阅读说明：本技术 一种白花鬼针草染色体常规制片的制作方法 (Method for preparing bidens alba chromosome conventional slide ) 是由 沈伟 岑湘涛 于 2021-07-07 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种白花鬼针草染色体常规制片的制作方法,具体包括以下步骤：根尖预处理培养；染色体制片；预处理；解离：取上述经预处理的根尖,在常温下用乙醇：38％HCl＝1:2分别进行解离,解离时间都为15分钟；染色：选取上述解离的根尖用不同染色剂1％结晶紫染色5分钟；观察拍照：用普通光学显微镜进行观察,对观察到的染色进行拍照。本发明优点在于：可获得细胞分散程度好,染色体收缩程度良好,染色体形态易辨别,提供了一种操作步骤简单又效率高的制片方法,此方法可用于白花鬼针草染色体数目的统计和观察。(The invention relates to a method for preparing a bidens alba chromosome conventional slide, which specifically comprises the following steps: pretreating and culturing root tips; preparing a chromosome; pre-treating; dissociation: taking the pretreated root tip, and treating the root tip with ethanol at normal temperature: dissociation was carried out with 38% HCl at 1:2 for 15 min; dyeing: selecting the dissociated root tips, and dyeing the root tips for 5 minutes by using 1% crystal violet of different dyeing agents; and (4) observing and photographing: the observation was carried out with a general optical microscope, and the observed staining was photographed. The invention has the advantages that: the method has the advantages of good cell dispersion degree, good chromosome contraction degree and easy chromosome morphology discrimination, and provides a flaking method with simple operation steps and high efficiency.)

一种白花鬼针草染色体常规制片的制作方法

技术领域

本发明涉及一种白花鬼针草染色体常规制片的制作方法。

背景技术

白花鬼针草，合瓣花亚纲桔梗目菊科鬼针草属植物，可入药。性状鉴别干燥药材呈条状。茎钝四棱形。下部叶3裂或不分裂；中部叶具柄，三出，小叶3枚，椭圆形或卵状椭圆形，先端锐尖，基部近圆形或阔楔形，不对称，边缘具锯齿。如何提供一种操作步骤简单又效率高的白花鬼针草染色体常规制片的制作方法成为研究方向。

发明内容

本发明的目的在于提供一种白花鬼针草染色体常规制片的制作方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为：一种白花鬼针草染色体常规制片的制作方法，具体包括以下步骤：

1)根尖预处理培养：先将白花鬼针草种子用清水浸泡二十分钟，浸泡的过程中把种皮外面的黄色物质清洗干净，用镊子挑选出颗粒饱满的白花鬼针草种子放在铺有定性滤纸的培养皿中，把种子有间隔地放在定性滤纸上，每个培养皿中约放25粒饱满的白花鬼针草种子，在培养皿中放入适量的清水，种子上面再铺上一层定性滤纸，放少量的清水，最后将培养皿放入到28℃培养箱培养2-3d，等根尖长到0.25cm时，采用根尖离体的方法进行根尖预处理；

2)染色体制片：经预处理的根尖先用蒸馏水清洗3次，后放入蒸馏水中浸泡十分钟，再转移至解离液中进行解离，解离完成后用蒸馏水清洗3次再用蒸馏水浸泡10分钟；用染色剂进行染色，染色时间为5分钟，染色之后用吸水纸吸干染液，之后用45％醋酸进行分色压片，分色完成之后，用吸水纸吸干染液，然后开始制片，先用手术刀切掉根尖的伸长区部分，留分生区部分，之后在载玻片上面滴一滴清水；然后盖上盖玻片，载玻片上面放一张滤纸，再用镊子轻轻敲打，使染色体均匀分散，将压好的载玻片置于普通光学显微镜下镜检并对染色体进行观察，找出清晰的中期分裂相细胞并进行拍照；

3)预处理：统一在早上8:30对白花鬼针草根尖进行取材，选取萌发至0.25厘米且乳白色无根毛的根尖放入含有预处理试剂的离心管中，25℃黑暗条件下分别用0.002mol/L的8-羟基喹啉浸泡4h进行预处理；

4)解离：取上述经预处理的根尖，在常温下用乙醇：38％HCl＝1:2分别进行解离，解离时间都为15分钟；

5)染色：选取上述解离的根尖用不同染色剂1％结晶紫染色5分钟；

6)观察拍照：用普通光学显微镜进行观察，对观察到的染色进行拍照。

本发明优点在于：可获得细胞分散程度好，染色体收缩程度良好，染色体形态易辨别，提供了一种操作步骤简单又效率高的制片方法，此方法可用于白花鬼针草染色体数目的统计和观察。

具体实施方式

下面用具体实施例说明本发明，并不是对本发明的限制。

实施例

一种白花鬼针草染色体常规制片的制作方法，具体包括以下步骤：

1)根尖预处理培养：先将白花鬼针草种子用清水浸泡二十分钟，浸泡的过程中把种皮外面的黄色物质清洗干净，用镊子挑选出颗粒饱满的白花鬼针草种子放在铺有定性滤纸的培养皿中，把种子有间隔地放在定性滤纸上，每个培养皿中约放25粒饱满的白花鬼针草种子，在培养皿中放入适量的清水，种子上面再铺上一层定性滤纸，放少量的清水，最后将培养皿放入到28℃培养箱培养2-3d，等根尖长到0.25cm时，采用根尖离体的方法进行根尖预处理；

2)染色体制片：经预处理的根尖先用蒸馏水清洗3次，后放入蒸馏水中浸泡十分钟，再转移至解离液中进行解离，解离完成后用蒸馏水清洗3次再用蒸馏水浸泡10分钟；用染色剂进行染色，染色时间为5分钟，染色之后用吸水纸吸干染液，之后用45％醋酸进行分色压片，分色完成之后，用吸水纸吸干染液，然后开始制片，先用手术刀切掉根尖的伸长区部分，留分生区部分，之后在载玻片上面滴一滴清水；然后盖上盖玻片，载玻片上面放一张滤纸，再用镊子轻轻敲打，使染色体均匀分散，将压好的载玻片置于普通光学显微镜下镜检并对染色体进行观察，找出清晰的中期分裂相细胞并进行拍照；

3)预处理：统一在早上8:30对白花鬼针草根尖进行取材，选取萌发至0.25厘米且乳白色无根毛的根尖放入含有预处理试剂的离心管中，25℃黑暗条件下分别用0.002mol/L的8-羟基喹啉浸泡4h进行预处理；

4)解离：取上述经预处理的根尖，在常温下用乙醇：38％HCl＝1:2分别进行解离，解离时间都为15分钟；

5)染色：选取上述解离的根尖用不同染色剂1％结晶紫染色5分钟；

6)观察拍照：用普通光学显微镜进行观察，对观察到的染色进行拍照。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。