阅读说明：本技术 光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸、光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸盐及它们的水合物 (Optically active 2- amino-phosphono alkanoic acid, optically active 2- amino-phosphonoalkyl hydrochlorate and their hydrate ) 是由 渡边文太 吉冈龙藏 石田英晃 于 2018-04-13 设计创作，主要内容包括：本发明提供具有与NAHLSGEN同样的药理活性且保存稳定性优异的新型的化合物、及其制造方法。本发明的光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸盐的制造方法,其特征在于,使碱性光学活性化合物(其中,光学活性赖氨酸除外)与作为原料的下述式(1)所示的DL－2－氨基－膦酰基烷酸或其水合物反应,得到下述式(1－1)所示的D－2－氨基－膦酰基烷酸与上述碱性光学活性化合物的盐(包括水合物)、和下述式(1－2)所示的L－2－氨基－膦酰基烷酸与上述碱性光学活性化合物的盐(包括水合物)的非对映体盐混合物,将得到的非对映体盐混合物供于分步结晶而单离一种非对映体盐。<Image he="756" wi="700" file="DDA0002234616820000011.GIF" imgContent="drawing" imgFormat="GIF" orientation="portrait" inline="no"></Image>(The present invention provides the novel compound and its manufacturing method with pharmacological activity same as NAHLSGEN and excellent storage stability.The manufacturing method of optically active 2- amino-phosphonoalkyl hydrochlorate of the invention, it is characterized in that, make alkaline optically active compound (wherein, except optical activity lysine) with DL-2- amino-phosphono alkanoic acid or its hydrate reaction shown in following formula (1) as raw material, obtain the salt (including hydrate) of D-2- amino-phosphono alkanoic acid shown in following formula (1-1) and above-mentioned alkaline optically active compound, with the diastereomer salt mixture of L-2- amino-phosphono alkanoic acid shown in following formula (1-2) and the salt (including hydrate) of above-mentioned alkaline optically active compound, by obtained diastereomer salt mixture for fractional crystallization a kind of isolated diastereoisomeric salt.)

光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸、光学活性的2－氨基－膦 酰基烷酸盐及它们的水合物

技术领域

本发明涉及光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸、光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸盐及它们的水合物、以及它们的制造方法。本申请要求2017年4月17日在日本申请的日本特愿2017－081237号的优先权，将其内容援引于此。

背景技术

NAHLSGEN(注册商标)或GGsTop[通用名：DL－2－氨基－4－[(RSp)－(3－羧基甲基苯氧基)(甲氧基)磷酰基]丁酸]作为优异的GGT抑制剂而为人所知(专利文献1等)。

但是，NAHLSGEN在室温下不晶体化而是呈油状，供于冷冻干燥而勉强得到的无定形的粉末固体还具有潮解性，在室温下容易分解。因此，需要冷蔵或冷冻保存，非常难以处理。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2010－270115号公报

发明内容

发明要解决的课题

因此，本发明的目的在于，提供具有与NAHLSGEN同样的药理活性且保存稳定性优异的新颖的化合物、和其制造方法。

本发明的另一目的在于，提供高效地将构成DL－2－氨基－膦酰基烷酸的2种光学异构体单离的方法。

用于解决课题的手段

本发明人们为了解决上述课题而进行了深入研究。

已知与NAHLSGEN具有共同的骨架的2－氨基－5－膦酰基戊酸、2－氨基－7－膦酰基庚酸为2种光学异构体的混合物(外消旋体)，使用光学活性的赖氨酸进行旋光拆分。

对于包括2－氨基－5－膦酰基戊酸、2－氨基－7－膦酰基庚酸在内的总碳数4～10的DL－2－氨基－膦酰基烷酸，本发明人们发现了可以与这些形成具有良好的结晶性的盐的、赖氨酸以外的碱性光学活性化合物。

另外，发现：通过单离总碳数4～10的D－或L－2－氨基－膦酰基烷酸与上述碱性光学活性化合物的盐，再将其供于分解处理，从而可容易且高效地得到总碳数4～10的D－或L－2－氨基－膦酰基烷酸。

发现：特别是，总碳数4、6或8的D－或L－2－氨基－膦酰基烷酸与上述碱性光学活性化合物的盐或其水合物(即，含水盐)的结晶性尤其优异，将其单离，再供于分解处理，由此可以以高纯度且高效地得到总碳数4、6或8的D－或L－2－氨基－膦酰基烷酸或其水合物。

此外，还发现：通过上述方法得到的总碳数4、6或8的D－或L－2－氨基－膦酰基烷酸、它们与碱性光学活性化合物的盐、或者它们的水合物具有与NAHLSGEN同样的药理活性(例如胶原产生促进效果、谷胱甘肽产生促进效果、创伤修复促进效果)且保存稳定性优异。本发明是基于这些见解完成的。

即，本发明提供一种光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸盐的制造方法，其特征在于，使碱性光学活性化合物(其中，光学活性赖氨酸除外)与作为原料的下述式(1)所示的DL－2－氨基－膦酰基烷酸或其水合物反应，得到下述式(1－1)所示的D－2－氨基－膦酰基烷酸与上述碱性光学活性化合物的盐(包括水合物)、和下述式(1－2)所示的L－2－氨基－膦酰基烷酸与上述碱性光学活性化合物的盐(包括水合物)的非对映体盐混合物，将得到的非对映体盐混合物供于分步结晶而单离一种非对映体盐。

[化1]

(式中，m表示1～7的整数，*表示不对称原子)

[化2]

(式中，m、*与上述相同)

[化3]

(式中，m、*与上述相同)

另外，本发明提供上述的光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸盐的制造方法，其中，碱性光学活性化合物为选自辛可宁、辛可尼定、奎宁、奎尼定、光学活性的精氨酸、光学活性的苯丙氨酰胺、光学活性的鸟氨酸、光学活性的酪氨酸酰肼、光学活性的1－苯基丙胺、光学活性的2－苯基丙胺、光学活性的缬氨醇、光学活性的对羟基苯基甘氨酸酰肼、光学活性的对羟基苯基甘氨酸甲酯、光学活性的对羟基苯基甘氨酸乙酯、光学活性的葡糖胺、光学活性的亮氨醇、光学活性的1－苯基乙胺、和光学活性的2－氨基－1－丁醇中的化合物。

另外，本发明提供上述的光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸盐的制造方法，其中，作为原料，使用式(1)所示且式中的m为1、3或5的DL－2－氨基－膦酰基烷酸或其水合物。

另外，本发明提供上述的光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸盐的制造方法，其中，使用式(1)所示的DL－2－氨基－膦酰基烷酸的水合物作为原料，得到作为非对映体盐的、式(1－1)所示的D－2－氨基－膦酰基烷酸与碱性光学活性化合物的盐或其水合物、或者式(1－2)所示的L－2－氨基－膦酰基烷酸与碱性光学活性化合物的盐或其水合物。

另外，本发明提供下述式(1－1’－B)所示的D－2－氨基－膦酰基烷酸盐或其水合物。

[化4]

(式中，m’表示1、3或5，t表示0～5的数。Bs表示碱性光学活性化合物(其中，光学活性赖氨酸除外)。*表示不对称原子)

另外，本发明提供下述式(1－2’－B)所示的L－2－氨基－膦酰基烷酸盐或其水合物。

[化5]

(式中，m’表示1、3或5，t’表示0～5的数。Bs表示碱性光学活性化合物(其中，光学活性赖氨酸除外)。*表示不对称原子)

另外，本发明提供光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸或其水合物的制造方法，其特征在于，在通过上述的光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸盐的制造方法得到光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸盐(包括水合物)后，将其分解，得到具有与上述被处理化合物相同的空间构型的、对应的光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸或其水合物。

另外，本发明提供下述式(1－1’)所示的D－2－氨基－膦酰基烷酸水合物。

[化6]

(式中，m’表示1、3或5，n表示超过0且5以下的数。*表示不对称原子)

另外，本发明提供下述式(1－2’)所示的L－2－氨基－膦酰基烷酸水合物。

[化7]

(式中，m’表示1、3或5，n表示超过0且5以下的数。*表示不对称原子)

发明效果

上述式(1)所示的DL－2－氨基－膦酰基烷酸或其水合物具有与NAHLSGEN共同的骨架，但与NAHLSGEN相比能够简便且廉价地制造。另外，该化合物虽然为2种光学异构体的混合物(外消旋体)，但是根据本发明的光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸盐的制造方法、和光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸或其水合物的制造方法，可以高效地单离一种非对映体盐[即，D－2－氨基－膦酰基烷酸与上述碱性光学活性化合物的盐(包括水合物)、或者L－2－氨基－膦酰基烷酸与上述碱性光学活性化合物的盐(包括水合物)]，若将单离出的非对映体盐供于分解处理，则简便且高纯度地得到作为分解物的、光学活性的D－2－氨基－膦酰基烷酸或其水合物、或者L－2－氨基－膦酰基烷酸或其水合物。

