具体实施方式

为了使本发明要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

除有定义外，以下实施例中所用的技术术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的实验试剂，如无特殊说明，均为常规生化试剂；以下实施例中所用的原材料、仪器和设备等，均可通过市场购买获得或者可通过现有方法获得；所述实验试剂用量，如无特殊说明，均为常规实验操作中试剂用量；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。

除非有相反陈述，下列用在说明书和权利要求中的术语具有下述含义。

术语“药学上可接受的盐”指那些保留母体化合物的生物有效性及特性的盐。该盐包括：酸加成盐，其是通过母体化合物的游离碱与无机酸或与有机酸的反应而获得的；所述无机酸诸如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、磷酸、硫酸及高氯酸等；所述有机酸诸如乙酸、草酸、(D)或(L)苹果酸、马来酸、甲烷磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、富马酸、琥珀酸、酒石酸或丙二酸等；优选为盐酸或(L)-苹果酸；或者当母体化合物中存在的酸质子被置换为金属离子或与有机碱配位时，形成盐，所述金属离子例如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子；所述有机碱诸如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、缓血酸胺、N-甲基葡糖胺及类似物。

术语“环烷基”指饱和或部分不饱和单环环状烃基团，环烷基环包含3至20个碳原子，优选包含3至12个碳原子，更优选包含5至6个碳原子。环烷基的非限制性实例包括环戊烯基、环己烯基等。

术语“杂环基”指饱和或部分不饱和单环环状烃基团，其包含3至20个环原子，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或硫的杂原子，其余环原子为碳。优选包含3至12个环原子，其中1～4个是杂原子；最优选包含3至8个环原子，其中1～3个是杂原子；最优选包含5至6个环原子，其中1个是杂原子。单环杂环基的非限制性实例包括二氢吡咯基、四氢吡啶基等。

术语“杂芳基”指具有完全共轭的π电子系统的、包含1至4个杂原子、5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子选自氧、硫和氮。杂芳基优选为5至10元，含1至3个杂原子；更优选为5元或6元，含1至2个杂原子；优选例如呋喃基、吡咯基、噻吩基、吡啶基、咪唑基、噻唑基、吡唑基、噁唑基、嘧啶基、噻二唑、吡嗪基等，更优选为呋喃基、吡咯基、噻吩基或吡啶基。

术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至12个碳原子的烷基，更优选含有1至4个碳原子的烷基。非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、2 ,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基及其各种支链异构体等。更优选的是含有1至4个碳原子的低级烷基，非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基等。烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基独立地任选选自卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烷基氨基、羟基、氰基、氨基中的一个或多个取代基所取代。

术语“烷氧基”指-O-(烷基)，其中烷基的定义如上所述。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基。烷氧基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基独立地任选选自卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烷基氨基、羟基、氰基、氨基中的一个或多个取代基所取代。

术语“烷硫基”指（烷基）-S-，烷硫基的非限制性实例包括：甲硫基、乙硫基、正丙硫基、异丙硫基、正丁硫基等。

术语“烷胺基”指具有一个或两个烷基取代基的胺基基团，如“烷基-NH-”或“（烷基）₂N-”基团，其中烷基的定义如上所述。烷胺基的非限制性实例包括：二甲基氨基、甲氨基等。

各种含碳氢结构部分的碳原子含量由该部分的标有最小和最大碳原子数目的前缀表示，即前缀C_i~j表示该部分的碳原子数为整数“i”至整数“j”（包括i和j）。因此，例如，C_1~4烷基是指1至4个碳原子的烷基（包括1和4）。

术语“药物组合物”指一种或多种本文中所述的化合物或其生理学上可接受的盐与其它化学成分(诸如生理学上可接受的载体及赋形剂)的混合物。药物组合物的目的旨在促进化合物给予生物。

术语“药学上可接受的载体”指药学领域常规的药物载体，对生物不产生明显刺激且不会消除所给予的化合物的生物活性及特性的载体，例如：稀释剂，如水等；填充剂，如淀粉、蔗糖等；粘合剂，如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮；湿润剂，如甘油；崩解剂，如琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂，如季铵化合物；表面活性剂，如十六烷醇；吸附载体，如高岭土和皂粘土；润滑剂，如滑石粉、硬脂酸钙和硬脂酸镁和聚乙二醇等。另外，还可以在上述药物组合物中加入其它辅料，如香味剂和甜味剂等。

术语“治疗有效量”指足以实现预期应用的本发明所述化合物的量。治疗有效量可以取决于以下因素而改变：预期应用（体外或者体内），或者所治疗的受试者和疾病病症，如受试者的重量和年龄、疾病病症的严重性和给药方式等，其可以由本领域普通技术人员容易地确定。具体剂量将取决于以下因素而改变：所选择的特定化合物、所述依据的给药方案、是否与其它化合物组合给药、给药的时间安排、所给药的组织和所承载的物理递送系统。

本发明所述“室温”具有本领域公知的含义，一般是指24-28℃。

第一方面，本发明实施例提供了一种具有式Ⅰ结构的化合物或其药学上可接受的盐：

；

式中，环A代表C_3-7环烷基、C_3-7杂环基、苯基、五元杂芳基或六元杂芳基；

R₁和R₂相同或不同，且各自独立地代表氢、氟、氯、溴、碘、不取代的C_1-4烷基、取代的C_1-4烷基、不取代的C_1-4烷氧基、取代的C_1-4烷氧基、不取代的C_1-4烷硫基、取代的C_1-4烷硫基、不取代的C_1-4烷胺基或取代的C_1-4烷胺基。

