具体实施方式

发明人得出了以下令人惊讶的发现：具有在特定范围内的粒径的甜菊糖苷晶体聚集体比在该特定粒径范围之外的甜菊糖苷晶体聚集体在水中实质上更快地溶解。在本公开的所有实施方式中，甜菊糖苷聚集体的粒径被解释为通过如本文实施例中执行的筛分来确定。典型的筛分如下执行。典型的筛分分析涉及多个具有丝网布(筛网)的筛的嵌套柱。将代表性的称量样品倒入具有最大筛孔的顶部筛中。柱中每个下部筛都具有比上部筛更小的孔。在底部的是圆盘，被称为接收器。柱通常放置在机械摇床中。摇床通常振荡该柱达一定的固定时间量。在振荡完成后，称量每个筛上的物质。然后将每个筛的样品的重量除以总重量，得到保留在每个筛上的百分比。

因此，本公开提供了一种甜味剂组合物，所述甜味剂组合物包含甜菊糖苷聚集体，其中基于所述组合物中的甜菊糖苷聚集体的总重量，至少80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w或100％w/w的所述甜菊糖苷聚集体的粒径大于约200μm或粒径大于200μm。在本文中，所述甜味剂组合物被称为根据本公开的甜味剂组合物；所述甜味剂组合物既可以用作甜味剂，也可以用于其他目的，例如甜味增进剂和风味增强剂。在本文中，甜菊糖苷聚集体被称为根据本公开的甜菊糖苷聚集体。

在根据本公开的甜味剂组合物中，基于所述组合物中的甜菊糖苷聚集体的总重量，至少80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w或100％w/w的所述甜菊糖苷聚集体的粒径可大于约250μm或粒径可大于250μm。

在根据本公开的甜味剂组合物中，基于所述组合物中的甜菊糖苷聚集体的总重量，至少80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w或100％w/w的所述甜菊糖苷聚集体的粒径可在约250μm至约2mm的范围内或粒径可在250μm至2mm的范围内。

在根据本公开的甜味剂组合物中，基于所述组合物中的甜菊糖苷聚集体的总重量，至少80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w或100％w/w的所述甜菊糖苷聚集体的粒径可在约250μm至约500μm的范围内或粒径可在250μm至500μm的范围内。

在根据本公开的甜味剂组合物中，基于所述组合物中的甜菊糖苷聚集体的总重量，至少80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w或100％w/w的所述甜菊糖苷聚集体的粒径可在约500μm至约1mm的范围内或粒径可在500μm至1mm的范围内。

在根据本公开的甜味剂组合物中，基于所述组合物中的甜菊糖苷聚集体的总重量，至少80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w或100％w/w的所述甜菊糖苷聚集体的粒径可在约1mm至约2mm的范围内或粒径可在1mm至2mm的范围内。

在根据本公开的甜味剂组合物中，基于所述组合物中的甜菊糖苷聚集体的总重量，至少80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w或100％w/w的所述甜菊糖苷聚集体的粒径可大于约2mm或粒径可大于2mm。

根据本公开的甜味剂组合物优选为干燥组合物。在此，“百分比(％)w/w”是指化合物的以干重计的重量百分比。本公开的组合物可以以任何适合递送到待变甜的产品中的形式提供给消费者和使用者，所述形式包括囊剂、小包、袋装散包装或盒子和方块。该组合物可以单位剂量或散装形式递送。

在根据本公开的甜味剂组合物中，甜菊糖苷聚集体可包含基于所述组合物中的甜菊糖苷聚集体的总重量至少80％w/w、81％w/w、82％w/w、83％w/w、84％w/w、85％w/w、86％w/w、87％w/w、88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w或100％w/w的纯甜菊糖苷。可以使用本领域的普通技术人员已知的方法来测量根据本公开的组合物的纯度。一种此类方法包括高效液相色谱(HPLC)。

在根据本公开的甜味剂组合物中，甜菊糖苷聚集体的湿度的(重量)百分比为至多约15％，例如至多1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或至多20％。

