一种自乳化递送系统在制备治疗淋巴转移肿瘤的口服药物中的应用
阅读说明：本技术 一种自乳化递送系统在制备治疗淋巴转移肿瘤的口服药物中的应用 (Application of self-emulsifying delivery system in preparation of oral medicine for treating lymphatic metastasis tumor ) 是由 陈晓光 刘玉玲 叶军 杨艳芳 高越 季鸣 刘东东 冯遇 李仁杰 徐晓燕 廖恒锋 于 2021-07-12 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种自乳化递送系统在制备治疗淋巴转移肿瘤的口服药物中的应用,所述自乳化递送系统包括油相、乳化剂、助乳化剂和免疫调节剂脂质材料复合物。本发明所涉及的自乳化递送系统为一种主要由油相、乳化剂和助乳化剂组成的脂质载体,口服后可被胃肠液稀释乳化成水包油型(o/w)纳米乳,通过淋巴转运途径靶向聚集于肠系膜淋巴结内,激活肠系膜淋巴结内的免疫细胞,最终发挥抗肿瘤(尤其是淋巴转移肿瘤)的免疫效应。该自乳化递送系统不仅可以提高患者的顺应性,对于经淋巴转移的肿瘤尤其是对肿瘤免疫治疗敏感的肿瘤更具治疗优势。(The invention relates to an application of a self-emulsifying delivery system in preparing an oral medicament for treating lymphatic metastasis tumor, wherein the self-emulsifying delivery system comprises an oil phase, an emulsifier, a co-emulsifier and an immunomodulator lipid material compound. The self-emulsifying delivery system is a lipid carrier mainly composed of an oil phase, an emulsifying agent and an auxiliary emulsifying agent, can be diluted by gastrointestinal fluid and emulsified into an oil-in-water (o/w) nano-emulsion after being taken orally, is targeted and gathered in mesenteric lymph nodes through a lymph transport path, activates immune cells in the mesenteric lymph nodes, and finally exerts the immune effect of resisting tumors (particularly lymphatic metastasis tumors). The self-emulsifying delivery system can not only improve the compliance of patients, but also has more treatment advantages on tumors which are transferred by lymph, especially tumors which are sensitive to tumor immunotherapy.)
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，涉及一种自乳化递送系统的制药新用途，具体涉及一种自乳化递送系统在制备治疗淋巴转移肿瘤的口服药物中的应用。
背景技术
