阅读说明：本技术 一种多糖、硫酸化多糖和在美白淡斑化妆品中的应用 (Polysaccharide, sulfated polysaccharide and application in whitening and spot-lightening cosmetics ) 是由 陈敏 于 2019-10-26 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种多糖、硫酸化多糖和在美白淡斑化妆品中的应用。本发明从金钱蒲全草中制备得到了一种多糖含量在95％左右的金钱蒲多糖,并对其衍生化修饰得到一种硫酸化金钱蒲多糖。酪氨酸酶抑制活性测试结果表明,金钱蒲多糖对酪氨酸酶具有较高的抑制作用,将金钱蒲多糖硫酸化修饰得到的硫酸化金钱蒲多糖对酪氨酸酶的抑制作用更强,抑制强度提高了80％以上,金钱蒲多糖及其衍生化产物硫酸化金钱蒲多糖都具有用作化妆品添加剂提高化妆品美白淡斑效果的前景。(The invention discloses a polysaccharide, a sulfated polysaccharide and application in whitening and spot-lightening cosmetics. The invention prepares a desmodium polysaccharide with the polysaccharide content of about 95 percent from the whole herb of desmodium, and obtains a sulfated desmodium polysaccharide by derivatization and modification of the desmodium polysaccharide. The tyrosinase inhibitory activity test result shows that the zamioculcas zamiifolia polysaccharide has a higher inhibitory effect on tyrosinase, the sulfated zamioculcas zamiifolia polysaccharide obtained by sulfating and modifying the zamioculcas zamiifolia polysaccharide has a stronger inhibitory effect on tyrosinase, the inhibitory strength is improved by more than 80%, and the zamioculcas zamiifolia polysaccharide and the sulfated zamioculcas zamiifolia polysaccharide serving as a derivative thereof have the prospect of being used as a cosmetic additive to improve the whitening and spot-lightening effects of cosmetics.)

一种多糖、硫酸化多糖和在美白淡斑化妆品中的应用

技术领域

本发明属于化学领域，具体涉及一种多糖、硫酸化多糖和在美白淡斑化妆品中的应用。

背景技术

酪氨酸酶抑制剂是目前公认的用于美白类化妆品的美白添加剂，如美白淡斑成分曲酸。因此，加强酪氨酸酶抑制剂的开发可以丰富化妆品中美白淡斑添加剂的种类。

植物多糖是大自然对人类的馈赠，许多植物多糖具有生物活性，如免疫调节、抗肿瘤、降血糖、降血脂、抗辐射、抗菌抗病毒、保护肝脏等保健作用。所以植物多糖早已被广泛运用到医学界、餐饮界等大众生活领域中。将植物多糖应用于化妆品具有安全无刺激的优点。

金钱蒲Acorusgramineus Soland.是天南星科菖蒲属植物，生于沟边阴湿之处，撕碎叶脉有浓郁的香味，主要分布于长江流域以南各省。金钱蒲在民间常用于治疗癫痫、痰厥、热病神昏、健忘、气闭耳聋、心胸烦闷、胃痛、腹痛、风寒湿痹、痈疽热毒、跌打损伤等病症，主要是以根茎入药。研究表明，金钱蒲全草含有多种化学成分，如黄酮、皂苷、多糖等。

金钱蒲全草中多糖的研究极少，没有其对酪氨酸酶抑制作用的活性报道。

发明内容

本发明的目的是为了提供一种多糖、硫酸化多糖和在美白淡斑化妆品中的应用。

本发明目的通过以下技术方案实现：

一种多糖，通过如下方法制备：

取洗净干燥的金钱蒲全草，粉碎，过筛，加入去离子水加热提取，提取液过滤，减压浓缩，离心，上清液用4倍体积的无水乙醇醇析，沉淀用去离子水复溶至原上清液体积，重复用4倍体积的无水乙醇醇析一次，沉淀依次用乙醇、丙酮交替洗涤，挥干溶剂后复溶于去离子水中，用Sevag法脱蛋白，冷冻干燥得金钱蒲多糖

