一种从黄连须中提取吡喃葡萄糖苷衍生物的工艺
阅读说明：本技术 一种从黄连须中提取吡喃葡萄糖苷衍生物的工艺 (Process for extracting glucopyranoside derivative from crassula argentea ) 是由 青端瑞 杨成 钟治晖 苏丹 于 2019-09-03 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种式IV所示化合物的制备方法,所述方法包括以下步骤：1)将黄连须干燥、粉碎,得到药材粉末；2)将步骤1)所得药材粉末用提取溶剂提取,得到提取液；所述提取溶剂选自水,醇类溶剂,或水和醇类溶剂的混合溶液；3)将步骤2)所得提取液浓缩,加醇类溶剂,进行沉淀,然后过滤,去除固体,保留滤液；4)将步骤3)所得滤液浓缩,得浓缩液,采用层析柱,以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂对浓缩液进行梯度洗脱,收集乙醇体积百分数为20％-60％的洗脱液,浓缩,干燥,即得。本发明提供的方法操作简单、成本低,产品纯度高、收率高,使用的试剂为乙醇和水,减少了对环境、操作人员的影响,减少了试剂残留；层析柱的填料可重复利用,使总体生产成本降低,也减少了填料废弃物对环境造成的污染；而且,本发明利用黄连采收后剩余的部位(黄连须),加强了黄连的综合利用。(The invention provides a preparation method of a compound shown as a formula IV, which comprises the following steps: 1) drying and pulverizing radix Coptidis to obtain medicinal powder; 2) extracting the medicinal material powder obtained in the step 1) by using an extraction solvent to obtain an extracting solution; the extraction solvent is selected from water, alcohol solvent or mixed solution of water and alcohol solvent; 3) concentrating the extracting solution obtained in the step 2), adding an alcohol solvent, precipitating, filtering, removing solids, and keeping filtrate; 4) concentrating the filtrate obtained in the step 3) to obtain a concentrated solution, performing gradient elution on the concentrated solution by adopting a chromatographic column and taking an aqueous solution with the volume percentage of ethanol of 0-80% as an eluent, collecting the eluent with the volume percentage of ethanol of 20-60%, concentrating and drying to obtain the product. The method provided by the invention is simple to operate, low in cost, high in product purity and high in yield, and the used reagents are ethanol and water, so that the influence on the environment and operators is reduced, and the reagent residue is reduced; the filler of the chromatographic column can be recycled, so that the overall production cost is reduced, and the pollution of filler waste to the environment is also reduced; in addition, the invention utilizes the residual part (the coptis chinensis whiskers) of the coptis chinensis after being harvested, thereby enhancing the comprehensive utilization of the coptis chinensis.)