另外，通过上述方法得到的非对映体盐或其分解物的结晶性优异。并且在室温时不吸湿，为非潮解性。因此，保存稳定性优异，易于处理。此外，具有与NAHLSGEN同样的药理活性(例如，胶原产生促进效果、谷胱甘肽产生促进效果、口腔粘膜及眼部粘膜等粘膜等的创伤修复促进效果)且不具有细胞毒性，安全性优异，因此，例如可以适宜地用于过敏性皮肤病、寻常性鱼鳞癣、老年性干燥症等皮肤病；牙周病、结膜炎等口腔粘膜及眼部的粘膜疾病的治疗或预防目的。

附图说明

图1是示出制备例1中得到的DL－2－氨基－4－膦酰基丁酸一水合物的热分析结果的图。

图2是示出制备例3中得到的DL－2－氨基－6－膦酰基己酸一水合物的热分析结果的图。

图3是示出制备例5中得到的DL－2－氨基－8－膦酰基辛酸一水合物的热分析结果的图。

图4是示出制备例7中得到的DL－2－氨基－10－膦酰基癸酸一水合物的热分析结果的图。

图5是示出实施例2中得到的L－2－氨基－4－膦酰基丁酸一水合物的热分析结果的图。

图6是示出实施例6中得到的D－2－氨基－6－膦酰基己酸·L－HPGM盐一水合物的热分析结果的图。

图7是示出实施例6中得到的D－2－氨基－6－膦酰基己酸一水合物的热分析结果的图。

图8是示出实施例8中得到的L－2－氨基－8－膦酰基辛酸·D－HPGH盐一水合物的热分析结果的图。

图9是示出实施例8中得到的D－2－氨基－8－膦酰基辛酸一水合物的热分析结果的图。

具体实施方式

[光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸盐的制造方法]

本发明的光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸盐的制造方法的特征在于，使碱性光学活性化合物(其中，光学活性赖氨酸除外。此后有时称为“Bs”)与作为原料的、下述式(1)所示的DL－2－氨基－膦酰基烷酸(此后有时称为“DL－AP”)或其水合物反应，得到下述式(1－1)所示的D－2－氨基－膦酰基烷酸(此后有时称为“D－AP”)与上述碱性光学活性化合物的盐(包括水合物)、和下述式(1－2)所示的L－2－氨基－膦酰基烷酸(此后有时称为“L－AP”)与上述碱性光学活性化合物的盐(包括水合物)的非对映体盐混合物(存在非对映体关系的一对盐的混合物)，将得到的非对映体盐混合物供于分步结晶，而单离一种非对映体盐(存在非对映体关系的一对盐中的一方)。需要说明的是，下述式中，m表示1～7的整数，*表示不对称原子

[化8]

[化9]

[化10]

DL－AP由于在1个分子中具有1个不对称原子(*)，因此为两种光学异构体的混合物。上述式中，(D)、(L)是用D－L表示法来表示键合于不对称原子的配体的空间构型的符号，在将羧基置于上方的Fischer投影中，(D)表示氨基位于右侧，(L)表示氨基位于左侧。需要说明的是，本说明书中，氨基酸以外的光学异构体的空间构型用R－S表示法来表示。

作为上述原料，特别是，从得到结晶性更优异的非对映体盐的角度出发，优选使用式(1)所示且式中的m为1、3或5的化合物(即，总碳数为4、6或8的DL－2－氨基－膦酰基烷酸)或其水合物。

另外，作为上述原料，从得到结晶性更优异的非对映体盐的角度出发，优选使用DL－AP的水合物。

因此，作为上述原料，优选使用式(1)所示且式中的m为1、3或5的化合物的水合物(即，总碳数为4、6或8的DL－2－氨基－膦酰基烷酸水合物)。

作为上述碱性光学活性化合物(Bs)，可列举例如：辛可宁、辛可尼定、奎宁、奎尼定、光学活性的精氨酸、光学活性的苯丙氨酰胺、光学活性的鸟氨酸、光学活性的酪氨酸酰肼、光学活性的1－苯基丙胺、光学活性的2－苯基丙胺、光学活性的缬氨醇、光学活性的对羟基苯基甘氨酸酰肼、光学活性的对羟基苯基甘氨酸甲酯、光学活性的对羟基苯基甘氨酸乙酯、光学活性的葡糖胺、光学活性的亮氨醇、光学活性的1－苯基乙胺、光学活性的2－氨基－1－丁醇等。需要说明的是，辛可宁与辛可尼定互为光学异构体，奎宁与奎尼定也互为光学异构体。在上述光学活性的化合物为氨基酸时，该化合物包含D体(D－Bs)和L体(L－Bs)，例如，光学活性的精氨酸包含D－精氨酸和L－精氨酸。在上述光学活性的化合物为氨基酸以外的化合物时，该化合物包含R体(R－Bs)和S体(S－Bs)，例如，光学活性的1－苯基丙胺包含(R)－1－苯基丙胺和(S)－1－苯基丙胺。

若使DL－AP或其水合物与碱性光学活性化合物反应，则可以形成D－AP与碱性光学活性化合物的盐或其水合物、和L－AP与碱性光学活性化合物的盐或其水合物的混合物(非对映体盐混合物)。

例如，在使用氨基酸作为碱性光学活性化合物(Bs)时，如果使L体(L－Bs)与DL－AP或其水合物反应，则得到包含D－AP与L体(L－Bs)的盐或其水合物、和L－AP与L体(L－Bs)的盐或其水合物的一对非对映体盐的非对映体盐混合物；如果使D体(D－Bs)与DL－AP或其水合物反应，则得到包含D－AP与D体(D－Bs)的盐或其水合物、和L－AP与D体(D－Bs)的盐或其水合物的一对非对映体盐的非对映体盐混合物。在使用氨基酸以外的碱性光学活性化合物时，也如此。

就根据DL－AP的烷烃链的长度(即，式(1)中的m值)适宜选择使用碱性光学活性化合物的方式而言，从可以形成包含结晶性更优异的非对映体盐的非对映体盐混合物，通过使上述的结晶性优异的一种非对映体盐从非对映体盐混合物中析出、从而可以高效地单离更高纯度的非对映体盐的角度出发，该方式是优选的。

DL－AP或其水合物与碱性光学活性化合物的优选组合如下。

式(1)中，

m＝1时、即DL－2－氨基－4－膦酰基丁酸或其水合物时，作为碱性光学活性化合物，优选辛可宁、辛可尼定、奎宁、奎尼定、光学活性的精氨酸(D－或L－精氨酸)、光学活性的苯丙氨酰胺(D－或L－苯丙氨酰胺)、或光学活性的鸟氨酸(D－或L－鸟氨酸)。

m＝3时、即DL－2－氨基－6－膦酰基己酸或其水合物时，作为碱性光学活性化合物，优选光学活性的酪氨酸酰肼(D－或L－酪氨酸酰肼)、光学活性的1－苯基丙胺(R－或S－1－苯基丙胺)、光学活性的缬氨醇(D－或L－缬氨醇)、光学活性的对羟基苯基甘氨酸甲酯(D－或L－对羟基苯基甘氨酸甲酯)、光学活性的苯丙氨酰胺(D－或L－苯丙氨酰胺)、光学活性的对羟基苯基甘氨酸酰肼(D－或L－对羟基苯基甘氨酸酰肼)、或光学活性的对羟基苯基甘氨酸乙酯(D－或L－对羟基苯基甘氨酸乙酯)。

m＝5时、即DL－2－氨基－8－膦酰基辛酸或其水合物时，作为碱性光学活性化合物，优选光学活性的葡糖胺(D－或L－葡糖胺)、光学活性的缬氨醇(D－或L－缬氨醇)、光学活性的亮氨醇(D－或L－亮氨醇)、光学活性的1－苯基乙胺(R－或S－1－苯基乙胺)、光学活性的对羟基苯基甘氨酸酰肼(D－或L－对羟基苯基甘氨酸酰肼)、或光学活性的2－氨基－1－丁醇(R－或S－2－氨基－1－丁醇)。

作为上述碱性光学活性化合物的使用量，相对于DL－AP或其水合物(1摩尔)例如为0.5～2.0摩尔左右、优选为0.5～1.5摩尔、特别优选为0.6～1.1摩尔。

DL－AP或其水合物与碱性光学活性化合物的反应优选在溶剂存在下进行，作为溶剂，可列举例如：丙酮、甲乙酮等酮；甲醇、乙醇、异丙基醇等醇；乙酸乙酯等酯；乙腈等含氮化合物；四氢呋喃等醚；水等。这些可以单独使用一种，也可以将两种以上组合使用。

作为上述溶剂的使用量，相对于DL－AP或其水合物与碱性光学活性化合物的总量例如为1～100重量％左右。溶剂的使用量超过上述范围时，反应成分的浓度降低，有反应速度下降的倾向。