在根据本公开的甜味剂组合物中，甜菊糖苷可为或可已经通过本领域技术人员已知的任何手段生产。所述甜菊糖苷可以例如获自甜叶菊植株，或通过(例如在WO2017031424和US20180146700中的)甜菊醇或甜菊糖苷的酶促(生物)转换获得。甜菊糖苷可以通过发酵产生，例如在WO2015/007748、US20180155751中所述。因此，用于制备甜菊糖苷的方法可包括例如在WO2015/007748的实施例7中所述在合适的发酵培养基中发酵能够产生至少一种甜菊糖苷的重组宿主，以及任选地回收所述甜菊糖苷。在用于生产甜菊糖苷的方法中使用的发酵培养基可以是允许特定宿主细胞(例如真核宿主细胞)生长的任何合适的发酵培养基。发酵培养基的基本成分是本领域技术人员已知的，并且可以适用于所选的宿主细胞。优选地，发酵培养基包含选自由以下项组成的组的碳源：植物生物质、纤维素、半纤维素、果胶、鼠李糖、半乳糖、岩藻糖、果糖、葡萄糖、麦芽糖、麦芽糊精、核糖、核酮糖或淀粉、淀粉衍生物、蔗糖、乳糖、脂肪酸、甘油三酸酯和甘油。优选地，发酵培养基还包含诸如尿素等氮源，或诸如硫酸铵、氯化铵、硝酸铵或磷酸铵等铵盐。根据本公开的发酵方法可以以分批、补料分批或连续方式进行。也可以采用单独进行水解和发酵(SHF)的方法或同时进行糖化和发酵(SSF)的方法。这些发酵方法模式的组合也可能实现最佳生产率。如果将淀粉、纤维素、半纤维素或果胶用作该发酵方法中的碳源，则SSF方法可为特别有吸引力的，在该方法中，可能需要添加水解酶(例如纤维素酶、半纤维素酶或果胶酶)以水解底物。可为有利的是在该方法中使用根据本公开的重组真核宿主，因为大多数真核细胞不需要无菌条件即可繁殖并且对噬菌体感染不敏感。另外，真核宿主细胞可以在低pH下生长以防止细菌污染。重组宿主可以是兼性厌氧微生物。兼性厌氧重组宿主可以有氧繁殖至高细胞浓度。然后可以以高细胞密度进行该厌氧相，所述高细胞密度可大大减少所需的发酵体积，并且可以使需氧微生物污染的风险最小化。根据本公开的生产甜菊糖苷的发酵方法可以是需氧或厌氧发酵方法。厌氧发酵方法在本文中定义为在不存在氧或基本上不消耗氧，优选消耗小于5mmol/L/h、2.5mmol/L/h或1mmol/L/h的情况下运行的发酵方法，并且其中有机分子充当电子供体和电子受体两者。根据本公开的发酵方法还可以首先在有氧条件下并且随后在厌氧条件下进行。发酵方法也可以在限氧或微需氧的条件下运行。或者，该发酵方法可以首先在需氧条件下进行，然后在限氧条件下进行。限氧发酵方法是氧消耗受到氧从气体到液体的转换限制的方法。限氧程度由进入气流的量和组成以及所用发酵设备的实际混合/质量传递特性确定。在该方法中的甜菊糖苷的产生可发生在宿主细胞的生长阶段期间、静止(稳态)阶段期间或这两个阶段期间。可以在不同温度下运行该发酵过程。生产甜菊糖苷的方法可以在对于重组宿主而言最合适的温度下进行。每个转化的重组宿主的最佳生长温度可能不同，并且是本领域技术人员已知的。该最佳温度可能高于野生型生物体的最佳温度，以使该生物体在非无菌条件下以最小的感染敏感性和最低的冷却成本有效地生长。或者，该方法可以在对于重组宿主的生长不是最佳的温度下进行。根据本公开的生产甜菊糖苷的方法可以在任何合适的pH值下进行。如果重组宿主是酵母，则发酵培养基中的pH的值优选低于6、优选低于5.5、优选低于5、优选低于4.5、优选低于4、优选低于pH 3.5或低于pH 3.0，或低于pH2.5，优选高于pH 2。在这些低pH值下进行发酵的优点是可以防止发酵培养基中污染细菌的生长。该过程可以以工业规模进行。