技术领域
本发明属于化学提纯领域，具体涉及一种从黄连须中提取吡喃葡萄糖苷衍生物的工艺。
背景技术
黄连为毛茛科植物黄连(Coptis chinensisFranch.)(味连)的干燥根茎。味连，又名川连、鸡爪黄连，主产四川，湖北、湖南、陕西、甘肃等省亦有栽培。味苦、性寒，归心、脾、胃、肝、胆、大肠经。具有清热燥湿，泻火解毒的功效。主要用于湿热痞满、呕吐吞酸、泻痢、黄疸、高热神昏、心火亢盛、心烦不寐、血热、目赤、牙痛、痈肿疔疮，外治湿疹、湿疮、耳道流脓。
文献“黄连水提液化学成分的分离与鉴定，李雪改等”公开了一种从黄连水提液中分离化合物的方法，并提取鉴定了22个化合物，其提取分离方法如下：黄连干燥根茎1kg，用水回流提取2次(第一次8倍量，第二次6倍量)，每次2h，合并提取液，48℃下减压回收溶剂，浓缩后得到总浸膏(1l0 g)。采用重结晶、反复开放硅胶柱色谱、Sephadex LH一20柱色谱、制备薄层色谱以及PHPLC等手段，对黄连的水提液进行系统分离，共得到22个化合物，并鉴定了它们的结构。得到的22个化合物中，包括一种吡喃葡萄糖苷衍生物，即其化合物15：3-(3’,4’二羟基苯基)-(2R)-乳酸-4’-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3-(3’,4'-dihydroxyphe·ny1)-(2R)-lactic acid-4’-O-β-D-glucopyranoside)。
本申请人申请的中国专利201610459981.5中公开了上述化合物15(即其式IV所示化合物)在制备用于预防和/或治疗糖尿病药物中的用途，该化合物的10mg/kg，20mg/kg及40mg/kg三个剂量组对正常小鼠糖耐量试验中给葡萄糖后60min血糖均有显著的降低作用，20mg/kg及40mg/kg还能降低AUC并升高血糖抑制率，且未见明显毒副作用，药物安全有效。因此，上述式IV所示化合物在制备用于预防和/或治疗糖尿病药物中具有非常好的应用前景。
但是，该化合物的制备方法非常复杂，成本高，收率低，不适合商业化生产。因此，寻找一种简单耗时短、操作简单、收率高的方法来制得上述化合物，具有非常好的应用前景。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从黄连须中提取式IV所示化合物的工艺。
本发明提供了一种式IV所示化合物的制备方法，所述方法包括以下步骤：
1)将黄连须干燥、粉碎，得到药材粉末；
2)将步骤1)所得药材粉末用提取溶剂提取，得到提取液；所述提取溶剂选自水，醇类溶剂，或水和醇类溶剂的混合溶液；
3)将步骤2)所得提取液浓缩，加醇类溶剂，进行沉淀，然后过滤，去除固体，保留滤液；
4)将步骤3)所得滤液浓缩，得浓缩液，采用层析柱，以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂对浓缩液进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分数为20％-60％的洗脱液，浓缩，干燥，即得；
其中，式IV所示化合物的结构为：
进一步地，步骤3)中，所述浓缩是浓缩至体系比重为1.00～1.15；
所述醇类溶剂为乙醇；
所述浓缩所得体系与醇类溶剂的质量比为1：(1-10)，优选为1:(4-8)；
所述沉淀的时间为1-72小时，温度为0-25℃。
进一步地，步骤3)中，所述乙醇为体积百分数50％-80％的乙醇水溶液，优选为体积百分数50％-70％的乙醇水溶液。
进一步地，步骤1)中，所述干燥方式包括阴干、阳干、烘干，干燥后产物中水分重量在14％以下；所述粉碎为粉碎至10-80目；
优选地，所述干燥方式为在以下条件下烘干：在40-200℃下干燥0.5-10小时。
进一步地，步骤2)中，所述提取方式选自回流提取、超声提取、浸泡提取中的一种或两种以上；其中，所述浸泡提取的提取温度为60-90℃；
和/或，所述药材粉末与提取溶剂的质量比为1：(2-10)，优选为1：(6-8)；
和/或，所述提取次数为2-3次，每次的提取时间为1.5-2h；
和/或，所述提取溶剂选自水或体积浓度为30％的乙醇。
进一步地，步骤4)中，收集的是乙醇体积百分数为40％-45％的洗脱液，优选为乙醇体积百分数为40％的洗脱液。
进一步地，步骤4)中，所述梯度洗脱的条件如下：
进一步地，步骤4)中，所述层析柱选自D-101大孔树脂柱、MCI树脂柱、ODS柱、AB-8树脂柱、HPD-400树脂柱、D3520树脂柱、MCL树脂柱，优选为ODS柱。
