具体实施方式

本发明能够采用制备漆树提取物，或者以制备的提取物为对象，或者浓缩提取液来处理的方法，使为反应的进行而添加的催化剂可以在之后的过滤工序中被过滤去除，反应液能够以生理活性得到强化的提取物的方式来获得。

已知到目前为止尚无以漆树提取物为对象，为了这种目的而使用催化剂的先例。本发明就是以这样的观点出发通过新的概念来开发的，是有关即使是专攻有机合成的研究人员也不易开发出来的新型的工序及组合物的。

本发明以漆树提取物的制备开始。用于作为本发明的主要工序的将黄颜木素转化为漆黄素的工序的催化剂可以使用铂、铜、铬、硅、镍中的一种以上，最好使用铂及铬中的一种以上。在这些金属的情况下，可以采用纯金属、氧化物、氮氧化物等的形态，这些都具有促进反应的进行本身的效果，只是程度上有差异而已。通常情况下，纯金属为最佳，然后依次是氧化物、氮氧化物。并且，为了反应的效率化，还可以采用如下通常的催化剂使用方法：出于通过扩大反应表面积来使反应在宽大的面积中更为有效地进行的目的，这些催化剂能够以活性炭、氧化锆之类的多孔性物质为载体，通过以涂敷于载体所具有的气孔表面的方式来制备为催化剂并添加的方式来使反应表面积扩大至数百倍，在最小化催化剂的使用量的同时最大化反应的进行。催化剂可以采用普通的方法来制备，即，可以在将金属或其氧化物溶于溶剂后，将载体浸渍于其中后干燥的方法来使金属成分担载于载体，将其用作催化剂来添加并使用。

漆树提取物的制备通常可以使用水提取物或稀释乙醇，当含有乙醇时，提取温度为50℃～80℃，在水提取的情况下，可以在60℃～100℃的温度下进行，但提取温度也可以为系统的可适用范围以上的温度。使用溶剂的倍数通常为投入的漆树重量的4倍～10倍左右，这是从经济层面考虑了效率后决定的，与能否提取是不相干的。最大化提取效率并考虑经济性，提取时间通常在4小时～10小时的范围内选择。若第一次提取时溶剂的量较少，则提取次数也可以进行至第二次或第三次。

投入催化剂的时间点可以采用如下方式：在提取的同时添加，或者在单独过滤提取液之后投入，或者在浓缩提取液之后在浓缩液的状态下投入等。

若在提取的同时添加，则在提取液内提取水溶性黄颜木素的同时，通过催化剂转化为漆黄素，但这会形成沉淀，在过滤过程中挂在过滤器的情况下会发生一部分损失。但却有同时促进提取和转化的优点。虽然形成沉淀的漆黄素在过滤的过程中会挂在过滤器上，但为了提高漆黄素的回收率，可以使用能够溶解挂在过滤器的漆黄素沉淀的酒精等溶剂来溶解并回收。

在单独集中提取液后向其中投入催化剂的情况下，能够更容易地转化，具有可以采用通过使溶剂的体积大的状态来调节溶解度低的漆黄素的沉淀形成，从而调节漆黄素沉淀的大小的工序的优点。但是，在浓缩液的情况下，在浓缩过程中形成漆黄素沉淀的情况较多，与提取液相比，具有不易调节这样的漆黄素结晶的大小的差异。

接下来在浓缩步骤中转化的方法虽然在漆树提取物浓缩时会有微量的漆黄素形成沉淀，但水溶性黄颜木素却保持溶解的状态，通过催化剂的作用易于转化为漆黄素。并且，将黄颜木素转化为漆黄素的催化反应由于其反应结果是生成的漆黄素在水溶液中的溶解度低而持续形成沉淀并从溶液中分离，因此，反应的平衡是向使黄颜木素积极转化为漆黄素的正方向移动，从而使反应效率最大化并极大提高了转化率。为此，还可以采用如下方式：通过使内容物的一部分向外部循环并冷却，诱导漆黄素的结晶形成，再通过回流的方式降低反应液中漆黄素的浓度，从而使黄颜木素转化为漆黄素的平衡向漆黄素积极地移动。并且，由于事前已处于通过过滤去除异物的状态，因此，正如在提取液中采用溶剂一样，无需单独的过滤工序。但是，由于在浓缩过程中自然形成漆黄素的沉淀，因此，在需要调节沉淀大小的情况下，还要经过溶解/结晶形成的过程。

添加的催化剂的量以提取液或浓缩液中固体成分的量为基准，可以使用最少0.1％(w/w)至最大30％(w/w)，这样的限度只是单纯考虑经济性而使用的，对通常的反应是否进行没有影响。即，催化剂虽然与反应相关，但在反应过程中不消失，因此即使极微量也能够催化反应。但是，从与反应相关的分子碰撞几率降低而要经过长时间的观点来考虑，极微量会带来转化率低的问题，若添加过高比例的催化剂，虽可缩短反应时间，但对象溶液是作为提取物的复合物，可能会引起意料之外的其他附加性的反应。过度添加催化剂不但不会持续提高转化为漆黄素的转化率，反而会发生使生成的漆黄素消失的情况，因此具有最终漆黄素的含量变低的倾向。