本发明实施例提供的化合物结构新颖，能够作为药物组合物的主要成分，通过抑制TRK激酶活性，可以有效治疗、缓解和/或预防肿瘤，对研究肿瘤药物的开发有重要的意义。

第一代TRK激酶抑制剂Larotrectinib和Entrectinib分别在2018年和2019年获FDA批准上市，可同时抑制TRKA、TRKB和TRKC 3个亚型，可治疗多种类型的肿瘤，被誉为“广谱抗癌神药”。但是，在临床上，第一代TRK激酶抑制剂已经出现了明显的不良反应和耐药的问题，并被证实是由NTRK突变引起，例如NTRK1的G595R或G667C突变，极大的限制了后期的开发使用。一旦发生耐药，就需要马上更换药物，且很多时候是一批药物的无法使用，倘若有迭代药物使用还好，如若没有，则患者的病情将快速恶化而无法得到控制。因此，研究新一代的TRK激酶抑制剂有望解决这些问题。

本发明实施例提供的化合物结构新颖，分子量小，可以同时抑制TRKA、TRKB和TRKC的活性，作为新的TRK激酶抑制剂，能够提高治疗肿瘤药物的选择性，有望解决现有抗癌药物的耐药性问题，具有巨大的社会价值和经济效益。

本发明的发明人在研究新的TRK激酶抑制剂的过程中，意外地发现本发明实施例提供的化合物因其具有大环结构，可以和TRK激酶中的ATP口袋竞争结合，从而抑制激酶活性，同时避免了TRK激酶结构域突变导致的空间损失，可以克服第一代TRK激酶抑制剂的母核因是非环状结构而容易产生耐药的缺陷。

第一代TRK激酶抑制剂Larotrectinib的结构如下：

。

进一步地，当所述R₁代表取代的C_1-4烷基、取代的C_1-4烷氧基、取代的C_1-4烷硫基或取代的C_1-4烷胺基时，取代基为羟基、甲基、氨基、甲氧基、二甲基氨基、卤素或乙基；当所述R₂代表取代的C_1-4烷基、取代的C_1-4烷氧基、取代的C_1-4烷硫基或取代的C_1-4烷胺基时，取代基为羟基、甲基、氨基、甲氧基、二甲基氨基、卤素或乙基。

进一步地，所述环A选自下述结构之一：

。

进一步地，所述R₁和R₂相同或不同，且各自独立地代表氢、氟、氯、甲基、甲氧基或。

进一步地，所述化合物可以选自但不限于下述的化合物： 。

第二方面，本发明实施例提供了一种如第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，包括如下步骤：

式中，环A、R₁和R₂的定义同第一方面对环A、R₁和R₂的定义；

S1、中间体Ⅲ的合成：

化合物II与联硼酸频那醇酯在第一催化剂作用下于第一碱存在的第一反应溶剂中进行反应，得到中间体Ⅲ；

S2、中间体Ⅴ的合成：

中间体Ⅲ与化合物Ⅳ在第二催化剂作用下于第二碱存在的第二反应溶剂中进行反应，得到中间体Ⅴ；

S3、中间体VI的合成：

中间体Ⅴ、铵盐和氢气在第三催化剂作用下于第三碱存在的第三反应溶剂中进行反应，得到中间体VI；

S4、中间体Ⅷ的合成：

中间体VI与化合物VII于第四碱存在的第四反应溶剂中进行反应，得到中间体Ⅷ；

S5、中间体Ⅸ的合成：

中间体Ⅷ于第五碱存在的第五反应溶剂和水中进行反应得到第一产物，所述第一产物与酸进行反应，得到中间体Ⅸ；

S6、中间体Ⅹ的合成：

中间体Ⅸ在缩合剂作用下于第六碱存在的第六反应溶剂中进行反应，得到中间体Ⅹ；

S7、化合物Ⅰ的合成：

中间体Ⅹ经手性拆分得到化合物Ⅰ。

本发明实施例提供的制备方法简单，条件温和，操作方便，设备条件要求不高，极易实现，且后处理简单，收率高，适用于工业化大规模生产。

进一步地，在步骤S1中，所述第一催化剂为钯催化剂，所述钯催化剂为醋酸钯、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、四三苯基膦钯中的至少一种。

进一步地，在步骤S1中，所述第一碱为醋酸钠、醋酸钾、碳酸钠、碳酸钾、磷酸钾、碳酸铯中的至少一种。

进一步地，在步骤S1中，所述第一反应溶剂为1,4-二氧六环、甲苯、四氢呋喃中的至少一种。

进一步地，在步骤S1中，反应温度为50℃~100℃，例如反应温度可以为50℃、60℃、70℃、80℃、90℃或100℃等。

进一步地，在步骤S2中，所述第二催化剂为钯催化剂，所述钯催化剂为醋酸钯、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、四三苯基膦钯中的至少一种。

进一步地，在步骤S2中，所述第二碱为碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、磷酸钾中的至少一种，所述第二碱不能为醋酸钠和醋酸钾，因醋酸钠和醋酸钾碱性太弱，不能使中间体Ⅲ与化合物Ⅳ发生反应。

