阅读说明：本技术 一种地胆草内酯化合物、制备方法及其应用 (Elephantopus scaber lactone compound, preparation method and application thereof ) 是由 邹忠梅 张涛 付露 于猛 齐云 李凌宇 于 2020-07-16 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种地胆草内酯化合物,所述地胆草内酯化合物的结构通式为：<Image he="526" wi="486" file="DDA0002587804940000011.GIF" imgContent="drawing" imgFormat="GIF" orientation="portrait" inline="no"></Image>该类化合物从地胆草属植物的花、根、茎叶或全草提取得到,具有优异的抗炎活性,为该化合物未报到的活性,且强于地胆草全提取物及其有效部位；本发明还提供了所述化合物的制备方法及其在抗炎,尤其制备神经炎症药物中的应用,适合工业生产。(The invention provides a elephantolide compound, which has a structural general formula as follows: the compound is extracted from flowers, roots, stems and leaves or whole plants of elephantopus plants, has excellent anti-inflammatory activity, is activity which is not reported by the compound, and is stronger than the elephantopus whole extract and effective parts thereof; the invention also provides a preparation method of the compound and application of the compound in anti-inflammation, in particular to preparation of neuroinflammation drugs, and is suitable for industrial production.)

一种地胆草内酯化合物、制备方法及其应用

技术领域

本发明涉及一种地胆草内酯化合物在制备抗炎药物中的应用，属于医药领域。

背景技术

炎症是由多种细胞、多种因子参与的复杂免疫防御反应，可以发生在机体任何部位的组织和器官，是临床上常见的病理过程。研究表明，炎症与许多疾病的相关，如炎性细胞因子CRP可促进动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS))的发生和发展，肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)对骨质疏松的发生起着重要作用及糖尿病的“炎症说”得到广泛认可等。许多传染性疾病和自身免疫性疾病、恶性肿瘤、心血管疾病、糖尿病等慢性非传染性重大疾病都属于炎症性疾病范畴，这些疾病正在全球范围蔓延并且已演变成严重危害人类健康和社会经济可持续发展的重要公共卫生问题。

临床常用甾体抗炎药物和非甾体类抗炎药物治疗炎症性疾病，甾体类抗炎药物通常指类固醇甾体激素，包括肾上腺皮质激素、糖皮质激素等，这类药物抗炎作用强，但是存在水钠潴留，感染危险等严重副作用，临床上使用受到限制。非甾体类抗炎药物是一类不含类固醇甾体结构而具有抗炎的药物，其耐受性良好，但其长期使用受限于严重的胃肠道不良反应，严重者甚至会出现消化道出血和穿孔。因现有抗炎药物存在作用单一，毒副作用大等问题，已无法满足临床需要，急需开发一种更为安全有效的抗炎药物。

目前地胆草提取物是一种公认具有药用效果的植物提取物，相关研究少，研究的主要集中于其粗提取物和有效部位中，不同提取方法能够得到的粗提取物和有效部位不同，限于技术原因，目前主要发现了几种地胆草内酯，无法满足临床对理想抗炎药物的需求，申请人采用自己开发的提取工艺和制备技术，重新对地胆草提取物进行提取和梳理，发现了一系列的新地胆草内酯化合物，且这一系列地胆草具有相同的母环结构，并且具有更强的抗炎活性，填补了这一领域的空白。

发明内容

本发明目的在于提供一类含有多不饱和脂肪链的酰胺类化合物，所述化合物为结构式I所示化合物或其生理上可接受的盐，

C₇-C₁₁为单键或双键；R₁为双键、羟甲基、甲基、羟基、含有1～8个碳原子的酯基中的一种；

R₂为氢、甲基、乙基、含有1～8个碳原子的酰基中的一种；

R₃为无取代基、氢或羟基。

所述酯基指的是通过所述取代基通过酯基与C₁₁相连接。

发明人在对地胆草属植物成分的研究过程中，惊喜地发现了结构通式为Ⅰ的化合物，该化合物在抗炎方面表现出了良好的活性，实验表明，该化合物能显著抑制LPS诱导的NO的产生，与公认效果最强的***相近。该化合物的结构及其在抗炎方面的活性未见任何报道。

临床数据显示，***作为一种长效糖皮质激素类药物，具有神经性休克股骨头坏死等严重副作用，但目前缺乏同样具有良好抗炎活性的药物可替代它，而本发明所述化合物的抗炎活性虽不及***强，但已与其相近，在没有更好的替代产品的情况下，是对其不足的良好补充，是深受***副作用毒害人群的福音。

