阅读说明：本技术 抗hpv型***用温敏凝胶、其制备方法及应用 (anti-HPV type vaginal temperature-sensitive gel, preparation method and application thereof ) 是由 刘志鹏 徐俊 于 2019-12-12 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种抗HPV型阴道用温敏凝胶、其制备方法及应用。该温敏凝胶包括特定配比的泊洛沙姆、壳聚糖、葡萄糖酸氯己定、大鲵低聚糖肽、重组人干扰素、细胞生长因子,在此基础上可进一步添加抗病毒药物、抗细菌药物、抗真菌药物、抗霉菌药物、抗支原体药物等功效成分；该温敏凝胶是一种缓释制剂,其pH值符合阴道环境,低于28℃时呈液体状态,可渗透到子宫、阴道深部褶皱处,杀灭病原体,接触体温3-5分钟后,形成凝胶,覆盖于病患部位,不易溢出,最大限度保证了药物与受药部位的作用时间及作用浓度。而且,本发明的凝胶能够阻逆HPV病毒E6,E7蛋白合成,抑制HPV病毒增殖；同时对革兰氏阳性菌、阴性菌及真菌均有较强的杀菌作用。(The invention provides an anti-HPV type vaginal temperature-sensitive gel, a preparation method and application thereof. The temperature-sensitive gel comprises poloxamer, chitosan, chlorhexidine gluconate, giant salamander oligosaccharide peptide, recombinant human interferon and cell growth factors in a specific ratio, and on the basis, effective components such as antiviral drugs, antibacterial drugs, antifungal drugs, mycoplasma resistant drugs and the like can be further added; the temperature-sensitive gel is a sustained-release preparation, the pH value of the temperature-sensitive gel accords with the vaginal environment, the temperature-sensitive gel is in a liquid state at the temperature of lower than 28 ℃, the temperature-sensitive gel can permeate into deep folds of uterus and vagina to kill pathogens, the gel is formed after contacting with body temperature for 3-5 minutes, the gel is covered on the affected part and is not easy to overflow, and the action time and the action concentration of a medicament and a medicament receiving part are ensured to the maximum extent. Moreover, the gel of the invention can prevent the synthesis of E6 and E7 proteins of the HPV virus and inhibit the proliferation of the HPV virus; meanwhile, the bactericidal composition has strong bactericidal effect on gram-positive bacteria, gram-negative bacteria and fungi.)

抗HPV型***用温敏凝胶、其制备方法及应用

技术领域

本发明涉及妇科外用药物技术领域，具体涉及一种抗HPV型***用温敏凝胶、其制备方法及应用。

背景技术

女性***天然温湿、分泌物较多，极易滋生微生物，因此对***的护理是保证女性健康的重要手段。在***护理产品中，洗剂、栓剂、传统凝胶是应用最广泛的剂型；其中，洗剂为液体制剂，尽管可冲洗***但洗剂易溢出体外，导致局部作用时间过短，局部护理、杀菌作用较差；而且经常用大量洗剂清洁生殖道，会破坏***天然的防护机制，破坏***内生态平衡，易产生负面作用。栓剂有良好的局部滞留特征，但其局部治疗有效部位限于***口2-4cm，而***长为10-12cm；栓剂无法覆盖全生殖，造成护理效果差，炎症不易治疗，是众多女性炎症反复发作的根源。

凝胶剂型在一定程度上克服了上述问题，借助给药器可将凝胶剂送达到***内8cm处，且具有良好的附着性。然而，由于以固体凝胶形式给药时药物与病患组织接触分散不均匀，且目前凝胶剂的凝胶强度小，生物粘附力差，局部作用时间不够，因此极大影响疗效。