进一步地，在步骤S2中，所述第二反应溶剂为四氢呋喃和水或1,4-二氧六环和水，所述第二反应溶剂包括水，可以增加所述第二碱的溶解性，提高反应收率。

进一步地，在步骤S2中，反应温度为20℃~100℃，例如反应温度可以为20℃、40℃、60℃、80℃或100℃等。

进一步地，在步骤S3中，所述铵盐为甲酸铵、乙酸铵、氯化铵、溴化铵、碘化铵、氢氧化铵、盐酸羟胺中的至少一种。

进一步地，在步骤S3中，所述第三催化剂为钯碳。

进一步地，在步骤S3中，所述第三碱为醋酸钠、醋酸钾中的至少一种，所述第三碱为弱碱，如果第三碱碱性太强，产生的杂质较多，中间体VI的收率较低，例如，若将醋酸钠或醋酸钾替换为碳酸钠、碳酸钾、磷酸钾、碳酸铯中的任一种时，收率都会降低。

进一步地，在步骤S3中，所述第三反应溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇中的至少一种。

进一步地，在步骤S3中，反应温度为20℃~80℃，例如反应温度可以为20℃、40℃、60℃或80℃等。

进一步地，在步骤S4中，所述第四碱为碳酸钾、碳酸铯、叔丁醇钠、叔丁醇钾、磷酸钾、三乙胺、N,N-二异丙基乙胺中的至少一种。

进一步地，在步骤S4中，所述第四反应溶剂为异丙醇、正丁醇中的至少一种，如果所述第四反应溶剂为甲醇或乙醇，则副反应较多，反应收率降低。

进一步地，在步骤S4中，反应温度为40℃~120℃，例如反应温度可以为40℃、60℃、80℃、100℃或120℃等。

进一步地，在步骤S5中，所述第五碱为氢氧化锂一水合物、氢氧化钠、氢氧化钾中的至少一种。

进一步地，在步骤S5中，所述第五反应溶剂为甲醇、乙醇、四氢呋喃中的至少一种。

进一步地，在步骤S5中，所述第一产物具有式B结构：

B

式中，R₃代表锂、钠或钾。

进一步地，在步骤S5中，所述酸为盐酸。

进一步地，在步骤S5中，反应温度为20℃~80℃，例如反应温度可以为20℃、40℃、60℃或80℃等。

进一步地，在步骤S6中，所述缩合剂为2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、O-苯并三氮唑- N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、N,N'-羰基二咪唑中的至少一种。

进一步地，在步骤S6中，所述第六碱为三乙胺、N,N-二异丙基乙胺中的至少一种。

进一步地，在步骤S6中，所述第六反应溶剂为二氯甲烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺中的至少一种。

进一步地，在步骤S7中，利用高效液相色谱手性柱进行所述手性拆分。

进一步地，在步骤S7中，所述高效液相色谱手性柱为Kromasil AmyCoat手性色谱柱。

进一步地，在步骤S7中，采用的流动相为体积比为4:1的甲醇和水。

第三方面，本发明实施例提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的选自如第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐，并包含药学上可接受的载体。

本发明实施例的药物组合物可通过将本发明的化合物或其盐与适宜的药学上可接受的载体组合而制备，例如可配制成固态、半固态、液态或气态制剂，如片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、膏剂、乳剂、悬浮剂、溶液剂、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶剂、微球及气溶胶等。

给予本发明实施例的化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物的典型途径包括但不限于口服、直肠、透黏膜、经肠给药，或者局部、经皮、吸入、肠胃外、舌下、阴道内、鼻内、眼内、腹膜内、肌内、皮下、静脉内给药。

本发明实施例的药物组合物可以采用本领域众所周知的方法制造，如常规的混合法、溶解法、制粒法、制糖衣药丸法、磨细法、乳化法、冷冻干燥法等等。

对于口服给药，可以通过将活性化合物与本领域熟知的药学上可接受的载体混合来配制该药物组合物。这些载体能使本发明的化合物被配制成片剂、丸剂、锭剂、糖衣剂、胶囊剂、液体、凝胶剂、浆剂、悬浮剂等，用于对患者的口服给药。

第四方面，本发明实施例提供了一种TRK激酶抑制剂，其包含治疗有效量的选自如第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐，并包含药学上可接受的载体。

第五方面，本发明实施例提供了一种根据第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于预防和/或治疗肿瘤药物中的用途。

进一步地，所述肿瘤选自皮肤癌、膀胱癌、卵巢癌、乳腺癌、胃癌、前列腺癌、结肠癌、肺癌、骨癌、脑癌、直肠癌、食管癌、舌癌、肾癌、肾实质癌、宫颈癌、子宫体癌、子宫内膜癌、睾丸癌、泌尿癌、黑素癌、星型细胞癌、脑膜瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病、急性骨髓性白血病，慢性粒细胞白血病、成人T细胞白血病淋巴瘤、肝细胞癌、支气管癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、多发性骨髓瘤、基底细胞瘤、精原细胞瘤、横纹肌肉瘤、软骨肉瘤、肌肉瘤、纤维肉瘤。

本发明先后进行过多次试验，现举一部分试验结果作为参考对发明进行进

一步详细描述，下面结合具体实施例进行详细说明。

实施例1 (R,63E,64E)-15-氟-8-甲基-4,7-二氮杂6(3,5)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-1(2,3)-吡啶3-3(1,2)-苯环并环十八烷-5-酮的制备

S1、中间体1b的合成：

将化合物1a（3.47g，20.0mmol）、联硼酸频那醇酯（5.6g，22.0mmol）、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯（1.47g，2.0mmol）、醋酸钾（3.93g，40.0mmol）溶于1,4-二氧六环（50mL）中，氮气保护下，升温至100℃回流反应5小时，TLC监测反应，反应完毕后，减压浓缩除去溶剂，之后加入200mL纯化水，用乙酸乙酯萃取三次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机相，之后用50mL纯化水洗涤有机相，再用50mL饱和食盐水洗涤有机相，之后用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离得到4.56g的中间体1b，收率为86.0%，中间体1b为淡黄色固体。