作为反应气氛，只要不阻碍反应则没有特别限定，可以是例如空气气氛、氮气气氛、氩气气氛等中的任一者。

反应温度例如为0～100℃左右。反应时间例如为1～10小时左右。另外，反应可以以间歇式、半间歇式、连续式等中的任一方法来进行。

以下，以使用氨基酸(D－Bs、或L－Bs)作为碱性光学活性化合物(Bs)的情况为例，来说明本发明的光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸盐的制造方法(特别是非对映体盐混合物的分步结晶方法)。在使用氨基酸以外的碱性光学活性化合物时，也如此。

非对映体盐混合物中所含的D－AP与L体(L－Bs)的盐或其水合物、以及L－AP与L体(L－Bs)的盐或其水合物相对于溶剂的溶解度彼此不同，D－AP与D体(D－Bs)的盐或其水合物、以及L－AP与D体(D－Bs)的盐或其水合物相对于溶剂的溶解度也彼此不同。因此，可以通过利用溶解度差异的分步结晶容易地将一种非对映体盐单离。

并且有如下倾向：D－AP与L体(L－Bs)的盐或其水合物的结晶性比L－AP与L体(L－Bs)的盐或其水合物优异，L－AP与D体(D－Bs)的盐或其水合物的结晶性比D－AP与D体(D－Bs)的盐或其水合物优异。因此，例如，使L体(L－Bs)与DL－AP水合物反应，则得到D－AP与L体(L－Bs)的盐或其水合物、和L－AP与L体(L－Bs)的盐或其水合物的混合物(非对映体盐混合物)，使得到的非对映体盐混合物中的D－AP与L体(L－Bs)的盐或其水合物先以晶体形式析出，供于过滤处理而进行单离，将过滤母液供于分解处理，将该过滤母液中所含的L－AP与L体(L－Bs)的盐或其水合物转变为L－AP水合物，接着使D体(D－Bs)与得到的L－AP水合物反应，使由此得到的L－AP与D体(D－Bs)的盐或其水合物以晶体形式析出，由此可以分别单离出D－AP与碱性光学活性化合物的盐或其水合物、以及L－AP与碱性光学活性化合物的盐或其水合物。

另外，作为析出晶体的方法，没有特别限制，可以适宜采用公知惯用的方法，例如冷却结晶、贫溶剂结晶、蒸发结晶、加压结晶等。

以下示出本发明的光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸盐的制造方法的一例。作为原料使用的DL－AP水合物表示为“DL－AP·nH₂O”(n表示超过0且5以下的数)。另外，(t－1)、(t－2)、(t－3)相同或不同，表示0～5的数。

[化11]

根据本发明，作为非对映体盐，可以高效地且高纯度地单离出下述式(1－1’－B)所示的、D－2－氨基－膦酰基烷酸或其水合物、和下述式(1－2’－B)所示的、L－2－氨基－膦酰基烷酸盐或其水合物。

[化12]

(式中，m’表示1、3或7，t表示0～5的数。Bs表示碱性光学活性化合物(其中，光学活性赖氨酸除外)。*表示不对称原子)

[化13]

(式中，m’表示1、3或7，t’表示0～5的数。Bs表示碱性光学活性化合物(其中，光学活性赖氨酸除外)。*表示不对称原子)

作为上述式(1－1’－B)所示的D－2－氨基－膦酰基烷酸盐水合物，

m’＝1时，碱性光学活性化合物优选为选自奎尼定、辛可尼定、L－精氨酸、D－对羟基苯基甘氨酸酰肼、和D－苯丙氨酰胺中的化合物。

m’＝3时，碱性光学活性化合物优选为L－酪氨酸酰肼。

m’＝7时，碱性光学活性化合物优选为选自L－亮氨醇、和(R)－2－氨基－1－丁醇中的化合物。

作为上述式(1－2’－B)所示的L－2－氨基－膦酰基烷酸盐水合物，

m’＝1时，碱性光学活性化合物优选为选自辛可宁、和L－鸟氨酸中的化合物。

m’＝3时，碱性光学活性化合物优选为选自(R)－1－苯基丙胺、L－缬氨醇、D－对羟基苯基甘氨酸甲酯、D－苯丙氨酰胺、D－对羟基苯基甘氨酸酰肼、和D－对羟基苯基甘氨酸乙酯中的化合物。

m’＝7时，碱性光学活性化合物优选为选自D－葡糖胺、L－缬氨醇、(R)－1－苯基乙胺、和D－对羟基苯基甘氨酸酰肼中的化合物。

通过上述方法得到的光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸盐(包括水合物)(特别是上述式(1－1’－B)所示的D－2－氨基－膦酰基烷酸或其水合物、和上述式(1－2’－B)所示的L－2－氨基－膦酰基烷酸盐或其水合物)在室温下不吸湿，保存稳定性优异，因此易于处理。另外，不具有细胞毒性，安全性优异。此外，具有与NAHLSGEN同样的药理活性(例如胶原产生促进效果、谷胱甘肽产生促进效果、创伤修复促进效果)，提高皮肤的屏障功能，抑制***反应原的侵入，可以抑制***反应。因此，例如，可以出于治疗或预防目的而适宜用于过敏性皮肤病、寻常性鱼鳞癣、老年性干燥症等皮肤病。另外，还可以作为口腔粘膜、眼部粘膜等的粘膜修复促进剂而适宜用于牙周病等口腔粘膜疾病、结膜炎等眼部粘膜疾病的治疗或预防。

需要说明的是，作为原料的DL－AP或其水合物例如可以通过非专利文献[Kosolapoff G.M.Isomerization of alkyl phosphites.VII.Some derivatives of 2－bromoethanephosphonic acid J.Am.Chem.Soc.1948,70,1971－1972；Chambers,J.R.,Isbell,A.F.A new synthesis of amino phosphonic acids.J.Org.Chem.1964,29,832－836]中记载的方法来制造。

更详细而言，可以经由下述式所示的反应来制造。下述式中，m表示1～7的整数，n表示超过0且5以下的数。X表示卤素原子(氟原子、氯原子、溴原子或碘原子)，R、R’相同或不同且表示碳数1～10的烷基。R”表示氨基的保护基。DPR表示被保护基保护的氨基的脱保护剂。*表示不对称原子。需要说明的是，作为氨基的保护基，可列举例如：碳数1～10的烷基、碳数7～18的芳烷基、酰基(R¹C(＝O)基；R¹为碳数1～10的烷基)、烷氧基羰基(R²OC(＝O)基；R²为碳数1～10的烷基)、可具有取代基的苄氧基羰基、可具有取代基的苯基亚甲基、可具有取代基的二苯基亚甲基等。另外，作为上述取代基，可列举例如：卤素原子、碳数1～3的烷氧基、硝基等。

[化14]

上述[1]的反应是使式(3)所示的亚磷酸酯与式(2)所示的二卤代烷烃进行反应而得到式(4)所示的膦酰基烷酸的反应(Michaelis－Arbuzov Reaction)。上述式(3)所示的亚磷酸酯的使用量相对于式(2)所示的二卤代烷烃1摩尔例如为0.1～1.0摩尔左右。

上述[1]的反应的反应温度优选例如为130～140℃左右。反应时间例如为0.5～2小时左右。

上述[2]的反应是使式(5)所示的化合物与经由[1]的反应而得到的式(4)所示的膦酰基烷酸进行反应，从而得到式(6)所示的化合物的反应。上述式(5)所示的化合物的使用量相对于式(4)所示的膦酰基烷酸1摩尔例如为0.7～1.3摩尔左右。

从得到促进反应进行的效果方面出发，上述[2]的反应优选在碱存在下进行。作为上述碱，可列举例如：碳酸氢钾、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸钠等碳酸盐类(特别是碱金属的碳酸盐类)；氢氧化钠、氢氧化钾等碱金属的氢氧化物；氢氧化钙、氢氧化镁等碱土金属的氢氧化物；磷酸二氢钠、磷酸二氢钾等磷酸盐类(特别是碱金属的磷酸盐类)；乙酸钠、乙酸钾等羧酸盐类(特别是碱金属的羧酸盐类)；三乙胺、吡啶等有机碱类；甲醇钠、乙醇钠等金属醇盐类(特别是碱金属的醇盐类)；氢化钠等金属氢化物类等。这些可以单独使用一种，或者可以将两种以上组合使用。碱的使用量相对于式(4)所示的膦酰基烷酸1摩尔例如为0.9～1.1摩尔左右。

上述[2]的反应优选在溶剂的存在下进行。作为上述溶剂，可列举例如：丙酮、乙基甲基酮等酮类；四氢呋喃、二噁烷等醚类；乙腈等腈类；二甲基亚砜等亚砜类；环丁砜等砜类；乙酸乙酯等酯类；二甲基甲酰胺等酰胺类；甲醇、乙醇、叔丁醇等醇类；戊烷、己烷、石油醚等烃类；苯、甲苯、二甲苯等芳香族烃类；二氯甲烷、氯仿、溴仿、氯苯、溴苯等含卤素的化合物；碳酸二甲酯、碳酸二乙酯、碳酸甲乙酯等链状碳酸酯；碳酸亚乙酯、碳酸亚丙酯等环状碳酸酯等。这些可以单独使用一种，或者可以将两种以上组合使用。

