具体实施方式

本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。

鼠源4T1乳腺癌细胞株购自中国科学院细胞库(上海)，使用含1％双抗与10％胎牛血清的RPMI 1640培养基培养，培养箱条件为5％CO₂，95％空气，37℃，恒湿环境。所有动物实验均严格按照医院伦理委员会批准的动物研究指南进行。实验用雌性Balb/c小鼠购自成都达硕实验动物有限公司。用4T1细胞建立皮下瘤肿瘤模型，并用于体内分布和成像研究。

实施例1、本发明糖基聚合物的制备

化合物Maleimide-Ppa、MA-PySS和MA-D-galactosamine按文献1和文献2报道的方法合成。

文献1(Pan D,Zheng X,Zhang Q,et al.Dendronized-Polymer DisturbingCells'Stress Protection by Targeting Metabolism Leads to Tumor Vulnerability[J].Advanced Materials,2020,32:1907490.)报道了Maleimide-Ppa和MA-PySS的合成方法，具体合成路线如下：

Maleimide-Ppa：

MA-PySS：

文献2(Wartchow C A,Wang P,Bednarski M D,et al.Carbohydrate ProteaseConjugates:Stabilized Proteases for Peptide Synthesis[J].The Journal ofOrganic Chemistry,1995,60:2216-2226.)报道了MA-D-galactosamine的合成方法。

Maleimide-Ppa的结构为：其中Ppa为光敏剂焦脱镁叶绿酸-a(Pyropheophorbide a)结构部分。

MA-Pyss的结构为：

MA-D-galactosamine的结构为：

1、酶敏感的功能化链转移剂MA-GFLGK-CTA的制备

酶敏感的功能化链转移剂MA-GFLGK-CTA的合成路线如图1所示。MA-GFLGK-CTA按文献3报道的类似方法合成(文献3：Sun L,Li X,Wei X,et al.Stimuli-ResponsiveBiodegradable Hyperbranched Polymer–Gadolinium Conjugates as Efficient andBiocompatible Nanoscale Magnetic Resonance Imaging Contrast Agents[J].ACSApplied Materials&Interfaces,2016,8:10499-10512.)。具体合成方法如下：

MA-GFLG-OH(4.6g，10mmol)、HOBt(1.49g，11mmol)与缩合剂HBTU(4.26g，11mmol)置于圆底烧瓶中，氮气保护，冰浴下加入超干的DMF(50mL)使其溶解。将DIPEA(6.7mL，40mmol)滴加到体系中反应0.5小时。称取H-Lys(O^tBu)-Fmoc·HCl(4.62g，10mmol)加入到体系中，混合溶液在冰浴下反应0.5小时后回至室温反应10小时。加入450mL乙酸乙酯(EA)溶解，再依次用饱和碳酸氢钠溶液(100mL×3)、1M稀盐酸(100mL×3)和饱和氯化钠溶液(100mL×3)洗涤，收集有机相，无水硫酸镁干燥后浓缩，4℃静置后析出晶状白色固体MA-GFLGK(O^tBu)-NHFmoc(6.51g，7.51mmol，产率75.1％)。¹H NMR(400MHz，δin ppm)，¹³C NMR(100MHz，d₆-DMSO，δin ppm)，LC-MS(ES+)：m/z＝867.2[M+H]⁺。MALDI-HRMS:m/z＝889.4474[M+Na]⁺。

冰浴下，MA-GFLGK(O^tBu)-NHFmoc(4.33g，5mmol)用40mL DCM/TFA(v:v＝1:9)的混合溶液溶解，回至室温反应。TLC监测，待反应完全后旋转蒸发除去溶剂，加入乙醚后析出白色固体粉末，得到的白色固体粉末用乙醚洗涤两次并干燥得产物MA-GFLGK(OH)-NHFmoc(3.61g，4.45mmol，产率89.0％)。¹H NMR(400MHz，δin ppm)，¹³C NMR(100MHz，d₆-DMSO，δinppm)，LC-MS(ES+)：m/z＝811.3[M+H]⁺，834.3[M+Na]⁺，MALDI-HRMS：m/z＝833.3842[M+Na]⁺。