S2、中间体1d的合成：

将中间体1b（4.56g，17.2mmol）溶于1,4-二氧六环（50mL）中，室温下加入化合物1c（4.46g，20.6mmol），四三苯基膦钯（2.00g，1.72mmol）、磷酸钾（7.30g，34.4mmol），纯化水12.5mL，氮气保护下，升温至100℃回流搅拌反应4小时，TLC监测反应，反应完毕后减压浓缩除去溶剂，之后加入纯化水200mL，用乙酸乙酯萃取三次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机相，之后用50mL纯化水洗涤有机相，再用50ml饱和食盐水洗涤有机相，之后用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离得到3.87g的中间体1d，收率为82.0%，中间体1d为黄色固体。

S3、中间体1e的合成：

将中间体1d（3.87g，14.1mmol）、氢氧化铵（1g，28.2mmol）和醋酸钠（4.62g，56.4mmol）溶于乙醇（50mL）中，加热至60℃反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后减压浓缩除去溶剂，加入纯化水200mL，用乙酸乙酯萃取三次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机相，之后先用50mL纯化水洗涤有机相，再用50mL饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到黄色固体中间体，之后加入甲醇（50mL）和10%钯碳（500mg），通入氢气，室温下搅拌3h，TLC监测反应，反应完毕后过滤，滤液倒入200mL纯化水中，用乙酸乙酯萃取三次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机相，之后先用50mL纯化水洗涤有机相，再用50mL饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离得到2.77g的中间体1e，收率为80.0%，中间体1e为黄色固体。

S4、中间体1g的合成：

将中间体1e（2.77g，11.28mmol）、化合物1f（2.55g，11.28mmol）、N,N-二异丙基乙胺（DIEA，2.18g，16.92mmol）溶于正丁醇（30mL）中，升温至80℃反应10小时，TLC监测反应，反应完毕后减压浓缩除去溶剂，之后加入纯化水200mL，用二氯甲烷萃取三次，每次萃取所用二氯甲烷的体积为50mL，合并有机相，之后先用50mL纯化水洗涤有机相，再用50mL饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离得到4.59g的中间体1g，收率为93.6%，中间体1g为黄色固体。

S5、中间体1h的合成：

将化合物1g（4.59g，10.56mmol）溶于甲醇（25mL）和纯化水（25mL）中，加入氢氧化锂一水合物（0.89g，21.12mmol），升温至50℃反应3小时，TLC监测反应，反应完毕后减压浓缩除去溶剂，加入纯化水100mL，用二氯甲烷萃取三次，每次萃取所用二氯甲烷的体积为50mL，合并水相，滴加1M盐酸22mL，有黄色固体析出，过滤，滤饼干燥后得到3.58g的中间体1h，收率为83.5%，中间体1h为黄色固体。

S6、中间体1j的合成：

将中间体1h（3.58g，8.82mmol）、N,N-二异丙基乙胺（DIEA，2.28g，17.64mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（DMF，40mL）中，室温下，加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯（HATU，6.71g，17.64mmol），室温反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后加入纯化水200mL，用乙酸乙酯萃取三次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机相，之后先用50mL纯化水洗涤有机相，再用50mL饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离得到1.75g的中间体1j，收率为51.2%，中间体1j为淡黄色固体，ESI(+) m/z=388.4。

S7、化合物1的合成：

将中间体1j（1.75g，4.52mmol）经制备高效液相色谱手性柱（Kromasil AmyCoat手性色谱柱），以甲醇、水作为流动相（流速为20mL/min，体积比为4:1），拆分得到600mg的化合物1（ee值>98%），收率为68.6%，化合物1为淡黄色固体，ESI(+) m/z=388.4。

实施例2 (R,63E,64E)-15,36-二氟-8-甲基-4,7-二氮杂-6(3,5)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-1(2,3)-吡啶- 3(1,2)-苯环并环十八烷-5-酮的制备

按照本实施例提供的合成路线，参考实施例1中制备化合物1的方法，制备化合物2。

在步骤S6中，得到1.68g的中间体2j，收率为49.8%，中间体2j为淡黄色固体，ESI(+) m/z=406.4。

在步骤S7中，参考实施例1中步骤S7，将1.68g的中间体2j拆分得到569mg的化合物2（ee值>98%），收率为67.8%，化合物2为淡黄色固体，ESI(+) m/z=406.4。

实施例3 (R,63E,64E)-15-氟-36,8-二甲基-4,7-二氮杂-6(3,5)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-1(2,3)-吡啶- 3(1,2)-苯环并环十八烷-5-酮的制备

按照本实施例提供的合成路线，参考实施例1中制备化合物1的方法，制备化合物3。

在步骤S6中，得到1.26g的中间体3j，收率为47.2%，中间体3j为淡黄色固体，ESI(+) m/z=402.4。

在步骤S7中，参考实施例1中步骤S7，将1.26g的中间体3j拆分得到454mg的化合物3（ee值>98%），收率为72.1%，化合物3为淡黄色固体，ESI(+) m/z=402.4。

实施例4 (R,63E,64E)-15,34-二氟-36,8-二甲基-4,7-二氮杂-6(3,5)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-1(2,3)- 吡啶-3(1,2)-苯环并环十八烷-5-酮的制备