HPV(Human papillomavirus，人***瘤病毒)是目前世界范围内唯一证实与癌症直接相关的病毒(HPV反复感染能诱发女性子***的发生和发展)。根据流行病学统计，几乎所有***病例都是由HPV感染导致的。目前，我国HPV的感染率非常高，40岁女性一过性感染率高达91％，高危型感染率高达40％。虽然大部分HPV感染可被机体自身免疫系统清除，但在部分情况下，HPV感染可能变为持续性感染。因此，所有妇女都面临HPV感染转为持续性感染的风险，以及癌前病变发展为浸润性***的风险。由此可见，HPV病毒的防控对女性生理健康具有重要意义；然而现有技术中，对HPV病毒的预防和治疗主要依靠疫苗或干扰素来实现，尚无外用的主动预防手段，而常用的***外用药物也不具有HPV防治功效。

发明内容

本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种抗HPV型***用温敏凝胶、其制备方法及应用，以解决现有技术中常规***凝胶不具有抗HPV功效的技术问题。

本发明要解决的另一技术问题是常规***凝胶对女性***炎的治疗效果有待提升。

为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：

抗HPV型***用温敏凝胶，包括以下重量份的成分：泊洛沙姆10～30份，壳聚糖0.05～1份，葡萄糖酸氯己定0.1～1份，大鲵低聚糖肽1～5份；所述抗HPV型***用温敏凝胶中含有100万～1000万IU重组人干扰素；所述抗HPV型***用温敏凝胶中含有1～100μg/mL细胞生长因子。

作为优选，所述抗HPV型***用温敏凝胶包括以下重量份的成分：泊洛沙姆15～25份，壳聚糖0.5～1份，葡萄糖酸氯己定0.1～0.5份，大鲵低聚糖肽1.4～4.5份；所述抗HPV型***用温敏凝胶中含有100万～7000万IU重组人干扰素；所述抗HPV型***用温敏凝胶中含有1～70μg/mL细胞生长因子。从而获得粘附性更高的温敏凝胶。

作为优选，所述泊洛沙姆选自以下成分的其中一种或其中若干种：泊洛沙姆407，泊洛沙姆108，泊洛沙姆188，泊洛沙姆338。

作为优选，所述温敏凝胶还包括以下成分的其中一种或其中若干种：抗病毒药物，抗细菌药物，抗真菌药物，抗霉菌药物，抗支原体药物。

作为优选，所述抗病毒药物选自以下成分的其中一种或其中若干种：大鲵低聚糖肽、重组人干扰素、细胞生长因子、没食子酸酯。

作为优选，所述抗细菌药物选自以下成分的其中一种：复方聚维酮碘搽剂，复方氯己定含漱液，复方新霉素，高锰酸钾，过氧苯甲酰，复方氯己定，红霉素，甲硝唑氯己定，甲紫溶液，克林霉素甲硝唑，利多卡因氯己定，克罗米通，酞丁安，甲硝唑葡萄糖，新霉素氟轻松，盐酸环丙沙星，盐酸林可霉素。

作为优选，所述抗真菌药物选自以下成分的其中一种：十一烯酸，醋酸，水杨酸，乳酸，灰黄霉素，制霉菌素，克念菌素，益康唑，咪康唑，联苯苄唑，克霉唑，酮康唑，两性霉素B，氟胞嘧啶，甲帕霉素，球红霉素，氟康唑，伊曲康唑。

作为优选，所述抗霉菌药物选自以下成分的其中一种：制霉菌素，氟康唑，两性霉素B，咪康唑，酮康唑。

作为优选，所述抗支原体药物选自以下成分的其中一种：四环素，强力霉素，阿齐霉素，甲胺四环素，米诺环素，交沙霉素，莪术油。

作为优选，所述温敏凝胶的pH为4.0～4.5；所述温敏凝胶胶凝的温度为28℃。

在以上技术方案的基础上，本发明进一步提供了上述抗HPV型***用温敏凝胶的制备方法，包括以下步骤：

1)将配方量的泊洛沙姆与配方量的壳聚糖加水搅拌均匀，静置溶胀，而后调节pH至4.0～4.5，得到空白凝胶；

2)将步骤1)所得的空白凝胶与配方量的其他成分混合，搅拌均匀，即得到所述抗HPV型***用温敏凝胶。

在以上技术方案的基础上，本发明进一步提供了上述抗HPV型***用温敏凝胶用于制备***HPV感染治疗药物或***修复药物的应用。

此外，上述抗HPV型***用温敏凝胶还可用于治疗由HPV感染引起的***病变及其它***炎症，包括霉菌性***炎，细菌性***炎，念珠菌性***炎，老年性***炎，滴虫性***炎，支原体性***炎，幼女性***炎。