上述[2]的反应的反应温度优选例如为100～110℃左右。反应时间例如为6～24小时左右。

上述[3]的反应是使经由[2]的反应而得到的式(6)所示的化合物的被保护基保护的羧基(－COOR’)、被保护基保护的氨基(－NHR")和被保护基保护的膦酸基(－P(＝O)(OR)₂)脱保护而得到式(7)所示的化合物的反应。被保护基保护的基团的脱保护可以通过使脱保护剂进行反应来进行。作为上述脱保护剂(上述式中用“DPR”表示)，可以适宜使用强碱(例如氢氧化钠)或强酸(例如盐酸)。

上述[3]的反应的反应温度优选例如为90～100℃左右。反应时间例如为20～24小时左右。

上述[4]的反应是使具有捕获脱保护剂的作用的化合物与经由[3]的反应而得到的式(7)所示的化合物反应而捕获脱保护剂，从而得到式(1)所示的化合物的反应。例如在脱保护剂为盐酸的情况下，优选使用环氧丙烷作为具有捕获脱保护剂的作用的化合物。具有捕获脱保护剂的作用的化合物的使用量相对于式(7)所示的化合物1摩尔例如为3.0～6.0摩尔左右。

式(1)所示的化合物的水合物(＝式(1')所示的化合物，式中的n表示超过0且5以下的数)可以通过将经由[4]的反应而得到的式(1)所示的化合物供于上述[5]的工序来制造。详细而言，通过将式(1)所示的化合物供于使用水和水溶性溶剂的结晶处理，从而可得到式(1')所示的化合物。

作为上述水溶性溶剂，优选在室温(25℃)下与水以任意的比例溶解的有机溶剂，优选对水的溶解度为50％以上(优选为80％以上、特别优选为95以上)的有机溶剂。

作为上述水溶性溶剂，优选使用醇(例如甲醇、乙醇等碳数1～5的低级醇)。

作为上述[1]～[5]的反应的气氛，只要不阻碍反应则没有特别限定，可以是例如空气气氛、氮气气氛、氩气气氛等中的任一者。另外，反应可以在常压、减压或加压下进行。此外，反应可以以间歇式、半间歇式、连续式等中的任一方法来进行。

在上述[1]～[5]的各反应结束后，可以对得到的反应产物实施例如过滤、洗涤、干燥(例如自然干燥、减压真空干燥、热风干燥等)等。

[光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸或其水合物的制造方法]

本发明的光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸或其水合物的制造方法的特征在于，在通过上述光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸盐的制造方法得到光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸盐(包括水合物)后，将其分解，得到具有与上述被处理化合物相同的空间构型的、对应的光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸或其水合物。

作为光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸盐(包括水合物)的分解方法，没有特别限定，优选使用离子交换树脂(特别是酸性阳离子交换树脂)。作为离子交换树脂，可使用例如商品名“Amberlite IR－120B”(Organo株式会社制)、商品名“Diaion”(三菱化学(株)制)等。

在光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸盐(包括水合物)分解后，得到的反应产物优选实施例如过滤、洗涤、干燥等。

利用上述方法，可得到高纯度(光学纯度例如为99.0％e.e.以上、优选为99.5％e.e.以上、特别优选为99.9％e.e.以上)的D－AP或其水合物、或者L－AP或其水合物。

根据本发明，特别是可高效且高纯度地得到下述式(1－1’)所示的D－2－氨基－膦酰基烷酸水合物、或下述式(1－2’)所示的L－2－氨基－膦酰基烷酸水合物。

[化15]

(式中，m’表示1、3或5，n表示超过0且5以下的数。*表示不对称原子)

[化16]

(式中，m’表示1、3或5，n表示超过0且5以下的数。*表示不对称原子)。

[光学活性体、光学活性体与碱性光学活性化合物的盐]

通过上述方法得到的光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸盐(包括水合物)、光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸(包括水合物)无潮解性，在室温下晶体化。因此，保存稳定性优异，在室温、相对湿度75％的环境下可6个月以上(特别是24个月以上)保持稳定，易于处理。而且，具有与NAHLSGEN(注册商标)同样或在其之上的药理活性。例如，如果将上述光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸盐(包括水合物)、2－氨基－膦酰基烷酸(包括水合物)(10μM左右)给药于人皮肤成纤维细胞，则得到使胶原的产生亢进的效果。另外，上述胶原的产生呈浓度依赖性地发生亢进，但即使过量给药，胶原的产生也不会无限制地亢进。此外，还可以发挥弹性蛋白产生促进效果、HSP47产生促进效果、谷胱甘肽产生促进效果、中间丝相关蛋白产生促进效果、中间丝相关蛋白基因表达促进效果、皮肤表皮的角化细胞的迁移·增殖的促进效果、创伤修复促进效果等。此外，不具有细胞毒性，安全性优异。因此，可以作为胶原产生促进剂、弹性蛋白产生促进剂、HSP47产生促进剂、谷胱甘肽产生促进剂、中间丝相关蛋白产生促进剂、中间丝相关蛋白基因表达促进剂、皮肤表皮的角化细胞的迁移·增殖的促进剂等适宜使用。另外，还可以作为口腔粘膜、眼部粘膜等的粘膜修复促进剂而适宜用于牙周病等口腔粘膜疾病、结膜炎等眼部粘膜疾病的治疗或预防。

上述光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸盐(包括水合物)、2－氨基－膦酰基烷酸(包括水合物)适合于以皮肤、毛发的美容·健康为目标的用途。此外，可以出于治疗、预防的目的而适宜用于与胶原、弹性蛋白、HSP47、谷胱甘肽、中间丝相关蛋白、皮肤表皮的角化细胞的迁移·增殖有关的各种疾病。

在将上述光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸盐(包括水合物)、2－氨基－膦酰基烷酸(包括水合物)用于外皮(皮肤、毛发、指甲等)时，可得到促进胶原的产生、改善屏障功能的效果。因此，例如，可以适宜用于过敏性皮肤病、寻常性鱼鳞癣、老年性干燥症等皮肤病的治疗或预防。另外，当将上述光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸盐(包括水合物)、2－氨基－膦酰基烷酸(包括水合物)用于皮肤时，通过促进谷胱甘肽的产生、中间丝相关蛋白的产生，从而可得到抗老化效果、美白效果。因此，可以适宜地作为护肤用化妆品等的添加剂使用。

作为上述护肤用化妆品，例如，包括：粉底、眼影、睫毛膏、眉笔、腮红、口红、指甲油等彩妆化妆品、化妆水、乳液、美容液等基础化妆品等。

上述光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸盐(包括水合物)、2－氨基－膦酰基烷酸(包括水合物)的添加量可根据用途来适宜调整。例如，添加到化妆品时的浓度例如为达到0.5～70μM(优选为10～60μM、特别优选为30～60μM、最优选为40～60μM)的范围。

实施例

以下，通过实施例更具体地说明本发明，本发明不因这些实施例而受限定。需要说明的是，下述式中，*表示不对称原子。

制备例1(DL－2－氨基－4－膦酰基丁酸水合物的制备)[化17]

向1,2－二溴乙烷(80ml、928mmol)中加入亚磷酸三乙酯(40.0ml、233mmol)，在搅拌下用油浴升温到140℃，在同一温度下加热30分钟后自然冷却。冷却到40℃附近后，开始减压。逐渐加大减压和加热，蒸馏除去乙基溴等副产物和多余的二溴乙烷。然后，进一步提高真空度(约1mmHg)，在约130℃下加热、蒸馏，从而得到无色无臭的油状的2－溴乙基膦酸二乙酯(36.3g、收率：64％)。

[化18]

向2－溴乙基膦酸二乙酯(25.0g，102mmol)中加入甲苯(70mL)、碳酸二乙酯(40mL)、乙酰氨基丙二酸二乙酯(16.9g、77.6mmol)、和用己烷洗涤后的60％氢化钠(4.40g、110mmol)，在110℃下回流。回流24小时后冷却到室温，用Celite滤去固体，将滤液减压浓缩，从而得到褐色油状物的2－乙酰氨基－2－[2－(二乙氧基磷酰基)乙基]丙二酸二乙酯(33.3g、收率：定量)。

[化19]

将2－乙酰氨基－2－[2－(二乙氧基磷酰基)乙基]丙二酸二乙酯(33.3g、87.3mmol)溶解于6N盐酸(154mL)，回流24小时。然后，减压浓缩，得到褐色油状物DL－2－氨基－4－膦酰基丁酸·盐酸盐(21.1g、收率：定量)。

[化20]

将DL－2－氨基－4－膦酰基丁酸·盐酸盐(21.1g、96.1mmol)溶解于水(30mL)，在于5～10℃冷却下边剧烈搅拌边滴加环氧丙烷(30mL、428mmol)的同时，一点点地滴加乙醇(150mL)后，在室温下搅拌4天。滤取所析出的晶体，用乙醇洗涤后，在40℃下真空干燥，得到无色粉末状的DL－2－氨基－4－膦酰基丁酸一水合物(11.8g、收率：61.1％)。将得到的化合物的热分析结果示于图1。

Mp(DSC)：115.3℃,203.1℃(dec).