按照本实施例提供的合成路线，参考实施例1中制备化合物1的方法，制备化合物4。

在步骤S6中，得到1.48g的中间体4j，收率为48.3%，中间体4j为淡黄色固体，ESI(+) m/z=420.4。

在步骤S7中，参考实施例1中步骤S7，将1.48g的中间体4j拆分得到559mg的化合物4（ee值>98%），收率为75.6%，化合物4为淡黄色固体，ESI(+) m/z=420.4。

实施例5 (R,63E,64E)-15-氟-34-甲氧基-36,8-二甲基-4,7-二氮杂-6(3,5)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-1(2,3)-吡啶基-3(1,2)-苯环并环十八烷-5-酮的制备

按照本实施例提供的合成路线，参考实施例1中制备化合物1的方法，制备化合物5。

在步骤S6中，得到1.57g的中间体5j，收率为62.4%，中间体5j为淡黄色固体，ESI(+) m/z=432.5。

在步骤S7中，参考实施例1中步骤S7，将1.57g的中间体5j拆分得到490mg的化合物5（ee值>98%），收率为62.4%，化合物5为淡黄色固体，ESI(+) m/z=432.5。

实施例6 (R,63E,64E)-15-氟-36,8-二甲基-34-(甲氨基)-4,7-二氮杂-6(3,5)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-1(2,3)-吡啶基-3(1,2)-苯环并环十八烷-5-酮的制备

按照本实施例提供的合成路线，参考实施例1中制备化合物1的方法，制备化合物6。

在步骤S6中，得到1.65g的中间体6j，收率为63.7%，中间体6j为淡黄色固体，ESI(+) m/z=431.5。

在步骤S7中，参考实施例1中步骤S7，将1.65g的中间体6j拆分得到447mg的化合物6（ee值>98%），收率为54.2%，化合物6为淡黄色固体，ESI(+) m/z=431.5。

实施例7 (R,63E,64E)-15-氟-8-甲基-4,7-二氮杂6(3,5)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-1(2,3),3(4,3)-二吡啶并环十八烷-5-酮的制备

按照本实施例提供的合成路线，参考实施例1中制备化合物1的方法，制备化合物7。

在步骤S6中，得到1.44g的中间体7j，收率为42%，中间体7j为淡黄色固体，ESI(+)m/z=389.4。

在步骤S7中，参考实施例1中步骤S7，将1.44g的中间体7j拆分得到373mg的化合物7（ee值>98%），收率为51.8%，化合物7为淡黄色固体，ESI(+) m/z=389.4。

实施例8 (R，63E，64E)-15,35-二氟-8-甲基-4,7-二氮杂-6(3,5)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-1(2,3)，3(4,3)-二吡啶并环十八烷-5-酮的制备

按照本实施例提供的合成路线，参考实施例1中制备化合物1的方法，制备化合物8。

在步骤S6中，得到1.46g的中间体8j，收率为40.5%，中间体8j为淡黄色固体，ESI(+) m/z=407.4。

在步骤S7中，参考实施例1中步骤S7，将1.46g的中间体8j拆分得到395mg的化合物8（ee值>98%），收率为54.1%，化合物8为淡黄色固体，ESI(+) m/z=407.4。

实施例9 (R,63E,64E)-15-氟-35,8-二甲基-4,7-二氮杂-6(3,5)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-1(2,3),3(4,3)-二吡啶并环十八烷-5-酮的制备

按照本实施例提供的合成路线，参考实施例1中制备化合物1的方法，制备化合物9。

在步骤S6中，得到1.89g的中间体9j，收率为53.2%，中间体9j为淡黄色固体，ESI(+) m/z=403.4。

在步骤S7中，参考实施例1中步骤S7，将1.89g的中间体9j拆分得到581mg的化合物9（ee值>98%），收率为61.5%，化合物9为淡黄色固体，ESI(+) m/z=403.4。

实施例10 (R,63E,64E)-35-氯-15-氟-8-甲基-4,7-二氮杂-6(3,5)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-1(2,3), 3(4,3)-二吡啶并环十八烷-5-酮的制备

按照本实施例提供的合成路线，参考实施例1中制备化合物1的方法，制备化合物10。

在步骤S6中，得到1.79g的中间体10j，收率为47.8%，中间体10j为淡黄色固体，ESI(+) m/z=423.8。

在步骤S7中，参考实施例1中步骤S7，将1.79g的中间体10j拆分得到575mg的化合物10（ee值>98%），收率为64.2%，化合物10为淡黄色固体，ESI(+) m/z=423.8。

实施例11 (R,63E,64E)-15-氟-35-甲氧基-8-甲基-4,7-二氮杂-6(3,5)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-1(2,3),3(4,3)-二吡啶并环十八烷-5-酮的制备

按照本实施例提供的合成路线，参考实施例1中制备化合物1的方法，制备化合物11。

在步骤S6中，得到1.78g的中间体11j，收率为48.2%，中间体11j为淡黄色固体，ESI(+) m/z=419.4。

在步骤S7中，参考实施例1中步骤S7，将1.78g的中间体11j拆分得到509mg的化合物11（ee值>98%），收率为57.2%，化合物11为淡黄色固体，ESI(+) m/z=419.4。

实施例12(R,63E,64E)-15,36-二氟-35,8-二甲基-4,7-二氮杂-6(3,5)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-1(2,3),3(4,3)-二吡啶并环十八烷-5-酮的制备

