阅读说明：本技术 一种组合物及其制备和应用 (Composition and preparation and application thereof ) 是由 沈鸣 巴福生 田亚平 杨广明 于 2020-06-04 设计创作，主要内容包括：本发明公开一种组合物及其制备和应用。使用本发明所提供组合物制备的消毒溶液为含有0.2g/L的多聚赖氨酸、0.8-1.0g/L的N-乙酰神经氨酸、1.0g/L的溶菌酶和10g/L海藻糖,pH为6.8的磷酸盐缓冲液。该消毒溶液可以用于制备防护无纺布,进而用于制备口罩等微生物防护用品。防护效果好而且稳定性好,保存期长。(The invention discloses a composition, and a preparation method and application thereof. The disinfectant solution prepared by using the composition provided by the invention is a phosphate buffer solution with pH of 6.8 and containing 0.2g/L of polylysine, 0.8-1.0g/L of N-acetylneuraminic acid, 1.0g/L of lysozyme and 10g/L of trehalose. The disinfectant solution can be used for preparing protective non-woven fabrics and further used for preparing microbial protective articles such as masks and the like. Good protection effect, good stability and long storage life.)

一种组合物及其制备和应用

技术领域

本发明涉及一种组合物及其制备和应用。

背景技术

新冠肺炎疫情让人类更加认识到了病毒、细菌等微生物对人类威胁的严重性。日常生活中的常规杀菌消毒和特殊情况下的防护器材的供应以及有效性都成为人们关注的热点，提高日常生活用的常规杀菌消毒产品的有效性成为人们的迫切需求，口罩、医用防护服等防护器材的及时有效供应以及其防护有效性的提高也成为疫情防控的急切需要和关键因素。

发明内容

本发明的目的在于提供一种组合物及其制备和应用，以至少部分地实现提高杀菌消毒用品的有效性，提高口罩等微生物防护用品的抗菌以及对病毒的吸附能力，并通过延长产品的保质期以提高口罩等微生物防护用品的有效供应能力。

本发明至少涉及如下技术方案。

本发明实施例涉及一种组合物，所述组合物包括1份多聚赖氨酸、4-5份N-乙酰神经氨酸、10份溶菌酶和海藻糖适量。作为优选，所述组合物包括1份多聚赖氨酸、5份N-乙酰神经氨酸、10份溶菌酶和海藻糖适量。

本发明实施例涉及一种消毒溶液，所述消毒溶液为含有0.2g/L的多聚赖氨酸、0.8-1.0g/L的N-乙酰神经氨酸、1.0g/L的溶菌酶和10g/L海藻糖，pH为6.8的磷酸盐缓冲液。该消毒溶液可使用前述组合物制备。

本发明实施例涉及一种防护无纺布，为无纺布同时承载适量的多聚赖氨酸、N-乙酰神经氨酸、溶菌酶和海藻糖。具体来讲，可以是每平米无纺布承载1.6mg的多聚赖氨酸、6.4-8.0mg的N-乙酰神经氨酸、8.0mg的溶菌酶和80mg的海藻糖。

本发明实施例还提供制备上述防护无纺布的方法，所述方法包括将前述消毒溶液用15％酒精将稀释2倍，常温下按照每平米无纺布8mL总量用均匀喷涂，60度烘干。

本发明实施例还涉及一种微生物防护用品，所述微生物防护用品包括至少一层上述防护无纺布。本专利所称微生物防护用品是指，可供人戴佩或者穿戴，以防止发生病毒和细菌等微生物感染的防护用品，比如包括口罩、医用防护服等。

本发明还涉及前述组合物在制备消毒溶液中的应用。

本发明还涉及前述消毒溶液在制备防护无纺布中的应用。

本发明还涉及前述防护无纺布在制备口罩等微生物防护用品中的应用。

本发明提供的抗菌消毒组合物，抗菌消毒能力较现有同类产品有明显的提升，而且保存期长。使用本发明提供的抗菌消毒组合物喷涂无纺布制作口罩抗菌能力和对病毒的吸附能力都较现有同类产品具有明显优势，而且保存期更长，对形成应对突发事件的供应能力更有保障。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