在根据本公开的甜味剂组合物中，聚集体可为晶体聚集体。根据本公开的聚集体可包含粘合剂(粘合试剂)，例如在用于生产根据本公开的甜菊糖苷的方法中用来从晶体形成聚集体(或促进形成聚集体)的粘合剂(粘合试剂)。在根据本公开的实施方式中，所述聚集体不包含粘合剂(粘合试剂)。典型的粘合剂(粘合试剂)是本领域技术人员已知的，并且可包括但不限于微晶纤维素、树胶(例如黄蓍胶)或明胶。

在根据本公开的甜味剂组合物中，所述组合物中甜菊糖苷聚集体的量可为基于所述组合物的总重量至少50％w/w、55％w/w、60％w/w、65％w/w、70％w/w、75％w/w、80％w/w、85％w/w、90％w/w、95％w/w或100％w/w。

在根据本公开的甜味剂组合物中，所述甜菊糖苷聚集体的至少10％w/w、15％w/w、20％w/w、25％w/w、30％w/w、35％w/w、40％w/w、45％w/w、50％w/w、55％w/w、60％w/w、65％w/w、70％w/w、75％w/w、80％w/w、85％w/w、90％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w或100％w/w可为莱鲍迪甙M聚集体。

在另一个实施方式中，在根据本公开的甜味剂组合物中，所述甜菊糖苷聚集体的至少10％w/w、15％w/w、20％w/w、25％w/w、30％w/w、35％w/w、40％w/w、45％w/w、50％w/w、55％w/w、60％w/w、65％w/w、70％w/w、75％w/w、80％w/w、85％w/w、90％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w或100％w/w可为莱鲍迪甙D聚集体。

在又一个实施方式中，在根据本公开的甜味剂组合物中，所述甜菊糖苷聚集体的至少10％w/w、15％w/w、20％w/w、25％w/w、30％w/w、35％w/w、40％w/w、45％w/w、50％w/w、55％w/w、60％w/w、65％w/w、70％w/w、75％w/w、80％w/w、85％w/w、90％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w或100％w/w可为莱鲍迪甙M与莱鲍迪甙D聚集体的混合物。

基于所述组合物中莱鲍迪甙M加上莱鲍迪甙D的总重量，莱鲍迪甙M和莱鲍迪甙D的典型混合物将包含至少50％w/w、至少60％w/w、至少70％w/w，例如至少75％w/w、80％w/w、85％w/w、90％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、98％w/w、99％w/w或100％w/w的莱鲍迪甙M和至多50％w/w、至多40％w/w、至多30％w/w，例如至多25％w/w、20％w/w、15％w/w、10％w/w、5％w/w、4％w/w、3％w/w、2％w/w、1％w/w或0％w/w的莱鲍迪甙D。在根据本公开的甜味剂组合物中，当制备100ml的1g/L溶液时，甜菊糖苷聚集体在室温下的溶解时间为10分钟、9分钟、8分钟、7分钟、6分钟、5分钟或更短时间。本领域技术人员知道如何制备此类溶液。

根据本公开的甜味剂组合物可以由根据本公开的甜菊糖苷晶体聚集体组成，或者还可包含附加甜味剂，所述附加甜味剂优选地选自由以下项组成的组：甜叶菊提取物、甜菊糖苷、蛇菊苷、莱鲍迪苷A、莱鲍迪苷B、莱鲍迪甙C、莱鲍迪甙D、莱鲍迪甙E、莱鲍迪甙F、杜克甙A、甜菊双糖苷、甜茶苷、在甜叶菊植株中发现的其他甜菊糖苷以及它们的混合物、罗汉果提取物、罗汉果苷、高果糖玉米糖浆、玉米糖浆、转化糖、低聚果糖、菊粉、低聚菊糖、偶合糖、低聚麦芽糖、麦芽糖糊精、玉米糖浆固体、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖、阿斯巴甜、糖精、三氯蔗糖、爱德万甜(advantame)、甜蜜素(cyclamate)、醋磺内酯钾(acesulphame-K)、纽甜(neotame)、异麦芽糖、乳糖醇、甘露醇、麦芽糖醇、山梨糖醇、塔格糖(tagatose)、海藻糖(trehalose)、阿洛酮糖(allulose)、木糖醇、赤藓糖醇、糖醇、甜蛋白以及它们的组合。

