阅读说明：本技术 一种基于银耳孢子发酵液提取多糖的方法 (Method for extracting polysaccharide based on tremella spore fermentation liquor ) 是由 齐宁 牛贵清 董新彬 于 2021-06-28 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种基于银耳孢子发酵液提取多糖的方法,属于多糖制备及应用技术领域,该基于银耳孢子发酵液提取多糖的方法,包括以下步骤：步骤一、原料准备,对银耳孢子发酵液进行过滤,随后使用研磨设备进行初步的研磨破碎,混合缓冲液,加热至35摄氏度,混合纤维素酶溶液,酶解后,冷却待用。该基于银耳孢子发酵液提取多糖的方法,通过对银耳孢子的粉碎、提取,可以最大程度利用银耳的有效充分,保证提取效率,纤维酶,可以实现对大分子的多聚糖进行水解,保证对多糖的提取含量提升,保证充足利用原材料,通过对银耳孢子提取通过预先固体物生产处理,使得无机盐提前析出,随后采用水为溶剂,将无机盐溶解,降低了制备成本。(The invention discloses a method for extracting polysaccharide based on tremella spore fermentation liquor, belonging to the technical field of preparation and application of polysaccharide, and the method for extracting polysaccharide based on tremella spore fermentation liquor comprises the following steps: step one, raw material preparation, filtration of tremella spore fermentation liquor, preliminary grinding and crushing by using grinding equipment, mixing of buffer solution, heating to 35 ℃, mixing of cellulase solution, enzymolysis and cooling for later use. This method based on polysaccharide is extracted to white fungus spore zymotic fluid, through smashing, extracting to the white fungus spore, can utilize the effective abundant of white fungus by the at utmost, guarantee extraction efficiency, the cellulase can realize hydrolysising the polysaccharide of macromolecule, guarantees to promote the extraction content of polysaccharide, guarantees the abundant raw and other materials that utilize, through extracting the white fungus spore solid production process in advance for inorganic salt is appeared in advance, adopts the water to be the solvent afterwards, dissolves inorganic salt, has reduced the preparation cost.)

一种基于银耳孢子发酵液提取多糖的方法

技术领域

本发明涉及多糖制备及应用领域，具体为一种基于银耳孢子发酵液提取多糖的方法。

背景技术

银耳多糖是银耳的主要活性成分，包括酸性多糖、中性多糖、中性杂多糖、酸性低聚糖、胞壁多糖和胞外多糖等，具有强心、延缓衰老、抗血栓、抗肿瘤、提高免疫力以及祛除黄褐斑等功效，在食品、保健品及化妆品领域中应用广泛，大分子量的银耳多糖具有良好的保湿能力和优越的成膜性，并具有抗氧化、抗敏消炎作用，但是存在溶解度低、不易被皮肤吸收和在配方中应用会带来黏腻感的缺点，在化妆品中应用存在一定的缺陷，而较低分子量的银耳多糖，溶解度高，容易被皮肤吸收且具备良好的保湿能力，给皮肤提供深层保湿的作用，故低分子量的银耳多糖更适合应用于化妆品领域。

孢子(spore)是脱离亲本后能直接或间接发育成新个体的生殖细胞，它是有丝分裂或减数分裂的产物；多数为单倍体，少数为二倍体，孢子一般为单细胞的，也可能是多细胞的繁殖体，由于它的性状不同，发生过程和结构的差异，形成了孢子的多样性。

目前对于从银耳子实体或孢子中提取银耳多糖的方法主要有热水浸取法、溶剂提取法、酶溶提取法等，这些方法是通过破坏银耳细胞而使胞内多糖溶出，但是银耳孢子中不仅仅含有多糖，还含有蛋白质和无机盐，在实际的制备过程中，需要花费大量的时间和试剂进行蛋白质的祛除，且依然会产生大量的试剂残留，其次是在后续的制备过程中，无机盐难以提前祛除，造成了多糖的杂质含量过多，实际制备成本较高的问题。