以MA-GFLGK(OH)-NHFmoc为原料，采用固相多肽合成法，经以下步骤合成功能单体MA-GFLGK-CTA。MA-GFLGK(OH)-NHFmoc(1.62g，2mmol)与DIPEA(0.67mL，4mmol)溶于10mLDMF后加入氯三苯甲基氯树脂(5.0g，1.15mmol/g)反应2小时。将树脂移至聚丙烯管中，用DCM:MeOH:DIPEA(v:v:v＝17:2:1)(100mL)的混合溶液冲洗3次，再分别用DCM和DMF冲洗3次。Fmoc保护基团用50mL含20％哌啶的DMF处理三次后加入氰基戊酸二硫代苯甲酸(CTA-COOH，2.79g，10mmol)、DIC(1.26g，10mmol)和HOBt(1.35g，10mmol)，反应12小时。产物用TFE/DCM(v:v＝3:7)在室温下处理2小时并通过过滤除去树脂。将母液减压浓缩，溶于少许甲醇后加入到乙醚中沉淀纯化，再通过高效液相色谱进一步纯化，得到粉红色固体产物MA-GFLGK-CTA(892mg，1.05mmol，产率52.5％)。¹H NMR(400MHz，δin ppm)，¹³C NMR(100MHz，d₆-DMSO，δin ppm)，LC-MS(ES+)：m/z＝851.3[M+H]⁺。MALDI-HRMS：m/z＝848.3408[M-H]^-，870.3181[M+Na-2H]^-。

2、酶敏感的功能化交联剂MA-GFLGKGLFG-MA的制备

组织蛋白酶B敏感的功能化交联剂MA-GFLGKGLFG-MA合成路线如图2所示。MA-GFLGKGLFG-MA按文献3报道的类似方法合成(文献3：Sun L,Li X,Wei X,et al.Stimuli-Responsive Biodegradable Hyperbranched Polymer–Gadolinium Conjugates asEfficient and Biocompatible Nanoscale Magnetic Resonance Imaging ContrastAgents[J].ACS Applied Materials&Interfaces,2016,8:10499-10512.)。具体合成方法如下：

BocNH-GFLG-OH(2.46g，5mmol)、HOBt(743mg，5.5mmol)和HBTU(2.13g，5.5mmol)置于圆底烧瓶，并在氮气保护下加入20mL超干DMF。冰浴下加入DIPEA(3.35mL，20mmol)反应0.5小时。向体系中加入H-Lys(OCH₃)-OH·2HCl(583mg，2.5mmol)后回至室温反应20小时。将反应液加入到250mL乙酸乙酯中，依次用饱和碳酸氢钠溶液(20mL×3)、1M稀盐酸(20mL×3)和饱和氯化钠溶液(20mL×3)洗涤，收集有机相，无水硫酸镁干燥后浓缩，置于4℃结晶得到白色固体产物BocNH-GFLGKGLFG-NHBoc(1.62g，1.46mmol，产率58.4％)。¹H NMR(400MHz，δin ppm)，¹³C NMR(100MHz，δin ppm)，LC-MS(ES+)：m/z＝1109.4[M+H]⁺，MALDI-HRMS：m/z＝1131.6045[M+Na]⁺。

