阅读说明：本技术 一种高纯度硫酸乙酰肝素的制备方法 (Preparation method of high-purity heparan sulfate ) 是由 尹怀君 张岩岩 于 2021-11-26 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种高纯度硫酸乙酰肝素的制备方法,包括有以下步骤：S1,准备清洗干净的猪肠粘膜、牛肺,并加入氯化钠溶液；S2,加入蛋白酶进行酶解；S3,将酶解后的物料依次进行离心、过滤,然后采用树脂离子交换吸附；S4,使用稀盐酸对树脂进行洗脱；S5,将洗脱液进行过滤,然后在滤液中加入乙醇,过滤,得到沉淀物；S6,对硫酸乙酰肝素粗品进行乙醇的二次沉淀；S7,再将固体物质加水溶解；S8,将洗脱液进行膜超滤浓缩；S9,将沉淀物再次溶解、洗脱,将洗脱液进行旋转蒸发浓缩后冻干,得到高纯度硫酸乙酰肝素,本发明涉及硫酸乙酰肝素技术领域。本发明,解决,硫酸乙酰肝素的纯化难度大,进而造成硫酸乙酰肝素的加工纯度不高的问题。(The invention discloses a preparation method of high-purity heparan sulfate, which comprises the following steps: s1, preparing cleaned pig intestinal mucosa and cattle lung, and adding a sodium chloride solution; s2, adding protease for enzymolysis; s3, sequentially centrifuging and filtering the materials subjected to enzymolysis, and then performing ion exchange adsorption by using resin; s4, eluting the resin by using dilute hydrochloric acid; s5, filtering the eluent, adding ethanol into the filtrate, and filtering to obtain a precipitate; s6, carrying out secondary precipitation of ethanol on the heparan sulfate crude product; s7, adding water to dissolve the solid matter; s8, performing membrane ultrafiltration concentration on the eluent; s9, dissolving and eluting the precipitate again, carrying out rotary evaporation and concentration on the eluent, and freeze-drying to obtain the high-purity heparan sulfate, and the invention relates to the technical field of heparan sulfate. The invention solves the problem that the processing purity of the heparan sulfate is not high due to the high purification difficulty of the heparan sulfate.)

一种高纯度硫酸乙酰肝素的制备方法

技术领域

本发明涉及硫酸乙酰肝素技术领域，特别是涉及一种高纯度硫酸乙酰肝素的制备方法。

背景技术

硫酸乙酰肝素是一类广泛存在于动物细胞表面的糖胺聚糖，由其与蛋白质构成的蛋白聚糖主要有黏附蛋白聚糖、纤维蛋白聚糖糖基磷脂酰肌醇蛋白聚糖及CD44等。它们在动物细胞的信号传导、增生与分化、免疫调节﹑细胞黏附以及神经细胞的信息传递等方面具有重要的生物学功能。

现有技术中，硫酸乙酰肝素的纯化难度大，进而造成硫酸乙酰肝素的加工纯度不高，所以我们提出了一种高纯度硫酸乙酰肝素的制备方法。

发明内容

为了解决，硫酸乙酰肝素的纯化难度大，进而造成硫酸乙酰肝素的加工纯度不高的问题，本发明的目的是提供一种高纯度硫酸乙酰肝素的制备方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种高纯度硫酸乙酰肝素的制备方法，包括有以下步骤：

S1，准备清洗干净的猪肠粘膜、牛肺，并加入氯化钠溶液；

S2，加入蛋白酶进行酶解，并加温；

S3，将酶解后的物料依次进行离心、过滤，然后采用树脂离子交换吸附；

S4，使用稀盐酸对树脂进行洗脱，得到洗脱液；

S5，将洗脱液进行过滤，然后在滤液中加入乙醇，过滤，得到沉淀物，制得硫酸乙酰肝素粗品；

S6，对硫酸乙酰肝素粗品进行乙醇的二次沉淀，再离心，得到固体物质；

S7，再将固体物质加水溶解，然后使用强碱阴离子交换树脂进行交换吸附，并进行洗脱；

S8，将洗脱液进行膜超滤浓缩，且再使用乙醇沉淀；

S9，将沉淀物再次溶解、洗脱，将洗脱液进行旋转蒸发浓缩后冻干，得到高纯度硫酸乙酰肝素。

优选的，所述S1中，猪肠粘膜、牛肺使用绞肉机绞碎，氯化钠溶液的浓度为3ml/L，肠粘膜、牛肺和氯化钠溶液进行搅拌混合，且重量分配比分别为猪肠粘膜、牛肺50-60份、氯化钠溶液42-55份。