作为优选，所述壳聚糖为羧甲基壳聚糖。

本发明提供了一种抗HPV型***用温敏凝胶、其制备方法及应用。该技术方案提供一种可随温度变化进行可逆性溶胶-凝胶转换的温敏空白凝胶作为基质，进而向该基质中添加功效成分。该温敏凝胶包括特定配比的泊洛沙姆、壳聚糖、葡萄糖酸氯己定、大鲵低聚糖肽、重组人干扰素、细胞生长因子，在此基础上可进一步添加抗病毒药物、抗细菌药物、抗真菌药物、抗霉菌药物、抗支原体药物等功效成分；该温敏凝胶是一种缓释制剂，其pH值符合***环境，低于28℃时呈液体状态，可渗透到子宫、***深部褶皱处，杀灭病原体，接触体温3-5分钟后，形成凝胶，覆盖于病患部位，不易溢出，最大限度保证了药物与受药部位的作用时间及作用浓度。而且，本发明的凝胶能够阻逆HPV病毒E6，E7蛋白合成，抑制HPV病毒增殖；同时对革兰氏阳性菌、阴性菌及真菌均有较强的杀菌作用，可解决目前常见***药物作用时间短、无法根治、易复发等缺点。

本发明对HPV病毒、革兰氏阳性菌、阴性菌及真菌均有较强的杀灭作用；而且其使用方便，效果良好。同时，本发明温敏凝胶对霉菌性***炎、细菌性***炎、念珠菌性***炎、老年性***炎、滴虫性***炎、支原体性***炎、幼女性***炎具有很好的预防和治疗作用。

本发明能安全、有效地治疗***HPV感染及多种细菌性***疾病。其低温下呈液体、高温下呈凝胶的温敏特性使药物均匀覆盖在粘膜表面，该特性成功解决了现有技术中常规凝胶的诸多缺陷。本发明作为一种在***HPV感染治疗及***护理中的解决方案，为患者提供一种顺应性高、效用更好的选择。

与现有技术相比，本发明的技术效果还集中体现在以下方面：本发明在温度低于某个胶凝温度时，制剂形态为液体，可渗透到***、子宫任何深部褶皱处，接触体温后3-5分钟转变为固态，可在粘膜表面形成一定强度的膜，极大增强了对***粘膜的覆盖性保护及润滑性，抗菌能力极大提高。成功解决了普通凝胶剂在病患部位分散不均匀的问题，同时也避免了栓剂无法抵达***深部的问题，保证了在一定时间内维持药物浓度，对黏膜具有机械保护的作用。其用药方便、卫生，也不会污染衣物，患者的顺应性较高。

附图说明

图1是本发明

具体实施方式

中，凝胶在实验动物***内残留量随时间变化图。

图2是本发明具体实施方式中，不同实验组中HPV的mRNA相对表达率结果图。

具体实施方式

以下将对本发明的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。以下实施例中所使用的近似性语言可用于定量表述，表明在不改变基本功能的情况下可允许数量有一定的变动。除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。

实施例1

抗HPV型***用温敏凝胶，包括以下重量份的成分：泊洛沙姆10份，壳聚糖0.05份，葡萄糖酸氯己定0.1份，大鲵低聚糖肽1份；所述抗HPV型***用温敏凝胶中含有100万IU重组人干扰素；所述抗HPV型***用温敏凝胶中含有1μg/mL细胞生长因子。

实施例2

抗HPV型***用温敏凝胶，包括以下重量份的成分：泊洛沙姆30份，壳聚糖1份，葡萄糖酸氯己定1份，大鲵低聚糖肽5份；所述抗HPV型***用温敏凝胶中含有1000万IU重组人干扰素；所述抗HPV型***用温敏凝胶中含有100μg/mL细胞生长因子。