将BocNH-GFLGKGLFG-NHBoc(1.33g，1.2mmol)置于氮气保护的圆底烧瓶中，冰浴下加入25mL DCM/TFA(v:v＝1:1)混合溶液，回至室温反应12小时后旋去溶剂，加入无水乙醚两次后抽干得到白色的固体中间产物，将其溶于100mL H₂O/ACN(v:v＝4:1)的混合溶液中，冰浴下滴加1M的NaOH溶液调节pH至7-8，然后将甲基丙烯酰氯(0.3mL，3mmol)溶于乙腈(ACN)后滴加到体系中，与此同时缓慢滴加1M的NaOH溶液使体系维持在pH＝10，冰浴下反应1小时后置于室温反应4小时，将反应液加入200mL乙酸乙酯中，用1M的稀盐酸调节pH至2-3，水相用EA萃取三次合并有机相用氯化钠溶液(20mL×3)洗涤，最后用无水硫酸镁干燥后浓缩，所得浓缩液置于4℃结晶得到白色固体产物MA-GFLGKGLFG-MA(700mg，0.68mmol，产率56.7％)。¹H NMR(400MHz，δin ppm)，¹³C NMR(100MHz，δin ppm)，LC-MS(ES+)：m/z＝516.3[M+2H]²⁺，1031.4[M+H]⁺。MALDI-HRMS：m/z＝1031.5506[M+H]⁺，1053.5377[M+Na]⁺，1029.5364[M-H]^-。

3、可降解的支化/交联糖基聚合物光动力治疗体系的构建与制备

可降解的支化/交联糖基聚合物光动力治疗体系的合成路线如图3所示。具体合成方法如下：

单体MA-D-Galactosamine(1446mg，4.63mmol)、MA-PySS(100mg，0.39mmol)、交联剂MA-GFLGKGLFG-MA(23.5mg，22.8μmol)、链转移剂MA-GFLGK-CTA(53.0mg，62.4μmol)与引发剂VA044(6.7mg，20.8μmol)溶于H₂O/CH₃OH(7.2mL，1:4，v/v)的混合溶液中，将聚合瓶避光置于冰浴中并通氩气鼓泡除氧45分钟后将其密闭，避光置于45℃油浴反应12小时，用液氮淬灭反应后将反应液低温透析冻干，得淡红色固体Branched-GFLG-poly D-galactosamine-PySS(B-gala-PySS，1480mg，产率91.2％)。聚合物前体Branched-GFLG-poly D-galactosamine-PySS(B-gala-PySS)的氢谱如图4所示。

将1300mg B-gala-PySS溶于10mL水溶液，加入1000mg二硫苏糖醇(DTT)处理过夜后透析(4℃，MWCO 3.5KDa)2天，样品用水相滤头处理后冻干得到白色固体粉末Branched-GFLG-poly D-galactosamine-SH(B-gala-SH，1150mg，产率88.5％)。聚合物前体Branched-GFLG-poly D-galactosamine-SH(B-gala-SH)的氢谱如图5所示。

Branched-GFLG-poly D-galactosamine-S-Ppa(BSP)按如下方法制备：500mg B-gala-SH溶于5mL RO H₂O后加入10mL DMSO配制成B-gala-SH/DMSO混合液，75mgMaleimide-Ppa溶于2mL DMSO后搅拌下滴加到B-gala-SH/DMSO混合液中将得到的墨绿色溶液，于室温环境避光反应过夜后透析(避光，MWCO 3.5KDa)2天除去DMSO，离心(7000rpm×5min)后取上清液经水相滤头(0.45μm)过滤，滤液冻干得黑绿色固体粗品(504mg，产率87.7％)。将粗品用2mL水溶解后滴加到200mL乙腈中出现大量沉淀，离心(10000rpm×5min)处理后收集固体残留物并重复处理纯化三次，得到的固体再次溶于20mL去离子水后冻干得产物(BSP，420mg)。聚合物Branched-GFLG-poly D-galactosamine-S-Ppa(BSP)的氢谱如图6所示。

