苍术茎叶提取物的应用
阅读说明：本技术 苍术茎叶提取物的应用 (Application of rhizoma atractylodis stem and leaf extract ) 是由 李秀梅 杨培龙 刘婧 杨娟 石冬冬 满晨 王亚冬 潘方方 于 2019-11-01 设计创作，主要内容包括：本发明属于中药加工领域,具体涉及苍术茎叶提取物的应用。本发明的苍术茎叶提取物的应用,包括粉碎苍术茎叶、用溶剂提取、静置后旋转蒸发等步骤。本发明实现了中药资源产业化过程副产物的有效利用,有效延伸资源经济产业链,产生良好的社会经济生态效益。(The invention belongs to the field of traditional Chinese medicine processing, and particularly relates to an application of an atractylodes rhizome stem leaf extract. The application of the atractylodes rhizome stem and leaf extract comprises the steps of crushing atractylodes rhizome stem and leaf, extracting with a solvent, standing, performing rotary evaporation and the like. The invention realizes the effective utilization of the byproduct in the industrialization process of the traditional Chinese medicine resources, effectively extends the economic industrial chain of the resources and generates good social, economic and ecological benefits.)
技术领域
本发明属于中药加工领域，具体涉及苍术茎叶提取物的应用。
背景技术
中草药是支撑我国中兽药及饲料添加剂产业发展的物质基础和资源保障，用于禽畜疾病防治具有悠久的历史，近些年来，以中药和天然药物资源为原料的产业集群迅猛发展，药材生产及深加工产业化过程产生的非药用部位及副产物的产量高达亿吨，这些材料均未能得到有效利用，不仅造成资源的巨大浪费，且导致生态环境的严重污染。
苍术(学名：Atractylodes Lancea(Thunb.)DC.)菊科苍术属多年生草本植物。苍术根状茎入药，为运脾药，性味苦温辛烈，有燥湿、化浊、止痛之效，苍术茎中含挥发油5％～9％，为其主要药用成分。苍术的非药药用部分，如其茎叶，往往遭到丢弃，同时，苍术茎叶中的药用成分含量低、且效果不确切，给进一步利用苍术茎叶造成了巨大困难。
发明内容
本发明的目的在于提供苍术茎叶的应用，尤其是在抑制病原菌、抗氧化和抑制炎症因子方面的应用。
根据本发明
具体实施方式
的苍术茎叶提取物用于抑制病原菌的应用，其中，所述病原菌为大肠杆菌CVCC 195、大肠杆菌CVCC 1515、沙门氏菌CVCC 3377、沙门氏菌ATCC14028和/或金黄色葡萄球菌ATCC 43300。
根据本发明具体实施方式的苍术茎叶提取物用于抗氧化的应用。
根据本发明具体实施方式的苍术茎叶提取物用于抑制炎症因子的应用，其中，水提物所述炎症因子包括IL-1β和/或IL-6；醇提取抑制的炎症因子包括L-6和/或TNF-α。
根据本发明具体实施方式的苍术提取物的应用，苍术茎叶提取物通过包括以下步骤的方法获得：
(1)粉碎苍术茎叶，得到药粉；
(2)将药粉加入提取溶剂，超声提取，其中，药粉与提取溶剂的质量体积比为1：40，超声功率为500W，温度为50℃，时间为30min，得到提取物；
(3)经步骤(2)得到的提取物静置后，取上层溶液，5000rpm条件下离心10min，取上清液；
(4)将步骤(3)得到的上清液旋转蒸发，并冻干成粉末。
根据本发明具体实施方式的苍术提取物的应用，提取溶剂为水或95％乙醇溶液。
本发明的有益效果：
本发明提取苍术茎叶中的有效成分，获得了苍术茎叶提取物，苍术茎叶的水/醇提取物对病原菌，如大肠杆菌CVCC 195、大肠杆菌CVCC 1515、沙门氏菌CVCC 3377、沙门氏菌ATCC 14028和/或金黄色葡萄球菌ATCC 43300有明显的抑制作用；苍术茎叶的水/醇提取物具有良好的抗氧化作用；苍术茎叶的水提物对炎症因子IL-1β和/或IL-6有良好的抑制作用；苍术茎叶的醇提物对炎症因子L-6和/或TNF-α有良好的抑制作用。
具体实施方式
实施例1苍术茎叶水提物的制备
(1)用微型植物粉碎机将苍术茎叶粉碎，过100目的分析筛，备用；
(2)称取苍术茎叶粗粉20g于盛放800mL蒸馏水的锥形瓶中，超声条件：超声功率500W，温度50℃，时间30min，进行超声提取；
(3)超声提取后，静置10min，将上层提取液倒入离心管中，5000rpm离心10min；
(4)将离心后的上清旋转蒸干并冻干成粉末，放入﹣80℃冰箱备用。