所述的生理上可接受的盐，主要是指吉玛烷型倍半萜类化合物的无机酸盐或有机酸盐，其中的无机酸为盐酸、硫酸、磷酸、氢溴酸或氢碘酸；有机酸为酒石酸、柠檬酸、甲酸、乙酸、乙二酸、丁酸、草酸、马来酸、琥珀酸、己二酸、藻酸、柠檬酸、天冬氨酸、苯苯磺酸、樟脑酸、樟脑磺酸、二葡糖酸、环戊烷丙酸、十二烷基硫酸、乙磺酸、葡庚糖酸、甘油磷酸、半硫酸、庚酸、己酸、延胡索酸、2-羟基乙磺酸、乳酸、马来酸、甲磺酸、烟酸、2-萘磺酸、扑酸、果胶酯酸、3-苯基丙酸、苦味酸、新戊酸、丙酸、琥珀酸、酒石酸、硫代氰酸、对-甲苯磺酸盐和十一烷酸盐等，优选酒石酸、柠檬酸、乙二酸、马来酸、琥珀酸、柠檬酸、苯磺酸。成盐后既不影响药效，又可进一步提高其溶解性；进一步优选为盐酸盐或马来酸盐。

进一步地，所述地胆草内酯化合物包括其异构体。

优选地，所述异构体为C₂-O化学键和/或C₇-C₁₁的异构体。

进一步地，所述的R₁为双键、羟甲基、甲基、羟基、含有1～5个碳原子的酰氧甲基中的一种，R₂为氢、乙基、含有1～5个碳原子的酰基中的一种。

进一步地，所述的R₁为双键、羟甲基、甲基、羟基或2,5-二羟基戊酰氧甲基；R₂为氢、2-甲基丙烯酰基、当归酰基或乙基，并且当R₂为当归酰基时，R₃为氢或羟基。

进一步地，C₇-C₁₁为双键时，R₁为羟基或羟甲基，R₂为2-甲基丙烯酰基、异戊烯酰基、或乙基，R₃为无取代基；

或C₇—C₁₁为单键时，R₁为甲基、甲基双键、2,5-二羟基戊酰氧甲基或羟甲基，R₂为氢、当归酰基或2-甲基丙烯酰基，R3为无取代基、氢或羟基。

进一步地，本发明通式I为包括下列地胆草内酯B-K的化合物的总和。

根据本发明的提取方法，发明人从地胆草中分离出新的地胆草内酯(elephantopinolide D以及B-K)，其中地胆草内酯B-K均为新化合物，命名是申请人根据文献命名规则命名的，其结构与功效未报道，但其功效与本发明所述化合物截然不同。

(B——K的化学式)

取代基情况如下表：

表1地胆草内酯A-K的取代基列表

本发明化合物较已有同类化合物的溶解性有所改善，这不但降低了其制药难度，更有助于提高其生物利用度，从而在保证疗效的前提下可减少服用/使用量，减小毒副作用。

本发明的目的还在于提供通式Ⅰ化合物的制备方法，该方法为：用有机溶剂提取地胆草属植物的花、根、茎叶或全草，提取物用水分散后用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯部分，回收溶剂，得到的萃取物经过柱层析后得到通式Ⅰ化合物。

所述的地胆草属植物包括地胆草、白花地胆草等。本发明优选以地胆草(学名：Elephantopus scaber L.)为提取原料，药用部位优选为全草。

上述的有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮、***及乙酸乙酯中的一种，优选甲醇、乙醇或丙酮。考虑到安全性和成本问题等因素，进一步优选为浓度50-95％乙醇，最优选为浓度90-95％乙醇。提取方法为冷浸或热回流提取法。

上述制备方法进一步为：用浓度为50-95％的低级醇提取地胆草属植物的花、根、茎叶或全草，提取物用水分散后依次用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯部分，回收乙酸乙酯，得到的萃取物过层析柱分离得到通式Ⅰ化合物，该通式Ⅰ化合物再经过制备液相色谱及半制备液相色谱可得到高纯度单体化合物，所述的高纯度是指纯度不低于98％。

所述的低级醇包括甲醇和乙醇。所述的制备液相色谱(prepHPLC)，如，色谱柱Daisogel-C₁₈-100A(10μm；250×30mm；20mL/min)，流动相为55～65％的CH₃OH，优选流动相为60％的CH₃OH；半制备液相色谱(semi-prepHPLC)，如YMC-Pack ODS-A column(5μm；250×10mm；2mL/min)，以60％-90％(0-35min)的CH₃OH-H₂O 为流动相进行梯度洗脱。

所述萃取的步骤中，提取物加4-6倍量的水进行分散，水相与有机相的体积比为(1:3) ～(3:1)，优选为1:1；萃取以上下两层均澄清为终点，萃取次数为1～5次。溶剂回收方法为本领域常规方法。

所述得到的通式(I)化合物为有效部位，该有效部位中约含有通式(I)化合物40～50％。

上述的柱层析包括：所述萃取物首先采用硅胶柱层析分离，用二氯甲烷-丙酮(100:1, 40:1,20:1)进行梯度洗脱，收集20:1部分，回收溶剂至干，再采用凝胶柱层析进行纯化，以甲醇、二氯甲烷-甲醇(3:1)或丙酮为洗脱剂洗脱，收集洗脱液，回收溶剂至干，得到通式(I)化合物，优选以丙酮为洗脱剂。

上述以二氯甲烷-丙酮(100:1,40:1,20:1)梯度洗脱的环节，还可以采用石油醚-丙酮 (20:1,6:1,3:1)进行梯度洗脱，收集3：1的部分，凝胶柱纯化的方法不变。