BSP的氨基酸分析结果如表1所示。

表1.糖基支化/交联聚合物BSP的氨基酸分析结果

一般而言，聚合物载体在生物体内有效代谢的肾阈值约为50kDa，因而需要保证降解后的聚合物主链分子量低于这一水平。研究发现，本发明糖基聚合物材料能在酶作用下迅速降解，4小时后的降解产物(Mn＝32.4×10³,Mw＝46.7×10³,PDI＝1.44)有着较好的均一性，其分子量低于肾阈值。

对照例1、Branched-GFLG-poly D-galactosamine-S-hexyl-Ppa(BShP)的制备

1、功能化光敏剂Maleimide-hexyl-Ppa的制备

功能化光敏剂的合成路线如图7所示。

称取马来酰亚胺丙酸(Maleimide-COOH，1.17g，6.9mmol)和缩合剂HATU(3.74g，9.85mmol)溶于10mL DMF，冰浴下加入DIEA(3.2mL，18.3mmol)反应5分钟后再将N-Boc-1,6-己二胺盐酸盐(1.80g，8.3mmol)加入体系反应2小时。将50mL饱和碳酸氢钠溶液和30mL DCM加入到反应液中，收集有机相并将水相用DCM萃取三次，合并有机相并用饱和碳酸氢钠溶液、稀盐酸和饱和氯化钠溶液洗涤两次，无水硫酸镁干燥后去除溶剂得到黄色固体粗产物。过柱纯化(CH₃OH:DCM＝1:20，v/v)后用高效液相色谱进一步分离纯化，得到无色液体产物Maleimide-hexyl-NHBoc(1.66g，产率65.4％)。¹H NMR(400MHz，δin ppm)，¹³C NMR(100MHz，δin ppm)，LC-MS(ES+)：m/z＝368.3m/z[M+H]⁺，390.2m/z[M+Na]⁺。MALDI-HRMS：m/z＝390.2000[M+Na]⁺。

在0℃下，将Maleimide-hexyl-NHBoc(220mg，0.60mmol)溶于10mL DCM中后加入10mL TFA，反应过夜后除去溶剂，残留物通过无水乙醚处理得到固体粉末。将上步所得的固体粉末、焦脱镁叶绿酸a(270mg，0.50mmol)与缩合剂HATU(285mg，0.75mmol)溶于DCM中并加入DIEA(0.23mL，1.33mmol)，反应液在室温下反应1.5小时后旋去溶剂，过柱纯化(DCM:CH₃OH＝30:1-20:1，v/v)得到黑色固体粉末Maleimide-hexyl-Ppa(237mg，产率50.5％)。¹HNMR(400MHz，δin ppm)，LC-MS(ES+)：m/z＝784.4m/z[M+H]⁺。MALDI-HRMS：m/z＝806.3995[M+H]⁺，m/z＝822.3678[M+K]⁺。

2、Branched-GFLG-poly D-galactosamine-S-hexyl-Ppa(BShP)的制备

Branched-GFLG-poly D-galactosamine-S-hexyl-Ppa(BShP)按如下方法制备：500mg B-gala-SH溶于5mL RO H₂O后加入10mL DMSO配制成B-gala-SH/DMSO混合液，80mgMaleimide-hexyl-Ppa溶于2mL DMSO后搅拌下滴加到B-gala-SH/DMSO混合液中得到墨绿色溶液，于室温环境避光反应过夜后透析(避光，MWCO 3.5KDa)2天除去DMSO，离心(7000rpm×5min)后取上清液经水相滤头(0.45μm)过滤，滤液冻干得黑绿色固体粗品(520mg，产率89.7％)。将粗品用2mL水溶解后滴加到200mL乙腈中出现大量沉淀，离心(9000rpm×5min)处理后收集固体残留物并重复处理纯化三次，得到的固体再次溶于20mL去离子水后冻干得产物(BShP，450mg)。聚合物Branched-GFLG-poly D-galactosamine-S-hexyl-Ppa(BShP)的氢谱如图8所示。

