一种左西孟坦的制备方法
阅读说明：本技术 一种左西孟坦的制备方法 (Preparation method of levosimendan ) 是由 鲁光英 于 2021-08-26 设计创作，主要内容包括：本发明提供一种左西孟坦的制备方法,将富勒醇溶解于乙醇水溶液中,加入左西孟坦；将二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇类化合物溶于溶剂中,快速搅拌得到混合液；混合液中加入乳化剂,使用超声波破乳,减压浓缩得到左西孟坦纳米粒子。本方法该纳米粒内核由富勒醇构成,左西孟坦装载于富勒醇表面,内核外部覆盖有DSPE-PEG类化合物构成的类脂层,该纳米粒将左西孟坦包裹在类脂层外壳中,避免了左西孟坦与外界环境的接触,增强了左西孟坦的稳定性,在释放过程中,释放速度较稳定,不存在突释现象,并可使其快速的分布于心肌组织中,减少周围组织的分布,可显著减小副作用的而产生。(The invention provides a preparation method of levosimendan, which comprises the steps of dissolving fullerol in an ethanol water solution, and adding levosimendan; dissolving distearoyl phosphatidyl ethanolamine-polyethylene glycol compound in a solvent, and quickly stirring to obtain a mixed solution; and adding an emulsifier into the mixed solution, demulsifying by using ultrasonic waves, and concentrating under reduced pressure to obtain the levosimendan nano particles. According to the method, the inner core of the nanoparticle is composed of fullerol, levosimendan is loaded on the surface of the fullerol, the outer part of the inner core is covered with a lipid layer composed of DSPE-PEG compounds, the nanoparticle wraps levosimendan in the outer shell of the lipid layer, contact between the levosimendan and the external environment is avoided, the stability of the levosimendan is enhanced, the release speed is stable in the release process, the burst release phenomenon does not exist, the levosimendan can be rapidly distributed in myocardial tissues, the distribution of surrounding tissues is reduced, and the generation of side effects can be remarkably reduced.)
技术领域
本发明涉及制药技术领域，更具体地说，尤其涉及一种左西孟坦的制备方法。
背景技术
左西孟坦为荷兰欧里恩公司开发的抗心衰药物，于2000年首次在瑞典上市，后陆续在挪威、芬兰、澳大利亚、西班牙等多个欧洲国家上市。2010年该药品获得在中国的上市许可，被批准用于需要增加心肌收缩力的急性失代偿心力衰竭的治疗。
由于左西孟坦常用于抢救，需要制备为注射液以供使用，但是左西孟坦难溶于水，且易降解，现有技术中多采用制剂手段加以克服。中国专利文件CN1373665中，通过以无水乙醇作为溶剂，并加入聚乙烯吡咯烷酮，用盐酸调节溶液pH至酸性的方案；已上市的左西孟坦注射液(国药准字H20110104成都圣诺生物制药有限公司)则采用以无水乙醇作为溶剂，加入聚乙二醇400，并用枸橼酸将pH值调节值酸性的方案。上述两方案制备的左西孟坦注射液，虽然基本解决了注射液稳定性的问题，但是制备过程中加入的聚维酮、聚乙二醇存在一定的溶血性，给治疗带来一定风险，而对于乙醇过敏的患者，该药物也存在致命风险，极大的限制了其使用。而且注射液需要在2—8℃保存，而且储存过程中也及不稳定，有可能从溶液中析出产生沉淀，而该药品在与5％葡萄糖注射液混合后的使用的过程中，也存在产生微粒杂质或者变色的情况。
