本发明涉及分子生物学领域,具体而言,涉及一种用于胞嘧啶碱基编辑的融合蛋白及其应用。该融合蛋白包含a)Cas9酶域；b)不稳定结构域(DD)；c)胞嘧啶脱氨酶域(CDA)以及d)尿嘧啶糖苷酶抑制剂(UGI)域。其能够在各种真核生物的基因组中实现高效率、高精度、可调控的碱基编辑。并能够在不引入缺失和插入的情况下,在各种真核生物的基因组中实施高精度高功效的C-T碱基编辑。

本发明公开了脱氧核糖核酸酶I在制备治疗、预防交通性脑积水药物中的应用,将脱氧核糖核酸酶I作为有效成分,用于在颅内出血或颅内感染性疾病后,降解脑脊液中游离DNA,从而治疗和预防交通性脑积水,并通过减轻交通性脑积水所致的脑室扩张改善神经认知功能。本发明动物实验证明：以高岭土诱导的大鼠交通性脑积水模型作为研究载体。侧脑室注射脱氧核糖核酸酶I可显著降低脑脊液中游离DNA水平,且核磁共振结果显示脱氧核糖核酸酶I可显著减轻28后脑室扩张程度。进一步运用水迷宫实验发现,脱氧核糖核酸酶I可明显改善实验动物的神经认知功能。

本发明提供了一种CRISPR-SaCas9基因编辑系统及其应用。所述基因编辑系统包括SaCas9载体、sgRNA载体和同源重组模板pDonor载体。本发明通过选择合适的SaCas9载体的核定位信号、sgRNA载体的骨架结构以及sgRNA载体的靶序列长度等多种手段,提高了mNeonGreen在人诱导多能干细胞中EEF1A1位点和GAPDH位点的基因敲入效率。同时,本发明还系统比较了不同sgRNA长度的SpCas9和SaCas9针对同一位点的打靶效率和脱靶效率,最终得知本发明提供的CRISPR-SaCas9基因编辑系统是一种打靶效率高、脱靶效率低的新型基因编辑载体系统。

本发明涉及在哺乳动物中治疗免疫相关疾病或状况的杂交核酸酶分子和方法,以及在哺乳动物中治疗免疫相关疾病的药物组合物。

本发明公开了FXYD3蛋白和基因在炎症性肠道疾病的诊断和治疗中的应用。本发明不仅发现了FXYD3基因主要表达在结肠杯状细胞,且其在炎症性肠病患者的炎症组织中表达显著下降,该发现为临床诊断炎症性肠病及判断易感性提供了重要的依据和生物标志物。进一步研究发现在肠道上皮细胞特异性敲除FXYD3的小鼠中,结肠杯状细胞数量和mucin 2的分泌明显受到抑制,且炎症性肠病的疾病程度更严重。细胞因子IL-22,IL-10可促进肠上皮细胞中FXYD3的表达,FXYD3通过正向调控STAT3信号活化从而促进杯状细胞分化和黏蛋白的分泌,增强肠道黏膜屏障,该发现预示着FXYD3可作为临床治疗炎症性肠病的新靶点。

本发明公开了可卡因酯酶突变体及其应用。所述可卡因酯酶突变体由野生型可卡因酯酶经过突变所得,野生型可卡因酯酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示,所述可卡因酯酶突变体为T172R/G173Q/L196C/I301C,或者再增加V116K点突变,或者再增加A51位点突变,A51位点突变为L、Y、V、F或W。本发明筛选到的可卡因酯酶突变体对可卡因有毒代谢物苯甲酰芽子碱的催化效率相对于野生型酶大大提高。

本发明提供了多种新颖腺相关病毒(AAV)载体,用于治疗Ia型糖原贮积病(GSD-Ia)的基因疗法应用。本文披露了许多掺入有经修饰的G6PC启动子/增强子序列的重组核酸分子、载体和重组AAV。当从各种宿主细胞平台表达时,使用所述经修饰的G6PC启动子/增强子序列导致增强的AAV产量和质量。本文还提供包含本发明的新颖AAV的组合物和使用所述组合物治疗GSD-Ia的方法。

本发明涉及一种基于CRISPR增加SMN蛋白表达的方法,包括：构建特异性编辑TSL2位点的CRISPR基因编辑系统,该系统包括靶向TSL2位点的sgRNA和Cas9蛋白,或者是表达出靶向TSL2位点的特定sgRNA和Cas9蛋白的质粒或病毒载体；后将系统导入细胞内或小鼠体内,对SMN2基因7号外显子上的TSL2位点进行编辑,使其随机产生插入或缺失或插入和缺失,从而使TSL2结构破坏或不稳定,进而增加全长SMN的mRNA与蛋白表达。利用基因编辑技术精确编辑SMN2基因TSL2位点,编辑后的细胞能持续转录、翻译,蛋白增加的阳性克隆率达44％。

本公开提供了包含编码至少一种α-Gal A蛋白的GLA转基因的表达构建体,用于表达α-Gal A蛋白和预防、抑制或治疗法布里病或与法布里病相关的一种或多种症状。