根据本公开的甜味剂组合物可包含其他化合物，例如但不限于调味剂，所述调味剂优选地选自由以下项组成的组：柠檬、橙子、水果、香蕉、葡萄、梨、菠萝、芒果、苦杏仁、可乐、肉桂、糖、棉花糖、香草以及它们的组合。

根据本公开的甜味剂组合物还可包含食物成分，所述食物成分选自由以下项组成的组：酸化剂、有机酸和氨基酸、着色剂、填充剂、改性淀粉、树胶、调质剂、防腐剂、抗氧化剂、乳化剂、稳定剂、增稠剂、胶凝剂，以及它们的组合。

根据本公开的甜味剂组合物可以基本上不含水可混溶性溶剂。术语“基本上不含水可混溶性溶剂”在下文中定义。

在第二方面中，本公开提供了一种食物产品，所述食物产品包含根据本公开的第一方面或第四方面的甜味剂组合物。此类食物产品在本文中称为根据本公开的食物产品。食物产品可以是期望向其中添加甜味剂例如糖或如本文其他地方所述的甜味剂的任何种类的食物产品。根据本公开的甜味剂组合物可以在食物产品中与另一种化合物(例如另一种甜味剂化合物，例如本文其他地方所述的那些)混合。该方面的特征与本公开的第一方面的特征相同。食物产品可为饮料、口香糖、乳制产品(例如酸奶)、酸奶饮料、牛奶、调味乳饮料、巧克力饮料、烘焙产品(例如面包、蛋糕、饼干)、谷物或基于谷物的食品、营养食品、药品、食用凝胶、糖果产品、化妆品、牙膏或其他口腔组合物等。另外，根据本公开的组合物可用作的甜味剂不仅用于饮料、食品和其他专用于人类食用的产品，而且还可以用于动物饲料和草料中。根据本公开的组合物可以与诸如天然甜味剂抑制剂等甜味剂抑制剂(如果需要的话)组合使用。它可以与诸如氨基酸或其盐等鲜味增强剂组合。

其中根据本公开的组合物可以用作甜味化合物的产品的示例可以是饮料，例如酒精饮料，例如伏特加、葡萄酒、啤酒、白酒、清酒等；天然果汁、提神饮料、碳酸软饮料、减肥饮料、零卡路里饮料、低卡路里饮料和食物、速溶果汁、速溶咖啡、粉末型速溶饮料、罐装产品、糖浆、发酵大豆酱、酱油、醋、调味品、蛋黄酱、番茄酱、咖喱、汤、速食肉汤、酱油粉、醋粉、多种类型的饼干、香米饼、咸饼干、面包、巧克力、焦糖、糖果、口香糖、果冻、布丁、蜜饯和腌菜、鲜奶油、果酱、橘子酱、糖花膏、奶粉、冰淇淋、冰糕、包装在瓶中的蔬菜和水果、罐装和煮熟的豆类、在甜味酱中煮熟的肉和食物、农业蔬菜食品、海鲜、火腿、香肠、鱼火腿、鱼香肠、鱼酱、油炸鱼制品、干制海产品、冷冻食品、腌渍海带、腊肉、烟草、医药产品等。原则上它可具有无限应用。

根据本公开的食物产品可以是饮料，所述饮料的非限制性示例包括非碳酸化软饮料和碳酸化软饮料，例如可乐、姜汁汽水、根汁汽水、苹果汁、水果味软饮料(例如，柑橘味软饮料，如柠檬、酸橙、柚子或橙汁)、软饮料粉等；来自水果或蔬菜的果汁、包括榨汁等的果汁、含有果粒的果汁、水果饮料、果汁饮料、含果汁的饮料、具有水果调味料的饮料、蔬菜汁、含蔬菜的汁以及含水果和蔬菜的混合果汁；运动饮料、能量饮料、接近水的饮料等(例如，具有天然或合成调味剂的水)；茶类或喜欢型饮料，诸如咖啡、可可、红茶、绿茶、乌龙茶等；含乳组分的饮料，例如乳饮料、含乳组分咖啡、牛奶咖啡、奶茶、果奶饮料、饮用酸奶、乳酸菌饮料等；以及乳制品。通常，甜味组合物中存在的甜味剂的量取决于甜味组合物的具体类型及其所需的甜度而广泛变化。本领域的普通技术人员可容易确定加入到甜味组合物中的甜味剂的适当量。在食物、饮料、药品、化妆品、餐桌产品、口香糖的制造过程中，可以使用常规方法，例如混合、捏合、溶解、腌制、渗透、渗滤、喷洒、雾化、灌输以及其他方法。因此，掺入了根据本公开的组合物的组合物可以通过本领域技术人员已知的提供成分的均质或均质混合物的任何方法来制备。这些方法包括干混、喷雾干燥、附聚、湿法制粒、压实、共结晶等。