所述的硅胶柱层析，选用为粒径200～300目的柱层析硅胶，上样量为6.7％～10％，即上样量与硅胶重量比为(1:10)～(1:15)，梯度洗脱时，每个浓度洗脱液优选洗脱3～5柱体积。

所述的凝胶柱层析，上样量为2％～2.5％，即上样量与硅胶重量比为(1:40)～(1:50)，洗脱7～8柱体积，根据具体情况，选择收集第3～5个柱体积洗脱液。

因柱层析过程中影响流份的因素较多，所以，该过程中优选通过薄层检测法(TLC)来确定所需流份。即，通过薄层检测吉玛烷型倍半萜，254nm下有暗斑，5％浓硫酸显色 (95℃烘5分钟)后显淡黄点。

本发明尤其提供了所述通式Ⅰ化合物在制备抗炎药物中的应用，特别是在制备与NO 相关的抗炎症药物中的应用。所述炎症尤其指神经细胞相关炎症，对应老年痴呆症，尤其是阿尔茨海默病。

本发明的另一个目的在于，提供一种抗炎的药物组合物，该组合物由有效剂量的本发明所述化合物及药学上可接受的辅料制成。所述的有效量是指5～50mg/天，所述的药学上可接受的辅料，是指为制成适用于人类或动物使用的任何药物剂型所需的辅料，如制成口服固体制剂时，药学上可接受的辅料指稀释剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂；制成注射液时，药学上可接受的辅料指pH调节剂、助溶剂、抗氧剂、等渗剂等。

再次重申：以下实验只是本发明研发过程中众多实验中的举例性实验，并未涵盖和穷尽了发明人为本发明所做的所有实验，目的仅仅在于用那些数据来阐述本发明化合物的抗抑郁活性。

具体实施方式

化合物对脂多糖诱导的抗炎活性

1、实验材料

药品及试剂：二甲基亚砜(DMSO)，购于Fisher公司(HPLC级)；25％胰蛋白酶，购于Sigma公司；DMEM培养基(内含青链霉素)，购于美国Invitrogen公司；胎牛血清，购于Gibco公司；马血清，购于Hyclone公司；PBS购于Hyclone公司。

细胞及器械：RAW264.7细胞株(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)由中国医学科学院药用植物研究所齐云课题组惠赠，细胞培养瓶(Coring公司)，无菌96孔板，细胞计数板，载玻片，盖玻片，玻璃移液管，尼龙过滤器，不锈钢滤器，各种规格玻璃瓶、移液枪、枪头、枪头盒和离心管。

仪器：DHG-9070A电热恒温鼓风干燥箱(北京陆希科技有限公司)，MCO-15AC型 CO₂恒温细胞培养箱(日本SANYO公司)，ZHJH-C 1115B型超净工作台(上海智成分析仪器制造有限公司)，CKX41型倒置相差显微镜(日本OLYMPUS公司)，MQX200型酶标光度计(美国BioTek仪器有限公司)，Legend Micro 17R型高速低温离心机(美国Thermo 公司)，QL-901微型涡旋混合器(海门市其林贝尔仪器制造有限公司)，-80℃超低温冰箱 (美国Thermo公司)，KQ-250B型超声波清洗器(昆山市超声波仪器厂)，SSW-420-2S型恒温水浴锅(上海博迅有限公司)，CY50945型Locator液氮罐(美国Thermo公司)。

供试样品：本发明化合物地胆草内酯A～K(纯度:98％以上)，自制；

阳性药：***

2、实验方法

使用Griess试剂来检测细胞中的NO分泌水平。该方法是Green等在1982年提出。原理是NO在体内或水中易氧化生成NO₂ ^-，在酸性条件下可以和重氮盐磺胺发生Griess反应生成重氮化合物。该类化合物可以进一步发生显色反应，在540nm处有最大吸收峰。OD值和NO的浓度成线形关系。

在体外实验中，使用RAW264.7细胞来进行实验。细胞培养在塑料培养皿中，使用DMEM培养基加10％体积的FBS(胎牛血清)，在37℃，5％CO₂的条件下进行培养。细胞在培养皿中，不使用E酶，枪头吹打下来，因RAW细胞较小，数量较多，因此稀释以后，使用计数板计数。然后按照2×10⁴每孔在96孔板上种板。在37℃，5％CO₂的培养箱中培养 24h，使细胞贴壁完全。

先加入不同浓度的药物，然后加入1μg/mL的LPS诱导炎症的发生。共培养24h后。取上清液50μL至新的96孔板中加入同体积的Griess试剂，孵育10min，在酶标仪上进行 NO含量的检测。波长使用540nm。NO的含量使用预先用亚硝酸钠测定的标准曲线进行浓度计算。每种药物测3次。

抑制率通过以下公式计算：

抑制率％＝(OD对照－OD样品)/OD对照×100。

3、实验结果

表2 RAW264.7细胞株模型抗炎性能

实验结果如表2所示，本发明所述通式Ⅰ中的化合物：B～K能显著抑制LPS诱导的NO的产生，虽未达到公认活性最强的***的效果，但已与之接近，且绝大部分内酯(B-C、F-I、K)的抗炎活性也优于DET。因此通式I所公布的A-K化合物均具有优异的抗NO途径的炎症反应。