进一步地，步骤4)中，所述干燥的方式选自喷雾干燥、真空干燥、冷冻干燥、近红外干燥以及微波干燥中的一种或两种以上，干燥温度为70℃以下；
和/或，浓缩液的体积为滤液的5％。
进一步地，步骤1)中，所述黄连须选自黄连短须、黄连长须中的一种或两种。
进一步地，所述黄连须选自味连须、雅连须或云连须中的一种或两种以上的组合。
本发明中，阴干指在没有阳光直射、通风性很好的地方自然干燥；阳干指在阳光直射下干燥；烘干指加热干燥。
黄连须是指黄连的根须。
黄连短须是指靠近主根近须部分。
黄连长须是指远离主根远须部分。
ODS柱即十八烷基硅烷键合硅胶柱。
本发明使用的试剂为乙醇和水，减少了试剂残留，减少了对环境、操作人员的影响。
本发明层析柱的填料可重复利用，使总体生产成本降低，也减少了填料废弃物对环境造成的污染。
本发明利用黄连采收后剩余的部位(黄连须)进行二次利用，加强了黄连的综合利用率，降低了成本，减少了资料的浪费。
实验结果表明，本发明提供的方法能够从黄连须中提取得到式IV所示化合物，本方法操作简单、成本降低，产品收率高、纯度高，更环保，适合商业化生产。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的
具体实施方式
，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
具体实施方式
本发明所用原料与设备均为已知产品，通过购买市售产品所得。
实施例1、本发明的提取工艺
1、提取
(1)将黄连须的提取部位短须干燥，在40-200℃,干燥0.5-10小时，至水分14％以下，然后粉碎10-80目，得到药材粉末；
(2)将步骤1)所得药材粉末用8倍量水，在80°下提取2次，每次2小时，得到提取液；
2、提纯
3)将步骤2)所得提取液浓缩至比重1.1，得到浸膏，再加入4倍量90％乙醇，进行沉淀24小时，然后过滤，去除固体，保留滤液；
4)将步骤3)所得滤液浓缩，得浓缩液，采用D-101大孔树脂柱，以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂对浓缩液进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分数为20％的洗脱液，浓缩，干燥，即得式IV所示化合物：
所述梯度洗脱的条件如下：
3、表征
通过核磁检测与对照品核磁图谱比较，确认为IV所示化合物。通过色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，HPLC检测分析纯度为78％；称量干燥后化合物计算得出收率为28％。
实施例2、本发明的提取工艺
1、提取
(1)将黄连须的提取部位长须干燥，在40-200℃,干燥0.5-10小时，至水分14％以下，然后粉碎10-80目，得到药材粉末；
(2)将步骤1)所得药材粉末用6倍量水，在60HZ下超声提取2次，每次1小时，得到提取液；
2、提纯
3)将步骤2)所得提取液浓缩至比重1.15，得到浸膏，再加入4倍量80％乙醇，进行沉淀36小时，然后过滤，去除固体，保留滤液；
4)将步骤3)所得滤液浓缩，得浓缩液，采用MCI树脂柱，以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂对浓缩液进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分数为45％的洗脱液(所述梯度洗脱的条件与实施例1的步骤(4)相同)，浓缩，干燥，即得式IV所示化合物。
3、表征
通过核磁检测与对照品核磁图谱比较，确认为IV所示化合物。通过色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，HPLC检测分析纯度为85％；称量干燥后化合物计算得出收率为30％。
实施例3、本发明的提取工艺
1、提取
(1)将黄连须的提取部位短须干燥，在40-200℃,干燥0.5-10小时，至水分14％以下，然后粉碎10-80目，得到药材粉末；
(2)将步骤1)所得药材粉末用8倍量30％乙醇水溶液，在80℃下回流提取2次，每次1.5小时，得到提取液；
2、提纯
3)将步骤2)所得提取液浓缩至比重1.1，得到浸膏，再加入4倍体积量70％乙醇，进行沉淀48小时，然后过滤，去除固体，保留滤液；
4)将步骤3)所得滤液浓缩，得浓缩液，采用ODS柱，以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂对浓缩液进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分数为40％的洗脱液(所述梯度洗脱的条件与实施例1的步骤(4)相同)，浓缩，干燥，即得式IV所示化合物。
3、表征