优选地，粉碎后过40目筛。

优选地，按照料液比1kg:8～12L加入去离子水。

优选地，加热提取的温度为75～85℃。

优选地，按照1kg全草对应1L浓缩液减压浓缩。

优选地，离心条件为4000r/min离心10min。

优选地，沉淀依次用乙醇、丙酮按照1g沉淀对应50mL溶剂交替洗涤3次。

上述多糖用于制备美白淡斑化妆品的用途。

一种上述多糖的硫酸化产物。

上述硫酸化产物用于制备美白淡斑化妆品的用途。

有益效果：

本发明从金钱蒲全草中制备得到了一种多糖含量在95％左右的金钱蒲多糖，并对其衍生化修饰得到一种硫酸化金钱蒲多糖。酪氨酸酶抑制活性测试结果表明，金钱蒲多糖对酪氨酸酶具有较高的抑制作用，将金钱蒲多糖硫酸化修饰得到的硫酸化金钱蒲多糖对酪氨酸酶的抑制作用更强，抑制强度提高了80％以上，金钱蒲多糖及其衍生化产物硫酸化金钱蒲多糖都具有用作化妆品添加剂提高化妆品美白淡斑效果的前景。

附图说明

图1为实施例1方法制备的金钱蒲多糖(A)与硫酸化金钱蒲多糖(B)扫描电镜图。

图2为金钱蒲多糖、硫酸化金钱蒲多糖和阳性药物曲酸对酪氨酸酶抑制作用的IC50值。

具体实施方式

下面结合附图和实施例具体介绍本发明实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。

实施例1：金钱蒲多糖的提取

取洗净干燥的金钱蒲全草，粉碎，过40目筛，按照料液比1kg:10L加入去离子水，80℃加热提取2h，共提取3次，合并提取液，过滤，按照1kg全草对应1L浓缩液进行减压浓缩，4000r/min条件下离心10min，上清液用4倍体积的无水乙醇醇析12h，沉淀用去离子水复溶至原上清液体积，重复用4倍体积的无水乙醇醇析一次，沉淀依次用乙醇、丙酮按照1g沉淀对应50mL溶剂交替洗涤3次，挥干溶剂后复溶于去离子水中，用Sevag法脱蛋白，冷冻干燥得金钱蒲多糖，经苯酚-硫酸法测定，多糖含量为95.23％，多糖含量非常高。

实施例2：金钱蒲多糖的提取

取洗净干燥的金钱蒲全草，粉碎，过40目筛，按照料液比1kg:8L加入去离子水，75℃加热提取2h，共提取3次，合并提取液，过滤，按照1kg全草对应1L浓缩液进行减压浓缩，4000r/min条件下离心10min，上清液用4倍体积的无水乙醇醇析12h，沉淀用去离子水复溶至原上清液体积，重复用4倍体积的无水乙醇醇析一次，沉淀依次用乙醇、丙酮按照1g沉淀对应50mL溶剂交替洗涤3次，挥干溶剂后复溶于去离子水中，用Sevag法脱蛋白，冷冻干燥得金钱蒲多糖，经苯酚-硫酸法测定，多糖含量为95.38％，多糖含量非常高。

实施例3：金钱蒲多糖的提取

取洗净干燥的金钱蒲全草，粉碎，过40目筛，按照料液比1kg:12L加入去离子水，85℃加热提取2h，共提取3次，合并提取液，过滤，按照1kg全草对应1L浓缩液进行减压浓缩，4000r/min条件下离心10min，上清液用4倍体积的无水乙醇醇析12h，沉淀用去离子水复溶至原上清液体积，重复用4倍体积的无水乙醇醇析一次，沉淀依次用乙醇、丙酮按照1g沉淀对应50mL溶剂交替洗涤3次，挥干溶剂后复溶于去离子水中，用Sevag法脱蛋白，冷冻干燥得金钱蒲多糖，经苯酚-硫酸法测定，多糖含量为94.05％，多糖含量非常高。