对照例2、线性糖基聚合物光动力治疗体系的制备

线性糖基聚合物光动力治疗体系的合成路线如图9所示：

作为对照，设计合成了线性糖基聚合物光动力治疗体系。单体MA-D-Galactosamine(722mg，2.31mmol)、MA-PySS(50mg，0.20mmol)、链转移剂4-氰基-4-(硫代苯甲酰)戊酸(CTA，5.3mg，19.0μmol)与引发剂VA044(2.1mg，6.5μmol)溶于H₂O/CH₃OH(3.5mL，1:4，v/v)的混合溶液中，将聚合瓶避光置于冰浴中并通氩气鼓泡除氧45分钟后将其密闭，避光置于45℃油浴反应12小时，用液氮淬灭反应后将反应液低温透析冻干，得淡红色固体Linear-poly D-galactosamine-PySS(L-gala-PySS：725mg，产率93.3％)。聚合物前体Linear-poly D-galactosamine-PySS的氢谱如图10所示。

将620mg L-gala-PySS溶于10mL水溶液，加入600mg DTT处理过夜后透析(4℃，MWCO 3.5KDa)2天，样品用水相滤头处理后冻干得到白色固体粉末Linear-poly D-galactosamine-SH(L-gala-SH，560mg，产率93.3％)。聚合物前体Linear-poly D-galactosamine-SH的氢谱如图11所示。

Linear-poly D-galactosamine-S-Ppa(LSP)的制备与可降解的支化/交联糖基聚合物光动力治疗体系的制备方法类似：500mg L-gala-SH溶于5mL RO H₂O后加入10mL DMSO配制成L-gala-SH/DMSO混合液，80mg Maleimide-Ppa溶于2mL DMSO后搅拌下滴加到L-gala-SH/DMSO混合液中得到的墨绿色溶液，于室温环境避光反应过夜后透析(避光，MWCO3.5KDa)2天除去DMSO，离心(7000rpm×5min)后取上清液经水相滤头(0.45μm)过滤，滤液冻干得黑绿色固体粗品(512mg，产率88.3％)。将粗品用2mL水溶解后滴加到200mL乙腈中出现大量沉淀，离心(10000rpm×5min)处理后收集固体残留物并重复处理纯化三次，得到的固体再次溶于20mL去离子水后冻干得产物(LSP，496mg)。聚合物Linear-poly D-galactosamine-S-Ppa(LSP)的氢谱如图12所示。

对照例3、基于HPMA的可降解支化/交联聚合物光动力治疗体系的制备

作为糖基材料的对照，设计合成了基于HPMA的可降解支化/交联聚合物光动力治疗体系。基于HPMA的可降解支化/交联聚合物光动力治疗体系的合成路线如图13所示。具体合成方法如下：

单体HPMA(722mg，5.04mmol)、MA-PySS(50mg，0.20mmol)、交联剂MA-GFLGKGLFG-MA(11.8mg，11.4μmol)、链转移剂MA-GFLGK-CTA(26.5mg，31.2μmol)与引发剂VA044(3.4mg，10.4μmol)溶于H₂O/CH₃OH(3.6mL，1:4)的混合溶液中，将聚合瓶避光置于冰浴中并通氩气鼓泡除氧45分钟后将其密闭，避光置于45℃油浴反应12小时，用液氮淬灭反应后将反应液低温透析冻干，得淡红色固体Branched-GFLG-poly HPMA-PySS(B-HPMA-PySS，740mg，产率91.2％)。聚合物前体Branched-GFLG-poly HPMA-PySS的氢谱如图14所示。

将640mg B-HPMA-PySS溶于10mL水溶液中，加入1000mgDTT处理过夜后透析(4℃，MWCO 3.5KDa)2天，样品用水相滤头处理后冻干得到白色固体粉末Branched-GFLG-polyHPMA-SH(B-HPMA-SH，600mg，产率93.8％)。聚合物前体Branched-GFLG-poly HPMA-SH的氢谱如图15所示。