通过核磁检测与对照品核磁图谱比较，确认为IV所示化合物。通过色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，HPLC检测分析纯度为91％；称量干燥后化合物计算得出收率为28％。
实施例4、本发明的提取工艺
1、提取
(1)将黄连须的提取部位短须干燥，在40-200℃,干燥0.5-10小时，至水分14％以下，然后粉碎10-80目，得到药材粉末；
(2)将步骤1)所得药材粉末用6倍量水，在90℃下浸泡提取2次，每次2小时，得到提取液；
2、提纯
3)将步骤2)所得提取液浓缩至比重1.15，得到浸膏，再加入4倍体积量65％乙醇，进行沉淀72小时，然后过滤，去除固体，保留滤液；
4)将步骤3)所得滤液浓缩，得浓缩液，采用AB-8树脂柱，以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂对浓缩液进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分数为30％的洗脱液(所述梯度洗脱的条件与实施例1的步骤(4)相同)，浓缩，干燥，即得式IV所示化合物。
3、表征
通过核磁检测与对照品核磁图谱比较，确认为IV所示化合物。通过色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，HPLC检测分析纯度为79％；称量干燥后化合物计算得出收率为33％。
实施例5、本发明的提取工艺
1、提取
(1)将黄连须的提取部位长须干燥，在40-200℃,干燥0.5-10小时，至水分14％以下，然后粉碎10-80目，得到药材粉末；
(2)将步骤1)所得药材粉末用8倍量水，在60HZ下超声提取3次，每次1小时，得到提取液；
2、提纯
3)将步骤2)所得提取液浓缩至比重1.15，得到浸膏，再加入5倍量70％乙醇，进行沉淀72小时，然后过滤，去除固体，保留滤液；
4)将步骤3)所得滤液浓缩，得浓缩液，采用HPD-400树脂柱，以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂对浓缩液进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分数为30％的洗脱液(所述梯度洗脱的条件与实施例1的步骤(4)相同)，浓缩，干燥，即得式IV所示化合物。
3、表征
通过核磁检测与对照品核磁图谱比较，确认为IV所示化合物。通过色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，HPLC检测分析纯度为76％；称量干燥后化合物计算得出收率为26％。
实施例6、本发明的提取工艺
1、提取
(1)将黄连须的提取部位长须干燥，在40-200℃,干燥0.5-10小时，至水分14％以下，然后粉碎10-80目，得到药材粉末；
(2)将步骤1)所得药材粉末用8倍量水，在70℃下浸泡提取2次，每次2小时，得到提取液；
2、提纯
3)将步骤2)所得提取液浓缩至比重1.1，得到浸膏，再加入4倍体积量65％乙醇，进行沉淀48小时，然后过滤，去除固体，保留滤液；
4)将步骤3)所得滤液浓缩，得浓缩液，采用D3520树脂柱，以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂对浓缩液进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分数为20％的洗脱液(所述梯度洗脱的条件与实施例1的步骤(4)相同)，浓缩，干燥，即得式IV所示化合物。
3、表征
通过核磁检测与对照品核磁图谱比较，确认为IV所示化合物。通过色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，HPLC检测分析纯度为77％；称量干燥后化合物计算得出收率为28％。
实施例7、本发明的提取工艺
1、提取
(1)将黄连须的提取部位短须干燥，在40-200℃,干燥0.5-10小时，至水分14％以下，然后粉碎10-80目，得到药材粉末；
(2)将步骤1)所得药材粉末用8倍量30％乙醇水溶液，在70℃下回流提取2次，每次2小时，得到提取液；
2、提纯
3)将步骤2)所得提取液浓缩至比重1.15，得到浸膏，再加入10倍体积量60％乙醇，进行沉淀72小时，然后过滤，去除固体，保留滤液；
4)将步骤3)所得滤液浓缩，得浓缩液，采用MCL树脂柱，以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂对浓缩液进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分数为45％的洗脱液(所述梯度洗脱的条件与实施例1的步骤(4)相同)，浓缩，干燥，即得式IV所示化合物。
3、表征
通过核磁检测与对照品核磁图谱比较，确认为IV所示化合物。通过色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，HPLC检测分析纯度为86％；称量干燥后化合物计算得出收率为35％。