根据本公开的食物产品可以基本上不含水可混溶性溶剂。术语“基本上不含水可混溶性溶剂”在下文中定义。

在第三方面中，本公开提供了一种用于生产食物产品的方法，所述方法包括使所述食物产品与根据本公开的第一方面或第四方面的甜味剂组合物接触。食物产品可以是期望向其中添加甜味剂例如糖或如本文其他地方所述的甜味剂的任何种类的食物产品。根据本公开的甜味剂组合物可以在食物产品中与另一种化合物(例如另一种甜味剂化合物，例如本文其他地方所述的那些)混合。还提供了一种可通过本公开的该方面的方法获得或通过本公开的该方面的方法获得的食物产品。还提供了通过使根据本公开的甜味剂组合物与食物产品或食物产品的前体产品接触来使根据本公开的甜味剂组合物用于食物产品的制备中的用途。该方面的特征与本公开的第一方面的特征相同。

在第四方面中，本公开提供了一种用于生产甜菊糖苷聚集体，优选莱鲍迪甙M聚集体的方法，所述方法包括：

-提供基本上不含水可混溶性溶剂的水性组合物，所述水性组合物包含甜菊糖苷晶体和水，

-干燥所述甜菊糖苷晶体以获得甜菊糖苷晶体聚集体，以及任选地，

-筛分所述甜菊糖苷晶体聚集体以获得所需的粒径范围。

在根据本公开的第三方面或第四方面的实施方式中，在所述方法中，不使用粘合剂(粘合试剂)来由晶体形成聚集体或促进由晶体形成聚集体。在本公开的第一方面中已经定义了甜菊糖苷聚集体的期望粒径。各个处理步骤优选为如WO2018/029272中所描述的那些处理步骤，该专利以引用方式并入本文。

在本文中，术语“基本上不含水可混溶性溶剂”是指所使用的水包含了至多10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％、0.1％、100ppm、50ppm、25ppm、15ppm、10ppm、5ppm、4ppm、3ppm、2ppm、至多1ppm的水可混溶性溶剂，或最优选包含0％的水可混溶性溶剂，后一者意味着水可混溶性溶剂的量低于检测限。本领域技术人员知道该技术领域中水可混溶性溶剂是什么，例如但不限于异丙醇、正丙醇、乙醇和甲醇。

在该第四方面中，本公开提供了一种用于生产甜菊糖苷聚集体，优选莱鲍迪甙M聚集体的方法，所述方法包括：

-从包含至少10g/L(例如至少15g/L、20g/L、30g/L、40g/L、50g/L、60g/L、70g/L、80g/L、90g/L或至少100g/L)的甜菊糖苷的母液中结晶出甜菊糖苷，

-从母液中分离出甜菊糖苷晶体，

-干燥所述甜菊糖苷晶体以获得甜菊糖苷晶体聚集体，以及任选地，

-筛分所述甜菊糖苷晶体聚集体以获得所需的粒径范围。

如上文所定义，所述方法优选在基本上不含水可混溶性溶剂的情况下执行。

各个处理步骤优选为如WO2018/029272中所描述的那些处理步骤，该专利以引用方式并入本文。

在该第四方面中，本公开提供了一种用于生产甜菊糖苷聚集体，优选莱鲍迪甙M聚集体的另外方法，所述方法包括：

-提供包含甜菊糖苷的发酵液，

-去除生物质，

-通过热休克步骤杀灭残留的微生物，并使用任选的澄清步骤将所述甜菊糖苷从所述生物质中分离出来，

-执行任选的纯化步骤以去除高分子量杂质，

-执行浓缩步骤以在结晶之前将甜菊糖苷的浓度增加到至少10g/L，例如至少15g/L、20g/L、30g/L、40g/L、50g/L、60g/L、70g/L、80g/L、90g/L或至少100g/L的甜菊糖苷，