Branched-GFLG-poly-HPMA-S-Ppa(BHSP)的制备如下：500mg B-HPMA-SH溶于5mLRO H₂O后加入10mL DMSO配制成B-HPMA-SH/DMSO混合液，80mg Maleimide-hexyl-Ppa溶于2mL DMSO后搅拌下滴加到B-HPMA-SH/DMSO混合液中得到的墨绿色溶液，于室温环境避光反应过夜后透析(避光，MWCO 3.5KDa)2天除去DMSO，离心(7000rpm×5min)后取上清液经水相滤头(0.45μm)过滤，滤液冻干得黑绿色固体粗品(500mg，产率86.2％)。将粗品用2mL水溶解后滴加到200mL丙酮中出现大量沉淀，离心(9000rpm×5min)处理后收集固体残留物并重复处理纯化三次，得到的固体再次溶于20mL去离子水后冻干得产物(BHSP，460mg)。聚合物Branched-GFLG-poly HPMA-S-Ppa(BHSP)的氢谱如图16所示。

以下通过具体试验例证明本发明的有益效果：

试验例1、聚合物的表征

1、聚合物的粒径与电位测定

称取BSP、BShP、LSP，纯水溶解稀释至终浓度为1.0mg/mL，使用粒度仪表征样品粒径和Zata电位(每次测量重复三次)，最终数据使用GraphPad Prism软件进行分析。同时将浓度为200μg/mL的样品滴加到铜网上自然风干，使用透射电镜观察粒径大小与形貌。

通过透射电镜观察到各组材料的形貌如图17所示。BShP的组装体呈十分均匀的圆形纳米粒；相较而言BSP形成的纳米粒则并不是太规则，但也能观察到类似圆形的形貌；而不具有支化/交联结构的LSP则呈松散的丝状分布，没有聚集形成特殊形貌。

如图18所示：通过DLS测得BSP、BShP和LSP的粒径分别约为238nm、164nm和374nm，即BShP形成的粒子最为致密，BSP却相对松散但仍保持纳米粒子形态。三组材料的Zeta电位分别为-16.81mV、-19.23mV和-21.97mV，均为电负性。

2、聚合物的体外ROS产生测定

将BSP、BShP和LSP溶解稀释至光敏剂焦脱镁叶绿酸-a(Pyropheophorbide a,Ppa)浓度为5.0μg/mL，同时加入SOSG检测试剂至终浓度为2.5μM。吸取各组溶液100μL至96孔板，并设3个复孔，随后用660nm激光进行辐照(功率密度：10mW/cm²，持续时间：15min)。在0.5、1、1.5、2、3、5、10、15min时间点用多功能酶标仪测定荧光强度(激发波长为490nm，发射波长为525nm)并记录各样品在525nm波长处的荧光强度。用PBS作为空白对照。

Ppa能吸收特定波长光子而从基态跃迁到激发态，随后将吸收的能量转移到附近的氧气分子产生单线态氧。Ppa经光照激发产生的ROS可以通过试剂盒检测。其中，单线态氧荧光探针(Singlet oxygen sensor green,SOSG)是一种对单线态氧具有高度选择性的检测试剂，该指示剂最初具有弱蓝色荧光，与单线态氧作用后会发出与荧光素相似的绿色荧光(最大激发/发射波长约为504/525nm)，绿色荧光强弱与产生的ROS量成正相关。如图19所示，在吸收660nm激发能量后，BSP所产生的荧光强度最强，LSP次之，BShP最弱，且BSP荧光强度显著高于LPS和BShP。说明BSP体外ROS产生的量和效率更高，而BShP和LSP的ROS产生效率则相对较低。进一步说明BSP对肿瘤有更好的杀伤作用。