实施例8、本发明的提取工艺
1、提取
(1)将黄连须的提取部位短须干燥，在40-200℃,干燥0.5-10小时，至水分14％以下，然后粉碎10-80目，得到药材粉末；
(2)将步骤1)所得药材粉末用8倍量水，在90℃下浸泡提取3次，每次1.5小时，得到提取液；
2、提纯
3)将步骤2)所得提取液浓缩至1.1，得到浸膏，再加入4倍体积量50％乙醇，进行沉淀36小时，然后过滤，去除固体，保留滤液；
4)将步骤3)所得滤液浓缩，得浓缩液，采用ODS柱，以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂对浓缩液进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分数为40％的洗脱液(所述梯度洗脱的条件与实施例1的步骤(4)相同)，浓缩，干燥，即得式IV所示化合物。
3、表征
通过核磁检测与对照品核磁图谱比较，确认为IV所示化合物。通过色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，HPLC检测分析纯度为90％；称量干燥后化合物计算得出收率为36％。
实施例9、本发明的提取工艺
1、提取
(1)将黄连须的提取部位短须干燥，在40-200℃,干燥0.5-10小时，至水分14％以下，然后粉碎10-80目，得到药材粉末；
(2)将步骤1)所得药材粉末用6倍量水，在70℃下浸泡提取2次，每次1.5小时，得到提取液；
2、提纯
3)将步骤2)所得提取液浓缩至比重1.15，得到浸膏，再加入5倍体积量60％乙醇，进行沉淀24小时，然后过滤，去除固体，保留滤液；
4)将步骤3)所得滤液浓缩，得浓缩液，采用MCL柱，以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂对浓缩液进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分数为45％的洗脱液(所述梯度洗脱的条件与实施例1的步骤(4)相同)，浓缩，干燥，即得式IV所示化合物。
3、表征
通过核磁检测与对照品核磁图谱比较，确认为IV所示化合物。通过色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，HPLC检测分析纯度为87％；称量干燥后化合物计算得出收率为30％。
实施例10、本发明的提取工艺
1、提取
(1)将黄连须的提取部位黄连短须干燥，在40-200℃,干燥0.5-10小时，至水分14％以下，然后粉碎10-80目，得到药材粉末；
(2)将步骤1)所得药材粉末用6倍量30％乙醇水溶液，在80℃下回流提取2次，每次2小时，得到提取液；
2、提纯
3)将步骤2)所得提取液浓缩至比重1.15，得到浸膏，再加入8倍体积量50％乙醇，进行沉淀48小时，然后过滤，去除固体，保留滤液；
4)将步骤3)所得滤液浓缩，得浓缩液，采用ODS柱，以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂对浓缩液进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分数为40％的洗脱液(所述梯度洗脱的条件与实施例1的步骤(4)相同)，浓缩，干燥，即得式IV所示化合物。
3、表征
通过核磁检测与对照品核磁图谱比较，确认为IV所示化合物。通过色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，HPLC检测分析纯度为90％；称量干燥后化合物计算得出收率为34％。
表1各样品的提取工艺及收率、纯度对比
从表1可以看出，采用本发明实施例1-10的方法均能够从黄连须中提取得到式IV所示化合物。特别是采用实施例3、8或10中的方法，先将提取液在50％-70％乙醇中进行沉淀，再以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂，通过ODS柱进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分数为40％洗脱液，得到的目标产物的纯度高达90％以上。
综上，本发明提供的方法能够从黄连须中提取得到式IV所示化合物，本方法操作简单、成本低，产品纯度高、收率高，且本发明使用的试剂为乙醇和水，减少了试剂残留，减少了对环境、操作人员的影响；本发明层析柱的填料可重复利用，使总体生产成本降低，也减少了填料废弃物对环境造成的污染；本发明利用黄连采收后剩余的部位(黄连须)进行二次利用，加强了黄连的综合利用率，降低了成本，减少了资料的浪费。
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