按照本实施例提供的合成路线，参考实施例1中制备化合物1的方法，制备化合物12。

在步骤S6中，得到1.74g的中间体12j，收率为46.9%，中间体12j为淡黄色固体，ESI(+) m/z=421.4。

在步骤S7中，参考实施例1中步骤S7，将1.74g的中间体12j拆分得到572mg的化合物12（ee值>98%），收率为65.8%，化合物12为淡黄色固体，ESI(+) m/z=421.4。

实施例13 (R,63E,64E)-15-氟-8-甲基-4,7-二氮杂6(3,5)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-1(2,3)-吡啶3-3(2,3)-呋喃并环十八烷-5-酮的制备

按照本实施例提供的合成路线，参考实施例1中制备化合物1的方法，制备化合物13。

在步骤S6中，得到2.28g的中间体13j，收率为68.2%，中间体13j为淡黄色固体，ESI(+) m/z=378.4。

在步骤S7中，参考实施例1中步骤S7，将2.28g的中间体13j拆分得到822mg的化合物13（ee值>98%），收率为72.1%，化合物13为淡黄色固体，ESI(+) m/z=378.4。

实施例14 (R,63E,64E)-15-氟-35,8-二甲基-4,7-二氮杂-6(3,5)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-1(2,3)-吡啶- 3(2,3)-呋喃并环十八烷-5-酮的制备

按照本实施例提供的合成路线，参考实施例1中制备化合物1的方法，制备化合物14。

在步骤S6中，得到2.50g的中间体14j，收率为72.1%，中间体14j为淡黄色固体，ESI(+) m/z=392.4。

在步骤S7中，参考实施例1中步骤S7，将2.50g的中间体14j拆分得到806mg的化合物14（ee值>98%），收率为64.5%，化合物14为淡黄色固体，ESI(+) m/z=392.4。

实施例15 (R,63E,64E)-15-氟-8-甲基-4,7-二氮杂6(3,5)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-1(2,3)-吡啶3-3(3,2)-呋喃并环十八烷-5-酮的制备

按照本实施例提供的合成路线，参考实施例1中制备化合物1的方法，制备化合物15。

在步骤S6中，得到2.35g的中间体15j，收率为70.3%，中间体15j为淡黄色固体，ESI(+) m/z=378.4。

在步骤S7中，参考实施例1中步骤S7，将2.35g的中间体15j拆分得到820mg的化合物15（ee值>98%），收率为69.8%，化合物15为淡黄色固体，ESI(+) m/z=378.4。

实施例16 (R,63E,64E)-15-氟-35,8-二甲基-4,7-二氮杂-6(3,5)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-1(2,3)-吡啶- 3(3,2)-呋喃并环十八烷-5-酮的制备

按照本实施例提供的合成路线，参考实施例1中制备化合物1的方法，制备化合物16。

在步骤S6中，得到2.52g的中间体16j，收率为72.8%，中间体16j为淡黄色固体，ESI(+) m/z=392.4。

在步骤S7中，参考实施例1中步骤S7，将2.52g的中间体16j拆分得到816mg的化合物16（ee值>98%），收率为64.8%，化合物16为淡黄色固体，ESI(+) m/z=392.4。

实施例17 (R,63E,64E)-15-氟-8-甲基-31H-4,7-二氮杂-6(3,5)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-1(2,3)-吡啶- 3(2,3)-吡咯并环十八烷-5-酮的制备

按照本实施例提供的合成路线，参考实施例1中制备化合物1的方法，制备化合物17。

在步骤S6中，得到1.64g的中间体17j，收率为49.2%，中间体17j为淡黄色固体，ESI(+) m/z=377.4。

在步骤S7中，参考实施例1中步骤S7，将1.64g的中间体17j拆分得到515mg的化合物17（ee值>98%），收率为62.8%，化合物17为淡黄色固体，ESI(+) m/z=377.4。

实施例18 (R,63E,64E)-15-氟-31,8-二甲基-31H-4,7-二氮杂-6(3,5)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-1(2,3)- 吡啶-3(2,3)-吡咯并环十八烷-5-酮的制备

按照本实施例提供的合成路线，参考实施例1中制备化合物1的方法，制备化合物18。

在步骤S6中，得到1.85g的中间体18j，收率为53.6%，中间体18j为淡黄色固体，ESI(+) m/z=391.4。

在步骤S7中，参考实施例1中步骤S7，将1.85g的中间体18j拆分得到536mg的化合物18（ee值>98%），收率为57.9%，化合物18为淡黄色固体，ESI(+) m/z=391.4。

实施例19 (R,63E,64E)-15-氟-8-甲基-31H-4,7-二氮杂-6(3,5)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-1(2,3)-吡啶- 3(3,2)-吡咯并环十八烷-5-酮的制备

按照本实施例提供的合成路线，参考实施例1中制备化合物1的方法，制备化合物19。

在步骤S6中，得到1.73g的中间体19j，收率为52.1%，中间体19j为淡黄色固体，ESI(+) m/z=377.4。

在步骤S7中，参考实施例1中步骤S7，将1.73g的中间体19j拆分得到554mg的化合物19（ee值>98%），收率为64.1%，化合物19为淡黄色固体，ESI(+) m/z=377.4。

实施例20 (R,63E,64E)-15-氟-31,8-二甲基-31H-4,7-二氮杂-6(3,5)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-1(2,3)- 吡啶-3(3,2)-吡咯并环十八烷-5-酮的制备