本发明所涉及百分含量，在溶剂和溶质均为液体的情况下为体积比含量，在溶质为固体溶剂为液体的情况下为重量体积比含量。

第一组

实施例1

发明人提供配方1：

1份多聚赖氨酸和3份N-乙酰神经氨酸。

按比例称取各成分，加入磷酸盐缓冲液，配置成终浓度0.2g/L多聚赖氨酸的溶液，pH调整至6.8。

实施例2

发明人提供配方2：

1份多聚赖氨酸、3份N-乙酰神经氨酸、10份壳聚糖和10份溶菌酶。

按比例称取各成分，加入磷酸盐缓冲液，配置成终浓度0.2g/L多聚赖氨酸的溶液，pH调整至6.8。

实施例3

发明人提供配方3：

1份多聚赖氨酸、3份N-乙酰神经氨酸、8份溶菌酶和海藻糖适量。

按比例称取各成分，加入磷酸盐缓冲液，配置成终浓度0.2g/L多聚赖氨酸的溶液，同时加入海藻糖至10g/L，pH调整至6.8。

实施例4

发明人提供配方4：

1份多聚赖氨酸、4份N-乙酰神经氨酸和8份溶菌酶和海藻糖适量。

按比例称取各成分，加入磷酸盐缓冲液，配置成终浓度0.2g/L多聚赖氨酸的溶液，同时加入海藻糖至10g/L，pH调整至6.8。

实施例5

发明人提供配方5：

1份多聚赖氨酸、5份N-乙酰神经氨酸、8份溶菌酶和海藻糖适量。

按比例称取各成分，加入磷酸盐缓冲液，配置成终浓度0.2g/L多聚赖氨酸的溶液，同时加入海藻糖至10g/L，pH调整至6.8。

实施例6

发明人提供配方6：

1份多聚赖氨酸、3份N-乙酰神经氨酸、10份溶菌酶和海藻糖适量。

按比例称取各成分，加入磷酸盐缓冲液，配置成终浓度0.2g/L多聚赖氨酸的溶液，同时加入海藻糖至10g/L，pH调整至6.8。

实施例7

发明人提供配方7：

1份多聚赖氨酸、4份N-乙酰神经氨酸、10份溶菌酶和海藻糖适量。

按比例称取各成分，加入磷酸盐缓冲液，配置成终浓度0.2g/L多聚赖氨酸的溶液，同时加入海藻糖至10g/L，pH调整至6.8。

实施例8

发明人提供配方8：

1份多聚赖氨酸、5份N-乙酰神经氨酸、10份溶菌酶和海藻糖适量。

按比例称取各成分，加入磷酸盐缓冲液，配置成终浓度0.2g/L多聚赖氨酸的溶液，同时加入海藻糖至10g/L，pH调整至6.8。

将实施例1-8所提供各个配方溶液分别喷涂到大肠杆菌的LB培养基、金黄色葡萄球菌的血平板、白色念珠菌的沙氏葡萄糖琼脂培养基上，观察各实施例的培养基48小时后有无可见菌落生长。

通过结果对比，实施例1-4肉眼可见菌落，实施例5-8未检出。证明本专利的实施例5-8的抑菌效果比较好。

实施例9：将实施例5的配方喷涂到无纺布上，制备防护无纺布。

喷涂的工艺参数是：将溶液用15％酒精将稀释2倍，常温下按照每平米无纺布5mL总量用均匀喷涂，60度烘干。

实施例10：参照实施例9的喷涂工艺将实施例6的配方喷涂到无纺布上，制备防护无纺布。

实施例11：参照实施例9的喷涂工艺将实施例7的配方喷涂到无纺布上，制备防护无纺布。

实施例12：参照实施例9的喷涂工艺将实施例8的配方喷涂到无纺布上，制备防护无纺布。

检测实施例9-12所制备防护无纺布对病毒的吸附率。实施例1-8所配溶液定义为生物防护液。实验步骤可参照如下进行：

1.实验条件

1.1试剂

流感病毒裂解疫苗：流感病毒裂解疫苗(华兰生物疫苗有限公司，国药准字S20083016)；

酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒：H1N1(猪流感)血凝素蛋白ELISA试剂盒(货号H1N1-SEK001)和H3N2(禽流感)血凝素蛋白ELISA试剂盒(货号为H3N2-SEK11056)；