另外，该药品使用过程中，需要根据病人的年龄、体重和病情等因素，调整初始输液速度、维持剂量并实时控制，使用较为不便。而且还存在较多的神经系统、胃肠系统的副作用。
发明内容
针对现有技术的上述缺陷和问题，本发明提供一种左西孟坦的制备方法。
为了达到上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种左西孟坦的制备方法，包括如下步骤：
步骤A、将富勒醇溶解于乙醇水溶液中，加入左西孟坦，在遮光环境下，搅拌12—24h；
步骤B、将二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇类化合物溶于溶剂中，再加入步骤A溶液后，快速搅拌得到混合液；
步骤C、混合液中加入乳化剂，快速搅拌后，使用超声波破乳，减压浓缩得到左西孟坦纳米粒子。
上述技术方案中，所述富勒醇由富勒烯通过表面羟基化得到，富勒醇的结构式为C2n(OH)m，其中n为30～60的正整数，m为≥6的正整数。
上述技术方案中，所述富勒醇的结构式为C60(OH)22。
上述技术方案中，所述步骤A中，乙醇水溶液中乙醇的比例为20％—100％。
上述技术方案中，所述步骤A中左西孟坦与富勒醇的质量比为1:3—5。
上述技术方案中，所述步骤A中左西孟坦与富勒醇的质量比为1:3—5。
上述技术方案中，所述步骤B中，溶剂为二氯甲烷、氯仿和四氢呋喃的一种或几种混合溶液。
上述技术方案中，所述步骤B中，所述二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇类化合物的浓度为5—30mg/ml。
上述技术方案中，所述步骤B中，所述混合液中，富勒醇混合液与DSPE-PEG类化合物溶液的比为1:1—5。
上述技术方案中，所述二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇类化合物是DSPE-PEG2000-SH、DSPE-PEG2000-NH2、DSPE-PEG2000-COOH、DSPE-PEG2000-OH、DSPE-PEG5000-SH、DSPE-PEG5000-NH2、DSPE-PEG5000-COOH、DSPE-PEG5000-OH的一种或几种混合物。
上述技术方案中，所述步骤C中所述乳化剂为聚乙烯醇、普郎尼克F68型、普郎尼克127型乳化剂中的任意一种或至少两种的混合物。
上述技术方案中，所述步骤C中，所述超声波破乳的功率为300～800W。
上述技术方案中，所述步骤C中，所述超声波破乳的功率为500W。
上述技术方案中，所述步骤C中，所述超声波破乳的时间为5～8min。
上述技术方案中，所述步骤C中，减压浓缩的温度为20—60℃，压力为400～600kPa。
本方法该纳米粒内核由富勒醇构成，左西孟坦装载于富勒醇表面，内核外部覆盖有DSPE-PEG(二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇)类化合物构成的类脂层，该纳米粒将左西孟坦包裹在类脂层外壳中，避免了左西孟坦与外界环境的接触，增强了左西孟坦的稳定性，用DSPE-PEG类化合物增加纳米粒外表面的亲水性，使其水溶性提高，并能形成立体位阻，延长药物在血液中的滞留时间，还可以有效提高心肌细胞对其选择性，纳米粒可显著改善左西孟坦的溶解性，可使其在以水溶剂的系统中快速溶解和稳定存放，不需要另外加入其他溶剂和助溶剂。在释放过程中，释放速度较稳定，不存在突释现象，并可使其快速的分布于心肌组织中，减少周围组织的分布，可显著减小副作用的而产生。
附图说明
图1、样品的药物释放曲线图。
图2、实施例进行药物分布研究试验结论图。
具体实施方式
下面将结合本发明的实施例和附图，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
一种左西孟坦的制备方法，包括如下步骤：
步骤A、将富勒醇溶解于乙醇水溶液中，加入左西孟坦，在遮光环境下，搅拌12—24h；富勒醇由富勒烯通过表面羟基化得到，富勒醇的结构式为C2n(OH)m，其中n为30～60的正整数，m为≥6的正整数，优选的富勒醇的结构式为C60(OH)22，乙醇水溶液中乙醇的比例为20％—100％,富勒醇的浓度为1—5μg/mL,左西孟坦与富勒醇的质量比为1:3—5。
