阅读说明：本技术 一种用有机合成高分子固定化微藻保种技术 (Microalgae seed conservation technology by organic synthesis polymer immobilization ) 是由 邓敏丽 于 2018-06-23 设计创作，主要内容包括：本发明提供了微藻保种技术邻域内的一种用有机合成高分子固定化微藻保种技术,其先定量称取有机合成高分子固定剂、氯化钠、藻液,然后将有机合成高分子固定剂和氯化钠分别加入蒸馏水,配成一定浓度的凝胶溶液,将有机合成高分子固定剂凝胶溶液煮沸消毒,再将有机合成高分子固定剂凝胶溶液与藻液按一定比例充分混匀,注射器均匀的速率滴入CaCl<Sub>2</Sub>溶液中,边滴边摇动,一定时间后形成固化的微藻胶珠,形成的微藻酸钙胶珠用消毒蒸馏水洗涤数次,得到固定藻细胞,保存培养,最后定时取样进行复活试验,室温下培养10天,先目测,后镜检,以判断是否存活；本发明的备方法简单,操作简单,不易污染,保种时间较长。(The invention provides a microalgae seed-preserving technology by immobilizing microalgae with an organic synthetic polymer, which comprises the steps of weighing an organic synthetic polymer fixing agent, sodium chloride and algae liquid in a certain amount, then adding the organic synthetic polymer fixing agent and the sodium chloride into distilled water respectively to prepare a gel solution with a certain concentration, boiling the organic synthetic polymer fixing agent gel solution for sterilization, then fully and uniformly mixing the organic synthetic polymer fixing agent gel solution and the algae liquid according to a certain proportion, and dropping CaCl into a syringe at a uniform rate 2 Dripping while shaking in the solution, forming solidified microalgae colloidal beads after a certain time, washing the formed microalgae calcium colloidal beads with sterilized distilled water for several times to obtain fixed algae cells, preserving and culturing, sampling at regular time, performing a revival test, culturing at room temperature for 10 days, firstly performing visual inspection, and then performing microscopic inspection to judge whether the microalgae cells survive; the preparation method is simple, the operation is simple, the pollution is not easy to occur, and the seed preservation time is longer.)

一种用有机合成高分子固定化微藻保种技术

技术邻域

本发明涉及一种保种技术，特别涉及一种用有机合成高分子固定化微藻保种技术。

背景技术

微藻的营养丰富，在人们的生活和生产实践中具有很广援的应用，在微藻的培养和应用中，保种技术十分重要，大规模微藻产业仅仅靠培养微藻是不够的，必须将藻种保存起来备用，才能满足需要，但微藻个体小，难分离，容易在保种过程中出现藻种单细胞纯种随环境变化发生变异，丧失自身的生理活性和遗传特性，所以藻种保存就显得尤为重要困，目前藻种保种方法常采用继代保种方法，操作重复且繁琐，不断传代过程藻种易污染，保种时间较短。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明的目的在于克服上述现有技术中的不足之处，提供一种用有机合成高分子固定化微藻保种技术，制备方法简单，操作简单，不易污染，保种时间较长。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：一种用有机合成高分子固定化微藻保种技术，所述制备方法包括以下步骤：

（A1）称量配液：定量称量有机合成高分子固定剂、氯化钠、藻液，将有机合成高分子固定剂和氯化钠分别加入蒸馏水，配成凝胶溶液；

（A2）固定：将有机合成高分子固定剂凝胶溶液消毒，有机合成高分子固定剂凝胶溶液与藻液按一定比例充分混匀，用注射器以6ml/min的速率滴入2%的CaCl₂溶液中，边滴边摇动，一定时间后形成固化的微藻胶珠，得到固定藻细胞；

（A3）保藏：将形成的微藻酸钙胶珠用消毒蒸馏水洗涤数次，保存培养；

（A4）检测：定时取样进行复活试验，室温下培养10天，先目测，后镜检，以判断是否存活。

本发明挑选出有机合成高分子固定剂，天平定量称取有机合成高分子固定剂、氯化钠、藻液，然后将有机合成高分子固定剂和氯化钠分别加入蒸馏水，配成一定浓度的凝胶溶液，将有机合成高分子固定剂凝胶溶液煮沸消毒备用，然后再有机合成高分子固定剂凝胶溶液与藻液按一定比例充分混匀，用注射器均匀的速率滴入CaCl₂溶液中，边滴边摇动，使游离的微藻细胞包埋在多糖或多聚化合物制成的网状支持物中，一定时间后形成固化的微藻胶珠，形成的微藻酸钙胶珠用消毒蒸馏水洗涤数次，得到固定藻细胞，保存培养，最后定时取样进行复活试验，室温下培养10天，先目测，后镜检，以判断是否存活；与现有技术相比，本发明的有益效果在于：该方法制备方法简单，操作简单，不易污染，保种时间较长。