优选的，所述S2中，搅拌，且加温至30-38℃，酶解时间为1-2h，蛋白酶的重量份为15-25份。

优选的，所述S3中，离心机中得到离心液，然后对离心液进行过滤，得到滤液，将滤液通过树脂离子交换吸附。

优选的，所述S4中，稀盐酸对树脂进行冲洗，冲洗时间为30-50min。

优选的，所述S5中，乙醇的重量份为20-50份，反应时间为2-3h。

优选的，所述S6中，硫酸乙酰肝素粗品加水溶解后，再加入重量份为30-50份的乙醇，对溶液加温至3-10℃，静置1.5-2.5h后，再溶液全部倒入离心机中进行离心。

优选的，所述S7中，将固体物质配制成2％的溶液，以1mol/L的氯化钠溶液洗脱，洗脱时间为30-50min。

优选的，所述S8中，膜超滤浓缩的截留值为3000，乙醇的浓度为60％。

优选的，所述S9中，将沉淀物配制成水溶液，沉淀物与水的配比为2/15，通过色谱柱后，使用1.5mol/L的氯化钠溶液进行洗脱。

与现有技术相比，本发明实现的有益效果：本发明，通过多次采用不同方法的树脂离子交换吸附、洗脱、沉淀可以制得高纯度硫酸乙酰肝素；本发明，最后采色谱柱后，使用1.5mol/L的氯化钠溶液进行洗脱，同时采用旋转蒸发浓缩，进一步提高硫酸乙酰肝素的纯度。

附图说明

以下结合附图和

具体实施方式

来进一步详细说明本发明：

图1为本发明的流程的示意图。

具体实施方式

以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效。

请参阅图1。须知，本说明书所附图式所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本发明可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本发明所能产生的功效及所能达成的目的下，均应仍落在本发明所揭示的技术内容得能涵盖的范围内。同时，本说明书中所引用的如“上”、“下”、“左”、“右”、“中间”及“一”等的用语，亦仅为便于叙述的明了，而非用以限定本发明可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更技术内容下，当亦视为本发明可实施的范畴。

本发明提供一种技术方案：一种高纯度硫酸乙酰肝素的制备方法，包括有以下步骤：

S1，准备清洗干净的猪肠粘膜、牛肺，并加入氯化钠溶液；

S2，加入蛋白酶进行酶解，并加温；

S3，将酶解后的物料依次进行离心、过滤，然后采用树脂离子交换吸附；

S4，使用稀盐酸对树脂进行洗脱，得到洗脱液；

S5，将洗脱液进行过滤，然后在滤液中加入乙醇，过滤，得到沉淀物，制得硫酸乙酰肝素粗品；

S6，对硫酸乙酰肝素粗品进行乙醇的二次沉淀，再离心，得到固体物质；

S7，再将固体物质加水溶解，然后使用强碱阴离子交换树脂进行交换吸附，并进行洗脱；

S8，将洗脱液进行膜超滤浓缩，且再使用乙醇沉淀；

S9，将沉淀物再次溶解、洗脱，将洗脱液进行旋转蒸发浓缩后冻干，得到高纯度硫酸乙酰肝素。

所述S1中，猪肠粘膜、牛肺使用绞肉机绞碎，氯化钠溶液的浓度为3ml/L，肠粘膜、牛肺和氯化钠溶液进行搅拌混合，且重量分配比分别为猪肠粘膜、牛肺50-60份、氯化钠溶液42-55份。

所述S2中，搅拌，且加温至30-38℃，酶解时间为1-2h，蛋白酶的重量份为15-25份。

所述S3中，离心机中得到离心液，然后对离心液进行过滤，得到滤液，将滤液通过树脂离子交换吸附。

所述S4中，稀盐酸对树脂进行冲洗，冲洗时间为30-50min。

所述S5中，乙醇的重量份为20-50份，反应时间为2-3h。

所述S6中，硫酸乙酰肝素粗品加水溶解后，再加入重量份为30-50份的乙醇，对溶液加温至3-10℃，静置1.5-2.5h后，再溶液全部倒入离心机中进行离心。

所述S7中，将固体物质配制成2％的溶液，以1mol/L的氯化钠溶液洗脱，洗脱时间为30-50min。

所述S8中，膜超滤浓缩的截留值为3000，乙醇的浓度为60％。

所述S9中，将沉淀物配制成水溶液，沉淀物与水的配比为2/15，通过色谱柱后，使用1.5mol/L的氯化钠溶液进行洗脱。

使用时，本发明，通过多次采用不同方法的树脂离子交换吸附、洗脱、沉淀可以制得高纯度硫酸乙酰肝素；本发明，最后采色谱柱后，使用1.5mol/L的氯化钠溶液进行洗脱，同时采用旋转蒸发浓缩，进一步提高硫酸乙酰肝素的纯度。

上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。