-执行结晶步骤并从母液中分离出晶体，

-执行任选的溶解和第二结晶步骤以去除杂质；从所述母液中分离出所述晶体，

-干燥所述甜菊糖苷晶体以得到甜菊糖苷晶体聚集体，以及任选地筛分所述甜菊糖苷晶体聚集体以获得所需粒径范围。

如上文所定义，所述方法优选在基本上不含水可混溶性溶剂的情况下执行。

各个处理步骤优选为如WO2018/029272中所描述的那些处理步骤，该专利以引用方式并入本文。可以如本文先前所述获得发酵液。

本领域的技术人员已知的几个步骤可以用于根据本公开的方法中，所述步骤例如但不限于以下步骤。

如果使用浓缩的话，则可以通过任何方便的方法进行浓缩。通常，任何浓缩步骤可包括或可不包括色谱法来浓缩所需甜菊糖苷的量。优选地，任何浓缩步骤都不包括吸附色谱法来浓缩所需甜菊糖苷的量。也就是说，本公开的方法优选是其中不使用吸附色谱法的方法，即为没有吸附色谱法步骤的方法。吸附色谱法有时称为结合洗脱色谱法。如果使用浓缩步骤的话，则所述浓缩步骤可包括：超滤和纳滤的组合；蒸发；和/或将步骤(a)中的溶液喷雾干燥，然后重新溶解经喷雾干燥的物质。浓缩步骤可包括(i)超滤和纳滤；和/或(ii)蒸发，例如超滤和纳滤的组合，之后蒸发。超滤可以用截止值为约3kDa至约15kDa，例如约10kDa的膜进行。可以用硫酸钠标称保持率高于90％的膜进行纳滤，可以使甜菊糖苷溶液的结晶发生足够的时长(“沉淀时间”或“冷却时间”)以获得所需产量的甜菊糖苷。例如，在特定实施方式中，甜菊糖苷溶液的结晶可进行约0.5小时至约120小时(5天)、约12小时至约96小时(4天)、约24小时(1天)至约72小时(3天)、约48小时(2天)或这些之间的任何时长。在一个实施方式中，甜菊糖苷晶体聚集体(例如RebM晶体聚集体)也可通过回收如本文所述获得的母液并在甲醇存在下从所述母液中结晶甜菊糖苷(例如莱鲍迪苷M)而获得。随后，可以将这些晶体干燥以产生晶体聚集体，并且任选地进行筛分以获得如上文所述的具有合适粒径的晶体聚集体。

优选地，在本公开的该方面中，甜菊糖苷晶体聚集体的所需粒径范围为约200μm至约2mm，或大于约200μm，或为约250μm至约2mm，或大于约250μm。优选地，在本公开的该方面中，甜菊糖苷晶体聚集体的所需粒径范围为200μm至2mm，或大于200μm或为250μm至2mm，或大于250μm。

还提供了可通过本公开的该方面的方法获得或从该方法获得的甜菊糖苷晶体聚集体。

在本公开的该方面中，特征与本公开的第一方面中的特征相同。

实施方式

提供根据本公开的以下实施方式；这些实施方式中的特征优选地是如本文先前所定义的那些特征。

1.一种甜味剂组合物，所述甜味剂组合物包含甜菊糖苷聚集体，其中基于所述组合物中的甜菊糖苷聚集体的总重量，至少80％w/w的所述甜菊糖苷聚集体的粒径大于约200μm。

2.根据实施方式1所述的甜味剂组合物，其中基于所述组合物中的甜菊糖苷聚集体的总重量，至少80％w/w的所述甜菊糖苷聚集体的粒径大于约250μm。

3.根据实施方式1或2所述的甜味剂组合物，其中基于所述组合物中的甜菊糖苷聚集体的总重量，至少80％w/w的所述甜菊糖苷聚集体的粒径在约250μm至约2mm的范围内。

4.根据实施方式1至3中任一项所述的甜味剂组合物，其中基于所述组合物中的甜菊糖苷聚集体的总重量，所述甜菊糖苷聚集体包含至少80％w/w的纯甜菊糖苷，和/或其中所述甜菊糖苷聚集体的湿度百分比为至多约15％。