实施例2苍术茎叶醇提物的制备
(1)用微型植物粉碎机将苍术茎叶粉碎，过100目的分析筛，备用；
(2)称取苍术茎叶粗粉20g于盛放800mL 95％酒精溶液的锥形瓶中，超声条件：超声功率500W，温度50℃，时间30min，进行超声提取；
(3)超声提取后，静置10min，将上层提取液倒入离心管中，5000rpm离心10min；
(4)将离心后的上清旋转蒸干并冻干成粉末，放入﹣80℃冰箱备用。
以同样的方法制备苍术茎叶、苍术根须、斜茎黄芪种皮、斜茎黄芪叶、地稍瓜瓜皮、灵芝菌棒的醇提物。
实施例3考察苍术茎叶提取物的功效
3.1检测苍术茎叶提取物的抑菌效果
以实施例1、2中所述方法制备苍术茎叶、苍术根须、斜茎黄芪种皮、斜茎黄芪叶、斜茎黄芪种皮、地稍瓜瓜皮、灵芝菌棒、白藓果皮的提取物。
平板涂布法：将中草药加工副产物粉碎过100目筛，备用。之后，将过100目筛的0.6g苍术提取物冻干粉加入60mL MHA培养基中，搅拌、混匀，121℃灭菌15min，调整pH为7.2±0.2，分装为三个加药平板。实验前24h制作好加药平板(药浓度为10mg/mL)，
取指数期的致病菌菌液，调整菌的浓度为1×108cfu，吸取菌液50μL，均匀涂布于三个平行加药平板及对照平板，37℃培养24h。
表1 中药加工废弃物的抑菌能力的比较
由表1可知，在浓度为10mg/mL下，各中药加工废弃物的抑菌能力各不相同，例如，苍术茎叶对除了S.aureus ATCC 25923之外了的5株致病菌均有显著的抑菌效果；苍术根须虽与苍术茎叶同样来源于苍术，却只对S.aureus ATCC 43300有良好的抑制作用；灵芝菌棒、斜茎黄芪叶及斜茎黄芪种皮能够完全抑制S.aureus ATCC 43300的生长；斜茎黄芪叶和斜茎黄芪种皮也能够显著抑制S.enterica CVCC 3377的生长。
3.2检测苍术茎叶提取物的总抗氧化能力
以实施例1、2中所述方法制备苍术茎叶、苍术根须、斜茎黄芪种皮、斜茎黄芪叶、斜茎黄芪种皮、地稍瓜瓜皮的提取物。
称取27.8mg试剂盒提供的FeSO4·7H2O，溶解并定容到1mL，此时浓度即为100mM。取适量100mM FeSO4溶液稀释至0.15、0.3、0.6、0.9、1.2和1.5mM。通常可以使用蒸馏水或样品配制溶液配制标准品。
a：96孔板的每个检测孔中加入180μL FRAP工作液(TPTZ稀释液150μL+TPTZ溶液15μL+检测缓冲液15μL)。
b：空白对照孔中加入5μL蒸馏水；标准曲线检测孔内加入5μL各种浓度的FeSO4标准溶液；样品检测孔内加入5μL各种样品(200μg/mL)或0.8mM的Trolox作为阳性对照。轻轻混匀。
c：37℃孵育3-5min后测定A593。如果测定A593有困难，也可以在585-605nm范围内进行测定。
d：根据标准曲线计算出样品的total antioxidant capacity(TAC)。如果样品测定出来的吸光度在标准曲线范围以外，需把样品适当稀释后再进行测定。
表2 中药加工废弃物的总抗氧化能力
由表2可知，在浓度为200μg/mL下，各中药加工废弃物的抗氧化能力各不相同，其中，苍术茎叶提取物的总抗氧化能力高于苍术根须的总抗氧化能力；苍术茎叶的水提物抗氧化能力强于其醇提物。
3.3检测苍术茎叶提取物的抗炎能力
(1)药物溶液配制
以实施例1、2中所述方法制备苍术茎叶、苍术根须、斜茎黄芪种皮、斜茎黄芪叶、斜茎黄芪种皮、地稍瓜瓜皮、灵芝菌棒、白藓果皮的提取物。
称取白藓果皮、苍术茎叶、苍术根须、斜茎黄芪种皮、斜茎黄芪叶、地稍瓜瓜皮、灵芝菌棒的水提物和醇提物冻干粉10mg，在超净台中用1mL的无血清培养基溶解、过膜，备用；
(2)分组和加药
取对数生长期的细胞悬液接种于96孔板中，细胞密度为1.5×106个/mL，每孔100μL，贴壁24h后，设空白对照组、LPS组(1mg/mL)、LPS+白藓果皮/苍术茎叶/苍术根须/斜茎黄芪种皮/斜茎黄芪叶/地稍瓜瓜皮/灵芝菌棒(100μg/mL)组，每组设置6个重复，各给药组加入相应药物预处理2h，空白对照组和LPS组加入相同体积的基础培养基，2h后，除空白对照组外，其余组加入1mg/mL的LPS刺激24h，收集细胞上清，采用Griess法检测NO含量，ELISA法检测细胞因子IL-6，IL-1β，TNF-α水平。
表3 中药加工废弃物水提物抗炎作用
由表3可知，在浓度为100μg/mL时，各中药加工废弃物的抑制炎症因子各不相同，例如，与LPS组相比，苍术根须能够同时抑制IL-1β、IL-6和TNF-α炎症因子的生成；苍术茎叶能够同时抑制IL-1β和IL-6炎症因子的生成；斜茎黄芪种皮能够同时抑制IL-6和TNF-α炎症因子的生成；地稍瓜瓜皮和灵芝菌棒能够同时抑制NO、IL-1β和IL-6炎症因子的生成。
表4 中药加工废弃物的醇提物抗炎作用
由表4可知，在浓度为100μg/mL时，各中药加工废弃物的抑制炎症因子各不相同，例如，与LPS组相比，白藓果皮、苍术根须、斜茎黄芪种皮和灵芝菌棒均能够同时显著的抑制IL-1β、IL-6和TNF-α炎症因子的生成；苍术茎叶能够抑制NO、IL-6和TNF-α炎症因子的生成；地稍瓜瓜皮能够同时抑制IL-6和TNF-α炎症因子的生成。