按照本实施例提供的合成路线，参考实施例1中制备化合物1的方法，制备化合物20。

在步骤S6中，得到1.95g的中间体20j，收率为56.4%，中间体20j为淡黄色固体，ESI(+) m/z=391.4。

在步骤S7中，参考实施例1中步骤S7，将1.95g的中间体20j拆分得到613mg的化合物20（ee值>98%），收率为62.9%，化合物20为淡黄色固体，ESI(+) m/z=391.4。

实施例21 (R,63E,64E)-15-氟-8-甲基-4,7-二氮杂6(3,5)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-1(2,3)-吡啶3-3(2,3)-噻吩并环十八烷-5-酮的制备

按照本实施例提供的合成路线，参考实施例1中制备化合物1的方法，制备化合物21。

在步骤S6中，得到2.15g的中间体21j，收率为61.7%，中间体21j为淡黄色固体，ESI(+) m/z=394.4。

在步骤S7中，参考实施例1中步骤S7，将2.15g的中间体21j拆分得到698mg的化合物21（ee值>98%），收率为64.9%，化合物21为淡黄色固体，ESI(+) m/z=394.4。

实施例22 (R,63E,64E)-15-氟-8-甲基-4,7-二氮杂6(3,5)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-1(2,3)-吡啶3(3,2)-噻吩并环十八烷-5-酮的制备

按照本实施例提供的合成路线，参考实施例1中制备化合物1的方法，制备化合物22。

在步骤S6中，得到2.01g的中间体22j，收率为57.9%，中间体22j为淡黄色固体，ESI(+) m/z=394.4。

在步骤S7中，参考实施例1中步骤S7，将2.01g的中间体22j拆分得到621mg的化合物22（ee值>98%），收率为61.8%，化合物22为淡黄色固体，ESI(+) m/z=394.4。

实施例23 (R,63E,64E)-15-氟-8-甲基-4,7-二氮杂6(3,5)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-1(2,3)-吡啶3-3(1,2)-环戊烯并环十八烷-5-酮的制备

按照本实施例提供的合成路线，参考实施例1中制备化合物1的方法，制备化合物23。

在步骤S6中，得到1.39g的中间体23j，收率为41.5%，中间体23j为淡黄色固体，ESI(+) m/z=378.4。

在步骤S7中，参考实施例1中步骤S7，将1.39g的中间体23j拆分得到395mg的化合物23（ee值>98%），收率为56.8%，化合物23为淡黄色固体，ESI(+) m/z=378.4。

实施例24 (63E,64E,8R)-15-氟-35,8-二甲基-4,7-二氮杂-6(3,5)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-1(2,3)-吡啶- 3(1,2)-环戊烯并环十八烷-31--5-酮的制备

按照本实施例提供的合成路线，参考实施例1中制备化合物1的方法，制备化合物24。

在步骤S6中，得到1.53g的中间体24j，收率为44.2%，中间体24j为淡黄色固体，ESI(+) m/z=392.4。

在步骤S7中，参考实施例1中步骤S7，将1.53g的中间体24j拆分得到405mg的化合物24（ee值>98%），收率为52.9%，化合物24为淡黄色固体，ESI(+) m/z=392.4。

实施例25 (R,63E,64E)-15-氟-8-甲基-32,33-二氢-31H-4,7-二氮杂-6(3,5)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-1(2,3)-吡啶-3(5,4)-吡咯并环十八烷-5-酮的制备

按照本实施例提供的合成路线，参考实施例1中制备化合物1的方法，制备化合物25。

在步骤S6中，得到1.29g的中间体25j，收率为38.6%，中间体25j为淡黄色固体，ESI(+) m/z=379.4。

在步骤S7中，参考实施例1中步骤S7，将1.29g的中间体25j拆分得到402mg的化合物25（ee值>98%），收率为62.3%，化合物25为淡黄色固体，ESI(+) m/z=379.4。

实施例26 (R,63E,64E)-15-氟-31,8-二甲基-32,33-二氢-31H-4,7-二氮杂-6(3,5)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-1(2,3)-吡啶-3(5,4)-吡咯并环十八烷-5-酮的制备

按照本实施例提供的合成路线，参考实施例1中制备化合物1的方法，制备化合物26。

在步骤S6中，得到1.45g的中间体26j，收率为41.8%，中间体26j为淡黄色固体，ESI(+) m/z=393.4。

在步骤S7中，参考实施例1中步骤S7，将1.45g的中间体26j拆分得到433mg的化合物26（ee值>98%），收率为59.7%，化合物26为淡黄色固体，ESI(+) m/z=393.4。

实施例27 (R,63E,64E)-15-氟-8-甲基-4,7-二氮杂6(3,5)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-1(2,3)-吡啶3-3(1,2)-环己烯并环十八烷-5-酮的制备

按照本实施例提供的合成路线，参考实施例1中制备化合物1的方法，制备化合物27。

在步骤S6中，得到1.81g的中间体27j，收率为52.3%，中间体27j为淡黄色固体，ESI(+) m/z=392.4。

在步骤S7中，参考实施例1中步骤S7，将1.81g的中间体27j拆分得到556mg的化合物27（ee值>98%），收率为61.4%，化合物27为淡黄色固体，ESI(+) m/z=392.4。

实施例28 (63E,64E,8R)-15-氟-36,8-二甲基-4,7-二氮杂-6(3,5)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-1(2,3)-吡啶- 3(1,2)-环己烯并环十八烷-5-酮的制备