IR(cm^－1):3147,2981,2287,1704,1637,1524,1834,1103,1024,895.

制备例2

作为原料，使用1,3－二溴丙烷来代替1,2－二溴乙烷，除此以外与制备例1同样进行，得到DL－2－氨基－5－膦酰基戊酸。

制备例3

作为原料，使用1,4－二溴丁烷来代替1,2－二溴乙烷，除此以外与制备例1同样进行，得到DL－2－氨基－6－膦酰基己酸一水合物。将得到的化合物的热分析结果示于图2。

制备例4

作为原料，使用1,5－二溴戊烷来代替1,2－二溴乙烷，除此以外与制备例1同样进行，得到DL－2－氨基－7－膦酰基庚酸。

制备例5

作为原料，使用1,6－二溴己烷来代替1,2－二溴乙烷，除此以外与制备例1同样进行，得到DL－2－氨基－8－膦酰基辛酸一水合物。将得到的化合物的热分析结果示于图3。

制备例6

作为原料，使用1,7－二溴庚烷(25.0g、97mmol)来代替1,2－二溴乙烷，除此以外与制备例1同样进行，得到DL－2－氨基－9－膦酰基壬酸(2.5g)。

Mp(DSC)：221℃(dec)

IR(cm^－1):3300－2000(br),2917,2848,1715,1525,1415,1266,1088,1052,779,720,642.

¹H－NMR(600MHz,D₂O和(with)DCl)δ_H:1.15－1.33(8H,m),1.37－1.44(2H,m),1.57－1.67(2H,m),1.73－1.86(2H,m),3.94(1H,t).

³¹P－NMR(242MHz,D₂O和DCl)δ_P:33.8.

HRMS(FAB)计算值(calcd for)C₉H₂₀NO₅P(M+H)253,1079:实验值(Found)254,1155.

制备例7

作为原料，使用1,8－二溴辛烷(15.5g，57mmol)来代替1,2－二溴乙烷，除此以外与制备例1同样进行，得到DL－2－氨基－10－膦酰基癸酸一水合物(1.8g)。将得到的化合物的热分析结果示于图4。

Mp(DSC)：237℃(dec)

IR(cm^－1):3300－2000(br),2918,2848,1715,1621,1581,1515,1466,1416,1245,1014,927,821,776,716.

¹H－NMR(600MHz,D₂O和DCl)δ_H:0.95－1.13(10H,m),1.16－1.23(2H,m),1.42－1.47(2H,m),1.52－1.65(2H,m),3.75(1H,t).

³¹P－NMR(242MHz,D₂O和DCl)δ_P:34.0.

HRMS(FAB)计算值C₁₀H₂₂NO₅P(M+H)267,1236:实验值268,1315.

实施例1(DL-2－氨基－4－膦酰基丁酸的旋光拆分)

在制备例中得到的DL－2－氨基－4－膦酰基丁酸一水合物(50mg、0.248mmol)中，加入下述表1中记载的碱性光学活性化合物(0.300mmol)和溶剂，加热溶解。过滤所析出的晶体，洗涤，干燥，得到非对映体盐。用手性HPLC对这些非对映体盐进行分析，求出光学纯度(de(％))。将结果示于下述表1。

[表1]

D－HPGH：D－对羟基苯基甘氨酸酰肼

手性HPLC分析条件(色谱柱：SUMICHIRAL OA－5000

流动相：2mM硫酸铜水溶液，流速：1.0ml/分钟

检测器UV－254nm，温度：40℃，样品：2－3mg/10ml缓冲液，5μl)

实施例2(使用L－Arg的DL－2－氨基－4－膦酰基丁酸的旋光拆分)将制备例中得到的DL－2－氨基－4－膦酰基丁酸一水合物(5.00g、24.9mmol)、L－Arg(4.99g、28.6mmol)和水(50mL)加热溶解，在70℃下逐渐加入甲醇(65mL)后，缓慢冷却，在25℃下搅拌3小时。过滤所析出的晶体(该过滤母液在下述*中使用)，洗涤，干燥，得到无色的粗晶D－2－氨基－4－膦酰基丁酸·L－Arg盐(4.41g)。

[α]_D ²⁰+6.3(c1,H₂O),89.3％de(表1的手性HPLC分析条件)

向该粗晶D－2－氨基－4－膦酰基丁酸·L－Arg盐(4.30g)中加入水(43mL)，在70℃下加热搅拌，滴加甲醇(43mL)。缓慢冷却，在20℃下搅拌3小时后，过滤所析出的晶体，洗涤，干燥，得到重结晶(1)D－2－氨基－4－膦酰基丁酸·L－Arg盐(3.62g)。

[α]_D ²⁰+6.3(c1,H₂O),98.3％de.

进一步地向该重结晶(1)D－2－氨基－4－膦酰基丁酸·L－Arg盐(3.50g)中加入水(35mL)，在70℃下加热搅拌，在同一温度下向其中滴加甲醇(35mL)。缓慢冷却后，在10℃下搅拌2小时后，过滤所析出的晶体，洗涤，干燥，得到重结晶(2)D－2－氨基－4－膦酰基丁酸·L－Arg盐(3.35g)。

Mp(DSC)：263℃(dec),[α]_D ²⁰+6.5(c1,H₂O),100％de(表1的手性HPLC分析条件)

IR(cm^－1):3355,2945,2084,1663,1581,1412,1338,1162,984,780,687.

¹H－NMR(600MHz,D₂O)δ_H:1.57－1.74(4H,m),1.84－1.93(2H,m),2.02－2.14(2H,m),3.22(2H,dd,J_H－H＝6.9and 6.9Hz),3.75(1H,dd,J_H－H＝6.2and 6.2Hz),3.78(1H,dd,J_H－H＝6.5and 5.5Hz).

³¹P－NMR(121MHz,D₂O)δ_P:23.7.

将重结晶(2)D－2－氨基－4－膦酰基丁酸·L－Arg盐(2.35g)溶解于纯水，缓慢地向离子交换树脂(商品名“Amberlite IR－120(H⁺)”、Organo株式会社制)(10.4mL)通液，用纯水(300mL)洗涤后，将通液和洗涤水合并、浓缩。向固体残渣中加入甲醇(10mL)，分散，过滤，用甲醇洗涤后，干燥，得到无色晶体的D－2－氨基－4－膦酰基丁酸一水合物(1.19g)。

Mp(DSC)：98.0℃,211.0℃(dec),[α]_D ²⁰－17.3(c1,H₂O),100％ee

IR(cm^－1):3247,2642,1723,1520,1265,984,923,731.

¹H－NMR(300MHz,D₂O)δ_H:1.58－1.86(2H,m),2.02－2.25(2H,m),4.00－4.06(1H,dd,J_H－H＝6.2and 6.2Hz).³¹P－NMR(121MHz,D₂O)δ_P:24.6.

将上述*处得到的过滤母液浓缩，向残渣中加入纯水将其溶解，缓慢地向离子交换树脂(商品名“Amberlite IR－120(H⁺)”、Organo株式会社制)(25mL)通液。用纯水约300mL洗涤后，将通液和洗涤水合并，浓缩，将残渣干燥，得到无色的粗晶L－2－氨基－4－膦酰基丁酸一水合物(2.37g；89.0％ee)。

将该粗晶L－2－氨基－4－膦酰基丁酸一水合物(2.30g)和D－Arg(2.23g)加热溶解于水(45mL)，在70℃下缓缓加入甲醇(45mL)后，缓慢冷却，在15℃下搅拌2小时。过滤所析出的晶体，洗涤，干燥，得到无色晶体的重结晶(1)L－2－氨基－4－膦酰基丁酸·D－Arg盐(3.34g)。

Mp(DSC)：263℃(dec),[α]_D ²⁰－6.5(c1,H₂O),100％de.

IR(cm^－1):3355,2945,2084,1663,1581,1413,1338,1162,984,780,687.

¹H－NMR(600MHz,D₂O)δ_H:1.57－1.74(4H,m),1.84－1.93(2H,m),2.02－2.14(2H,m),3.22(2H,dd,J_H－H＝6.9and 6.9Hz),3.75(1H,dd,J_H－H＝6.2and 6.2Hz),3.78(1H,dd,J_H－H＝6.5and 5.5Hz).³¹P－NMR(121MHz,D₂O)δ_P:23.7.

将重结晶(1)L－2－氨基－4－膦酰基丁酸·D－Arg盐(2.07g)溶解于纯水，缓慢地向离子交换树脂(商品名“Amberlite IR－120(H⁺)”、Organo株式会社制)(9.2mL)通液，用纯水(300mL)洗涤后，将通液和洗涤水合并，浓缩，向固体残渣中加入甲醇10mL，分散，过滤，用甲醇洗涤后，在40℃下减压干燥3小时，得到无色晶体的L－2－氨基－4－膦酰基丁酸一水合物((1.07g)。将得到的化合物的热分析结果示于图5。

Mp(DSC)：98.6℃,212.3℃(dec),[α]_D ²⁰+17.5(c1,H₂O),100％ee.

