阅读说明：本技术 一种从植物中分离纯化红枣多糖的方法 (Method for separating and purifying red date polysaccharide from plants ) 是由 郑宋友 王平 何宇琴 王顺余 何建新 于 2019-08-05 设计创作，主要内容包括：本发明提供一种从植物中分离纯化红枣多糖的方法,在含有红枣多糖的原料以1:1~1:30的料液比加入水或乙醇溶液,充分混合均匀,在微波功率为100~800W下进行微波提取1-30min得到红枣多糖粗提物；在萃取温度为30~80℃、萃取压力为16~30MPa、萃取时间为0.5~3h、CO<Sub>2</Sub>流速为5~8L/min的条件下、使用超临界二氧化碳萃取技术对得到红枣多糖粗提物进行萃取得到红枣多糖萃取液,在红枣多糖萃取液中加入体积分数为60-99%的乙醇溶液,离心得沉淀后干燥,得到红枣多糖。(The invention provides a method for separating and purifying red date polysaccharide from plants, which comprises the steps of adding water or ethanol solution into a raw material containing red date polysaccharide according to the material-liquid ratio of 1: 1-1: 30, fully and uniformly mixing, and performing microwave extraction for 1-30min under the microwave power of 100-800W to obtain a red date polysaccharide crude extract; extracting at 30-80 deg.C under 16-30 MPa for 0.5-3 hr with CO 2 Extracting the obtained red date polysaccharide crude extract by using a supercritical carbon dioxide extraction technology under the condition that the flow rate is 5-8L/min to obtain red date polysaccharide extract, adding an ethanol solution with the volume fraction of 60-99% into the red date polysaccharide extract, centrifuging to obtain a precipitate, and drying to obtain the red date polysaccharide.)

一种从植物中分离纯化红枣多糖的方法

技术领域

本发明涉及一种对天然产物进行分离纯化的方法，尤其涉及一种从植物中快速分离纯化红枣多糖的方法。

背景技术

红枣多糖(Red jujube polysaccharide)为鼠李科枣属植物枣树果实的的主要化学活性成分之一，由多个单分子缩合而成的一类天然大分子化合物。据文献报道表明，红枣多糖可以多层次、多途径的调节免疫系统，具有明显的抗补体活性和促进淋巴细胞的增殖作用，可明显减缓衰老。红枣多糖还有抗病毒、降血脂、降血糖、清除自由基等功能。

红枣多糖主要可以从红枣进行提取，超声空化效应可缩短提取时间，但没有红枣多糖提取的最佳优化工艺。目前，从大枣分离纯化红枣多糖的方法主要如下：首先，将石油醚与红枣粉末混合用索氏提取器回流处理得到脱脂后的红枣粉末，接着采用超声波提取再浓缩得到粗多糖试液，然后将粗多糖进行辅助酶法重复脱杂得脱蛋白液，再采用醇提法、过滤、冷冻干燥得到粗多糖，HSCCC、HPLC和其他色谱方法分离得到红枣多糖。在上述生产过程中，萃取过程是十分重要的，由于多糖的稳定性差，高温或长时间溶液状态都会加速有效成分的降解，而且酶解法提取时间较长，而且纯度较高的活性酶价格较高，从而提高了生产成本。

专利CN103335971B公开了一种碱液浸提后进行超声技术提取红枣多糖的方法，将红枣洗净、烘干、去皮去核、粉碎、研磨至粉末状，称干重；将处理好的红枣粉末，进行石油醚脱脂，风干；再将红枣进行碱液浸提稀释后离心，得到上清液；将上清液进行粗过滤，得到红枣多糖粗提取液，再将其超声提取，所得的红枣粗提取液定容于250mL容量瓶，放置于不同温度的水槽中提取一定时间；取1mL红枣粗提取稀释液，加入6％苯酚溶液1mL，浓硫酸 2mL，摇匀，冷却，于490nm波长中测吸光度A。红枣中的多糖多为酸性，根据其化学性质可知，用碱液提取可以提高该成分的溶出得率。但是碱液提取对多糖结构有破坏作用，故改用其他的方法提取。

本发明利用超临界流体-微波辅助联用提取，能够快速除去红枣多糖提取物中不同种类杂质，纯化得到较纯的红枣多糖，减少实验操作，加快实验进度，从而减少有效成分的损失，保持较高的收率。因此，该技术是一种快速、高效、环保的红枣多糖的提取纯化方法。

发明内容

本发明提供一种从植物中分离纯化红枣多糖的方法，采用本方法制备红枣多糖，能快速提高红枣多糖的纯度，保持红枣多糖的稳定性，增加得率，且该工艺简便可行，绿色环保，适用于工业化大批量生产，为其相关制剂开发和应用奠定了基础。