实施例4：硫酸化金钱蒲多糖的制备

按照文献方法(高山红景天多糖的硫酸化修饰及DPPH自由基清除活性研究，中草药，第48卷第24期2017年12月)对金钱蒲多糖进行硫酸化，步骤如下：

1、硫酸化酯化剂的配制

先将三颈烧瓶、冷凝管连在能搅拌、能加热的水浴锅上，冷凝管通水。在水浴锅中放入冰块后，将吡啶按照硫酸化试剂的比例(氯磺酸与吡啶的体积比为1:4)用带有玻璃枪头的移液枪转移到三颈烧瓶中，打开搅拌器搅拌5min。用带有玻璃枪头的移液枪根据硫酸化试剂的比例再吸取一定量的氯磺酸逐滴加入到正在搅拌的三颈烧瓶中，加完后，将冰块从水浴锅中拿出，然后将温度调节成20℃，实验中保持搅拌状态，30min后，备用。

2、硫酸化金钱蒲多糖的制备

精确称取100mg金钱蒲多糖(按照实施例1方法制备)，放入小烧杯中。量取20mL无水N,N-二甲基甲酰胺，倒入盛有金钱蒲多糖的小烧杯中，搅拌30min使完全溶解后，将其转移至装有硫酸化酯化剂(10mL)的三颈烧瓶中，调节温度至60℃，反应2h。反应结束后，温度恢复至室温，加入约15mL蒸馏水至分层反应液不再继续分层，静置，用4mol/L的氢氧化钠溶液将反应液的pH值调节至7.0。在3500r/min下离心10min，收集上清液，再用3倍体积的乙醇沉降过夜，在3500r/min下离心10min，收集沉淀。沉淀用蒸馏水复溶后，将其转移至透析袋中脱盐，分别用自来水、蒸馏水、超纯水各透析24h，冷冻干燥即得硫酸化金钱蒲多糖，含硫量为21.35％。

图1为实施例1方法制备的金钱蒲多糖(A)与上述硫酸化金钱蒲多糖(B)扫描电镜图。

实施例5：金钱蒲多糖及其硫酸化产物对酪氨酸酶的抑制活性

将实施例1～3制备的金钱蒲多糖、实施例4制备的硫酸化金钱蒲多糖和阳性药物曲酸分别配制成不同浓度的样品溶液，酪氨酸酶抑制活性的测定按照王加利等提供的方法进行(驱虫斑鸠菊化学成分及酪氨酸酶抑制活性研究，中药材，第40卷第8期2017年8月)。该反应在96孔培养板中进行，总反应体系为200μL：不同浓度的样品溶液40μL；67mmol/L磷酸盐缓冲液80μL；100U/mL酪氨酸酶溶液40μL；2.5mmol/L左旋多巴40μL。调零孔仅加67mmol/L磷酸盐缓冲液200μL。加样完毕后，混匀，将其置于37℃水浴孵箱中孵育20min，用酶联免疫检测仪检测反应产物在490nm波长处的特异性吸光值(A490)，重复测试3次。按照下式计算金钱蒲多糖、硫酸化金钱蒲多糖和阳性药物曲酸对酪氨酸酶的抑制率：酪氨酸酶抑制率(％)＝[(A－B)－(C－D)]/(A－B)×100％。其中，A＝A490－药+酶；B＝A490－药－酶；C＝A490+药+酶；D＝A490+药－酶。同时以抑制率对抑制剂浓度作图，根据抑制曲线求得金钱蒲多糖、硫酸化金钱蒲多糖和阳性药物曲酸的IC50值。结果如表1和图2所示。

表1金钱蒲多糖、硫酸化金钱蒲多糖和阳性药物曲酸对酪氨酸酶抑制作用的IC50值

测试结果表明，金钱蒲多糖对酪氨酸酶具有较高的抑制作用，将金钱蒲多糖硫酸化修饰得到的硫酸化金钱蒲多糖对酪氨酸酶的抑制作用更强，抑制强度提高了80％以上，金钱蒲多糖和硫酸化金钱蒲多糖都具有用作化妆品添加剂提高化妆品美白淡斑效果的前景。

上述实施例的作用在于具体介绍本发明的实质性内容，但本领域技术人员应当知道，不应将本发明的保护范围局限于该具体实施例。