一种隐黄质的制备方法
阅读说明：本技术 一种隐黄质的制备方法 (Preparation method of cryptoxanthin ) 是由 刘贤军 刘霞 杨国强 严守彩 于 2021-06-29 设计创作，主要内容包括：本发明涉及类胡萝卜素制备技术领域,具体涉及一种隐黄质的制备方法；将万寿菊鲜花浆液稀释后进行PH值调整,通过加入水解酶、脂肪酶和碱性蛋白酶水解,经过超声粉碎过滤后,对滤渣进行萃取合并,将物料浓缩,再次PH值调整,并加热回流,获得产物脱水叶黄素,将产物脱水叶黄素异构化,通过PH值调整、通入气体、离心、静置、结晶分离以及真空干燥,获得隐黄质提取物；本发明采用生物酶解的方法提取万寿菊中的叶黄素,然后利用脂肪酶水解的方法对酯进行水解皂化,实验条件更温和、产品安全、减少环境污染、减少有机溶剂的使用,采用加压氢化的方法获得隐黄质,方法简单,易操作,工序少,减少了目标产物的损失,得率高。(The invention relates to the technical field of carotenoid preparation, in particular to a preparation method of cryptoxanthin; diluting fresh marigold flower slurry, adjusting the pH value, adding hydrolase, lipase and alkaline protease for hydrolysis, performing ultrasonic crushing and filtering, extracting and combining filter residues, concentrating materials, adjusting the pH value again, heating and refluxing to obtain a product dehydrated lutein, isomerizing the product dehydrated lutein, and performing pH value adjustment, gas introduction, centrifugation, standing, crystallization separation and vacuum drying to obtain a cryptoxanthin extract; the method adopts a biological enzymolysis method to extract the lutein in the marigold, then utilizes a lipase hydrolysis method to carry out hydrolysis and saponification on the ester, has mild experimental conditions, safe products, reduces environmental pollution and reduces the use of organic solvents, adopts a pressure hydrogenation method to obtain the cryptoxanthin, and has the advantages of simple method, easy operation, less working procedures, reduction of the loss of target products and high yield.)
技术领域
本发明涉及类胡萝卜素制备
技术领域
，具体涉及一种隐黄质的制备方法。背景技术
隐黄质是类胡萝卜素，具有良好的抗氧化性，在抗癌、增强免疫和减少心血管疾病发病率等方面具有独特的生理功能。在抗癌方面，β-隐黄质已经被人们认为是一种良好的抗癌因子，尤其是对吸烟引起的肺癌有独特的疗效。在增强免疫方面，可通过促进抗原刺激淋巴细胞增殖反应。它还可以保护细胞和DNA免受自由基的损害，并且可以修复被氧化的DNA。但是人体不能自行合成，主要靠食物来获取。隐黄质来源包括天然来源和人工合成。天然来源的隐黄质主要通过天然产物提取得到，合成主要从类异戊二烯开始或从类胡萝卜素转换而得到。天然提取的含量太低，且需要用到大量有机溶剂，而合成的反应一般是通过硼氢化的过程加氢反应，此类反应会用到二氯甲烷，硼烷等毒性溶剂，过程复杂，副反应多，产品安全性难以保证。
中国专利CN105073711A报道了植物来源的β-隐黄质和其制备方法，该工艺过程复杂而且繁琐，不利于工业化生产，限制了β-隐黄质的开发应用。
中国专利CN109503447B报道了一种由万寿菊浸膏制备隐黄质的方法，万寿菊膏经过水解、酸化处理得到隐黄质的方法，其中万寿菊膏水解皂化过程中需要用大量的碱，酸处理过程中会有大部分中间产物脱水叶黄素和顺式隐黄质，会大大降低产品的收率。