进一步神经炎症细胞模型验证：

将上述试验中RAW264.7细胞株替换为BV-2细胞株(小鼠小胶质细胞)，购自国家实验细胞资源共享服务平台。

再次进行NO分泌水平的相关检测，如表3所示：

表3 BV-2神经细胞的抗炎模型

由表3显示，BV-2细胞株属于小鼠小胶质细胞，其炎症反应常常与神经类细胞疾病相关，例如阿尔茨海默病等，并且在LPS刺激炎症反应过程中，相较与DET和elephantopinolide D已知化合物，化合物B-K也显示其卓越的抗炎活性，且优于DET和elephantopinolide D化合物的抗炎活性，因此新的化合物抗炎活性从RAW和BV-2细胞模型的炎症检测上，均优于DET和elephantopinolide D的抗炎表现，因此具有了进一步开发新的有效新药的潜力。

实施例1：

通式(I)化合物(总内酯)的制备：

取干燥的地胆草(Elephantopus scaber)全草20kg用10倍量的95％乙醇回流提取3次，每次3小时，合并提取液，回收乙醇，得干浸膏1400g，提取物(干浸膏)用约5L 30％乙醇溶解，进行大孔树脂HP-20柱色谱分离，依次用等体积的50％，90％的乙醇-水梯度洗脱，各洗脱3个柱体积，收集90％乙醇部位，回收溶剂，得到的90％乙醇部位127g。将90％乙醇部位用硅胶柱(200-300目的柱层析硅胶，样品与硅胶质量比为1:10)层析纯化，用石油醚-丙酮(5:1,3:1,)进行梯度洗脱，每个梯度洗脱4个柱体积，收集石油醚-丙酮(3:1) 洗脱液，回收溶剂，得到通式(I)化合物的粗提物。该粗提取再采用MCI柱色谱(样品与凝胶质量比为1:10)进行分离，以90％甲醇洗脱，洗脱5个柱体积，收集90％甲醇洗脱液，回收溶剂，得到通式(I)总内酯32g。

实施例2：

通式(I)化合物(总内酯)的制备：

取干燥的地胆草(E.scaber)全草9.0kg用10倍量的95％乙醇冷浸提取3次，每次 2天，合并提取液，回收乙醇，得干浸膏270g，提取物(干浸膏)用加约2.5L水分散，加两倍体积的乙酸乙酯萃取，萃取5次，取乙酸乙酯部分，回收溶剂，得到的乙酸乙酯萃取物35g。将乙酸乙酯萃取物用硅胶柱(200-300目的柱层析硅胶，样品与硅胶质量比为1:15)层析纯化，用石油醚-丙酮(5:1,3:1)进行梯度洗脱，每个梯度洗脱5个柱体积，收集石油醚-丙酮(3:1)洗脱液，回收溶剂，得到通式(I)化合物的粗提物。该粗提取再采用MCI柱色谱(样品与MCI填料质量比为1:10)进行分离，以90％甲醇洗脱，洗脱5个柱体积，收集90％甲醇洗脱液，回收溶剂，得到通式(I)总内酯6.8g。

实施例3：

与实施例1不同之处在于，被提取物为白花地胆草(Elephantopus tomentosus)，药用部位为全草，所用溶剂为甲醇。得到通式(I)总内酯30g。

实施例4：

与实施例2不同之处在于，被提取物为白花地胆草(Elephantopus tomentosus)，药用部位为全草，所用溶剂为丙酮。得到通式(I)总内酯7.5g。

实施例5：

elephantopinolide D的制备：

实施例1所得总内酯再分别采用prepHPLC(50％CH₃OH)和semi-prepHPLC(35％CH₃CN等度洗脱)制备，得到化合物elephantopinolide D。

elephantopinolide D的理化数据如下：白色粉末，[α]2D0-133.7(c 0.41MeOH)；UV (MeOH)λ_max:218nm,IR(neat)ν_max:3489，2931，1755，1735，1649，1389，1350，1233，1147cm^-1；HRESI-MS(pos.):m/z 374.1366[M+H]⁺(cald for C₂₀H₂₃O₇,375.1444)。

以核磁共振法确认该化合物结构：¹H-NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ：7.26(1H,s,H-1),5.51(1H,m,H-2),2.74(2H,m,H-3a,9a),3.07(1H,m,H-3b),4.31(1H,d,J＝10.4Hz,H-5),5.78(1H,d,J＝10.4Hz,H-6),5.12(1H,dd,J＝2.1,11.4Hz,H-8),3.30(1H,m,H-9b),4.39(2H,s,H-13),1.86(3H,d,J＝1.5Hz,H-14),1.95(3H,s,H-18),6.26(1H,m,H-19),2.01(3H,s,H-20)；¹³C-NMR(125MHz,DMSO-d₆)δ：156.6(C-1),82.8(C-2),41.2(C-3),135.6(C-4),131.9(C-5),79.9(C-6),166.6(C-7),70.3(C-8),33.1(C-9),129.2(C-10),130.1(C-11),175.1 (C-12),54.2(C-13),20.6(C-14),174.8(C-15),167.6(C-16),127.8(C-17),19.6(C-18),141.9 (C-19),16.1(C-20)。