3、聚合物体外IC50值测定

将4T1细胞按5×10⁴个/每孔的细胞浓度接种于96孔板中，待细胞贴壁(约孵育12小时)后吸弃培养基，加入用培养基配制的含BSP、LSP和BShP的梯度浓度(Ppa浓度：50、20、10、5、2、1、0.5、0.1、0.01μg/mL)溶液后继续孵育6小时，孵育完成后分别给予2J/cm²剂量光照，再孵育12小时后根据试剂盒说明书使用CCK8试剂，通过酶标仪检测450nm左右吸光度。使用GraphPad Prism(vison 8.0)软件对测定结果进行作图分析。

通过体外细胞实验进行了IC₅₀值的比较(图20)。在同样的Ppa浓度梯度、光照剂量以及培养条件下，三组聚合物IC50值分别为BSP 0.25μg/mL，LSP 0.91μg/mL，BShP 4.8μg/mL，说明BSP对肿瘤细胞杀伤效果最强。

4、聚合物体内肿瘤部位信号检测

1×10⁶个4T1细胞接种于Balb/c小鼠(20克，6-8周龄)侧腹部，待肿瘤生长到直径约5mm左右开始进行实验。将小鼠随机分为3组(每组5只)，分别经尾静脉注射Ppa浓度为5mg/kg的不同组材料(BSP、BShP和LSP)。于注射完成不同时间点(5min、30min、1h、3h、6h、12h和24h)通过活体荧光成像系统观察肿瘤部位荧光信号，并通过数据分析系统处理数据并分析。

结果表明，BSP材料在注射后肿瘤部位荧光强度逐渐升高，6小时左右达到最高，并且在各个时间点的肿瘤部位荧光强度均远高于LSP和BShP组(图21)。

在同样Ppa浓度下，BSP无论是体外ROS的产生量、对肿瘤细胞的毒性作用和在肿瘤组织聚集度均高于LSP和BShP，这保证了光动力治疗的效果。BSP可作为光敏剂，用于光动力治疗肿瘤具有优异的效果。

试验例2、聚合物包载奥拉帕尼及其表征

1、聚合物包载奥拉帕尼

聚合物包载奥拉帕尼通过透析法制备，称取300mg LSP、BSP、BShP及BHSP分别溶于5mL去离子水，并加入10mL DMSO，得到含有材料的H₂O/DMSO混合溶液。30mg奥拉帕尼(Olaparib)溶于2mL DMSO后滴加到含有材料的H₂O/DMSO混合溶液。避光搅拌过夜，将反应液透析(3.5kDa MWCO)2天去除DMSO溶剂，然后用水相滤膜处理后冻干，得到包载奥拉帕尼的聚合物，聚合物依次命名为LSPO、BSPO、BShPO和BHSPO(O代表olaparib)。

2、奥拉帕尼包载量的测定

LSP、BSP、BShP和BHSP对于奥拉帕尼的包载量通过HPLC结果计算。载药量(wt％)＝(包载的药物的质量/聚合物与包载药物的总质量)×100％。将各组材料分别用流动相溶解后超声，并将有机相滤头处理后的滤液进行HPLC检测。色谱柱型号为(Column name:Shim-pack GLST，C18，5μm.Size:250×4.6mm I.D.)，测试柱温为30℃，流速为1.0mL/min，进样量为20μL，样品浓度约为100μg/mL，检测器选择为UV light(276nm)，流动相为CH₃OH/H₂O(v:v＝1:1)的混合溶液。

结果如表2所示。BSP聚合物的包载量最高，达到4.03％；BShP的包载量为2.17％，差于BSP。相较而言，对照材料LSP和BHSP无法有效包载小分子药物，其包载量分别仅为0.33％和0.13％。说明BSP“合适”的组装堆叠形态能够包载更多的小分子药物。通过HPLC收集包载的小分子药物进行检测，HRMS结果表明olaparib仍然为活性原药(图22)。