中国专利CN106977440B报道了一种分离纯化β-隐黄质的方法，主要是利用硅胶层析柱对辣椒红色素中的β-隐黄质进行初步分离；将初步分离后的β-隐黄质进行皂化；将皂化后的β-隐黄质经溶剂提取进行初步浓缩；再次利用硅胶层析柱将β-隐黄质进一步分离纯化。该方法是对天然来源的隐黄质进行分离皂化再分离，天然来源的产率低且皂化和柱解析均会用到大量的有机溶剂。
综上所述，研发一种隐黄质的制备方法，仍是类胡萝卜素制备
技术领域
中急需解决的关键问题。
发明内容
针对现有技术所存在的上述缺点，本发明的目的在于提供一种隐黄质的制备方法，本发明提供了一种安全性高、产率高、便于生产的用万寿菊鲜花来制备隐黄质的方法。
为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
一种隐黄质的制备方法，将万寿菊鲜花浆液稀释后进行PH值调整，通过加入水解酶、脂肪酶和碱性蛋白酶水解，经过超声粉碎过滤后，对滤渣进行萃取合并，将物料浓缩，再次PH值调整，并加热回流，获得产物脱水叶黄素，将产物脱水叶黄素异构化，通过PH值调整、通入气体、离心、静置、结晶分离以及真空干燥，获得隐黄质提取物。
优选的是，所述水解酶为蛋白酶、纤维素酶和果胶酶。
优选的是，采用超声波粉碎仪将水解物超声粉碎。
优选的是，采用刮膜闪蒸仪将物料浓缩到20％。
优选的是，所述气体为氢气。
优选的是，包括以下步骤：
S1、取万寿菊鲜花浆液，加入水均匀搅拌，并调节PH值，水浴加热，再加入蛋白酶、纤维素酶和果胶酶，搅拌均匀后恒温水浴避光振荡进行酶解反应，用氢氧化钠溶液调节PH值，均质3min后加入脂肪酶和碱性蛋白酶，搅拌均匀，水浴恒温振荡器上避光反应2-4h，再均质2min，二次加入脂肪酶，搅拌均匀，反应1-2h，获得料液；
S2、将料液用超声波粉碎仪处理，重复2次后，水浴恒温振荡0.5h后过滤。
S3、将S2中滤渣用溶剂按照料液比1：(1-4)，萃取2-4次。
S4、将S3中的萃取液合并，在工作温度为45-60℃的条件下，并用刮膜闪蒸仪浓缩。
S5、加入50％硫酸调节PH值，然后在80-88℃的条件下，加热回流，反应时间为2-4h，得到产物脱水叶黄素。
S6、加一定量水回流反应1-2h进行异构化。
S7、用2moL/L氢氧化钠调节PH到7.0，将料液放入高压设备中，通入氢气，压力控制在1.8-3.5MPa，保持10-30min，再离心分离。
S8、将下层离心液用乙醇溶解，冷却后静置，再结晶离心分离。
S9、在真空干燥温度为50℃的条件下，真空干燥3h，获得隐黄质提取物。
优选的是，在所述步骤S1中，加入柠檬酸调节PH值到4.0-6.0。
优选的是，在所述步骤S8中，在60-78℃的条件下，用乙醇溶解30-60min，冷却至10-20℃静置2-4h。
有益效果
采用本发明提供的技术方案，与已知的公有技术相比，具有如下有益效果：
1、本发明采用生物酶解的方法提取万寿菊中的叶黄素，然后利用脂肪酶水解的方法对酯进行水解皂化，实验条件更温和、产品安全、减少环境污染、减少有机溶剂的使用。
2、本发明采用加压氢化的方法获得隐黄质，方法简单，易操作，工序少，减少了目标产物的损失，得率高。
附图说明
图1为一种隐黄质的制备方法的流程图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
下面结合实施例对本发明作进一步的描述。
实施例1
请参照图1所示，本实施例中隐黄质的制备方法，包括以下步骤：
取万寿菊鲜花浆液(破碎磨浆处理)1kg，加入水1.5kg，搅拌均匀，加入柠檬酸调整PH值到4.5，水浴加热45℃，加入水解酶(蛋白酶600U/g，纤维素酶700U/g，果胶酶500U/g)，搅拌均匀后恒温水浴避光振荡进行酶解反应4h；用氢氧化钠溶液(2moL/L)调节PH到7均质3min后加入脂肪酶(添加量为800U/g)和碱性蛋白酶(添加量600U/g)，搅拌均匀，水浴恒温振荡器上反应2h，均质4min；二次加入脂肪酶(添加量为1200U/g)，搅拌均匀，反应2h；将料液用超声波粉碎仪处理，总工作时间6min，工作时间/间隔时间15s/30s，功率600W，重复2次后，45℃水浴恒温振荡0.5h后过滤；滤渣用溶剂乙醇与正己烷(V:V 1:1)按照料液比1：2萃取3次；合并滤液后，进行刮膜闪蒸仪浓缩，工作温度50℃将物料浓缩到10％；加入50％硫酸调PH为1.5，82℃下加热回流，反应3h，得到产物脱水叶黄素；加一定量水回流反应2h进行异构化；用2moL/L氢氧化钠调节PH到7；将料液放入高压设备中，通入氢气，压力控制在3.5MPa，保持25min，进行加氢反应；离心分离；下层在60℃下用乙醇溶解30min，冷却15℃静置3h结晶，离心分离；50℃真空干燥3h得提取物2.2g。
对获取的隐黄质进行HPLC检测，通过检测可知，隐黄质占比为85％。
实施例2
请参照图1所示，本实施例中隐黄质的制备方法，包括以下步骤：
