阅读说明：本技术 一种单端孢霉烯型化合物及其作用 (Trichothecene compound and application thereof ) 是由 李天笑 贾学伟 许春平 王颖 张宗欣 孟丹丹 刘彬 姚延超 于 2019-09-03 设计创作，主要内容包括：本发明提出了一种单端孢霉烯型化合物露湿漆斑醇,化合物的结构式为<Image he="154" wi="166" file="DEST_PATH_IMAGE002.GIF" imgContent="drawing" imgFormat="GIF" orientation="portrait" inline="no"></Image>,单端孢霉烯型化合物露湿漆斑醇对人胃癌细胞株MGC803的半数抑制浓度为5.4±0.5μM；对人肺腺癌细胞细胞株NCI-H1975的半数抑制浓度为28.7±1.3μM,可在制备治疗胃癌和肺癌药物前体中应用,为下一步的胃癌和肺癌药物的药效研究奠定了物质基础。(The invention provides a trichothecene compound wet-spot pain alcohol, and the structural formula of the compound is The median inhibitory concentration of the trichothecene compound of the rhodanese wet spot alcohol to human gastric cancer cell strain MGC803 is 5.4 +/-0.5 mu M; the half inhibition concentration of human lung adenocarcinoma cell line NCI-H1975 is 28.7 +/-1.3 mu M, and the derivative can be applied to preparation of precursors of medicaments for treating gastric cancer and lung cancer, and lays a material foundation for the next pharmacodynamic study of gastric cancer and lung cancer medicaments.)

一种单端孢霉烯型化合物及其作用

技术领域

本发明属于天然药物技术领域，具体而言，涉及一种单端孢霉烯型化合物及其作用。

背景技术

单端孢霉烯是单端孢霉属(Trichotheciumsp.)、漆斑菌属(Myrotheciumsp.)、镰刀菌属(Fusariumsp.)、木霉属(Trichodermasp.)等属的真菌产生的一种毒素。已报道的单端孢霉烯类化合物具有多方面的生物活性，其抗肿瘤活性突出，是目前研究的热点。有研究表明，10,13位环合的单端孢霉烯类如露湿漆斑醇毒性低、安全性好，抗肿瘤效果不减，比不环合的化合物成药前景更好。目前此类化合物还没有对人胃癌MGC803和肺腺癌细胞NCI-H1975细胞株的活性测试报道。

因此，提供一种10,13位环合的单端孢霉烯类化合物，并研究此类化合物的抗肿瘤药效，为临床应用奠定了物质基础是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

本发明正是基于上述技术问题至少之一，本发明提出了一种抗肿瘤作用的单端孢霉烯新化合物及其制备方法，该化合物为抗肿瘤药物开发提供了有效的药物前体，也为下一步的药效研究奠定了物质基础。

有鉴于此，本发明提出了一种单端孢霉烯型化合物露湿漆斑醇，化合物的结构式为

根据本发明的第二方面，提出了单端孢霉烯型化合物露湿漆斑醇在用于制备治疗胃癌和肺癌药物前体中应用。

根据本发明的第三方面，提出了制备单端孢霉烯型化合物露湿漆斑醇的方法，包括以下步骤：

(1)将露湿漆斑菌活化后形成种子液，并在固体培养基中培养发酵；

(2)将步骤(1)得到的发酵物冷浸提取后，减压浓缩得到粗浸膏；

(3)将步骤(2)中粗浸膏利用大孔树脂柱色谱洗脱后，再将目标亚组分利用高效液相色谱进行分离纯化。

进一步的，固体培养基的配制方法为：60～100g大米、90～150mL水，浸泡过夜后105～115℃高压灭菌20～40min。

进一步的，步骤(3)中大孔树脂柱色谱洗脱梯度为10％～100％甲醇-水。

进一步的，步骤(3)中目标亚组分为20％～40％甲醇-水段。

进一步的，高效液相色谱洗脱液为甲醇与水体积比为30％～40％的甲醇-水。

本发明提出了一种单端孢霉烯型化合物及其作用，具有如下技术效果：本发明提出了一种新型10,13位环合的单端孢霉烯新化合物露湿漆斑醇，后续的研究中发现露湿漆斑醇对人胃癌细胞株MGC803的半数抑制浓度为5.4±0.5μM；对人肺腺癌细胞细胞株NCI-H1975的半数抑制浓度为28.7±1.3μM，可在制备治疗胃癌和肺癌药物前体中应用，为下一步的胃癌和肺癌药物的药效研究奠定了物质基础。