表2.各组聚合物的Ppa含量及对应Olaparib的包载量

3、BSPO的相关表征

用DLS测量包载奥拉帕尼的聚合物BSPO(1.0mg/mL)的水相粒径和zeta电位，并进一步通过TEM考察其形貌(制样浓度为200μg/mL)。用紫外-可见分光光度计在200-800nm范围内检测样品BSP、BSPO、Ppa和Olaparib的紫外光谱，通过荧光光谱仪测定BSP、BSPO、Ppa和Olaparib的荧光光谱。通过SOSG检测试剂评价BSP和BSPO的体外单线态氧生成效率的变化，具体方法与试验例1体外ROS产生测定的条件方法相同。

如图23所示，DLS结果表明BSPO水相粒径约为178nm，其表面同样为负电荷；而TEM结果表明其形成了尺寸相对均一的纳米粒子。这表明相较于BSP，包载了小分子奥拉帕尼后的BSPO结构可能更为致密。

BSPO的荧光光谱性质：如图24所示，相同Ppa浓度下，BSP与BSPO在680nm左右的荧光强度无明显差别，说明包载奥拉帕尼后并不影响Ppa的荧光性质。

与此同时，在紫外光谱图中(图25)BSP和BSPO在330-800nm左右的紫外光谱基本重叠，说明紫外光谱在这一波长范围内没有改变；而在300nm左右，紫外光谱略有区别，即BSPO在300nm左右的光谱发生了变化。奥拉帕尼的紫外吸收峰在276nm左右，这一变化是Ppa的紫外峰与奥拉帕尼的紫外峰重叠引起的，这一结果一定程度上说明了BSP能够有效包载奥拉帕尼，且包载奥拉帕尼不会影响聚合物产生ROS能力。

如图26所示，BSPO与BSP相比，其体外的ROS产生量和效率没有明显差异，说明包载奥拉帕尼后仍能高效产生ROS。

上述试验结果说明：糖基聚合物BSP可以作为光敏剂，用于光动力治疗，其在肿瘤部位有良好的聚集效果，并且对肿瘤有良好的杀伤作用；同时，糖基聚合物BSP可以作为药物载体包裹药物，如奥拉帕尼，进一步用于疾病治疗。其包裹药物的载药量高，作为给药系统效果优异。

本发明合成了不同结构的糖基聚合物载体BSP、BShP和LSP，以及基于pHPMA的药物载体BSHP。实验结果表明在相同光敏剂焦脱镁叶绿酸-a(Pyropheophorbide a,Ppa)浓度的情况下，相比于BShP和LSP，BSP光照后ROS的产生效率最高。肿瘤细胞毒性实验发现BSP、BShP和LSP三种聚合物载体的半抑制浓度(Half maximal inhibitory concentration，IC50)分别为0.25μg/mL、4.8μg/mL和0.91μg/mL，BSP具有更明显的肿瘤细胞杀伤作用。

本发明还制备了包载奥拉帕尼的双药递送系统BSPO。包载药物奥拉帕尼能力的研究发现，BSP对药物的包载能力最强，作为药物载体最优。

可见本发明制备的糖基聚合物载体BSP在肿瘤部位的聚集浓度高，具有良好的光动力治疗效果，对肿瘤杀伤作用强，是一种良好的光敏剂；且作为药物载体包载量大，是一种优异的给药系统。

综上，本发明提供了一种糖基聚合物BSP，该糖基聚合物克服了现有PDT光敏剂肿瘤部位聚集不够，对肿瘤杀伤作用不强的缺点，可以在肿瘤部位聚集，具有良好的靶向作用；其具有光动力效应，作为光敏剂用于光动力治疗ROS产生效率高，对肿瘤细胞杀伤作用强。同时，该糖基聚合物还可以作为给药系统包载药物，特别是肿瘤药物，如奥拉帕尼，用于肿瘤治疗，效果优异。本发明糖基聚合物用于制备治疗肿瘤的药物具有优良的应用前景。