无纺布布材(香河华鑫非织造布有限公司，批号为HX-20160830)。

1.2设备

生物防护液喷涂机(公司自行订制生产)；

100mL烧杯7只；

匀浆振荡器(海门市其林贝尔仪器制造有限公司，型号为TS-1)；

漩涡振荡器(海门市其林贝尔仪器制造邮箱公司，型号为Qilinbeier XW-80A)；

酶标分析仪(北京普朗信新技术有限公司，型号为DNM-9602G)。

2.实验步骤

2.1生物防护材料无纺布及空白无纺布的制备

剪裁14cm×14cm无纺布两块，20mL生物防护液将溶液用15％酒精将稀释2倍，常温下按照每平米无纺布5mL量用机器高压喷雾法均匀喷涂，60度烘干，作为生物防护材料无纺布(简称有效布)，而空白无纺布(简称空白布)喷涂5mL 15％酒精。每块布对半剪裁成4块，有效布随机取3块，编号为A1、A2和A3，空白布随机取3块，编号为B1、B2和B3，每块布的表面积为3.5cm×3.5cm；

2.2流感病毒疫苗原液的配制

取6支流感病毒疫苗共3mL(60μg/mL)，加入147mL蒸馏水，定容到150mL，混合均匀，配置成2％流感病毒疫苗原液，抗原浓度为1200000pg/mL；

2.3样品溶液的配制

2.3.1取6只洗净并经高压灭菌的100mL烧杯，每只烧杯加入一块空白布或有效布，以及20mL 2％的流感病毒疫苗原液。空白布或有效布分别为3块，烧杯编号与布材的编号对应，共计6块布。第7号烧杯只加入20mL 2％疫苗原液作为阳性对照；

2.3.2将7只烧杯放于匀浆振荡器上，室温下匀速振荡30分钟，转速为120rpm；

2.3.3用镊子取出烧杯中浸泡的布材，自然晾干做好标记并保存，将各烧杯中的剩余溶液分别摇晃均匀，分别吸取10μL与1.5mL EP管中，加入990μL样品稀释液(0.1％BSA，20mM Tris,150mM NaCl,pH 7.4)，振荡混匀，稀释100倍，作为生物防护材料吸附性能评价的溶液使用；

2.4标准溶液的配制

吸取60μL 2％流感病毒疫苗原液于1.5mL EP管中，加540μL样品稀释液，使体积达到600μL混匀，做1:10稀释，从中取出300μL，与300μL样品稀释液混合做1:20稀释，依次类推做二倍稀释，配制成疫苗原液1:10、1:20、1:40、1:80、1:160、1:320、1:640稀释的标准溶液，浓度分别为120000、60000、30000、15000、7500、3750、1750pg/mL；

2.5利用ELISA测定流感病毒抗原的浓度

2.5.1包被抗体：用包被液(0.05M Na2CO3,NaHCO3,pH9.6)将H1N1(2009猪流感)血凝素蛋白ELISA试剂盒及H3N2(禽流感)血凝素蛋白ELISA试剂盒中的一抗稀释至工作浓度，加到酶标板中，每孔加入100μL，使一抗与酶标板内的固相载体结合，封板膜封板，放置于4C冰箱过夜(16～24小时)；

2.5.2洗涤：倒尽酶标板孔中的液体，加350μL洗涤液(0.05％Tween20，20mM Tris,150mM NaCl,pH 7.4)，洗3次，最后在毛巾或吸水纸上拍干板子；