5.根据实施方式1至4中任一项所述的甜味剂组合物，其中所述甜菊醇糖苷是通过发酵产生的。

6.根据实施方式1至5中任一项所述的甜味剂组合物，其中所述聚集体为结晶聚集体。

7.根据前述实施方式中任一项所述的甜味剂组合物，其中所述组合物中的甜菊糖苷聚集体的量为基于所述组合物的总重量至少50％w/w。

8.根据实施方式1至7中任一项所述的甜味剂组合物，其中所述甜菊糖苷聚集体中的至少10％w/w为莱鲍迪甙M聚集体，或者其中所述甜菊糖苷聚集体为莱鲍迪甙M聚集体。

9.根据实施方式1至8中任一项所述的甜味剂组合物，其中当制备100ml的1g/L溶液时，所述甜菊糖苷聚集体在室温下的溶解时间为10分钟或更少。

10.根据实施方式1至9中任一项所述的甜味剂组合物，所述甜味剂组合物还包含附加甜味剂，所述附加甜味剂选自由以下项组成的组：甜叶菊提取物、甜菊糖苷、蛇菊苷、莱鲍迪甙A、莱鲍迪甙B、莱鲍迪甙C、莱鲍迪甙D、莱鲍迪甙E、莱鲍迪甙F、杜克甙A、甜菊双糖苷、甜茶苷、甜叶菊植株中发现的其他甜菊糖苷以及它们的混合物、罗汉果提取物、罗汉果苷、高果糖玉米糖浆、玉米糖浆、转化糖、低聚果糖、菊粉、低聚菊糖、偶合糖、低聚麦芽糖、麦芽糖糊精、玉米糖浆固体、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖、阿斯巴甜、糖精、三氯蔗糖、糖醇以及它们的组合。

11.根据实施方式1至10中任一项所述的甜味剂组合物，所述甜味剂组合物还包含调味剂，所述调味剂优选选自由以下项组成的组：柠檬、橙子、水果、香蕉、葡萄、梨、菠萝、芒果、苦杏仁、可乐、肉桂、糖、棉花糖、香草以及它们的组合。

12.根据实施方式1至11中任一项所述的甜味剂组合物，所述甜味剂组合物还包含食物成分，所述食物成分选自由以下项组成的组：酸化剂、有机酸和氨基酸、着色剂、填充剂、改性淀粉、树胶、调质剂、防腐剂、抗氧化剂、乳化剂、稳定剂、增稠剂、胶凝剂，以及它们的组合。