发明内容

本发明提供的发明目的在于提供一种基于银耳孢子发酵液提取多糖的方法。通过本发明一种基于银耳孢子发酵液提取多糖的方法，对于银耳多糖的制备效率，随后采用反复采用聚乙二醇和乙醇溶解、醇沉提取物，通过在生产过程中使用的聚乙二醇和乙醇进行回收再利用，避免产生原料的浪费。

为了实现上述效果，本发明提供如下技术方案：一种基于银耳孢子发酵液提取多糖的方法，包括以下步骤：

步骤一、原料准备，对银耳孢子发酵液进行过滤，随后使用研磨设备进行初步的研磨破碎，混合缓冲液，加热至35摄氏度，混合纤维素酶溶液，酶解后，冷却待用。

步骤二、粗分离，酶解液，取出加热、离心，随后进行冻干处理，获取固体产物。

步骤三、提纯，固体产物与无水乙醇和聚乙二醇混合浸泡，离心后取上清液，蒸发为浓缩液。

步骤四、制备多糖，再次加入无水乙醇，醇沉24小时、通过中空蒸发器进行冻干粉制备即可。

进一步的，包括以下步骤：根据步骤一中的操作步骤，所述发酵液进行过滤，其过滤直径为银耳孢子直径。

进一步的，包括以下步骤：根据步骤一中的操作步骤，所述缓冲液以稀盐酸溶液制备，所述稀盐酸溶液的浓度为0.4-0.8mol/L，所述缓冲液的PH值为4-5。

进一步的，包括以下步骤：根据步骤二中的操作步骤，所述酶解液的加热温度为40-60摄氏度。

进一步的，包括以下步骤：根据步骤二中的操作步骤，所述固体产物为蛋白质和多糖的混合物。

进一步的，包括以下步骤：根据步骤三中的操作步骤，所述无水乙醇和聚乙二醇混合浸泡时间需要达到24小时以上，所述浓缩液为原体积的十分之一。

进一步的，包括以下步骤：根据步骤三中的操作步骤，所述离心需要保持10分钟以上，每增加1L上清液，离心时间增加5分钟。

进一步的，包括以下步骤：根据步骤四中的操作步骤，所述再次加入无水乙醇与浓缩液的混合比例为10：1。

进一步的，包括以下步骤：根据步骤四中的操作步骤，所述醇沉工艺，需要冷却48小时以后，取上清液进行冻干粉制备。

进一步的，包括以下步骤：根据步骤四中的操作步骤，所述冻干粉制备采用真空度为0.1-0.2MPa，温度为28摄氏度到38摄氏度。

本发明提供了一种基于银耳孢子发酵液提取多糖的方法，具备以下有益效果：

(1)该基于银耳孢子发酵液提取多糖的方法，通过对银耳孢子的粉碎、提取，可以最大程度利用银耳的有效充分，保证提取效率。

(2)该基于银耳孢子发酵液提取多糖的方法，纤维酶，可以实现对大分子的多聚糖进行水解，保证对多糖的提取含量提升，保证充足利用原材料。

(3)该基于银耳孢子发酵液提取多糖的方法，通过对银耳孢子提取通过预先固体物生产处理，使得无机盐提前析出，随后采用水为溶剂，将无机盐溶解，降低了制备成本。

附图说明

图1为本发明的制备方法示意图。

具体实施方式

本发明提供一种技术方案：请参阅图1，一种基于银耳孢子发酵液提取多糖的方法，包括以下步骤：

步骤一、原料准备，对银耳孢子发酵液进行过滤，随后使用研磨设备进行初步的研磨破碎，混合缓冲液，加热至35摄氏度，混合纤维素酶溶液，酶解后，冷却待用。

步骤二、粗分离，酶解液，取出加热、离心，随后进行冻干处理，获取固体产物。

步骤三、提纯，固体产物与无水乙醇和聚乙二醇混合浸泡，离心后取上清液，蒸发为浓缩液。