按照本实施例提供的合成路线，参考实施例1中制备化合物1的方法，制备化合物28。

在步骤S6中，得到2.03g的中间体28j，收率为56.7%，中间体28j为淡黄色固体，ESI(+) m/z=406.5。

在步骤S7中，参考实施例1中步骤S7，将2.03g的中间体28j拆分得到591mg的化合物28（ee值>98%），收率为58.2%，化合物28为淡黄色固体，ESI(+) m/z=406.5。

实施例29 (R,63E,64E)-15-氟-8-甲基-31,32,33,34-四氢-4,7-二氮杂-6(3,5)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-1(2,3)，3(6,5)-二吡啶并环十八烷-5-酮的制备

按照本实施例提供的合成路线，参考实施例1中制备化合物1的方法，制备化合物29。

在步骤S6中，得到1.65g的中间体29j，收率为47.6%，中间体29j为淡黄色固体，ESI(+) m/z=393.4。

在步骤S7中，参考实施例1中步骤S7，将1.65g的中间体29j拆分得到535mg的化合物29（ee值>98%），收率为64.8%，化合物29为淡黄色固体，ESI(+) m/z=393.4。

实施例30 (R,63E,64E)-15-氟-31,8-二甲基-31,32,33,34-四氢-4,7-二氮杂-6(3,5)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-1(2,3)，3(6,5)-二吡啶并环十八烷-5-酮的制备

按照本实施例提供的合成路线，参考实施例1中制备化合物1的方法，制备化合物30。

在步骤S6中，得到1.93g的中间体30j，收率为53.7%，中间体30j为淡黄色固体，ESI(+) m/z=407.5。

在步骤S7中，参考实施例1中步骤S7，将1.93g的中间体30j拆分得到576mg的化合物30（ee值>98%），收率为59.7%，化合物30为淡黄色固体，ESI(+) m/z=407.5。

实施例31TRKA，TRKB，TRKC激酶体外活性测试

将第一代TRK激酶抑制剂Larotrectinib和化合物1~30分别从10000nM开始，用100%DMSO进行4倍的梯度稀释(共9个浓度)。将Larotrectinib和化合物1~30分别50倍稀释到1X激酶反应缓冲液中，在振荡器上震荡20分钟。用1X的酶反应缓冲液配制2*TrkA、TrkB、TrkC激酶(购买于Carna Biosciences 08-186 ,08-187 ,08-197)和4*底物混合物(ATP+TKSubstrate-biotin多肽底物)。向384反应板中每孔加入2μL上述配制得TRK激酶和1μL在缓冲液中稀释好的化合物，用封板膜封住板子，1000g离心30秒，室温放置10分钟。向384反应板中加入上述配制的1μL4x底物混合物，用封板膜封住板子，1000g离心30秒，室温反应60分钟。转移4μL ADP-Glo到384反应板中，1000rpm/min，离心1min，25℃孵育40min。转移8μL检测溶液到384反应板中，1000rpm/min，离心1min，25℃孵育40min。使用Biotek多功能读板机读取RLU( Relative luminescence unit)信号，信号强度用于表征激酶的活性程度。数据使用GraFit6.0软件(Erithacus Software)计算得到该化合物的IC₅₀值，IC₅₀值的具体结果如表1所示。

实施例32突变的TRKA(G595R) 和TRKA(G667C)激酶体外活性测试

重组人源TRKA(G595R)和TRKA(G667C)激酶购自SignalChem，其体外活性测试方法参照实施例31中体外活性测试方法，使用Biotek多功能读板机读取RLU( Relativeluminescence unit)信号，信号强度用于表征激酶的活性程度。数据使用GraFit6.0软件(Erithacus Software)计算得到该化合物的IC₅₀值，IC₅₀值的具体结果如表1所示。

A＜50nM，50nM≤B≤300nM，300nM＜C＜500nM，500nM≤D

表1

由表1可知，化合物1~30均具有较强的TRK激酶抑制活性，尤其是化合物18、化合物24、化合物25和化合物28对TRK激酶的抑制活性最强，且明显优于Larotrectinib。以IC50计算，化合物24对TRKA的抑制活性强度达到Larotrectinib的4倍，对TRKB的抑制活性强度达到Larotrectinib的2倍，对TRKC的抑制活性强度达到Larotrectinib的2倍。

化合物1~30对突变的TRKA(G595R)和TRKA(G667C)激酶抑制活性远远强于Larotrectinib，以IC50计算，化合物24的抑制活性最强，化合物28的抑制活性次之，化合物24对TRKA(G595R)的抑制活性强度是化合物28的5倍，化合物24对TRKA(G667C)的抑制活性强度是化合物28的4倍。

现已发现，第一代TRK激酶抑制剂Larotrectinib在治疗一段时间后，会存在一定的耐药现象（主要涉及NTRK1/NTRK3）。进一步研究发现，其结构域突变的发生与ALK、ROS1激酶的突变相似，主要涉及3个主要区域的氨基酸取代，即溶剂前沿位点、卡口残基、xDFG-motif。溶剂前沿位点突变主要包括TRKA-G595R，TRKB-G639R和TRKC-G623R；卡口残基突变包括TRKA-F589L，TRKB-F633L和TRKC-F617L；xDFG-motif突变包括TRKA-G667C，TRKB-G709C和TRKC-G696A。

突变的发生会使药物对TRK激酶的抑制活性降低，从而出现耐药性问题。

化合物1~30对突变的TRKA(G595R)和TRKA(G667C)激酶的抑制活性远远强于Larotrectinib，克服了在使用第一代TRK激酶抑制剂Larotrectinib过程中出现的耐药性缺陷。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围。