一种从植物中分离纯化红枣多糖的方法，该方法包如下具体步骤：

在含有红枣多糖的原料以1:1～1:30的料液比加入水或乙醇溶液，充分混合均匀，在微波功率为100～800W下进行微波提取1～30min得到红枣多糖粗提物；在萃取温度为30～80℃、萃取压力为16～30MPa、萃取时间为0.5～3h、CO₂流速为5～8L/min的条件下、使用超临界二氧化碳萃取技术对得到红枣多糖粗提物进行萃取得到红枣多糖萃取液，在红枣多糖萃取液中加入体积分数为60-99％的乙醇溶液，离心得沉淀后干燥，得到红枣多糖。

在本发明一些实施方式中，微波提取中的料液比为1:5～1:20。

在本发明一些实施方式中，微波提取所用乙醇溶液的体积分数不大于百分之30％。

在本发明一些实施方式中，微波提取的条件为：微波功率为400～600W，微波提取时间 2～8min。

在本发明一些实施方式中，超临界二氧化碳萃取的萃取温度为50～70℃、萃取压力为 20～25MPa、萃取时间为0.5～2h、CO2流速为6～7L/min。

在本发明一些实施方式中，在红枣多糖萃取液中加入体积分数为75～99％的乙醇溶液，离心得到沉淀。

在本发明一些实施方式中，所述原料为红枣。

与现有的技术相比，本发明的有益效果体现在：

1.本发明将红枣多糖进行微波辅助提取，大大节约了提取所用时间以及降低提取所需温度，减少红枣多糖的糊化和降解，有利于提高红枣多糖的得率；

2.本发明中采用超临界流体提取纯化的方法提高红枣多糖的纯度，有利于减少工艺操作，加快纯化速度，从而减少红枣多糖的损失，活率较高，绿色环保且有利于工业化生产。

3.本发明建立了一种能加快红枣多糖分离纯化速度的制备工艺，能节约提取纯化时间，加快速度，保证红枣多糖的稳定性，增加其得率，且该工艺简便可行，绿色环保，为红枣多糖相关制剂开发应用及产业化发展奠定了基础。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明方案进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此。

实施例1

将10.0g红枣以料液比(g/mL)为1:5，与水混合，充分搅拌均匀，在400W的功率下进行微波提取2min，得到红枣多糖粗提物；然后使用超临界二氧化碳萃取技术进行提取，其过程中温度50℃，压力20MPa，提取时间0.5h，CO₂流速6L/min，得到红枣多糖萃取液。将含有红枣多糖的萃取液加入体积分数为75％的乙醇溶液沉淀，离心得沉淀后干燥，得到较纯的红枣多糖，产率为15.18％，纯度为45.8％。

实施例2

将10.0g红枣以料液比(g/mL)为1:15，与体积分数为10％乙醇溶液混合，充分搅拌均匀，在400W的功率下进行微波提取4min，得到红枣多糖粗提物；然后使用超临界二氧化碳萃取技术进行提取，其过程中温度50℃，压力20MPa，提取时间1.0h，CO₂流速6L/min，得到红枣多糖萃取液。将含有红枣多糖的萃取液加入体积分数为85％的乙醇-水溶液沉淀，离心得沉淀后干燥，得到较纯的红枣多糖，产率为17.53％，纯度为48.6％。

实施例3

将10.0g红枣以料液比(g/mL)为1:10，与体积分数为20％的乙醇溶液混合，充分搅拌均匀，在600W的功率下进行微波提取2min，得到红枣多糖粗提物；然后使用超临界二氧化碳萃取技术进行提取，其过程中温度60℃，压力20MPa，提取时间1.0h，CO₂流速6L/min，得到红枣多糖萃取液。将含有红枣多糖的萃取液加入体积分数为80％的乙醇-水溶液沉淀，离心得沉淀后干燥，得到较纯的红枣多糖，产率为17.29％，纯度为52.3％。

实施例4

将10.0g红枣以料液比(g/mL)为1:10，与水混合物混合，充分搅拌均匀，在500W的功率下进行微波提取6min，得到红枣多糖粗提物；然后使用超临界二氧化碳萃取技术进行提取，其过程中温度70℃，压力25MPa，提取时间2h，CO₂流速7L/min，得到红枣多糖萃取液。将含有红枣多糖的萃取液加入体积分数为90％的乙醇-水溶液沉淀，离心得沉淀后干燥，得到较纯的红枣多糖，产率为16.82％，纯度为50.1％。