IR(cm^－1):3130,2481,1722,1521,1167,895,718.

¹H－NMR(300MHz,D₂O)δ_H:1.60－1.89(2H,m),2.02－2.28(2H,m),4.02－4.08(1H,dd,J_H－H＝6.2and 6.2Hz).³¹P－NMR(121MHz,D₂O)δ_P:24.6.

实施例3(D－2－氨基－4－膦酰基丁酸·D－Arg盐一水合物的制备)

将D－2－氨基－4－膦酰基丁酸一水合物(0.165g、82.0mmol)、D－Arg(0.147g、84.5mmol)和水(5mL)加热溶解后，减压浓缩，缓慢加入甲醇(2.5mL)后，在冰冷却下放置30分钟。过滤所析出的晶体，洗涤，干燥，得到无色的粗晶D－2－氨基－4－膦酰基丁酸·D－Arg盐一水合物(0.295g)。

[α]_D ²⁰－8.2(c1,H₂O)

IR(cm^－1):3357,2949,2874,2618,1578,1514,1338,1162,1134,1017,663.

实施例4(L－2－氨基－4－膦酰基丁酸·L－Arg盐一水合物的制备)

将L－2－氨基－4－膦酰基丁酸一水合物(0.165g、82.0mmol)、L－Arg(0.147g、84.5mmol)和水(5mL)加热溶解后，减压浓缩，缓缓加入甲醇(2.5mL)后，在冰冷却下放置30分钟。过滤所析出的晶体，洗涤，干燥，得到无色的粗晶L－2－氨基－4－膦酰基丁酸·L－Arg盐一水合物(0.295g)。

[α]_D ²⁰+7.8(c1,H₂O)

IR(cm^－1):3355,2932,1657,1576,1514,1404,1133,1018,895,766,683.

实施例5(DL－2－氨基－6－膦酰基己酸的旋光拆分)

向通过制备例得到的DL－2－氨基－6－膦酰基己酸一水合物(50mg)中加入下述表2中记载的碱性光学活性化合物(0.222mmol)和溶剂，加热溶解。过滤所析出的晶体，洗涤，干燥，得到非对映体盐。用手性HPLC对这些非对映体盐进行分析，求出光学纯度(de(％))。将结果示于下述表2。

[表2]

D－HPGM:D－对羟基苯基甘氨酸甲酯

D－HPGH:D－对羟基苯基甘氨酸酰肼

D－HPGE:D－对羟基苯基甘氨酸乙酯

手性HPLC分析条件(色谱柱：SUMICHIRAL OA－5000

流动相：2mM硫酸铜/H₂O：IPA＝98:2，流速：1.0ml/分钟

检测器UV－254nm，温度：40℃，样品：5mg/10ml缓冲液，10μl)

实施例6(使用D－HPGM的DL－2－氨基－6－膦酰基己酸的旋光拆分)

将制备例中得到的DL－2－氨基－6－膦酰基己酸一水合物(5.00g)、D－HPGM(4.38g)和水(55mL)加热溶解，在70℃下缓慢加入甲醇(100mL)后，缓慢冷却，在25℃下搅拌3小时。过滤所析出的晶体(该过滤母液在下述*处使用)，洗涤，干燥，得到无色的粗晶L－2－氨基－6－膦酰基己酸·D－HPGM盐一水合物(3.24g)。

[α]_D ²⁶－64.6(c1,H₂O),92.1％de(表2的手性HPLC分析条件)

向该粗晶L－2－氨基－6－膦酰基己酸·D－HPGM盐一水合物(3.20g)中加入水(19.2mL)，在75℃下加热搅拌，滴加甲醇(80mL)。缓慢冷却，在15℃下搅拌3小时后，过滤所析出的晶体，洗涤，干燥，得到重结晶(1)L－2－氨基－6－膦酰基己酸·D－HPGM盐一水合物(2.60g)。

Mp(DSC)：116.6℃,205.4℃(dec),[α]_D ²⁵－65.0(c1,H₂O),100％de

IR(cm^－1):3463,2860,2644,1733,1605,1524,1579,1418,1253,998,894.

¹H－NMR(600MHz,D₂O)δ_H:1.43－1.54(2H,m),1.56－1.65(4H,m),1.83－1.96(2H,m),3.76(1H,dd,J_H－H＝7.2and 5.1Hz),3.84(3H,s),5.23(1H,s),6.99(2H,d,J_H－H＝8.6Hz),7.36(2H,d,J_H－H＝8.6Hz).³¹P－NMR(121MHz,D₂O)δ_P:26.8.

将重结晶(1)L－2－氨基－6－膦酰基己酸·D－HPGM盐一水合物(2.50g)溶解于纯水，缓慢地向离子交换树脂(商品名“Amberlite IR－120(H⁺)”、Organo株式会社制)(10mL)通液，用纯水充分洗涤后，将通液和洗液合并，浓缩。向固体残渣中加入甲醇(15mL)，分散，过滤，用甲醇洗涤后，干燥，得到无色晶体的L－2－氨基－6－膦酰基己酸一水合物(1.29g)。

Mp(DSC)：93.8℃,224.7℃,225℃(dec),[α]_D ²⁵+19.7(c1,2N－HCl),100％ee

IR(cm^－1):3235,2933,1704,1600,1537,1148,998,878,770.

¹H－NMR(600MHz,D₂O+DCl)δ_H:1.42－1.62(4H,m),1.74－1.80(2H,m),1.85－1.91(1H,m),1.93－1.99(1H,m),4.05(1H,dd,J_H－H＝6.4and 6.4Hz).³¹P－NMR(121MHz,D₂O)δ_P:32.6.

将上述*处得到的过滤母液浓缩，向残渣中加入纯水而将其溶解，缓慢地向离子交换树脂(商品名“Amberlite IR－120(H⁺)”、Organo株式会社制)(25mL)通液。用纯水充分洗涤后，将通液和洗液合并，浓缩，将残渣干燥，得到白色的粗晶D－2－氨基－6－膦酰基己酸一水合物(3.17g)。

[α]_D ²⁶－6.5(c1,H₂O),60.8％ee

将该粗晶D－2－氨基－6－膦酰基己酸一水合物(3.10g)和L－HPGM(2.71g)在水(34.5mL)中加热溶解，在70℃下缓慢加入甲醇(144mL)后，缓慢冷却，在15℃下搅拌2小时。过滤所析出的晶体，洗涤，干燥，得到无色晶体的粗晶(1)D－2－氨基－6－膦酰基己酸·L－HPGM盐一水合物(3.30g)。

[α]_D ²⁵+64.9(c1,H₂O),96.5％de.

向粗晶(1)D－2－氨基－6－膦酰基己酸·L－HPGM盐一水合物(3.26g)中加入水(19.6mL)，在约70℃下加热溶解，进一步在同一温度下滴加甲醇(82mL)。缓慢冷却后，在15℃下搅拌2小时后，过滤所析出的晶体，洗涤，干燥，得到重结晶(1)D－2－氨基－6－膦酰基己酸·L－HPGM盐一水合物(2.76g)。将得到的化合物的热分析结果示于图6。

Mp(DSC)：126.8,205.5℃(dec),[α]_D ²⁶+66.4(c1,H₂O),100％de.

IR(cm^－1):3458,2860,2643,1733,1605,1579,1523,1418,1253,997,893.

¹H－NMR(600MHz,D₂O)δ_H:1.38－1.52(2H,m),1.52－1.63(4H,m),1.80－1.93(2H,m),3.73(1H,dd,J_H－H＝7.2and 5.1Hz),3.81(3H,s),5.20(1H,s),6.97(2H,d,J_H－H＝8.6Hz),7.34(2H,d,J_H－H＝8.6Hz).³¹P－NMR(121MHz,D₂O)δ_P:26.8.

将重结晶(1)D－2－氨基－6－膦酰基己酸·L－HPGM盐一水合物(2.66g)溶解于纯水，缓慢地向离子交换树脂(商品名“Amberlite IR－120(H⁺)”、Organo株式会社制)(10.7mL)通液。用纯水充分洗涤后，将通液和洗液合并，浓缩。向固体残渣中加入甲醇(15mL)，分散，过滤，用甲醇洗涤后，干燥，得到无色晶体的D－2－氨基－6－膦酰基己酸一水合物(1.40g)。将热分析结果示于图7。

Mp(DSC)：112.9℃,231.8℃(dec),[α]_D ²⁵－19.6(c1,2N－HCl),100％ee

IR(cm^－1):3235,2934,1705,1600,1537,1148,1000,879,770.

¹H－NMR(600MHz,D₂O+DCl)δ_H:1.43－1.67(4H,m),1.74－1.82(2H,m),1.85－1.93(1H,m),1.93－2.01(1H,m),4.06(1H,dd,J_H－H＝6.4and 6.4Hz).³¹P－NMR(121MHz,D₂O)δ_P:32.6.