取万寿菊鲜花浆液(破碎磨浆处理)1kg，加入一定比例的水2kg，搅拌均匀，加入柠檬酸调整PH值到4.5，水浴加热45℃，加入水解酶(蛋白酶500U/g，纤维素酶600U/g，果胶酶600U/g)，搅拌均匀后恒温水浴避光振荡进行酶解反应3h，用氢氧化钠溶液2moL/L调节PH到7.5均质4min后加入脂肪酶(添加量为700U/g)和碱性蛋白酶(添加量为700U/g)，搅拌均匀，水浴恒温振荡器上反应3h，均质4min，二次加入脂肪酶(添加量为1500U/g)，搅拌均匀，反应2h；将料液用超声波粉碎仪处理，总工作时间2-10min，工作时间/间隔时间15s/30s，功率500W，重复2次后，45℃水浴恒温振荡0.5h后过滤，滤渣用溶剂乙醇或正己烷按照料液比1：3萃取3次；合并滤液后，进行刮膜闪蒸仪浓缩，工作温度45℃将物料浓缩到20％；加入50％硫酸调PH为1.5，85℃下加热回流，反应2h，得到产物脱水叶黄素；加一定量水回流反应2h进行异构化；用2moL/L氢氧化钠调节PH到7；将料液放入高压设备中，通入氢气，压力控制在3.0MPa，保持30min，进行加氢反应；离心分离；下层在65℃下用乙醇溶解50min，冷却10℃静置4h，结晶离心分离；50℃真空干燥3h得隐黄质提取物1.9g。
对获取的隐黄质进行HPLC检测，通过检测可知，隐黄质的占比为80％。
实施例3
请参照图1所示，本实施例中隐黄质的制备方法，包括以下步骤：
取万寿菊鲜花浆液(破碎磨浆处理)1kg，加入一定比例的水1kg，搅拌均匀，加入柠檬酸调整PH值到4.5，水浴加热45℃，加入水解酶(蛋白酶600U/g，纤维素酶500U/g，果胶酶600U/g)，搅拌均匀后恒温水浴避光振荡进行酶解反应2h，用氢氧化钠溶液2moL/L调节PH到7.5均质3min后加入脂肪酶(添加量为900U/g)和碱性蛋白酶(添加量为700U/g)，搅拌均匀，水浴恒温振荡器上反应3h，均质4min，二次加入脂肪酶(添加量为1300U/g)，搅拌均匀，反应2h；将料液用超声波粉碎仪处理，总工作时间2-10min，工作时间/间隔时间15s/30s，功率600W，重复2次后，45℃水浴恒温振荡0.5h后过滤，滤渣用溶剂乙醇或正己烷按照料液比1：4萃取2次；合并滤液后，进行刮膜闪蒸仪浓缩，工作温度50℃将物料浓缩到20％；加入50％硫酸调PH为1.5，85℃下加热回流，反应2h，得到产物脱水叶黄素；加一定量水回流反应2h进行异构化；用2moL/L氢氧化钠调节PH到7；将料液放入高压设备中，通入氢气，压力控制在2.5MPa，保持30min，进行加氢反应；离心分离；下层在65℃下用乙醇溶解50min，冷却17℃静置3h，结晶离心分离；50℃真空干燥3h得隐黄质提取物1.7g。
对获取的隐黄质进行HPLC检测，通过检测可知，隐黄质的占比为78％。
实施例4
请参照图1所示，本实施例中隐黄质的制备方法，包括以下步骤：
取万寿菊鲜花浆液(破碎磨浆处理)0.5kg，加入一定比例的水0.5kg，搅拌均匀，加入柠檬酸调整PH值到6，水浴加热50℃，加入水解酶(蛋白酶800U/g，纤维素酶600U/g，果胶酶700U/g)，搅拌均匀后恒温水浴避光振荡进行酶解反应6h，用氢氧化钠溶液2moL/L调节PH到8均质3min后加入脂肪酶(添加量为1000U/g)，和碱性蛋白酶(添加量为800U/g)，搅拌均匀，水浴恒温振荡器上反应4h，均质2min，二次加入脂肪酶(添加量为1500U/g)，搅拌均匀，反应2h；将料液用超声波粉碎仪处理，总工作时间10min，工作时间/间隔时间15s/30s，功率800W，重复2次后，45℃水浴恒温振荡30min后过滤，滤渣用溶剂乙醇按照料液比1：4萃取3次；合并滤液后，进行刮膜闪蒸仪浓缩，工作温度60℃将物料浓缩到20％；加入50％硫酸调PH为1.5，88℃下加热回流，反应4h，得到产物脱水叶黄素；加一定量水回流反应2h进行异构化；用2moL/L氢氧化钠调节PH到7；将料液放入高压设备中，通入氢气，压力控制在1.8MPa，保持10min，进行加氢反应；离心分离；下层在78℃下用乙醇溶解60min，冷却10-20℃静置4h，结晶离心分离；50℃真空干燥3h得隐黄质提取物2g。
对获取的隐黄质进行HPLC检测，通过检测可知，隐黄质的占比为75％。
由实施例1-4可知，本发明隐黄质的制备方法，采用生物酶解的方法提取万寿菊中的叶黄素，然后利用脂肪酶水解的方法对酯进行水解皂化，实验条件更温和、产品安全、减少环境污染、减少有机溶剂的使用，采用加压氢化的方法获得隐黄质，方法简单，易操作，工序少，减少了目标产物的损失，得率高。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不会使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
- 上一篇：一种医用注射器针头装配设备
- 下一篇：一种虾青素的合成方法