实施例6：

地胆草内酯B(elephscabertopin B)的制备：

实施例1所得总内酯再分别采用prepHPLC(50％CH₃OH)和semi-prepHPLC(35％CH₃CN等度洗脱)制备，得到化合物地胆草内酯B。

地胆草内酯B(elephscabertopin B)的理化数据如下：白色粉末，[α]2D0-98.0(c＝0.20 MeOH)；UV(MeOH)λ_max:215nm,IR(neat)ν_max:2931，1749，1716，1630，1388，1314，1152，1015cm^-1；HRESI-MS(pos.):m/z 361.1286[M+H]⁺(cald for C₁₉H₂₁O₇,361.1287)。

以核磁共振法确认该化合物结构：¹H-NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ：7.29(1H,s,H-1),5.54(1H,m,H-2),2.77(2H,m,H-3a,9a),3.10(1H,dd,J＝2.1,12.9Hz,H-3b),4.33(1H,d, J＝10.4Hz,H-5),5.78(1H,1H,d,J＝10.4Hz,H-6),5.17(1H,1H,dd,J＝2.1,11.4Hz,H-8),3.40(1H,dd,J＝11.4,12.9Hz,H-9b),4.41(2H,s,H-13),1.89(3H,d,J＝1.6Hz,H-14),2.00(3H,s,H-18),5.75(1H,m,H-19a),6.26(1H,t,J＝1.2Hz,H-19b)；¹³C-NMR(125MHz, DMSO-d₆)δ：156.6(C-1),82.8(C-2),41.3(C-3),135.6(C-4),131.9(C-5),79.9(C-6),166.2 (C-7),70.8(C-8),33.1(C-9),129.1(C-10),130.5(C-11),175.0(C-12),54.3(C-13),19.6(C-14),174.7(C-15),167.4(C-16),136.9(C-17),18.3(C-18),127.5(C-19)。

实施例7：

地胆草内酯C(elephscabertopin C)的制备：

实施例1所得总内酯再分别采用prepHPLC(50％CH₃OH)和semi-prepHPLC(35％CH₃CN等度洗脱)制备，得到化合物地胆草内酯C。

地胆草内酯C(elephscabertopin C)的理化数据如下：白色粉末，[α]2D0-76.7(c＝0.09 MeOH)；UV(MeOH)λ_max:215nm,IR(neat)ν_max:3494，2925，1752，1711，1650，1440，1389，1256，1127，1015cm^-1；HRESI-MS(pos.):m/z 374.1366[M+H]⁺(cald for C₂₀H₂₃O₇,375.1444)。

以核磁共振法确认该化合物结构：¹H-NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ：7.25(1H,s,H-1),5.50(1H,m,H-2),2.73(2H,m,H-3a,9a),3.06(1H,dd,J＝1.9,12.9Hz,H-3b),4.30(1H,d, J＝10.4Hz,H-5),5.75(1H,1H,d,J＝10.4Hz,H-6),5.11(1H,dd,J＝2.1,11.4Hz,H-8),3.36(1H,dd,J＝11.4,12.9Hz,H-9b),4.36(2H,s,H-13),1.85(9H,m,H-14,19,20)；¹³C-NMR(125MHz,DMSO-d₆)δ：156.6(C-1),82.8(C-2),41.3(C-3),135.6(C-4),131.9(C-5),79.9(C-6),166.6(C-7),70.6(C-8),33.1(C-9),129.2(C-10),130.3(C-11),175.0(C-12),54.3(C-13),19.6(C-14),174.7(C-15),168.0(C-16),128.8(C-17),140.5(C-18),14.6(C-19),12.0 (C-20)。

实施例8：

地胆草内酯D(elephscabertopin D)的制备：

实施例1所得总内酯再分别采用prepHPLC(48％CH₃OH)和semi-prepHPLC(20％CH₃CN等度洗脱)制备，得到化合物地胆草内酯D。

地胆草内酯D(elephscabertopin D)的理化数据如下：白色晶体(甲醇)，[α]2D0+122.5 (c 0.20,MeOH)；UV(MeOH)λ_max:218nm,IR(neat)ν_max:3474，2936，1753，1750，1439，1325，1201，1099，1006cm^-1；HRESI-MS(pos.):m/z 279.1223[M+H]⁺(calcd for C₁₅H₁₉O₅,279.1232)。

以核磁共振法确认该化合物结构：¹H-NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ：7.45(1H,s,H-1),5.42(1H,d,J＝4.8Hz,H-2),2.33(1H,dd,J＝5.0,14.4Hz,H-3a),2.67(1H,dd,J＝3.0,14.4Hz,H-3b),4.68(1H,d,J＝10.2Hz,H-5),4.84(1H,t,J＝10.2Hz,H-6),1.95(1H,ddd,J＝5.0, 10.2,12.3Hz,H-7),3.41(1H,m,H-8),2.30(1H,t,J＝12.4Hz,H-9a),2.60(1H,dd,J＝4.4, 12.4Hz,H-9b),2.79(1H,m,H-11),1.16(3H,d,J＝6.8Hz,H-13),1.64(3H,d,J＝1.5Hz, H-14),5.40(1H,d,J＝4.7Hz,8-OH)；¹³C-NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ：150.2(C-1),79.4(C-2),39.5(C-3),135.7(C-4),123.9(C-5),78.6(C-6),55.6(C-7),70.8(C-8),33.7(C-9), 130.4(C-10),38.0(C-11),178.6(C-12),15.8(C-13),20.9(C-14),174.8(C-15)。