步骤四、制备多糖，再次加入无水乙醇，醇沉24小时、通过中空蒸发器进行冻干粉制备即可。

具体的，包括以下步骤：根据步骤一中的操作步骤，发酵液进行过滤，其过滤直径为银耳孢子直径。

具体的，包括以下步骤：根据步骤一中的操作步骤，缓冲液以稀盐酸溶液制备，稀盐酸溶液的浓度为0.4-0.8mol/L，缓冲液的PH值为4-5。

具体的，包括以下步骤：根据步骤二中的操作步骤，酶解液的加热温度为40-60摄氏度。

具体的，包括以下步骤：根据步骤二中的操作步骤，固体产物为蛋白质和多糖的混合物。

具体的，包括以下步骤：根据步骤三中的操作步骤，无水乙醇和聚乙二醇混合浸泡时间需要达到24小时以上，浓缩液为原体积的十分之一。

具体的，包括以下步骤：根据步骤三中的操作步骤，离心需要保持10分钟以上，每增加1L上清液，离心时间增加5分钟。

具体的，包括以下步骤：根据步骤四中的操作步骤，再次加入无水乙醇与浓缩液的混合比例为10：1。

具体的，包括以下步骤：根据步骤四中的操作步骤，醇沉工艺，需要冷却48小时以后，取上清液进行冻干粉制备。

具体的，包括以下步骤：根据步骤四中的操作步骤，冻干粉制备采用真空度为0.1-0.2MPa，温度为28摄氏度到38摄氏度。

实施例的方法进行检测分析，并与现有技术进行对照，得出如下数据：

	制备效率	洁净度	制备成本
				实施例	较高	较搞	较低
现有技术	较低	较低	较高

根据上述表格数据可以得出，当实施实施例时，通过本发明一种基于银耳孢子发酵液提取多糖的方法，对于银耳多糖的制备效率，随后采用反复采用聚乙二醇和乙醇溶解、醇沉提取物，通过在生产过程中使用的聚乙二醇和乙醇进行回收再利用，避免产生原料的浪费。

本发明提供了一种基于银耳孢子发酵液提取多糖的方法，包括以下步骤：步骤一、原料准备，对银耳孢子发酵液进行过滤，随后使用研磨设备进行初步的研磨破碎，混合缓冲液，加热至35摄氏度，混合纤维素酶溶液，酶解后，冷却待用，发酵液进行过滤，其过滤直径为银耳孢子直径，缓冲液以稀盐酸溶液制备，稀盐酸溶液的浓度为0.4-0.8mol/L，缓冲液的PH值为4-5，通过对发酵液过滤，可以实现对固体琼脂、蛋白胨和其他培养皿物质的过滤，避免产生多余的杂质，步骤二、粗分离，酶解液，取出加热、离心，随后进行冻干处理，获取固体产物，酶解液的加热温度为40-60摄氏度，固体产物为蛋白质和多糖的混合物，通过对固体产物的固化，可以避免含有水分，且在实际的生产过程中，固体产物还会含有无机盐，可以通过蒸馏水进行再溶解，去除无机盐，步骤三、提纯，固体产物与无水乙醇和聚乙二醇混合浸泡，离心后取上清液，蒸发为浓缩液，无水乙醇和聚乙二醇混合浸泡时间需要达到24小时以上，浓缩液为原体积的十分之一，离心需要保持10分钟以上，每增加1L上清液，离心时间增加5分钟，步骤四、制备多糖，再次加入无水乙醇，醇沉24小时、通过中空蒸发器进行冻干粉制备即可，再次加入无水乙醇与浓缩液的混合比例为10：1，醇沉工艺，需要冷却48小时以后，取上清液进行冻干粉制备，冻干粉制备采用真空度为0.1-0.2MPa，温度为28摄氏度到38摄氏度。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。