附图说明

图1示出了露湿漆斑醇的关键HMBC和¹H-¹HCOSY信号。

图2示出了露湿漆斑醇的高分辨质谱图。

图3示出了露湿漆斑醇的¹H-NMR图。

图4示出了露湿漆斑醇的¹³C-NMR图。

图5示出了露湿漆斑醇的¹H-¹HCOSY图。

图6示出了露湿漆斑醇的HSQC图。

图7示出了露湿漆斑醇的HMBC图。

图8示出了露湿漆斑醇的ROESY图。

具体实施方式

为了能够更清楚地理解本发明的上述目的、特征和优点，下面结合附图和具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述。需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明的实施例及实施例中的特征可以相互组合。

在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是，本发明还可以采用其他不同于在此描述的其他方式来实施，因此，本发明的保护范围并不受下面公开的具体实施例的限制。

实施例1菌种的发酵和提取

露湿漆斑菌(Myrothecium roridum)，保藏于美国标准菌株保藏中心(ATCC)，保藏号为ATCC60379。将该菌种划线复活，接种到PDB固体培养基，28℃培养箱中活化5天。用手术刀从PDB固体中切下菌落小块，接种到PDB液体培养基中，于28℃和160rpm的摇床上震荡培养5天得到种子液。然后将种子液接种到固体培养基中，在28℃恒温恒湿箱中静置培养30天。取大米发酵物，每100g发酵物加乙酸乙酯200mL，冷浸提取2次，合并提取液减压浓缩至无乙酸乙酯味得到乙酸乙酯浸膏。

实施例2

将浸膏上大孔树脂柱色谱，吸附过夜，以10％、30％、50％、70％、90％、100％甲醇-水梯度洗脱，每个梯度合并旋干至无液体，得到6个亚组分。将第2亚组分(30％部分)用半制备高效液相色谱进行分离纯化，流动相：35％MeOH，流速4mL/min，检测波长210nm，出峰时间14.8-15.3min。将该峰接出，旋蒸至全干，得到白色固体35.0mg。将该白色固体进行高分辨质谱和一维二维核磁分析结果如图1-8，确定该化合物结构为

高分辨质谱[M+Na]⁺m/z559.2142，计算值为559.2150(C₂₇H₃₆O₁₁Na)，化合物分子式为C₂₇H₃₆O₁₁。其¹H和¹³C核磁数据如表1所示。

表1化合物的¹H(600MHz)和¹³C(150MHz)核磁数据(MeOD)

实施例3药理实验

采用MTT方法，取处于对数生长期的人胃癌细胞株MGC803和人肺腺癌细胞株NCI-H1975，PBS冲洗，0.25％胰酶消化，加入新鲜培养基吹打成单细胞悬液。用血球计数板进行计数，调整细胞浓度为5～7×10³个/mL，取190μL/孔加入到96孔板上，置CO₂培养箱(37℃，5％CO₂，饱和湿度)培养。24h后加药10μL/孔，样品的工作液用培养基稀释至终浓度分别为50、25、12.5、6.25、3.125μM，加样组及空白组均设3个复孔。继续培养48h后，加入20μLMTT工作液。继续培养4h后，弃去培养基，加入DMSO150μL/孔，置于平板摇床上500rpm振摇10min。酶标仪测定各孔的OD值，测定波长490nm，参比波长570nm，计算细胞增殖抑制率。细胞增殖抑制率＝(空白对照OD值-给药组OD值)/空白对照组OD值×100％，以上实验均重复三次。结果如表2所示。

表2化合物的细胞毒IC₅₀活性数据(μM)

由表2可知，露湿漆斑醇对两株癌细胞都表现出较强的细胞毒活性，特别对于人胃癌细胞株MGC803的药效明显优于阳性药顺铂。

综上所述，本发明提出了一种新型10,13位环合的单端孢霉烯新化合物露湿漆斑醇，后续的研究中发现单端孢霉烯型化合物露湿漆斑醇对人胃癌细胞株MGC803的半数抑制浓度为5.4±0.5μM；对人肺腺癌细胞细胞株NCI-H1975的半数抑制浓度为28.7±1.3μM，可在制备治疗胃癌和肺癌药物前体中应用，为下一步的胃癌和肺癌药物的药效研究奠定了物质基础。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。