阅读说明：本技术 一种具有抗菌活性的金樱子果实粗多糖制备方法 (Preparation method of cherokee rose fruit crude polysaccharide with antibacterial activity ) 是由 张立新 岳丹丹 刘学贵 高品一 李丹琦 于 2019-10-24 设计创作，主要内容包括：一种具有抗菌活性的金樱子果实粗多糖制备方法,涉及一种抗菌活性多糖制备方法,通过以下制备步骤得到的：将金樱子干燥的果实,经粉碎机粉碎过筛后用石油醚、乙醇回流处理,去除脂质和含有的单糖、低聚糖以及皂苷类等干扰化学成分；然后选取微波功率(450-550W)、提取时间(10-20min)、提取次数(1-5次)以及料液比(1:40-1:60g/mL)对金樱子果实多糖提取,提取液减压浓缩干燥得到金樱子果实粗多糖。该方法取金樱子干燥的果实经除去样品中含有的单糖、低聚糖以及皂苷类等干扰化学成分,表明在多糖浓度为100-200mg/mL时显示出明显的金黄色葡萄球菌抑制作用,为进一步药物开发研究奠定了基础。(A preparation method of cherokee rose fruit crude polysaccharide with antibacterial activity relates to a preparation method of polysaccharide with antibacterial activity, which is obtained by the following preparation steps: pulverizing dried fructus Rosae Laevigatae, sieving, and reflux treating with petroleum ether and ethanol to remove lipid, monosaccharide, oligosaccharide and saponin; then selecting microwave power (450-. According to the method, the interference chemical components such as monosaccharide, oligosaccharide and saponins contained in the sample of dried cherokee rose fruit are removed, which shows that the method shows obvious staphylococcus aureus inhibition effect when the polysaccharide concentration is 100-200mg/mL, and lays a foundation for further drug development and research.)

一种具有抗菌活性的金樱子果实粗多糖制备方法

技术领域

本发明涉及一种抗菌活性多糖制备方法，特别是涉及一种具有抗菌活性的金樱子果实粗多糖制备方法。

背景技术

金樱子的药用价值：中药金樱子Rosa laevigata Michx.为蔷薇科蔷薇属植物在我国分布非常广泛。始载于《蜀本草》，其果实，根和叶均可入药。《本草纲目》中记载金樱子：性酸、涩、平、无毒；主治脾泻下痢、止小便利、涩精气。中药金樱子的成熟的果实中含有丰富的多糖、黄酮及三萜皂苷类化合物，使其具有提高机体免疫功能、抗肿瘤、抑菌、抗应激、抗炎,以及降血糖、降血压、降血脂、抗心率失常等多种生物活性。作为药用佳品的金樱子果实，味道甜美，气味幽香，在食用和药用领域有着极其广阔的开发生产前景。

金樱子的粗多糖是从干燥的金樱子中果实中提取得到的，已经被证明具有保肝、抗氧化、抑菌抗炎、抗肿瘤、增强机体非特异性免疫功能等生物活性，因此，对于深入探究金樱子多糖的其他药理活性以及其在其在食品、工业、药物研究开发等领域具有广阔的发展前景。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有抗菌活性的金樱子果实粗多糖制备方法，该方法取金樱子干燥的果实经除去样品中含有的单糖、低聚糖以及皂苷类等干扰化学成分，表明在多糖浓度为100 - 200 mg/mL时显示出明显的金黄色葡萄球菌抑制作用，为进一步药物开发研究奠定了基础。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种具有抗菌活性的金樱子果实粗多糖制备方法，所述抗菌活性的金樱子果实粗多糖通过以下制备步骤得到的：

将金樱子干燥的果实，经粉碎机粉碎过筛后用石油醚、乙醇回流处理，去除脂质和含有的单糖、低聚糖以及皂苷类等干扰化学成分；然后合并提取液，减压浓缩烘干后得粗品；金樱子干燥的果实，经粉碎机粉碎之后，再过筛得到金樱子果实的粉末；金樱子果实的粉末加入500 - 1000 ml的石油醚，于水浴锅中加热，温度控制在60 - 90 ^oC的范围内进行回流提取脱脂6 - 12 h；待样品挥干试剂之后，加入500 - 1000 ml体积分数为60 - 90%的乙醇在70 - 90 ^oC的温度下，进行回流提取2 - 5 h，除去样品中含有的单糖、低聚糖以及皂苷类等干扰化学成分；倒去上层的液体，将样品烘干至衡重；在单因素实验的基础上采用响应曲面设计法优化提取工艺后，选取微波功率(450 - 550 W)、提取时间(10 - 20 min)、提取次数(1 - 5 次)以及料液比（1:40 - 1:60 g/mL）对金樱子果实多糖提取，提取液减压浓缩干燥得到金樱子果实粗多糖。本发明的优点与效果是：