肿瘤转移是指肿瘤细胞从原发灶脱落，经淋巴管或血管等迁移至其他部位继续生长的过程，是导致肿瘤患者死亡的最主要原因。肿瘤细胞的转移往往具有一定方向性，像“种子”一样，向着更适合其生长的微环境进行选择性迁移。例如，乳腺癌易发生肺、骨和脑转移，结肠癌易发生肺和肝转移，胰腺癌易发生肝转移。肿瘤转移主要分为血行转移和淋巴转移两种途径。与经血管转移相比，恶性肿瘤更易借助淋巴系统发生转移，淋巴系统因此成为许多实体瘤(如黑色素瘤、乳腺癌等)扩散的主要途径。其主要原因为：(1)与血管结构相比，淋巴管的内皮细胞间连接较松散，基底膜不够完整，使得肿瘤细胞更易进入淋巴管；(2)淋巴液流速慢，使得肿瘤细胞在淋巴系统中更易存活；(3)无血清的淋巴环境使得细胞在淋巴液中有着更高的活力。
手术切除、化疗、放疗以及肿瘤免疫疗法是目前肿瘤治疗的四大主流疗法。但当肿瘤发生转移时，可能会有多个转移灶(如淋巴结转移)，通过手术切除和放疗很难根除所有的转移灶，同时对患者损害较大。而系统给药的化疗药物或免疫治疗药物往往驻留在血液或脏器中，很难进入淋巴系统，严重影响对淋巴转移灶的治疗效果。因此，抑制肿瘤的淋巴转移成为现今肿瘤治疗领域的研究重点之一。对于咖啡酰奎宁酸类免疫调节剂，如绿原酸，口服给药难以发挥良好的肿瘤免疫治疗效果，临床上只能采取注射给药。但注射给药对T细胞、DC细胞、巨噬细胞等免疫细胞的刺激作用并不十分理想，因此，临床上需要长时间的频繁注射，连续数月、每日一次的肌肉注射，导致患者顺应性差，限制了临床治疗与应用。
与侵入式的注射给药相比，口服给药具有优异的顺应性。但咖啡酰奎宁酸类免疫调节剂，口服给药难以发挥良好的免疫治疗效果。按照本领域人员认知，即使通过促吸收技术增加生物利用度，也远远达不到注射给药的效果，无法获得可用于临床治疗的口服制剂。对于免疫调节类活性成分，采用特定的纳米递送工具，在提高口服吸收的同时，还实现在肠道激活T细胞等免疫细胞功能、增强免疫治疗效果，发展可用于通过淋巴转移肿瘤的口服制剂的制备。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种自乳化递送系统的制药新用途，具体提供一种包含油相、乳化剂、助乳化剂和免疫调节剂脂质材料复合物的自乳化递送系统在制备治疗淋巴转移肿瘤的口服药物中的应用。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
本发明提供一种自乳化递送系统在制备治疗淋巴转移肿瘤的口服药物中的应用，所述自乳化递送系统包括油相、乳化剂、助乳化剂和免疫调节剂脂质材料复合物。
本发明所涉及的自乳化递送系统为一种主要由油相、乳化剂和助乳化剂组成的脂质载体，口服后可被胃肠液稀释乳化成水包油型(o/w)纳米乳，通过淋巴转运途径靶向聚集于肠系膜淋巴结内，激活肠系膜淋巴结内的免疫细胞，最终发挥抗肿瘤(尤其是淋巴转移肿瘤)的免疫效应。该自乳化递送系统不仅可以提高患者的顺应性，对于经淋巴转移的肿瘤尤其是对肿瘤免疫治疗敏感的肿瘤更具治疗优势。
优选地，所述淋巴转移肿瘤为可通过激活淋巴系统和/或淋巴器官中的免疫细胞获得治疗的肿瘤。
优选地，所述免疫细胞包括DC细胞、T细胞、B细胞、NK细胞或巨噬细胞中的任意一种或至少两种的组合。
所述至少两种的组合例如DC细胞和T细胞的组合、B细胞和NK细胞的组合、NK细胞和巨噬细胞的组合等，其他任意的组合方式均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述淋巴转移肿瘤包括脑胶质瘤、肺癌或白血病。
所述脑胶质瘤是中枢神经系统中最常见且致命的原发性恶性肿瘤，其5年相对生存率低于5％，且最终都会复发。脑胶质瘤的常规疗法是手术切除后辅以放疗并联合使用替莫唑胺化疗，效果仍不理想。传统手术的局限性主要是由于肿瘤的扩散浸润性，阻止了正常脑实质浸润细胞的完全切除，因此临床上亟需新的疗法来改善患者预后。
所述肺癌的发病率和死亡率在世界范围内均高居首位。由于肺癌的早期症状并不明显，多数患者被诊断时已发生局部扩散或远处转移，导致其预后较差。而传统疗法(手术、放疗和化疗)在控制晚期肺癌进展方面疗效有限。分子靶向治疗针对肺癌特定分子类型有疗效，但通常服用8-12个月出现获得性耐药。肿瘤免疫疗法，尤其是相关的免疫检查点抑制剂，在肺癌治疗领域进展飞快，适应证在国内外不断获批，具有优异的临床治疗前景。