实施例9：

地胆草内酯E(elephscabertopin E)的制备：

实施例1所得总内酯再分别采用prepHPLC(48％CH₃OH)和semi-prepHPLC(22％CH₃CN等度洗脱)制备，得到化合物地胆草内酯E。

地胆草内酯E(elephscabertopin E)的理化数据如下：白色粉末，[α]2D0+3.7(c0.41, MeOH)；UV(MeOH)λ_max:218nm,IR(neat)ν_max:3463，2936，1755，1751，1647，1487，1245，1204，1078，1009cm^-1；HRESI-MS(pos.):m/z 279.1231[M+H]⁺(calcd for C₁₅H₁₉O₅,279.1232)。

以核磁共振法确认该化合物结构：¹H-NMR(500MHz,Methanol-d₄)δ：7.22(1H,s, H-1),5.50(1H,m,H-2),2.69(1H,dt,J＝13.4Hz,H-3a),2.78(1H,dd,J＝4.9,13.4Hz, H-3b),4.70(1H,d,J＝10.2Hz,H-5),4.76(1H,dd,J＝9.0,10.2Hz,H-6),2.15(1H,ddd,J＝ 6.9,9.0,11.9Hz,H-7),3.86(1H,m,H-8),2.79(1H,m,H-9a),2.62(1H,dt,J＝10.6,12.7Hz, H-9b),2.89(1H,m,H-11),1.38(3H,d,J＝6.9Hz,H-13),1.77(3H,d,J＝1.5Hz,H-14)；¹³C-NMR(125MHz,Methanol-d₄)δ：154.9(C-1),83.0(C-2),41.6(C-3),135.3(C-4),135.7 (C-5),79.5(C-6),59.9(C-7),70.5(C-8),38.3(C-9),130.7(C-10),40.6(C-11),c,17.1(C-13),181.7(C-12),20.0(C-14),175.4(C-15)。

实施例10：

地胆草内酯F(elephscabertopin F)的制备：

实施例1所得总内酯再分别采用prepHPLC(53％CH₃OH)和semi-prepHPLC(35％CH₃CN等度洗脱)制备，得到化合物地胆草内酯F。

地胆草内酯F(elephscabertopin F)的理化数据如下：白色粉末，[α]2D0+18.2(c0.11, MeOH)；UV(MeOH)λ_max:210nm,IR(neat)ν_max:3459，2930，1753，1750，1653，1476，1274，1209，1147，1028cm^-1；HRESI-MS(pos.):m/z 277.1081[M+H]⁺(calcd for C₁₅H₁₇O₅,277.1076)。

以核磁共振法确认该化合物结构：¹H-NMR(500MHz,CD₃OD)δ:7.24(1H,s,H-1),5.52(1H,m,H-2),2.70(1H,m,H-3a),2.80(1H,m,H-3b),4.80(1H,d,J＝10.1Hz,H-5), 4.77(1H,m,H-6),3.08(1H,m,H-7),3.93(1H,ddd,J＝2.7,5.8,10.5Hz,H-8),2.73(1H,m, H-9a),2.83(1H,m,H-9b),6.20(1H,dd,J＝1.5,3.3Hz,H-13a),6.34(1H,dd,J＝1.5,3.7Hz,H-13b),1.79(3H,d,J＝1.3Hz,H-14)；¹³C-NMR(125MHz,CD₃OD)δ:155.2(C-1),83.2 (C-2),41.5(C-3),136.7(C-4),135.2(C-5),80.1(C-6),54.2(C-7),70.9(C-8),38.1(C-9),130.6(C-10),136.5(C-11),172.7(C-12),126.9(C-13),20.0(C-14),175.3(C-15)。

实施例11：

地胆草内酯G(elephscabertopin G)的制备：

实施例1所得总内酯再分别采用prepHPLC(53％CH₃OH)和semi-prepHPLC(35％CH₃CN等度洗脱)制备，得到化合物地胆草内酯G。

地胆草内酯G(elephscabertopin G)的理化数据如下：白色粉末，[α]2D0+131.8(c0.11, MeOH)；UV(MeOH)λ_max:212nm,IR(KBr)ν_max:3448，2941，1749，1746，1650，1482， 1386，1260，1141，1093cm^-1；HRESI-MS(pos.):m/z 277.1076[M+H]⁺(calcd for C₁₅H₁₇O₅,277.1076)。