实施例5

将10.0g红枣以料液比(g/mL)为1:20，与体积分数为30％的乙醇溶液混合，充分搅拌均匀，在500W的功率下进行微波提取4min，得到红枣多糖粗提物；然后使用超临界二氧化碳萃取技术进行提取，其过程中温度60℃，压力25MPa，提取时间1.5h，CO₂流速7L/min，得到红枣多糖萃取液。将含有红枣多糖的萃取液加入体积分数为90％的乙醇-水溶液沉淀，离心得沉淀后干燥，得到较纯的红枣多糖，产率为18.45％，纯度为54.4％。

实施例6

将10.0g红枣以料液比(g/mL)为1:20，与体积分数为20％的乙醇溶液混合，充分搅拌均匀，在400W的功率下进行微波提取4min，得到红枣多糖粗提物；然后使用超临界二氧化碳萃取技术进行提取，其过程中温度60℃，压力20MPa，提取时间1.0h，CO₂流速6L/min，得到红枣多糖萃取液。将含有红枣多糖的萃取液加入体积分数为90％的乙醇-水溶液沉淀，离心得沉淀后干燥，得到较纯的红枣多糖，产率为17.88％，纯度为53.9％。

实施例7

将10.0g红枣以料液比(g/mL)为1:10，与体积分数为30％的乙醇溶液混合，充分搅拌均匀，在400W的功率下进行微波提取6min，得到红枣多糖粗提物；然后使用超临界二氧化碳萃取技术进行提取，其过程中温度70℃，压力25MPa，提取时间1.5h，CO₂流速6L/min，得到红枣多糖萃取液。将含有红枣多糖的萃取液加入体积分数为75％的乙醇-水溶液沉淀，离心得沉淀后干燥，得到较纯的红枣多糖，产率为16.56％，纯度为52.7％。

实施例8

将10.0g红枣以料液比(g/mL)为1:10，与体积分数为10％的乙溶液混合，充分搅拌均匀，在500W的功率下进行微波提取4min，得到红枣多糖粗提物；然后使用超临界二氧化碳萃取技术进行提取，其过程中温度60℃，压力25MPa，提取时间2h，CO₂流速7L/min，得到红枣多糖萃取液。将含有红枣多糖的萃取液加入体积分数为85％的乙醇-水溶液沉淀，离心得沉淀后干燥，得到较纯的红枣多糖，产率为16.01％，纯度为52.1％。

实施例9

将10.0g红枣以料液比(g/mL)为1:15，与体积分数为30％乙醇溶液混合，充分搅拌均匀，在600W的功率下进行微波提取8min，得到红枣多糖粗提物；然后使用超临界二氧化碳萃取技术进行提取，其过程中温度70℃，压力25MPa，提取时间0.5h，CO₂流速7L/min，得到红枣多糖萃取液。将含有红枣多糖的萃取液加入体积分数为75％的乙醇-水溶液沉淀，离心得沉淀后干燥，得到较纯的红枣多糖，产率为15.79％，纯度为54.1％。

实施例10

将10.0g红枣以料液比(g/mL)为1:20，与体积分数为20％的乙醇溶液混合，充分搅拌均匀，在500W的功率下进行微波提取6min，得到红枣多糖粗提物；然后使用超临界二氧化碳萃取技术进行提取，其过程中温度70℃，压力25MPa，提取时间2h，CO₂流速7L/min，得到红枣多糖萃取液。将含有红枣多糖的萃取液加入体积分数为90％的乙醇-水溶液沉淀，离心得沉淀后干燥，得到较纯的红枣多糖，产率为18.65％，纯度为57.8％。

对比例1

将10.0g红枣以料液比(g/mL)为1:20，与体积分数为20％的乙醇溶液混合，充分搅拌均匀，超声提取6min，得到红枣多糖粗提物；然后使用超临界二氧化碳萃取技术进行提取，其过程中温度70℃，压力25MPa，提取时间2h，CO₂流速7L/min，得到红枣多糖萃取液。将含有红枣多糖的萃取液加入体积分数为90％的乙醇-水溶液沉淀，离心得沉淀后干燥，得到较纯的红枣多糖，产率为18.65％，纯度为57.8％。

对比例2

将10.0g红枣进行碱液浸提稀释，碱液0.5mol/mLNa₂CO₃溶液，稀释的料液比(g/mL)是1:20，超声提取6min，得到红枣多糖粗提物；然后使用超临界二氧化碳萃取技术进行提取，其过程中温度70℃，压力25MPa，提取时间2h，CO₂流速7L/min，得到红枣多糖萃取液。将含有红枣多糖的萃取液加入体积分数为90％的乙醇-水溶液沉淀，离心得沉淀后干燥，得到较纯的红枣多糖，产率为16.36％，纯度为47.9％。