所述白血病是造血干细胞在不同分化阶段由于分化障碍、凋亡受阻及克隆增生引起的血液系统恶性肿瘤，目前白血病的治疗方法有化疗、放射治疗、免疫治疗、靶向治疗、干细胞移植等。白血病在0-35岁中国人口恶性肿瘤发病率和死亡率中占据首位，随着治疗方法的发展，完全缓解率得到提高，但仍存在很高的复发率。白血病的免疫治疗基于可治愈疾病的细胞移植物对白血病的作用或者可以定义为使用宿主自身的细胞免疫力对抗潜在疾病，这可以通过增强宿主的免疫系统或抑制负调节剂来完成。随着免疫治疗的研究和发展,其所利用的免疫细胞及免疫路径越来越多，这使得白血病的临床疗效逐步提高。
所述脑胶质瘤、肺癌和白血病均具有很高的发病率和致死率，且预后较差，容易通过淋巴发生转移。
优选地，所述乳化剂包括聚乙二醇甘油酯、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、油酸聚乙二醇甘油酯或亚油酸聚乙二醇甘油酯中的任意一种或至少两种的组合；优选辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯。
与其他类型的乳化剂相比，以辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯作为乳化剂能够使得最终形成的自乳化递送系统具有更好的乳化效率、组织穿透性和安全性，进而使得自乳化递送系统在体内具有更好的吸收和更低的胃肠道刺激作用。
所述至少两种的组合例如聚乙二醇甘油酯和辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯的组合、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯和油酸聚乙二醇甘油酯的组合、油酸聚乙二醇甘油酯和亚油酸聚乙二醇甘油酯的组合等，其他任意的组合方式均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述助乳化剂包括碳酸丙二酯、乙二醇单乙基醚、甘油糠醛、二甲基异山梨酯、二乙二醇单乙基醚、PEG400、甘油或苯甲醇中的任意一种或至少两种的组合；优选二甲基异山梨酯和二乙二醇单乙基醚的组合。
所述至少两种的组合例如碳酸丙二酯和乙二醇单乙基醚的组合、甘油糠醛和二甲基异山梨酯的组合、甘油和苯甲醇的组合等，其他任意的组合方式均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述油相包括油酸乙酯、油酸山梨醇酯、油酸甘油酯，亚油酸甘油酯、1944cs、Maisine35-1、亚油酸乙酯、C8/C10甘油单酯、椰子油C8/C10甘油双酯、椰子油C8/C10甘油三酯、辛酸甘油三酯、辛酸甘油二酯、辛酸甘油单酯、癸酸甘油单酯、癸酸甘油二酯、癸酸甘油三酯、辛癸酸甘油单酯、辛癸酸甘油酯、辛癸酸甘油三酯、肉豆蔻酸异丙酯、亚油酸聚乙二醇甘油酯、Gelucire或Capryol 90中的任意一种或至少两种的组合；优选油酸乙酯、油酸山梨醇酯和油酸甘油酯的组合。
所述至少两种的组合例如油酸乙酯和油酸山梨醇酯的组合、油酸甘油酯和亚油酸甘油酯的组合、亚油酸乙酯和C8/C10甘油单酯的组合等，其他任意的组合方式均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述免疫调节剂脂质材料复合物由免疫调节剂和脂质材料组成，所述免疫调节剂与脂质材料的摩尔比为1:(0.25-8)，例如1:0.25、1:0.5、1:0.75、1:1、1:2、1:3、1:4、1:6、1:8等，该数值范围内的其他任意具体数值均可选择，在此便不再一一赘述。优选1:(0.25-4)。
优选地，所述免疫调节剂与脂质材料的复合率大于90％，例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％等，该数值范围内的其他任意具体数值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述免疫调节剂包括绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C或莱蓟素中的任意一种或至少两种的组合；优选绿原酸。