以核磁共振法确认该化合物结构：¹H-NMR(500MHz,CD₃OD)δ:7.38(1H,s,H-1),5.43(1H,d,J＝4.9Hz,H-2),2.46(1H,dd,J＝5.1,14.5Hz,H-3a),2.84(1H,dt,J＝1.5,14.5Hz,H-3b),4.95(1H,dt,J＝1.4,10.4Hz,H-5),4.89(1H,d,J＝9.5Hz,H-6),3.03(1H,m, H-7),3.65(1H,ddd,J＝3.7,4.6,10.9Hz,H-8),2.68(1H,m,H-9a),2.74(1H,dd,J＝4.6,12.6Hz,H-9b),6.04(1H,dd,J＝1.4,3.4Hz,H-13a),6.29(1H,dd,J＝1.4,3.8Hz,H-13b),1.74(1H,d,J＝1.5Hz,H-14)；¹³C-NMR(125MHz,CD₃OD)δ:151.4(C-1),81.5(C-2),40.9(C-3),138.0(C-4),125.4(C-5),81.3(C-6),52.2(C-7),73.8(C-8),34.4(C-9),132.7(C-10),135.9 (C-11),172.5(C-12),125.7(C-13),21.3(C-14),177.3(C-15)。

实施例12：

地胆草内酯H(elephscabertopin H)的制备：

实施例1所得总内酯再分别采用prepHPLC(60％CH₃OH)和semi-prepHPLC(40％CH₃OH等度洗脱)制备，得到化合物地胆草内酯H。

地胆草内酯H(elephscabertopin H)的理化数据如下：白色粉末，[α]2D0-22.7(c0.34, MeOH)；UV(MeOH)λ_max:207nm,IR(KBr)ν_max:3387，2932，1765，1754，1639，1447， 1367，1315，1154，1039cm^-1；HRESI-MS(pos.):m/z 479.1927[M+H]⁺(calcd for C₂₄H₃₁O₁₀,479.1917)。

以核磁共振法确认该化合物结构：¹H-NMR(600MHz,CD₃OD)δ：7.35(1H,s,H-1),5.54(1H,m,H-2),2.75(1H,d,J＝12.7Hz,H-3a),2.79(1H,d,J＝4.5Hz,H-3b),4.80(1H,d,J＝10.7Hz,H-5),5.07(1H,dd,J＝9.1,10.7Hz,H-6),2.80(1H,m,H-7),5.19(1H,ddd,J＝2.6,7.1,11.0Hz,H-8),2.72(1H,dd,J＝1.9,12.7Hz,H-9a),2.86(1H,dd,J＝11.0,12.7Hz,H-9b),3.27(1H,ddd,J＝4.3,10.4,12.1Hz,H-11),3.59(1H,dd,J＝4.3,13.0Hz,H-13a),3.68(1H,m,H-13b),1.82(3H,d,J＝1.4Hz,H-14),2.02(3H,s,H-18),5.82(1H,m,H-19a),6.23(1H,t,J＝1.2Hz,H-19b),3.95(1H,dd,J＝5.1,9.2Hz,H-21),2.23(1H,m,H-22a),2.36(1H,m,H-22b),1.97(1H,m,H-23a),2.09(1H,m,H-23b),2.94(1H,m,H-24a),3.82(1H, ddd,J＝3.8,7.3,11.2Hz,H-24b)；¹³C-NMR(150MHz,CD₃OD)δ：156.2(C-1),83.1(C-2), 41.6(C-3),137.4(C-4),134.1(C-5),80.0(C-6),53.0(C-7),72.0(C-8),34.2(C-9),129.2 (C-10),41.7(C-11),177.5(C-12),56.4(C-13),20.0(C-14),174.7(C-15),167.0(C-16),137.8 (C-17),18.7(C-18),127.4(C-19),173.0(C-20),72.8(C-21),30.0(C-22),25.0(C-23),55.4 (C-24)。

实施例13：

地胆草内酯I(elephscabertopin I)的制备：

实施例1所得总内酯再分别采用prepHPLC(60％CH₃OH)和semi-prepHPLC(40％CH₃OH等度洗脱)制备，得到化合物地胆草内酯I。

地胆草内酯I(elephscabertopin I)的理化数据如下：白色粉末，[α]2D0-71.8(c0.22, MeOH)；UV(MeOH)λ_max:205nm,IR(neat)ν_max:3078，2944，1756，1710，1643，1448，1361，1226，1142，1049cm^-1；HRESI-MS(pos.):m/z 493.1927[M+H]⁺(calcd for C₂₅H₃₃O₁₀,479.1917)。