实施例7(DL-2－氨基－8－膦酰基辛酸的旋光拆分)

向制备例中得到的DL－2－氨基－8－膦酰基辛酸一水合物(50mg)中加入下述表3中记载的碱性光学活性化合物(0.213mmol)和溶剂，加热溶解。过滤所析出的晶体，洗涤，干燥，得到非对映体盐。用手性HPLC对这些非对映体盐进行分析，求出光学纯度(de(％))。将结果示于下述表3。

[表3]

D－HPGH：D－对羟基苯基甘氨酸酰肼

手性HPLC分析条件(色谱柱：SUMICHIRAL OA－5000

流动相：2mM硫酸铜/H₂O：IPA＝92:8，流速：1.0ml/分钟

检测器UV－254nm，温度：40℃，样品：5mg/10ml缓冲液，10μl)

实施例8(使用D－HPGH的DL－2－氨基－8－膦酰基辛酸的旋光拆分)

向DL－2－氨基－8－膦酰基辛酸一水合物(5.00g)中加入D－HPGH(3.86g)和水(60mL)，在80℃下加热搅拌，缓慢加入甲醇(30mL)后，缓慢冷却，在25℃下搅拌2小时。过滤所析出的晶体(该过滤母液在下述*处使用)，洗涤，干燥，得到无色的粗晶L－2－氨基－8－膦酰基辛酸·D－HPGH盐一水合物(3.30g)。

[α]_D ²⁵－54.5(c1,N－HCl),90.6％de.(表3的手性HPLC分析条件)

向该粗晶L－2－氨基－8－膦酰基辛酸·D－HPGH盐一水合物(3.20g)中加入水(112mL)，在85℃下加热搅拌，进一步在同一温度下滴加甲醇(112mL)。缓慢冷却后，在15℃下搅拌2小时后，过滤所析出的晶体，洗涤，干燥，得到重结晶(1)L－2－氨基－8－膦酰基辛酸·D－HPGH盐一水合物(2.80g)。

[α]_D ²⁶－52.8(c1,N－HCl),99.1％de

向该重结晶(1)L－2－氨基－8－膦酰基辛酸·D－HPGH盐一水合物(2.70g)中加入水(54mL)和甲醇(10mL)，在约75℃下加热搅拌，加入N－HCl(6.42mL)而将其溶解。在注意发泡的同时向该溶液中加入碳酸氢钠(0.539g)，进一步在同一温度下滴加甲醇(58mL)。缓慢冷却后，在15℃下搅拌2小时，过滤所析出的晶体，洗涤，干燥，得到重结晶(2)L－2－氨基－8－膦酰基辛酸·D－HPGH盐一水合物(2.60g)。将得到的化合物的热分析结果示于图8。

Mp(DSC)：82.8℃,212.5℃(dec),[α]_D ²⁶－51.7(c1,N－HCl),100％de.

IR(cm^－1):3461,3334,3289,2858,1682,1580,1519,1263,999,911.

¹H－NMR(600MHz,D₂O)δ_H:1.33－1.46(6H,m),1.48－1.62(4H,m),1.80－1.94(2H,m),3.74－3.75(1H,dd,J_H－H＝6.2and 6.2Hz).5.03(1H,S),6.97－6.99(1H,dd,J_H－H＝6.2and 6.2Hz),7.35－7.38(1H,dd,J_H－H＝6.2and 6.2Hz),³¹P－NMR(121MHz,D₂O)δ_P:27.6.

将重结晶(2)L－2－氨基－8－膦酰基辛酸·D－HPGH盐一水合物(2.30g)溶解于纯水，缓慢地向离子交换树脂(商品名“Amberlite IR－120(H⁺)”、Organo株式会社制)(26mL)通液。用纯水充分洗涤后，将通液和洗液合并，浓缩，过滤所析出的晶体，洗涤，干燥，得到无色晶体的L－2－氨基－8－膦酰基辛酸一水合物(1.35g、收率96.0％)。

Mp(DSC)：73.0℃,239.3℃(dec),[α]_D ²⁵+14.9(c1,2N HCl),100％ee(表3的手性HPLC分析条件)

IR(cm^－1):3144,2933,1715,1634,1525,1156,1030,887

¹H－NMR(300MHz,D₂O)δ_H:1.58－1.86(2H,m),2.02－2.25(2H,m),4.00－4.06(1H,t).³¹P－NMR(121MHz,D₂O)δ_P:33.6.

将上述*处得到的过滤母液浓缩，向其残渣中加入纯水而将其溶解，缓慢地向离子交换树脂(商品名“Amberlite IR－120(H⁺)”、Organo株式会社制)(25mL)通液。用纯水充分洗涤后，将通液和洗液合并，浓缩，将残渣干燥，得到无色的粗晶D－2－氨基－8－膦酰基辛酸一水合物(2.65g)。

[α]_D ²⁵－9.0(c1,N－HCl),67.7％ee

向该粗晶D－2－氨基－8－膦酰基辛酸一水合物(2.56g)中加入L－HPGH(1.98g)和水(90mL)，在85℃下加热搅拌，进一步在相同温度下滴加甲醇(90mL)。缓慢冷却，在15℃下搅拌2小时后过滤所析出的晶体，洗涤，干燥，得到无色晶体的重结晶(1)D－2－氨基－8－膦酰基辛酸·L－HPGH盐一水合物(3.50g)。

[α]_D ²⁵+53.5(c1,N－HCl),96.2％de.

再向该重结晶(1)D－2－氨基－8－膦酰基辛酸·L－HPGH盐一水合物(3.45g)中加入水(69mL)和甲醇(10mL)，在约75℃下加热搅拌，加入N－HCl(8.20mL)而使其溶解。在注意发泡的同时向该溶液中加入碳酸氢钠(0.69g)，进一步在相同温度下滴加甲醇(76mL)。缓慢冷却后，在15℃下搅拌2小时，过滤所析出的晶体，洗涤，干燥，得到重结晶(2)D－2－氨基－8－膦酰基辛酸·L－HPGH盐一水合物(3.19g)。

Mp(DSC)：81.8℃,215.1℃,[α]_D ²⁵+52.7(c1,N－HCl),99.3％ee.

IR(cm^－1):3459,3333,3288,2858,1681,1579,1519,1263,999,911.

¹H－NMR(600MHz,D₂O)δ_H:1.33－1.46(6H,m),1.48－1.62(4H,m),1.80－1.94(2H,m),3.73－3.76(1H,dd,J_H－H＝6.2and 6.2Hz).5.03(1H,S),6.97－6.99(1H,dd,J_H－H＝6.2and 6.2Hz),7.35－7.38(1H,dd,J_H－H＝6.2and 6.2Hz),³¹P－NMR(121MHz,D₂O)δ_P:27.6.

将重结晶(2)D－2－氨基－8－膦酰基辛酸·L－HPGH盐一水合物(2.30g)溶解于纯水，缓慢地向离子交换树脂(商品名“Amberlite IR－120(H⁺)”、Organo株式会社制)(26mL)通液。用纯水充分洗涤后，将通液和洗液合并，浓缩，过滤所析出的晶体，洗涤，干燥，得到无色晶体的D－2－氨基－8－膦酰基辛酸一水合物(1.37g)。将得到的化合物的热分析结果示于图9。

Mp(DSC)：75.3℃,240.8℃(dec),[α]_D ²⁵－14.8(c1,2N HCl),100％ee

IR(cm^－1):3142,2933,1714,1633,1524,1155,1030,887.

¹H－NMR(300MHz,D₂O)δ_H:1.58－1.86(2H,m),2.02－2.25(2H,m),4.00－4.06(1H,t).³¹P－NMR(121MHz,D₂O)δ_P:33.6.