作为本发明的进一步改进，所述有机合成高分子固定剂包括聚丙烯酰胺、聚乙烯醇、多孔硅胶和聚氨基甲酸乙酯的一种。

作为本发明的进一步改进，所述有机合成高分子固定剂浓度为1%～5%。

作为本发明的进一步改进，所述有机合成高分子固定剂与藻液混合比例为1:1～4:1。

具体实施方式

实施例1

一种用有机合成高分子固定化微藻保种技术，为制备微藻保种，其按如下步骤进行：

（A1）称量配液：挑选出有机合成高分子固定剂聚丙烯酰胺，天平定量称取有机合成高分子固定剂聚丙烯酰胺2.5g、氯化钠2g、量筒量取藻液25mL，蒸馏水100mL，然后将聚丙烯酰胺和氯化钠分别加入到100mL蒸馏水中，玻璃棒搅拌配成浓度为2.5%（W/V）的凝胶溶液；

（A2）固定：将聚丙烯酰胺凝胶溶液煮沸消毒备用，然后再有机合成高分子固定剂凝胶溶液与藻液按4:1的比例进行接种，充分混匀后制成胶-藻混悬液，用9号针头的注射器以6mL/min的速率滴入2%的CaCl2溶液中，边滴边摇动，约30min后形成固化的胶珠，从而使藻细胞得以固定，得到固定藻细胞；

（A3）保藏：将形成的胶珠用消毒蒸馏水洗涤两次，置于250ml的三角烧瓶内保存培养；

（A4）检测：定时取样进行复活试验，室温下培养10天，先目测，后镜检，以判断是否存活。

实施例2

一种用有机合成高分子固定化微藻保种技术，为制备微藻保种，其按如下步骤进行：

（A1）称量配液：挑选出有机合成高分子固定剂聚乙烯醇，天平定量称取有机合成高分子固定剂聚乙烯醇5g、氯化钠2g、量筒量取藻液100mL，蒸馏水100mL，然后将聚乙烯醇和氯化钠分别加入到100mL蒸馏水中，玻璃棒搅拌配成浓度为5%（W/V）的凝胶溶液；

（A2）固定：将聚乙烯醇凝胶溶液煮沸消毒备用，然后再有机合成高分子固定剂凝胶溶液与藻液按4:1的比例进行接种，充分混匀后制成胶-藻混悬液，用9号针头的注射器以6mL/min的速率滴入2%的CaCl2溶液中，边滴边摇动，约30min后形成固化的聚乙烯醇胶珠，从而使藻细胞得以固定，得到固定藻细胞；

（A3）保藏：将形成的聚乙烯醇胶珠用消毒蒸馏水洗涤两次，置于250ml的三角烧瓶内保存培养；

（A4）检测：定时取样进行复活试验，室温下培养10天，先目测，后镜检，以判断是否存活。

实施例3

一种用有机合成高分子固定化微藻保种技术，为制备微藻保种，其按如下步骤进行：

（A1）称量配液：挑选出有机合成高分子固定剂多孔硅胶，天平定量称取有机合成高分子固定剂多孔硅胶1g、氯化钠2g、量筒量取藻液50mL，蒸馏水100mL，然后将多孔硅胶和氯化钠分别加入到100mL蒸馏水中，玻璃棒搅拌配成浓度为5%（W/V）的凝胶溶液；

（A2）固定：将多孔硅胶凝胶溶液煮沸消毒备用，然后再有机合成高分子固定剂凝胶溶液与藻液按4:1的比例进行接种，充分混匀后制成胶-藻混悬液，用9号针头的注射器以6mL/min的速率滴入2%的CaCl2溶液中，边滴边摇动，约30min后形成固化的多孔硅胶胶珠，从而使藻细胞得以固定，得到固定藻细胞；

（A3）保藏：将形成的多孔硅胶胶珠用消毒蒸馏水洗涤两次，置于250ml的三角烧瓶内保存培养；

（A4）检测：定时取样进行复活试验，室温下培养10天，先目测，后镜检，以判断是否存活。

本发明并不局限于上述实施例，在本发明公开的技术方案的基础上，本邻域的技术人员根据所公开的技术内容，不需要创造性的劳动就可以对其中的一些技术特征作出一些替换和变形，这些替换和变形均在本发明保护范围内。