所述至少两种的组合例如绿原酸和新绿原酸的组合、隐绿原酸和异绿原酸A的组合、异绿原酸B和异绿原酸C的组合等，其他任意的组合方式均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述脂质材料包括大豆磷脂、蛋黄磷脂、磷脂酰甘油酯、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二肉蔻酰磷脂酰胆碱或神经酰胺中的任意一种或至少两种的组合；优选大豆磷脂和蛋黄磷脂的组合。
所述至少两种的组合例如大豆磷脂和蛋黄磷脂的组合、磷脂酰甘油酯和二硬脂酰磷脂酰胆碱的组合、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺和二肉蔻酰磷脂酰胆碱的组合等，其他任意的组合方式均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述自乳化递送系统中免疫调节剂含量为5-200mg/g，例如5mg/g、10mg/g、20mg/g、50mg/g、60mg/g、80mg/g、100mg/g、120mg/g、150mg/g、180mg/g、200mg/g等，该数值范围内的其他任意具体数值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述油相、乳化剂与助乳化剂的质量比为(1-5):(3-6):(2-6)。
其中，(1-5)中的具体取值可以为1、1、1、1、1等。
(3-6)中的具体取值可以为3、3.5、4、4.5、5、5.5、6等。
(2-6)中的具体取值可以为2、3、4、5、6等。
上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述药物还包括药学上可接受的辅料。
优选地，所述辅料包括载体、稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、乳化剂、助溶剂、增溶剂、渗透压调节剂、表面活性剂、包衣材料、着色剂、pH调节剂、抗氧剂、抑菌剂或缓冲剂中的任意一种或至少两种的组合。
所述至少两种的组合例如填充剂和粘合剂的组合、乳化剂和助溶剂的组合、渗透压调节剂和表面活性剂的组合、pH调节剂和抗氧剂的组合等，其他任意的组合方式均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述载体包括脂质体、胶束、树枝状大分子、微球或微囊。
在本发明中，所述自乳化递送系统是由包括如下步骤的制备方法制备得到的：
将油相、乳化剂、助乳化剂和免疫调节剂脂质材料复合物混合均匀，即得。
在本发明中，所述免疫调节剂脂质材料复合物是由包括如下步骤的制备方法制备得到的：
按配比称取免疫调节剂与脂质材料，溶于有机溶剂中，混匀，静置15-30min(例如15min、17min、20min、22min、25min、28min、30min等)，旋转蒸发或喷雾干燥去除有机溶剂，再减压干燥，即得。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
本发明所涉及的自乳化递送系统为一种主要由油相、乳化剂和助乳化剂组成的脂质载体，口服后可被胃肠液稀释乳化成水包油型(o/w)纳米乳，通过淋巴转运途径靶向聚集于肠系膜淋巴结内，激活肠系膜淋巴结内的免疫细胞，最终发挥抗肿瘤(尤其是淋巴转移肿瘤)的免疫效应。该自乳化递送系统不仅可以提高患者的顺应性，对于经淋巴转移的肿瘤尤其是对肿瘤免疫治疗敏感的肿瘤(例如白血病)更具治疗优势。
附图说明
图1是测试例1中各组小鼠的原位脑胶质瘤的体积结果图(其中A为核磁共振观察图，B为各组肿瘤体积的统计图)；
图2是测试例1中各组小鼠的肠系膜淋巴结内的CD40和CD86表达水平统计结果图；
图3是测试例1中各组小鼠的外周血内的CD40和CD86表达水平统计结果图；
