阅读说明：本技术 一种采用深紫外光源的荧光显微照明方法 (Fluorescent microscopic illumination method adopting deep ultraviolet light source ) 是由 陈木旺 林顺华 林茂英 于 2019-11-26 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种采用深紫外光源的荧光显微照明方法。该系统由目镜、不透深紫外物镜、深紫外激发光源和聚光系统组成,其中深紫外激发光源和聚光系统安装在物镜周围,并形成暗场照明,照射在标本上,激发标本产生荧光,经由物镜收集后再成像至目镜。本发明可使用短工作距离的物镜,避免了光能损耗,光学效率更高；不需要滤色块,结构简单且降低成本。(The invention discloses a fluorescent microscopic illumination method adopting a deep ultraviolet light source. The system consists of an ocular lens, a deep ultraviolet-impermeable objective lens, a deep ultraviolet excitation light source and a light condensing system, wherein the deep ultraviolet excitation light source and the light condensing system are arranged around the objective lens and form dark field illumination, the dark field illumination is irradiated on a specimen to excite the specimen to generate fluorescence, and the fluorescence is collected by the objective lens and then imaged to the ocular lens. The invention can use the objective lens with short working distance, thereby avoiding the loss of light energy and having higher optical efficiency; the color filtering block is not needed, the structure is simple, and the cost is reduced.)

一种采用深紫外光源的荧光显微照明方法

技术领域

本发明涉及显微镜技术领域，特别涉及一种荧光显微激发照明技术。

背景技术

荧光显微镜具有对比度高、检出能力高、对细胞的刺激小、能进行多重染色等优点，可广泛应用于生物学、血液学、组织学、病理学、药物化学等研究以及临床试验之用。荧光显微镜主要由荧光激发源、聚光系统、滤色块（由激发滤色片、分光分色片和阻挡滤色片组成）和显微镜组成，一般是采用落射照明结构，具体原理是：荧光激发源通电后发出的光线经过聚光、激发滤色片（只能透过小于一定波长的光）和分光分色片（反射小于某波长的光，并能透射大于该波长的光）成像在物镜的后焦面上，与物镜形成一个柯拉照明系统，可以在样品上获得均匀的落射照明；样品受到落射照激发后产生荧光，其波长大于分光分色片能够透射的光的波长，此荧光直接透过分光分色片和阻挡滤色片（只能透过大于某一波长的光），到达目镜或者摄像装置以供观察。

因为物镜同时充当聚光和成像作用，结构简单，受到广泛的应用。但对于特殊波长如深紫外（350nm以下），由于常规荧光物镜、聚光系统只能透过紫外以上的波长，该方法就不适用，除非全部重新设计，但代价昂贵。

现有专利CN107003242 A公开一种使用荧光剂进行染色之后在紫外激发的情况下使用荧光显微镜控制组织中的成像深度的系统和方法，采用斜照明方式，即照明聚光和成像部分独立，解决了物镜不能透深紫外的问题，但对于高倍物镜，由于工作距离短（如1mm左右），斜照明的利用率就非常低，甚至不能用。

现有专利CN 205091263U、CN105092550A公开了一种荧光显微成像方法和装置，包括光源装置、样品放置台、物镜、发射滤光模组和图像获取装置，光源装置包括多个单色荧光激发光源和与多个单色荧光激发光源电连接的控制系统，多个单色荧光激发光源环绕物镜和图像获取装置所构成的成像光路中轴设置，且每个单色荧光激发光源所发出的单色荧光激发光与成像光路中轴相交于样品放置台的预设位置，控制系统根据实验要求在多个单色荧光激发光源中点亮至少一个相同颜色的单色荧光激发光源为目标光源；样品放置台设置于多个单色荧光激发光源所发出的单色荧光激发光交汇位置。但该对比文件是用于透射荧光，需要滤色块，其成本也较高。

发明内容

本发明在于提供一种采用深紫外光源的荧光显微照明方法。本发明的技术方案是，将深紫外激发光源及其聚光系统安装在物镜周围，激发光源发出的光经聚光系统后形成暗场照明照射在标本面上，激发标本发出荧光，经物镜收集后在成像到目镜上。

所述的荧光激发光源为紫外固态光源，其波长小于400nm。如LED，固态激光，优选的为LED，LED固定在环形电路板上。

所述的紫外固态光源为LED。

所述的荧光激发光源的数量可以一颗或者多颗。

所述的在波长上可以是单种波长，或多种波长的组合。

所述的聚光系统为透镜、离轴抛物面，离轴曲面的任意一种或其组合。

所述的聚光系统用以将激发光源发出的光形成暗场照明会聚在标本面上，与所述的物镜的焦面重合。

所述的透镜必须可以透深紫外，如石英玻璃。

现有技术专利中的荧光显微镜要使用滤色块，通过滤色块改变波长，每一发射滤光区域得通过波段为样品板内颗粒受一颜色的单色荧光激发光源的激发而发出的荧光的波段。而本发明不需要使用滤色块，通过荧光激发光源就能改变波长，从而达到激发样品荧光的目的。本发明可使用短工作距离的物镜，避免了光能损耗，光学效率更高；同时本发明不需要滤色块，结构简单且成本更低。

附图说明

此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本发明的一部分，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：

图1所示本发明专利单独的曲面反射镜示意图。

图2所示本发明专利透深紫外示意图。

图3所示本发明专利显微镜透深紫外示意图。

图4所示本发明专利透深紫外结构示意图。

具体实施方式

为进一步说明各实施例，本发明提供有附图。这些附图为本发明揭露内容的一部分，其主要用以说明实施例，并可配合说明书的相关描述来解释实施例的运作原理。配合参考这些内容，本领域普通技术人员应能理解其他可能的实施方式以及本发明的优点。图中的组件并未按比例绘制，而类似的组件符号通常用来表示类似的组件。

如图1、2、3、4所示，本发明提供一种采用深紫外光源的荧光显微照明方法，包括1、标本，2、离轴抛物面，3、光源，4、物镜，5、目镜，6、透镜阵列，7、头部，8、暗场物镜，9、载物台，10、机架，11、物镜内胆，12、线扣，13、外壳组成，其中所述的深紫外激发光源3为固态光源，如LED，固态激光，优选的为LED，光源3固定在环形电路板上。光源3的数量可以单颗，也可以多颗。在波长上可以是单种波长，也可以多种波长组合。

将深紫外激发光源3，及其聚光系统安装在物镜周围，激发光源3发出的光经聚光系统后形成暗场照明照射在标本1面上，激发标本1发出荧光，经物镜4收集后在成像到目镜5上。其中所述的聚光系统为透镜阵列6、离轴抛物面2，离轴曲面任意一种或其组合。

所述的聚光系统，用以将激发光源3发出的光形成暗场照明会聚在标本1面上，与该物镜4的焦面重合。所述的聚光系统可以由环形透镜、透镜阵列6与曲面反射镜组合，如图1所示，可以单独的曲面反射镜如离轴抛物面反射镜，透镜必须可以透深紫外，如石英玻璃。

尽管结合优选实施方案具体展示和介绍了本发明，但所属领域的技术人员应该明白，在不脱离所附权利要求书所限定的本发明的精神和范围内，在形式上和细节上对本发明做出各种变化，均为本发明的保护范围。