以核磁共振法确认该化合物结构：¹H-NMR(600MHz,CD₃OD)δ：7.35(1H,s,H-1),5.55(1H,m,H-2),2.75(1H,m,H-3a),2.79(1H,d,J＝4.7,13.4Hz,H-3b),4.81(1H,d,J＝10.3Hz,H-5),5.07(1H,dd,J＝9.1,10.3Hz,H-6),2.78(1H,m,H-7),5.20(1H,ddd,J＝2.6,7.0,11.0Hz,H-8),2.79(1H,m,H-9a),2.88(1H,d,J＝10.0Hz,H-9b),3.25(1H,ddd,J＝4.3,10.4,12.2Hz,H-11),3.52(1H,dd,J＝4.3,13.0Hz,H-13a),3.69(1H,dd,J＝10.4,13.0Hz,H-13b),1.82(3H,d,J＝1.4Hz,H-14),2.00(3H,t,J＝1.7Hz,H-18),6.29(1H,m,H-19),2.06(3H,dt,J＝1.6,7.3Hz,H-20),3.95(1H,dd,J＝5.1,9.2Hz,H-22),2.25(1H,m,H-23a),2.37(1H,m,H-23b),1.99(1H,m,H-24a),2.10(1H,m,H-24b),2.92(1H,m,H-25a),3.86(1H,m, H-25b)；¹³C-NMR(150MHz,CD₃OD)δ：156.4(C-1),83.1(C-2),41.6(C-3),137.4(C-4), 134.2(C-5),80.0(C-6),52.9(C-7),71.6(C-8),34.4(C-9),129.3(C-10),41.8(C-11),177.4(C-12),56.4(C-13),20.0(C-14),174.7(C-15),167.5(C-16),128.3(C-17),20.9(C-18),141.2 (C-19),16.3(C-20),172.9(C-21),72.9(C-22),30.0(C-23),25.0(C-24),55.4(C-25)。

实施例14：

地胆草内酯J(elephscabertopin J)的制备：

实施例1所得总内酯再分别采用prepHPLC(63％CH₃OH)和semi-prepHPLC(35％CH₃CN等度洗脱)制备，得到化合物地胆草内酯J。

地胆草内酯J(elephscabertopin J)的理化数据如下：白色粉末，[α]2D0+106.2(c0.29, MeOH)；UV(MeOH)λ_max:216nm,IR(neat)ν_max:3460，2957，1706，1754，1669，1452，1321，1166，1053，1011cm^-1；HRESI-MS(pos.):m/z 393.1546[M+H]⁺(calcd for C₁₆H₁₉O₆,393.1549)。

以核磁共振法确认该化合物结构：¹H-NMR(500MHz,CD₃OD)δ：7.43(1H,s,H-1),5.46(1H,d,J＝4.7Hz,H-2),2.48(1H,dd,J＝4.8,14.5Hz,H-3a),2.90(1H,m,H-3b),4.96(1H,m,H-5),5.32(1H,t,J＝10.2Hz,H-6),2.86(1H,d,J＝5.9,10.2Hz,H-7),5.13(1H,ddd,J＝4.3,6.0,10.9Hz,H-8),2.67(1H,dd,J＝4.5,12.6Hz,H-9b),2.91(1H,m,H-9b),3.87(2H, s,H-13),1.82(3H,d,J＝1.6Hz,H-14),6.11(1H,s,H-18),1.99(3H,m,H-19),1.94(3H,m, H-20)；¹³C-NMR(125MHz,CD₃OD)δ：151.6(C-1),81.4(C-2),41.2(C-3),138.8(C-4),125.0(C-5),79.4(C-6),49.6(C-7),71.3(C-8),31.7(C-9),131.8(C-10),79.8(C-11),177.6 (C-12),62.4(C-13),21.3(C-14),176.7(C-15),168.1(C-16),129.2(C-17),138.8(C-18),15.9 (C-19),20.9(C-20)。

实施例15：

地胆草内酯K(elephscabertopin K)的制备：

实施例1所得总内酯再分别采用prepHPLC(63％CH₃OH)和semi-prepHPLC(35％CH₃CN等度洗脱)制备，得到化合物地胆草内酯K。

地胆草内酯K(elephscabertopin K)的理化数据如下：白色粉末，[α]2D0-26.3(c0.16, MeOH)；UV(MeOH)λ_max:225nm,IR(neat)ν_max:3067，2972，1753，1742，1674，1444，1336，1256，1133，1080，1013cm^-1；HRESI-MS(pos.):m/z 307.1184[M+H]⁺(calcd forC₁₆H₁₈O₆,307.1182)。

以核磁共振法确认该化合物结构：¹H-NMR(500MHz,CD₃OD)7.36(1H,s,H-1),5.37(1H,m,H-2),2.35(1H,dd,J＝4.5,14.7Hz,H-3a),2.84(1H,m,H-3b),4.45(1H,m,H-5),5.69(1H,d,J＝9.1Hz,H-6),3.75(1H,d,J＝4.6,11.2Hz,H-8),2.81(1H,m,H-9a),3.11(1H,m,H-9b),1.76(3H,d,J＝1.5Hz,H-13),3.46(1H,m,H-15a),3.53(1H,m,H-15b),1.23(3H,d,J＝7.0Hz,H-16)；¹³C-NMR(125MHz,CD₃OD)δ：151.0(C-1),81.2(C-2),40.4(C-3), 135.6(C-4),124.6(C-5),79.2(C-6),131.8(C-7),78.4(C-8),29.8(C-9),132.7(C-10),142.0(C-11),171.2(C-12),21.2(C-13),176.2(C-14),65.5(C-15),15.5(C-16)。

以上样品均可获得含量在HPLC98以上的纯品。

本发明不局限于上述实施方式，任何人在本发明的启示下得出的其他任何与本发明相同或相近似的产品，均不排除在本发明的保护范围之外。