图4是测试例1中各组小鼠的肠系膜淋巴结内的中央记忆型CD3+T细胞比例统计结果图；
图5是测试例1中各组小鼠的原位肿瘤内的免疫细胞分析统计结果图；
图6是测试例3中各组小鼠的肿瘤外观图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
以下测定绿原酸与脂质材料的复合率的方法为：
(1)对照品溶液：称取绿原酸标准品25mg至25ml容量瓶中，用乙醇溶液定容，精密量取1ml至50ml容量瓶中，用30％乙醇水定容，作为对照品溶液；
(2)W总：称取80mg绿原酸脂质材料复合物至25ml容量瓶中，用无水乙醇定容摇匀，精密量取1ml至50ml容量瓶中，用30％乙醇水溶液定容摇匀，作为供试品W总溶液；
(3)W复合：称取80mg绿原酸脂质材料复合物至25ml容量瓶中，用氯仿溶解后定容，用0.22μm滤膜过滤，精密量取续滤液1ml，氮吹挥干溶剂(氯仿)后，用30％乙醇水准确稀释至50mL，作为供试品W复合溶液。
在制得以上样品的基础上，采用以下HPLC条件进行测定：
流动相：0.4％磷酸:乙腈＝82:18(v/v)
检测波长：328nm
流速：1.0mL/min
柱温：25℃
进样量：10μL
停止时间：8min。
以下测定自乳化递送系统的粒径的方法为：取100μL自乳化递送系统加入到10mL纯化水中搅拌1分钟，采用激光粒度仪进行粒径。
以下测定自乳化递送系统的载药量的方法为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，Agilent SB-C18(4.6×250mm，5μm)；以1％冰醋酸：乙腈＝90:10(v:v)为流动相，检测波长为328nm；柱温为25℃；流速1mL/min；进样量：5μL；停止时间：15min。取自乳化递送系统样品833mg，精密称定，置10mL量瓶中，加甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀，精密量取1mL，置50mL量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，得到供试品溶液。另取绿原酸对照品10mg，精密称定，置10mL量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取1mL，置10mL量瓶中加溶剂稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液。测定供试品和对照品溶液，按外标法以峰面积计算样品含量。
以下所涉及的绿原酸购自四川九章生物科技有限公司。
以下所涉及的ICR和C57BL/6小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司。
以下所涉及的G422细胞、Lewis肺癌细胞、L1210白血病细胞均来自于北京协和医学院基础医学研究所国家细胞资源中心。
实施例1
本发明提供一种自乳化递送系统，其制备方法如下：
(1)以大豆卵磷脂为脂质材料，将绿原酸和大豆卵磷脂按照摩尔比1:1的药脂比进行投料，一同加入至1L的圆底烧瓶中，以无水乙醇为溶剂，使药物浓度控制在60mg/ml，待绿原酸和大豆卵磷脂全部溶解后，25℃放置15min，随后于旋转蒸发仪100rpm、40℃旋蒸减压干燥除去无水乙醇，待乙醇蒸干后，于25℃继续100rpm减压干燥1h将乙醇除干净，得到绿原酸脂质材料复合物。按照上述方法测定复合率为101.52％。
(2)按质量比2:5:3称取油酸乙酯、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯和二乙二醇单乙基醚，搅拌混合均匀，得到空白自乳化浓缩液。
(3)按照复合物与空白自乳化浓缩液的质量比为1.2:5将绿原酸脂质材料复合物加入至空白自乳化浓缩液中，并将其置于空气浴振荡器中，温度25℃，转速210rpm，得到所述自乳化递送系统。测定载药量为60mg/g，加水100倍稀释后测定粒径为60nm。
实施例2
本发明提供一种自乳化递送系统，其制备方法如下：