本发明制备的金樱子果实粗多糖的抗菌活性研究结果表明在多糖浓度为100 - 200mg/mL时显示出明显的金黄色葡萄球菌抑制作用，在多糖浓度为100 - 300 mg/mL时显示出明显的大肠杆菌抑制作用。

可见本发明制备的金樱子果实粗多糖且具有一定的抗菌活性，为进一步有关的药物的开发研究开发奠定了基础。

附图说明

图1为金樱子果实粗多糖的抗菌活性实验的效果图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明进行详细说明。

下面通过具体实施例对本发明进行说明，但本发明并不局限于此。下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和生物材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

实施例

1.金樱子果实样品预处理

称取适量的金樱子干燥的果实，经粉碎机粉碎之后，再过筛得到金樱子果实的粉末。金樱子果实的粉末置于圆底烧瓶中，加入500 - 1000 ml的石油醚，于水浴锅中加热，温度控制在60 - 90 ^oC的范围内进行回流提取脱脂6 - 12 h。待样品挥干试剂之后，加入500 -1000 ml体积分数为60 - 90%的乙醇在70 - 90 ^oC的温度下，进行回流提取2 - 5 h，除去样品中含有的单糖、低聚糖以及皂苷类等干扰化学成分。倒去上层的液体，将样品烘干至衡重，取出样品置于干燥干净的药品瓶中，放在阴凉干燥处待用。

2多糖标准曲线的绘制

称取0.1000 - 0.5000g已干燥至衡重的D-葡萄糖对照品，用去离子水定容到得到0.1- 0.5 mg/ml的葡萄糖对照品溶液。然后，精确吸取该葡萄糖对照品溶液0.2 - 1.0 ml分别置于试管中，分别加去离子水定容，然后分别加入浓度为3 - 8%的苯酚溶液1.0 - 4.0 ml，摇匀，缓慢加入浓硫酸2.0 - 5.0 ml ，室温下放置10 - 40 min；另外，以蒸馏水代替葡萄糖对照品溶液，同上操作，作为空白组。之后，用紫外分光光度计在450 - 650nm波长处分别测定其吸收度。求得吸光度与多糖浓度之间的标准曲线回归方程。

3金樱子果实粗多糖得率的测定方法

精确称取金樱子果实干燥的粉末1.0 - 4.0 g, 按照设计好的料液比、微波功率、提取次数以及提取时间进行微波提取。用水循环真空泵对提取样液进行抽滤，移取滤液5 - 25ml置于容量瓶中，摇匀定容，作为供试液备用。按照3.2.2中样品的测定，准确移取0.1 - 1ml供试液于试管中，按照标准曲线的操作方法,测定样品的吸光度，再根据标准曲线的回归方程推导出样品中的多糖浓度，计算出样品的多糖得率。

式中：C—测定的多糖质量浓度（mg/ml）；V—提取液的体积（ml）；N—稀释因素；W—金樱子果实粉末的质量（g）。

4金樱子粗多糖抗菌活性研究

在金樱子粗多糖抑菌试验中，考查多糖不同浓度的抑菌效果，用PBS配置金黄色葡萄球菌的菌悬液10³ - 10⁸ cfu/mL，将无菌悬液均匀的涂布在无菌的培养基平板上，加入50 -300 uL的多糖溶液。用无菌水作为对照。将无菌平板在培养箱培养10 - 20 h观察抑菌圈的直径用游标卡尺量取抑菌圈。实验结果表明在多糖浓度为100 - 200 mg/mL时显示出明显的金黄色葡萄球菌抑制作用，在多糖浓度为100 - 300 mg/mL时显示出明显的大肠杆菌抑制作用。