步骤B、将二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇类化合物溶于溶剂中，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇类化合物是DSPE-PEG2000-SH、DSPE-PEG2000-NH2、DSPE-PEG2000-COOH、DSPE-PEG2000-OH、DSPE-PEG5000-SH、DSPE-PEG5000-NH2、DSPE-PEG5000-COOH、DSPE-PEG5000-OH的一种或几种混合物，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇类化合物的浓度为5—30mg/ml；溶剂为二氯甲烷、氯仿和四氢呋喃的一种或几种混合溶液；再加入步骤A溶液后，快速搅拌得到混合液，混合液中，富勒醇混合液与DSPE-PEG类化合物溶液的比为1:1—5
步骤C、混合液中加入乳化剂，快速搅拌后，使用超声波破乳，减压浓缩得到左西孟坦纳米粒子，乳化剂为聚乙烯醇、普郎尼克F68型、普郎尼克127型乳化剂中的任意一种或至少两种的混合物，超声波破乳的功率为300～800W，优选的超声波破乳的功率为500W，超声波破乳的时间为5～8min，减压浓缩的温度为20—60℃，压力为400～600kPa。
作为实施例所示的一种左西孟坦的制备方法：
实施例1：
将2mg分子式为C60(OH)22的富勒醇溶解于1L 60％的乙醇水溶液中，加入0.5mg左西孟坦，在遮光环境下，搅拌18h，得溶液1；将20mg DSPE-PEG2000溶于4ml二氯甲烷中，再取40ml溶液1加入后，快速搅拌得到混合液；混合液中加入1mL聚乙烯醇，快速搅拌5min，使用超声波细胞粉碎仪，在800W功率下超声破乳5min，500kPa、40℃下减压浓缩，得到左西孟坦纳米粒1。
实施例2：
将5mg分子式为C60(OH)22的富勒醇溶解于1L 60％的乙醇水溶液中，加入0.6mg左西孟坦，在遮光环境下，搅拌18h，得溶液1；将30mg DSPE-PEG2000溶于4ml二氯甲烷中，再取40ml溶液1加入后，快速搅拌得到混合液；混合液中加入1mL聚乙烯醇，快速搅拌5min，使用超声波细胞粉碎仪，在800W功率下超声破乳5min，500kPa、40℃下减压浓缩，得到左西孟坦纳米粒2。
对上述实施例进行粒径研究，各取上述实施例1和实施例2配成含有左西孟坦的浓度为25μg/mL的水溶液，使用Zetasizer型激光粒度仪测定样品的粒径，激光粒度仪的测试参数为：测试温度25℃，测试角度90度，实施例1粒径为91nm，实施例2粒径为101nm。
对上述实施例进行细胞释放试验，将同一密度的小鼠心肌细胞接种在培养皿中，分别加入粒径研究中制备的实施例1和实施例2样品，37℃下分别在孵育10min、30min、1h、2h、4h、12h和24h后，用Perkin Elmer型光共聚焦显微镜分别观察细胞内左西孟坦的荧光变化情况，作出细胞内荧光发射光强度随时间变化的曲线，即为样品的药物释放曲线，曲线见图1，从图1中可以看到药物在细胞中0—5小时为线性释放，之后释放平缓，不存在突释现象。
对上述实施例进行稳定性研究，按照《中国药典》稳定性试验条件考察结果如下表：
对上述实施例进行药物分布研究：
样品配置：分别将实施例1和实施例2制备的纳米粒及市售样品采用5％葡萄糖注射液配制成浓度为0.05mg/mL的注射液，装瓶备用。
给药：健康SD雄性大鼠36只，体重230-250g，分为3组，每组12只，给药前禁食过夜，自由饮水。每组分别按0.5mg/kg的剂量经大鼠尾静脉分别注射给予所述注射液，分别于给药后5min、30min、90min各取6只大鼠断头取血，立即解剖采集心、肝、脾、肾各0.4mL。
试验结果如图2所示，在三个时间点均观察到，市售常规制剂在心、肝、脾中组织浓度相近没有选择性，而实施例1和实施例2的纳米粒中的左西孟坦药物更明显地富集在心脏部位也就是心肌组织中，并且在肝脏部位以及肾脏部位的药物浓度明显降低。这说明本发明的靶向制剂对于心肌具有明显的靶向性，且能够使其他组织部位药物浓度相对降低，减少毒副作用。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应所述以权利要求的保护范围为准。
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