(1)以大豆卵磷脂为脂质材料，将绿原酸和大豆卵磷脂按照摩尔比1:2的药脂比进行投料，一同加入至1L的圆底烧瓶中，以无水乙醇为溶剂，使药物浓度控制在60mg/ml，待绿原酸和大豆卵磷脂全部溶解后，25℃放置15min，随后于旋转蒸发仪100rpm、40℃旋蒸减压干燥除去无水乙醇，待乙醇蒸干后，于25℃继续100rpm减压干燥1h将乙醇除干净，得到绿原酸脂质材料复合物。按照上述方法测定复合率为100.89％。
(2)按质量比3:4:3称取油酸乙酯、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯和二乙二醇单乙基醚，搅拌混合均匀，得到空白自乳化浓缩液。并在空白自乳化浓缩液中加入抗氧化剂维生素E(加入量为0.04％)。
(3)按照复合物与空白自乳化浓缩液的质量比为3.45:10将绿原酸脂质材料复合物加入至空白自乳化浓缩液中，并将其置于空气浴振荡器中，温度25℃，转速210rpm，得到所述自乳化递送系统。测定载药量为48mg/g，加水100倍稀释后测定粒径为100nm。
实施例3
本发明提供一种自乳化递送系统，其制备方法与实施例1的区别仅在于：将大豆卵磷脂替换为质量比2:1的大豆磷脂和蛋黄磷脂(脂质材料的总量保持不变)。其他条件均保持一致。测定载药量为60mg/g，加水100倍稀释后测定粒径为50nm。
实施例4
本发明提供一种自乳化递送系统，其制备方法与实施例1的区别仅在于：将二乙二醇单乙基醚替换为质量比1:1的二甲基异山梨酯和二乙二醇单乙基醚(助乳化剂的总量保持不变)。其他条件均保持一致。测定载药量为60mg/g，加水100倍稀释后测定粒径为60nm。
实施例5
本发明提供一种自乳化递送系统，其制备方法与实施例1的区别仅在于：将油酸乙酯替换为质量比5:2:1的油酸乙酯、油酸山梨醇酯和油酸甘油酯(油相的总量保持不变)。其他条件均保持一致。测定载药量为60mg/g，加水100倍稀释后测定粒径为70nm。
实施例6
本发明提供一种自乳化递送系统，其制备方法与实施例1的区别仅在于：将辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯替换为等量的亚油酸聚乙二醇甘油酯。其他条件均保持一致。测定载药量为60mg/g，加水100倍稀释后测定粒径为70nm。
测试例1
以原位接种脑胶质瘤的ICR小鼠为模型，构建方法为：雌性ICR小鼠用戊巴比妥钠麻醉，并置于立体定向仪器中。以10μL/min的速度将2×106个G422细胞注入脑。
将24只原位接种脑胶质瘤的ICR小鼠(雌性、18-20g)随机分成3组，每组8只，分别为模型组、CHA组和CHA-SME组。分别给予生理盐水、绿原酸(CHA，腹腔注射，20mg/kg/天，连续给药9天)和实施例1的样品(CHA-SME，口服，35mg/kg/天，连续给药9天)。给药结束采用核磁共振观察小鼠脑内的肿瘤大小以评价绿原酸自乳化递送系统的抗肿瘤效应。
实验结果如图1所示(其中A为核磁共振观察图，B为各组肿瘤体积的统计图)，绿原酸自乳化递送系统(CHA-SME)35mg/kg的剂量下可以显著抑制小鼠原位脑胶质瘤的生长。与模型组相比，绿原酸(CHA)和绿原酸自乳化递送系统(CHA-SME)的肿瘤体积分别缩小至54％和46％，说明绿原酸自乳化递送系统(CHA-SME)具有更强的肿瘤抑制效应。
对给药后小鼠体内的肠系膜淋巴结、外周血和原位肿瘤进行了免疫分析，主要包括DC和T细胞的分析。实验结果如图2和图3所示，在给予绿原酸自乳化递送系统(CHA-SME)后，与模型组相比，肠系膜淋巴结和外周血内的DC表面的特征成熟蛋白明显上调。如图2所示，与模型组相比，绿原酸自乳化递送系统(CHA-SME)组的肠系膜淋巴结内的CD40和CD86分别提高2.4和1.4倍，而绿原酸(CHA)组则未出现明显变化。此外绿原酸自乳化递送系统(CHA-SME)组肠系膜淋巴结内的CD86比绿原酸(CHA)组的高1.4倍。如图3所示，与模型组相比，绿原酸自乳化递送系统(CHA-SME)组的外周血内的CD40和CD86分别提高1.3和13.4倍，而绿原酸(CHA)组则未出现明显变化。除刺激DC成熟外，如图4所示，与模型组相比，绿原酸自乳化递送系统(CHA-SME)组的肠系膜淋巴结内的中央记忆型CD3+T细胞比例提高1.6倍，而绿原酸(CHA)组则未出现明显变化。
