具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。

在本发明的描述中，需要理解的是，术语“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“顶”、“底”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。

Nisin与螯合剂葡萄糖酸钠联合使用，比单独使用Nisin可增强对革兰氏阴性菌的广泛杀菌活性，也可增强对革兰氏阳性菌的广泛杀菌活性。

本发明提供了Nisin或其他羊毛硫类细菌素与螯合剂葡萄糖酸钠结合的组合物。本发明还提供了在适当的载体中溶解或悬浮组合物，以增强杀菌剂的应用范围。本发明已经发现1:1和4:1的乳酸链球菌肽和葡萄糖酸钠的组合物能够很好的抑制革兰氏阴性细菌，如大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、肺炎克雷伯菌、表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌等，也可以拓展应用于革兰氏阳性菌，以增强Nisin的抑菌效果。螯合剂葡萄糖酸钠对Nisin活性的增强作用与葡萄糖酸钠浓度有关。

由于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在食品中几乎总是同时存在，因此， Nisin组合物对革兰氏阴性菌如大肠埃希氏菌、伤寒沙门氏菌、肺炎克雷伯菌以及其他革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的杀灭作用非常重要。该杀菌剂特别适用于抑制原料、加工食品和饮料受细菌性病原体和其他微生物污染。与食品相关的潜在用途包括肉类的处理，特别是家禽、鸡蛋、奶酪和鱼，以及食品包装和设备处理。进一步的用途包括作为食品防腐剂，如用于加工奶酪、奶油、牛奶、乳制品以及清洗家禽、鱼类、肉类、蔬菜、乳制品和食品加工设备。

Nisin组合物的使用不只是局限于与食品有关的用途，Nisin组合物应适用于存在革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌污染的的任何情况。所述组合物可溶解在适当的载体中，例如水溶剂或缓冲液，或悬浮在适宜的液体、胶体或聚合物基质中，以生产杀菌剂。所述组合物或杀菌剂可用于药膏或药用涂层，如治疗感染、伤口敷料或外科医疗产品，也可用于皮肤或口腔冲洗、消毒，或者作为擦布和洗液的消毒剂。该杀菌剂可用于医疗器械清洗、手术前消毒等。杀菌剂在需要进行环境消毒的情况下具有很好的用途，特别是在由于存在腐蚀或其他有害残留物的风险而不能使用化学杀菌剂的情况下。本发明也可以作为杀菌剂应用于存在有机物如牛奶或血清的情况下。

Nisin属于含羊毛硫氨酸的肽类细菌素。羊毛硫细菌素还包括由不同的微生物产生的枯草素、表皮素、肉桂素、耐久霉素、血管紧张肽转化酶抑制肽和 Pep 5。因此，我们认为，由于分子上的相似性，其他羊毛硫细菌素与葡萄糖酸钠联合使用，也能够同时抑制革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌。

相比较于市面上现有的Nisin产品，Nisin和葡萄糖酸钠组合物作为杀菌剂对革兰氏阴性菌的效果是非常明显的。此外，Nisin和葡萄糖酸钠组合物的抑菌效果，满足了食品保藏科学长期以来的迫切需求。食品保藏科学一直缺乏一种可接受的、天然的、无毒的、能有效对抗多种细菌的药剂。为了证明含有 Nisin和葡萄糖酸钠的组合物对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均有非常明显的抑制效果，对该组合物进行了多项实验。这些实验只是作为例证，但本专利并不仅限于这些例证。

实施例1：

乳酸链球菌素和螯合剂葡萄糖酸钠对革兰氏阴性菌大肠杆菌的杀菌效果如图1所示。

在37℃、pH 6.0的条件下，设置对照进行试验，初始大肠杆菌活菌数为 10⁵CFU/ml。以24小时后细菌存活率为指标，测定杀菌剂的效果。在未添加葡萄糖酸钠的对照组中，乳酸链球菌素对大肠杆菌的杀灭作用不明显。然而，添加葡萄糖酸钠的处理组，对大肠杆菌表现出很强的活性。随着乳酸链球菌素浓度的增加，活性增强。乳酸链球菌素与葡萄糖酸钠的结合作为一种杀菌剂，显示了提高对杀灭大肠杆菌的有效性。因此，可以认为含Nisin和螯合剂葡萄糖酸钠的杀菌剂是一种对各种革兰氏阴性菌有效的食品防腐剂。

实施例2：

乳酸链球菌素和螯合剂葡萄糖酸钠对革兰氏阴性菌肺炎克雷伯菌(Klebsiellapneumoniae)的杀菌效果

在37℃、pH 6.0的条件下，初始菌浓10⁵CFU/ml，对含有Nisin和葡萄糖酸钠的组合物和单独使用Nisin对革兰氏阴性细菌肺炎克雷伯菌杀灭作用评估 (图2)。在没有葡萄糖酸钠的情况下，Nisin对肺炎克雷伯菌没有明显的杀菌作用。然而，在添加葡萄糖酸钠的情况下，杀菌剂对肺炎克雷伯菌表现出显著的活性。随着乳酸链球菌素浓度的增加，杀菌活性增强。

实施例3：

乳酸链球菌素和螯合剂葡萄糖酸钠对革兰氏阴性菌鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium)的杀菌效果

Nisin和葡萄糖酸钠对革兰氏阴性菌鼠伤寒沙门氏菌的灭杀活性如图3所示。未填加葡萄糖酸钠的Nisin对照组对鼠伤寒无明显活性。然而，当Nisin 与葡萄糖酸钠配合使用时，杀菌剂对鼠伤寒杆菌表现出显著的活性。葡萄糖酸钠对乳酸链球菌素的增强作用呈浓度依赖性。

实施例4：

乳酸链球菌素和螯合剂葡萄糖酸钠对革兰氏阳性菌表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermis)的杀菌效果

图4显示了含有链球菌素和葡萄糖酸钠的杀菌剂对表皮葡萄球菌的影响。葡萄糖酸钠与链球菌素联合使用的杀菌剂，可显著提高链球菌素对表皮葡萄球菌的杀菌活性。Nisin和葡萄糖酸钠的复合使用是的确有效的。

实施例5：

乳酸链球菌素和螯合剂葡萄糖酸钠对革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的杀菌效果

图5中的数据显示，Nisin和葡萄糖酸钠对金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的杀菌效果比单独使用Nisin更强。螯合剂葡萄糖酸钠配合Nisin杀菌需要在一定的浓度范围内。

实施例6：

一种杀菌剂，由羊毛硫细菌素和螯合剂混合而成。所述螯合剂为葡萄糖酸钠。所述羊毛硫细菌素包括乳酸链球菌素、枯草素、表皮素、肉桂素、耐久霉素、血管紧张肽转化酶抑制肽。所述羊毛硫细菌素和螯合剂的浓度比例为1： 1。

实施例7：

一种杀菌剂，由羊毛硫细菌素和螯合剂混合而成。所述螯合剂为葡萄糖酸钠。所述羊毛硫细菌素包括乳酸链球菌素、枯草素、表皮素、肉桂素、耐久霉素、血管紧张肽转化酶抑制肽。所述羊毛硫细菌素和螯合剂的浓度比例为8： 1。

实施例8：

一种杀菌剂，由羊毛硫细菌素和螯合剂混合而成。所述螯合剂为葡萄糖酸钠。所述羊毛硫细菌素包括乳酸链球菌素、枯草素、表皮素、肉桂素、耐久霉素、血管紧张肽转化酶抑制肽。所述羊毛硫细菌素和螯合剂的浓度比例为4： 1。

实施例9：

一种基于实施例8的杀菌剂的应用，应用于食品防腐剂。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。