＜谷胱甘肽产生促进作用的评价＞

使用实施例8中得到的D－2－氨基－8－膦酰基辛酸一水合物作为样品，对于该样品，通过下述方法评价谷胱甘肽产生促进作用(n＝4)。

即，将正常人表皮细胞以2.0×10⁴个细胞/96孔的细胞密度使用正常人表皮角化细胞增殖用培养基(商品名“HuMedia KG2”、仓敷纺织(株)制)播种在96孔微孔板中。

播种24小时后，交换为含有规定浓度的样品的正常人表皮角化细胞增殖用培养基(商品名“HuMedia KB2”、仓敷纺织(株)制)，继续培养。

另外，作为空白，除了不使用上述样品以外，同样地进行培养。

培养24小时后，用含有100μM的苯基甲基磺酰氟的磷酸缓冲液，通过超声波处理将细胞破碎，利用谷胱甘肽还原酶循环法定量总谷胱甘肽量。

即，将细胞破碎液与还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐和谷胱甘肽还原酶混合，在37℃下反应10分钟。

然后，加入溶解有10mM的5,5’－二硫代双(2－硝基苯甲酸)的0.1M磷酸缓冲液(含有0.5M EDTA、pH7.5)，测定刚添加后的、和孵育30分钟后的吸光度(450nm处)，将其差值[30分钟后的吸光度－刚添加后的吸光度]作为谷胱甘肽合成量的指标。

需要说明的是，利用使用氧化型谷胱甘肽制作的标准曲线来计算细胞破碎液中的总谷胱甘肽量。另外，使用Pierce Microplate BCA Protein Assay Kit(ThermoSCIENTIFIC)来定量细胞破碎液的蛋白质含量。关于谷胱甘肽合成量，使用Student t检验来进行显著性差异检验，从而评价与未处理试样和阳性对象的差异。将实施2次的结果示于下述表4－1(第1次)、表4－2(第2次)。

[表4]

表4-1

表4-2

p1:相对于空白的显著性差异

由表4－1、4－2可知，实施例中得到的D－2－氨基－8－膦酰基辛酸一水合物与空白(未处理时)相比具有显著的谷胱甘肽产生促进作用。

作为样品，使用实施例2中得到的D－2－氨基－4－膦酰基丁酸·L－Arg盐和实施例3中得到的D－2－氨基－4－膦酰基丁酸·D－Arg盐一水合物来代替D－2－氨基－8－膦酰基辛酸一水合物，除此以外与上述同样地进行，评价谷胱甘肽产生促进作用(n＝4)。

作为参考例，使用NAHLSGEN[通用名：DL－2－氨基－4－[(RSp)－(3－羧基甲基苯氧基)(甲氧基)磷酰基]丁酸]来代替上述样品，除此以外与上述同样进行。

将实施2次的结果示于下述表5－1(第1次)、表5－2(第2次)。

[表5]

表5-1

表5-2

p1:相对于空白的显著性差异

p2:相对于同浓度的NAHLSGEN的显著性差异

由表5－1、5－2可知，实施例中得到的D－2－氨基－4－膦酰基丁酸·L－Arg盐和D－2－氨基－4－膦酰基丁酸·D－Arg盐一水合物具有与NAHLSGEN同等或在其之上的、显著的谷胱甘肽产生促进作用。

作为以上的总结，以下记载本发明的构成和其变形。

[1]一种光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸盐的制造方法，其特征在于，使碱性光学活性化合物(其中，光学活性赖氨酸除外)与作为原料的式(1)所示的DL－2－氨基－膦酰基烷酸或其水合物反应，得到式(1－1)所示的D－2－氨基－膦酰基烷酸与上述碱性光学活性化合物的盐(包括水合物)、和式(1－2)所示的L－2－氨基－膦酰基烷酸与上述碱性光学活性化合物的盐(包括水合物)的非对映体盐混合物，将得到的非对映体盐混合物供于分步结晶而单离一种非对映体盐。

[2]根据[1]所述的光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸盐的制造方法，其中，碱性光学活性化合物为选自辛可宁、辛可尼定、奎宁、奎尼定、光学活性的精氨酸、光学活性的苯丙氨酰胺、光学活性的鸟氨酸、光学活性的酪氨酸酰肼、光学活性的1－苯基丙胺、光学活性的2－苯基丙胺、光学活性的缬氨醇、光学活性的对羟基苯基甘氨酸酰肼、光学活性的对羟基苯基甘氨酸甲酯、光学活性的对羟基苯基甘氨酸乙酯、光学活性的葡糖胺、光学活性的亮氨醇、光学活性的1－苯基乙胺、和光学活性的2－氨基－1－丁醇中的化合物。

[3]根据[1]或[2]所述的光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸盐的制造方法，其中，作为原料，使用式(1)所示且式中的m为1、3或5的DL－2－氨基－膦酰基烷酸或其水合物。

[4]根据[1]～[3]中任一项所述的光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸盐的制造方法，其中，使用式(1)所示的DL－2－氨基－膦酰基烷酸的水合物作为原料，得到作为非对映体盐的、式(1－1)所示的D－2－氨基－膦酰基烷酸与碱性光学活性化合物的盐或其水合物、或者式(1－2)所示的L－2－氨基－膦酰基烷酸与碱性光学活性化合物的盐或其水合物。

[5]式(1－1’－B)所示的、D－2－氨基－膦酰基烷酸盐或其水合物。

[6]式(1－2’－B)所示的、L－2－氨基－膦酰基烷酸盐或其水合物。

[7]光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸或其水合物的制造方法，其特征在于，在通过[1]～[4]中任一项所述的光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸盐的制造方法得到光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸盐(包括水合物)后，将其分解，得到具有与上述被处理化合物相同的空间构型的、对应的光学活性的2－氨基－膦酰基烷酸或其水合物。

[8]式(1－1’)所示的D－2－氨基－膦酰基烷酸水合物。

[9]式(1－2’)所示的L－2－氨基－膦酰基烷酸水合物。

[10]一种胶原产生促进剂，其含有选自式(1－1’－B)所示的D－2－氨基－膦酰基烷酸盐或其水合物、式(1－2’－B)所示的L－2－氨基－膦酰基烷酸盐或其水合物、式(1－1’)所示的D－2－氨基－膦酰基烷酸水合物、和式(1－2’)所示的L－2－氨基－膦酰基烷酸水合物中的至少1种作为有效成分。

[11]一种弹性蛋白产生促进剂，其含有选自式(1－1’－B)所示的D－2－氨基－膦酰基烷酸盐或其水合物、式(1－2’－B)所示的L－2－氨基－膦酰基烷酸盐或其水合物、式(1－1’)所示的D－2－氨基－膦酰基烷酸水合物、和式(1－2’)所示的L－2－氨基－膦酰基烷酸水合物中的至少1种作为有效成分。

[12]一种HSP47产生促进剂，其含有选自式(1－1’－B)所示的D－2－氨基－膦酰基烷酸盐或其水合物、式(1－2’－B)所示的L－2－氨基－膦酰基烷酸盐或其水合物、式(1－1’)所示的D－2－氨基－膦酰基烷酸水合物、和式(1－2’)所示的L－2－氨基－膦酰基烷酸水合物中的至少1种作为有效成分。

[13]一种谷胱甘肽产生促进剂，其含有选自式(1－1’－B)所示的D－2－氨基－膦酰基烷酸盐或其水合物、式(1－2’－B)所示的L－2－氨基－膦酰基烷酸盐或其水合物、式(1－1’)所示的D－2－氨基－膦酰基烷酸水合物、和式(1－2’)所示的L－2－氨基－膦酰基烷酸水合物中的至少1种作为有效成分。

[14]一种中间丝相关蛋白产生促进剂，其含有选自式(1－1’－B)所示的D－2－氨基－膦酰基烷酸盐或其水合物、式(1－2’－B)所示的L－2－氨基－膦酰基烷酸盐或其水合物、式(1－1’)所示的D－2－氨基－膦酰基烷酸水合物、和式(1－2’)所示的L－2－氨基－膦酰基烷酸水合物中的至少1种作为有效成分。

[15]一种中间丝相关蛋白基因表达促进剂，其含有选自式(1－1’－B)所示的D－2－氨基－膦酰基烷酸盐或其水合物、式(1－2’－B)所示的L－2－氨基－膦酰基烷酸盐或其水合物、式(1－1’)所示的D－2－氨基－膦酰基烷酸水合物、和式(1－2’)所示的L－2－氨基－膦酰基烷酸水合物中的至少1种作为有效成分。

[16]一种皮肤表皮的角化细胞的迁移·增殖的促进剂，其含有选自式(1－1’－B)所示的D－2－氨基－膦酰基烷酸盐或其水合物、式(1－2’－B)所示的L－2－氨基－膦酰基烷酸盐或其水合物、式(1－1’)所示的D－2－氨基－膦酰基烷酸水合物、和式(1－2’)所示的L－2－氨基－膦酰基烷酸水合物中的至少1种作为有效成分。

[17]一种护肤用化妆品，其含有选自式(1－1’－B)所示的D－2－氨基－膦酰基烷酸盐或其水合物、式(1－2’－B)所示的L－2－氨基－膦酰基烷酸盐或其水合物、式(1－1’)所示的D－2－氨基－膦酰基烷酸水合物、和式(1－2’)所示的L－2－氨基－膦酰基烷酸水合物中的至少1种作为有效成分。

产业上的可利用性

根据本发明，以能够简便且廉价地制造的式(1)所示的DL－2－氨基－膦酰基烷酸或其水合物为原料，可以简便且高纯度地得到光学活性的D－2－氨基－膦酰基烷酸或其水合物、或L－2－氨基－膦酰基烷酸或其水合物。

另外，得到的光学活性的D－2－氨基－膦酰基烷酸或其水合物、或者L－2－氨基－膦酰基烷酸或其水合物的结晶性优异。此外，在室温下不吸湿，无潮解性。因此，保存稳定性优异、易于处理。而且，具有胶原产生促进效果、谷胱甘肽产生促进效果、创伤修复促进效果，且不具有细胞毒性，安全性优异，因此，例如可以适宜用于过敏性皮肤病、寻常性鱼鳞癣、老年性干燥症、牙周病、结膜炎等的治疗和预防。