原位肿瘤内的免疫细胞分析结果如图5所示，与模型组和绿原酸(CHA)组相比，绿原酸自乳化递送系统(CHA-SME)组可以显著上调肿瘤组织内的T细胞(包括CD3+、CD4+、CD8+和记忆型T细胞)比例。与绿原酸(CHA)组相比，绿原酸自乳化递送系统(CHA-SME)组肿瘤组织内的CD3+、CD4+、CD8+、效应记忆型CD3+T细胞、效应记忆型CD4+T细胞、中央记忆型CD4+T细胞、效应记忆型CD8+T细胞、中央记忆型CD8+T细胞分别增加1.3、2.4、4.1、1.6、3.0、4.1、3.7和3.8倍，进而增强T细胞的肿瘤免疫治疗效应。
测试例2
以皮下移植脑胶质瘤的ICR小鼠为模型，构建方法为：将2×106个G422细胞皮下注射至雌性ICR小鼠右前肢腋下部位。
将18只皮下移植脑胶质瘤的ICR小鼠(雌性、18-20g)随机分成3组，每组6只，分别为模型组、CHA组和CHA-SME组。
分别给予生理盐水、绿原酸(CHA，口服，35mg/kg/天，连续给药19天)和实施例2的样品(CHA-SME，口服，35mg/kg/天，连续给药19天)。给药结束后剥离皮下肿瘤进行称重以评价抑瘤效果。
实验结果如表1所示，与模型组和绿原酸相比，绿原酸自乳化递送系统(CHA-SME)35mg/kg的剂量下可以显著抑制小鼠脑胶质瘤的生长。
表1
组别
肿瘤重量(g)
模型组
2.28±0.71
CHA组
2.40±0.21
CHA-SME组
0.82±0.55
测试例3
以皮下移植的Lewis肺癌C57BL/6小鼠为模型，构建方法为：将5×105个Lewis肺癌细胞皮下注射至雄性C57BL/6小鼠右后肢内侧。
将6只皮下移植的Lewis肺癌C57BL/6小鼠(雄性、16-18g)随机分成2组，每组3只，分别为模型组和CHA-SME组。
分别给予生理盐水、实施例1的样品(CHA-SME，口服，30mg/kg/天，连续给药14天)。给药结束后剥离皮下肿瘤进行称重以评价抑瘤效果。
实验结果如图6所示，与模型组相比，绿原酸自乳化递送系统(CHA-SME)30mg/kg的剂量下可以显著抑制小鼠肺癌的生长。
测试例4
以皮下移植的L1210白血病DBA/2小鼠为模型，构建方法为：将6×105个L1210白血病细胞皮下注射至雌性DBA/2小鼠右后肢内侧。
将48只ICR小鼠(雌性、18-20g)随机分成8组，每组6只，分别为模型组、CHA低剂量组、CHA高剂量组和CHA-SME 1-5组。
依次分别给予绿原酸(CHA，腹腔注射，20和40mg/kg/天，连续给药12天)和实施例1、3-6制得的样品(CHA-SME，口服，35mg/kg/天，连续给药12天)。给药结束后剥离皮下肿瘤进行称重以评价抑瘤效果。
实验结果如表2所示，与模型组相比，口服的绿原酸自乳化递送系统(CHA-SME)可以显著抑制小鼠白血病的生长，其肿瘤生长抑制率为44.4％以上，且优于绿原酸腹腔注射组(20和40mg/kg)，其肿瘤生长抑制率分别为29.8％和40.5％。同时，由表中数据可见自乳化递送系统中的乳化剂、助乳化剂、油相、脂质材料的选择均会影响其抗白血病的效果。
表2
组别
肿瘤重量(g)
模型组
2.70±0.40
CHA低剂量组
1.90±0.75
CHA高剂量组
1.61±0.90
CHA-SME 1组(实施例1)
1.40±0.25
CHA-SME 2组(实施例3)
0.95±0.20
CHA-SME 3组(实施例4)
1.05±0.15
CHA-SME 4组(实施例5)
1.10±0.30
CHA-SME 5组(实施例6)
1.50±0.10
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的一种自乳化递送系统在制备治疗淋巴转移肿瘤的口服药物中的应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。