取物凝胶
桂花提取物1g，PEG400 450g，己二醇80g，吐温8020g，卡波姆30g，乙醇胺6ml，苯甲醇10g，蒸馏水加至1000g。
实施例5：桂花提取物胶囊
桂花提取物100g，淀粉80g，羧甲基淀粉钠24g，糊精17g，70％乙醇适量，制成1000粒(每粒含桂花提取物100mg)。
实施例6：桂花提取物片
桂花提取物1000g，乳糖55g，可压性淀粉15g，羟丙纤维素10g，硬脂酸镁5g，70％乙醇适量，制成1000片(每片含桂花提取物1000mg)。
实施例7：桂花提取物颗粒剂
桂花提取物10g，乳糖粉800g，硬脂酸镁194g，70％乙醇适量，制成1000克颗粒(每g颗粒制中含桂花提取物10mg)。
实施例8：桂花提取物软胶囊
桂花提取物50g，大豆油10g，明胶5g，甘油5g，蒸馏水7g，制成1000粒(每粒含桂花提取物50mg)。
实施例9：桂花提取物和当归提取物组合物乳膏
桂花提取物1g，当归提取物1g，硬脂酸100g，十六醇20g，单硬脂酸甘油酯10g，液体石腊10g，羟苯甲酯0.8g，羟苯丁酯0.2g，甘油140g，氢氧化钾5g，乙醇10g，蒸馏水加至1000g。
实施例10：桂花提取物和党参提取物组合物凝胶
桂花提取物1g，枸杞水提取物1g，PEG400 450g，己二醇80g，吐温8020g，卡波姆30g，乙醇胺6ml，苯甲醇10g，蒸馏水加至1000g。
实施例11：桂花提取物和女贞提取物组合物凝胶
桂花提取物1g，女贞水提取物1g，PEG400 450g，己二醇80g，吐温8020g，卡波姆30g，乙醇胺6ml，苯甲醇10g，蒸馏水加至1000g。
实施例12：桂花提取物和菟丝子提取物组合物凝胶
桂花提取物1g，菟丝子提取物1g，PEG400 450g，己二醇80g，吐温8020g，卡波姆30g，乙醇胺6ml，苯甲醇10g，蒸馏水加至1000g。
实施例13：桂花提取物和地黄提取物组合物凝胶
桂花提取物1g，地黄提取物1g，PEG400 450g，己二醇80g，吐温8020g，卡波姆30g，乙醇胺6ml，苯甲醇10g，蒸馏水加至1000g。
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