实施例3

抗HPV型***用温敏凝胶，包括以下重量百分比的成分：泊洛沙姆10％～30％，壳聚糖0.05％～1％，葡萄糖酸氯己定0.1％～1％，大鲵低聚糖肽1％～5％；所述抗HPV型***用温敏凝胶中含有100万～1000万IU重组人干扰素；所述抗HPV型***用温敏凝胶中含有1～100μg/mL细胞生长因子。

实施例4

抗HPV型***用温敏凝胶，包括以下重量百分比的成分：泊洛沙姆20％，壳聚糖0.08％，葡萄糖酸氯己定0.5％，大鲵低聚糖肽3％；所述抗HPV型***用温敏凝胶中含有550万IU重组人干扰素；所述抗HPV型***用温敏凝胶中含有50μg/mL细胞生长因子。同时该温敏凝胶还包括抗病毒药物，抗细菌药物，抗真菌药物，抗霉菌药物，抗支原体药物。

实施例5(测试本发明凝胶的相变温度)

取本发明的温敏凝胶，倒入西林瓶，水浴加热。倾倒西林瓶，以凝胶不流动为相变温度。

结果显示，本发明的凝胶在28℃时性质由液体变为凝胶状，且该凝胶粘附性较高。

实施例6

取本发明的温敏凝胶，加入荧光标记物；取某品牌的固体凝胶，加入荧光标记物作为对照组，分别注入家兔***中，于1h、3h、6h、12h、16h、20h、24h、处死家兔，取***观察凝胶在家兔体内的滞留时间。实验结果如图1所示。

实验结果显示某品牌的固体凝胶给药3h后，凝胶基本排空，而本发明的温敏凝胶基质24h时还可观察到，因此体内滞留时间大于24h，可实现一天给药一次的治疗目标。

实施例7

将SPF级雌性家兔60只，激素预处理。15只不做任何处理，为对照组；45只接种HPV16病毒，分为3组，构建HPV16感染***炎家兔模型。接种后的家兔一组给予空白凝胶基质，一组给予某品牌凝胶，一组给予本发明凝胶，每天给药一次，连续7天，于末次给药后处死家兔并解剖。观察***状态。

观察显示，对照组家兔***正常无病变；HPV16感染组中，使用空白凝胶组的家兔***出现丘疹，粘膜表面糙角化；使用本发明凝胶实验组的家兔***基本恢复正常；使用某品牌凝胶的家兔***症状减轻，但并未完全恢复正常。实验结果如表1所示。

表1给药后治愈率情况统计表

组别	例数	治愈例数	百分比％
				本发明凝胶组	15	13	87
某品牌凝胶组	15	4	27
				空白凝胶组	15	0	0

实施例8

取实施例7中的家兔鳞状上皮细胞，提取RNA，反转录后，通过qPCR技术测定HPV16mRNA相对表达量。实验结果如图2所示。

实验结果显示，使用本发明的凝胶后，HPV的mRNA表达量极低，说明使用本发明凝胶后HPV病毒得到了很好的抑制；使用某品牌的凝胶后，HPV表达量相对于空白凝胶来讲，有一定降低，但是未能得到完全抑制。本次qPCR结果与实施例7中***观察结果相符。

本实验中：

荧光标记物：SyberGreen

对照基因：Rplp0

引物1：CACTGGTCTAGGACCCGAGAAG

引物2：GGTGCCTCTGGAGATTTTCG

HPV16 E6基因：

引物1：ACCAAAAGAGAACTGCAA

引物2：CAGCTGGGTTTCTCTACGTG

以上对本发明的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明。凡在本发明的申请范围内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 刘志鹏

<120> 抗HPV型***用温敏凝胶、其制备方法及应用

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequence)

<400> 1

cactggtcta ggacccgaga ag 22

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequence)

<400> 2

ggtgcctctg gagattttcg 20

<210> 3

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequence)

<400> 3

accaaaagag aactgcaa 18

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequence)

<400> 4

cagctgggtt tctctacgtg 20