2.5.3封闭：加封闭液(2％BSA，20mM Tris,150mM NaCl pH 7.4)300μL，封板膜封板，室温孵育1小时；

2.5.4洗涤：同2.5.2；

2.5.5加待测样品：取出预先包被好的酶标板，每孔加入100μL待测样品，每个样品做4个复孔，封板膜封板，室温孵育2小时；

2.5.6洗涤：同2.5.2；

2.5.7加酶标二抗：将酶标二抗稀释到适当工作浓度，每孔加入100μL，室温孵育1小时；

2.5.8洗涤：同2.5.2；

2.5.9加显色液：显色液B与显色液A在用前半小时混合配置，避光放置半小时后，每个样品孔加入100μL显色液，室温避光孵育10分钟；

2.5.10加终止液：每孔50μL，用漩涡振荡器混匀；

2.5.11观察记录结果：用酶标仪记录450nm波长处的吸光度值；

2.5.12制作标准曲线：以样品稀释液为空白，以吸光度A为横坐标，流感病毒疫苗浓度C为纵坐标制图，制出标准曲线，得到相应的公式；

2.5.13计算布材的吸附率：将样品溶液的吸光度带入到标准曲线的线性公式中，计算经布材吸附后剩余病毒疫苗溶液中的病毒抗原浓度。

吸附率Q＝((C1×体积-C2×稀释倍数×体积))/((C1×体积))＝(1-C2*100/C1)×100％

其中，C1为病毒疫苗原液浓度(即1200000pg/mL)，C2为剩余病毒疫苗溶液浓度，通过计算三块有效布A1、A2和A3以及三块空白布B1、B2和B3吸附率的算数平均值，得到每次实验生物防护材料组和空白对照组的吸附率值，共计重复三次实验。

3.检测结果

通过对比本组内各实施例对病毒的吸附效率，证明本专利实施例11和实施例12的吸附效率较高，其中实施例12吸附率最高。

实施例13：将实施例7制备的配方溶液用15％酒精将稀释2倍，常温下按照每平米无纺布8mL总量用均匀喷涂，60度烘干，制备防护无纺布。

实施例14：参照实施例13的工艺，将实施例8的配方喷涂到无纺布上，制备防护无纺布。

实施例15：将实施例7制备的配方溶液用15％酒精将稀释2倍，常温下按照每平米无纺布10mL总量用均匀喷涂，60度烘干，制备防护无纺布。

实施例16：参照实施例15的工艺，将实施例8的配方喷涂到无纺布上，制备防护无纺布。

参照前述实验方法，检测实施例13-16所制备防护无纺布对病毒的吸附效率，得到以下结果

通过结果对比，证明实施例13-16所采用喷涂工艺比此前的喷涂工艺的吸附效率更高，其中实施例13-14对所配置消毒溶液的利用率更高。

实施例17：各配方溶液的稳定性评价

将实施例5-8所提供的配方溶液分别配制4份，置于三角瓶中密封，在60℃温度和50％的湿度下，分别在15天、30天、45天和60天后取一份，进行抑菌试验，实验过程参照前述。实施例5所提供的配方溶液在第15天，实施例6所提供的配方溶液在第30天，实施例7所提供的配方溶液在60天后，实施例8所提供的配方溶液在45天后出现肉眼可见的菌落。结果证明，实施例7-8所提供的配方溶液的稳定性较好，其中实施例7所提供的配方溶液最好。

实施例18：各防护无纺布的稳定性评价

实验1:将实施例13所制备的防护无纺布密封保存4份，在60℃温度和50％的湿度下，分别在15天、30天、45天和60天取出，检测吸附病毒效率。

实验2：实施例14所制备的防护无纺布密封保存4份，在60℃温度和50％的湿度下，分别在15天、30天、45天和60天取出，检测吸附病毒效率。

实验3：实施例13所制备的防护无纺布密封保存4份，在60℃温度和20％的湿度下，分别在15天、30天、45天和60天取出，检测吸附病毒效率。

实验4：实施例14所制备的防护无纺布密封保存4份，在60℃温度和20％的湿度下，分别在15天、30天、45天和60天取出，检测吸附病毒效率。

	第15天	第30天	第45天	第60天
					实验1	73.2％	63.2％	47.2％	32.2％
实验2	76.5％	66.1％	48.9％	38.4％
					实验3	76.1％	65.2％	50.2％	36.7％
实验4	78.9％	67.3％	52.9％	40.8％

结果显示实验2和实验4稳定性最好，说明将实施例8制备的配方溶液用15％酒精将稀释2倍，常温下按照每平米无纺布8mL总量用均匀喷涂，60度烘干，制备得到的防护无纺布更能适应不同的保存环境。

尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，本领域技术人员将会理解。根据已经公开的所有教导，可以对那些细节进行各种修改和替换，这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。