13.一种食物产品，所述食物产品包含根据实施方式1至12中任一项所述的甜味剂组合物。

14.一种生产食物产品的方法，所述方法包括使所述食物产品与根据实施方式1至12中任一项所述的甜味剂组合物接触。

15.一种用于生产甜菊糖苷聚集体，优选莱鲍迪甙M聚集体的方法，所述方法包括：

-提供基本上不含水可混溶性溶剂的水性组合物，所述水性组合物包含甜菊糖苷晶体和水，

-干燥所述甜菊糖苷晶体以获得甜菊糖苷晶体聚集体，以及任选地，

-筛分所述甜菊糖苷晶体聚集体以获得所需的粒径范围。

16.一种用于生产甜菊糖苷聚集体，优选莱鲍迪甙M聚集体的方法，所述方法包括：

-从含有至少10g/L的甜菊糖苷的母液中结晶出甜菊糖苷晶体，

-从所述母液中分离出所述甜菊糖苷晶体，

-干燥所述甜菊糖苷晶体以获得甜菊糖苷晶体聚集体，以及任选地，

-筛分所述甜菊糖苷晶体聚集体以获得所需的粒径范围。

17.一种用于生产甜菊糖苷聚集体，优选莱鲍迪甙M聚集体的方法，所述方法包括：

-提供包含甜菊糖苷的发酵液，

-去除生物质

-通过热休克步骤杀灭残留的微生物，并使用任选的澄清步骤将所述甜菊糖苷从所述生物质中分离出来，

-执行任选的超滤步骤以去除高分子量杂质，

-执行浓缩步骤以在结晶之前将所述甜菊糖苷的浓度增加到至少10g/L的甜菊糖苷，

-执行第一步结晶步骤并从母液中分离出晶体，

-执行任选的溶解和第二结晶步骤以去除杂质；从所述母液中分离出所述晶体，

-干燥所述甜菊糖苷晶体以获得甜菊糖苷晶体聚集体，以及任选地筛分所述甜菊糖苷晶体聚集体以获得所需粒径范围。

18.根据实施方式15、16或17所述的方法，其中所述甜菊糖苷晶体聚集体的所述所需粒径范围为200μm至2mm或大于200μm。

19.根据实施方式14至18中任一项所述的方法，其中不使用用于从晶体形成聚集体或促进从晶体形成聚集体的粘合剂。

一般定义

在整个说明书和所附权利要求书中，词语“包括(comprise)”、“包含(include)”和“具有(having)”以及诸如“包括(comprises/comprising)”和“包含(includes/including)”的变型将被包含性地解释。也就是说，在上下文允许的情况下，这些词语旨在传达可能包括未具体叙述的其他要素或整数。

冠词“一(a/an)”在本文中用于指代一个或多于一个(即，一个或至少一个)该冠词的语法对象。举例来说，“要素”可以表示一个要素或多于一个要素。

当与数值(例如，约10)结合使用时，词语“约”或“近似”优选地意味值可以是给定值(10)加减该值的10％或加减该值的5％。

甜菊糖苷在此被定义为以下中的任一者：甜菊单糖苷、甜菊双糖苷、甜茶苷、杜克甙B、杜克甙A、莱鲍迪甙B、莱鲍迪甙G、蛇菊苷、莱鲍迪甙C、莱鲍迪甙F、莱鲍迪甙A、莱鲍迪甙I、莱鲍迪甙E、莱鲍迪甙H、莱鲍迪甙L、莱鲍迪甙K、莱鲍迪甙J、莱鲍迪甙M、莱鲍迪甙M2、莱鲍迪甙D、莱鲍迪甙D2、莱鲍迪甙N、莱鲍迪甙O、莱鲍迪甙A、在甜叶菊中发现的其他甜菊糖苷，或合成甜菊糖苷。根据本公开的优选甜菊糖苷为莱鲍迪苷M。

本文中提及的专利文献或作为现有技术给出的其他事项不应被视为承认该文献或事项是已知的，或者该文献或事项所包含的信息是在任何请求项的优先权日期时的公知常识的一部分。

本文所述的每篇参考文献的公开内容均以引用方式整体并入本文。

通过以下非限制性实施例来进一步说明本发明：

实施例

在以下实施例中，说明了本发明的各种实施方式。根据以上描述和这些实施例中，本领域技术人员可以对本公开进行各种改变和修改以使其适应各种用途和条件。

实施例1：

根据本发明的甜菊糖苷晶体聚集体的生产。

通过如在WO2018/029272的实施例1中所述的方法获得莱鲍迪甙M晶体。干燥不含水可混溶性溶剂的莱鲍迪甙M晶体饼，以获得晶体聚集体。在干燥后，将750克获得的晶体聚集体进行筛分，以获得各种粒径范围的甜菊糖苷晶体聚集体。所使用的筛来自Test Sieve认证的ISO 3310-1，具有表1中列出的大小；用于筛分的设备是Retsch AS200 digit。结果描述于表1中。在锥形真空干燥器(Hosakawa Micron B.V.)中，在60摄氏度(干燥器壁温)下执行甜菊糖苷晶体的干燥。将甜菊糖苷晶体饼放入干燥器中，开始搅拌，施加真空并将温度升高至60摄氏度。

表1：经筛分的甜菊糖苷晶体聚集体的特征

大于250μm的甜菊糖苷晶体聚集体的总级分为80.4％(w/w，基于甜菊糖苷晶体聚集体的总重量计)。大于250μm但小于2mm的甜菊糖苷晶体聚集体的总级分为52.6％(w/w，基于甜菊糖苷晶体聚集体的总重量计)。

当在室温下制备1g/l溶液时，测试具有不同粒径的级分的莱鲍迪甙M溶解速度。在某些时间段后，目视观察溶解，记录明显可见的未溶解粒子的存在。结果描述于表2中。

表2：甜菊糖苷晶体聚集体的不同级分的溶解特征

显然，大于250μm的莱鲍迪甙M聚集体比小于250μm的莱鲍迪甙M聚集体实质上更快地溶解。