因此，在本发明中，当通过添加催化剂来使黄颜木素转化为漆黄素时，在最终的漆树提取物中，通常黄颜木素的含量为3％(w/w)以下，漆黄素的含量保持在5％～20％(w/w)的范围，最终含量受原料漆树中所含有的黄颜木素、漆黄素的浓度的很大影响。在原料漆树的树龄为10年以上的情况下，黄酮类化合物的总含量显著增加，因此可以得出通过添加催化剂来转化为漆黄素后，漆黄素的含量提高的结果。

并且，在本发明中，转化为漆黄素的漆树提取物与转化之前的漆树提取物相比，表现出抗氧化活性增加20％～35％左右，这可以成为能够期待表现出提高的生理活性的资料。

通常，添加催化剂后反应的温度越高，反应速度越快，因此，在60℃～100℃的范围内易于反应，为了更快的反应，也可以采用100℃以上的温度，但过高的温度会因过高的反应性而提高引起意料之外的反应的可能性。并且，在温度低于60℃的情况下，只有因反应性降低而延长反应时间的缺点，反应的进行没有问题。

反应时间会与温度、催化剂的量相关地变动，通常，在以与固定成分相比为1％(w/w)～10％(w/w)的比例添加催化剂的量的情况下，在90℃的反应温度下，反应时间以2小时～6小时为适当。

作为反应条件之一，通常，可以将反应进行时所存在的氧气判断为妨碍反应的进行。其理由为，将黄颜木素转化为漆黄素的反应是脱氢反应，若存在氧气，会促进所添加的催化剂的氧化反应，从而降低反应的效率，其结果为有可能降低漆黄素的收率。因此，以去除氧气为佳，方法可以采用使用氮气之类的非活性气体吹扫的方法，或者抽为真空等的方法。

催化反应结束后要进行冷却，在此过程中，原本溶解的包含漆黄素的微小沉淀的漆黄素结晶会逐渐生长而使其大小逐渐变大。因此，在回收这样的漆黄素后，为了去除催化剂，可以将反应液浓缩至固体成分的浓度为50％(w/v)以上后加入纯酒精，加温使漆黄素全部溶解后将其过滤来去除催化剂。之后，若浓缩滤液来去除溶剂，就可以获得去除了催化剂的“增加漆黄素的漆树提取物”。

这样获得的增加漆黄素的漆树提取物可以用于抑制癌症转移的抗癌剂、功能性食品等。

并且，在本发明中制备的增加漆黄素的漆树提取物可以与通常在食品及药品的制备中使用的糖类、卵磷脂、纤维素等混合为液体或粉末状来制备含有漆树提取粉末的多种剂型的组合物。

另一方面，本发明提供一种抗癌剂组合物，其特征在于，包含增加漆黄素的含量的漆树提取物。上述“包含”是指在本发明的抗癌剂组合物中，添加能够通过“漆黄素”来发挥作为抗癌剂的功效的程度的量。

本发明的抗癌用组合物可以单独包含药学上有效的量漆树提取物，还可以包含一种以上的药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。上述“药学上有效的量”是指用于预防、改善及治疗癌症症状的充分的量。

本发明的漆树提取物的药学上有效的量为0.5mg/日/体重kg～100mg/日/体重kg，优选地，为0.5mg/日/体重kg～5mg/日/体重kg。但上述药学上有效的量可以根据癌症症状的程度、患者的年龄、体重、健康状态、性别、给药途径及治疗时间而适当变化。

并且，上述所说的“药学上可接受”的表达是指在生理学上可接受的，并且在向人体给药时通常不会引起胃肠障碍、眩晕症之类的异常反应或与此相似的反应。上述载体、赋形剂及稀释剂的例有乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯胶、褐藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石粉、硬脂酸镁以及矿物油。并且，还可以包含填充剂、抗凝剂、润滑剂、湿润剂、香料、乳化剂及防腐剂等。

并且，本发明的组合物可以通过本发明所属技术领域公知的方法剂型化来在向哺乳动物给药后能够提供活性成分的迅速、持续或延迟释放。剂型可以为粉末、颗粒、片剂、乳剂、糖浆、喷剂、软质或硬质的明胶胶囊、灭菌注射溶液、灭菌粉末的形态。

本发明的抗癌用组合物可以通过包括口服、经皮、皮下、静脉或肌肉的多种途径来给药，活性成分的给药量可以根据给药途径、患者的年龄、性别、体重及患者的重症度等诸多因素来适当地选择。并且，本发明的抗癌用组合物可以与具有预防、改善或治疗癌症症状的效果的公知的化合物并行给药。由此，本发明可以提供包含上述漆树提取物作为有效成分的用于预防和/或治疗癌症症状的药剂。

进而，本发明的抗癌用组合物不仅能够通过优秀的抗癌及抗氧化作用提供缓解癌症症状的效果，还可以添加到以癌症症状的预防及改善为目的的食品中，因此，本发明的组合物还可以用作用于预防及改善癌症症状的组合物。因此，本发明的组合物可以灵活地用作具有癌症症状的预防及改善效果的食品，例如，食品的主原料、副原料、食品添加剂、功能性食品或饮料。

在本发明中，上述“食品”是指含有一种或一种以上营养素的天然物或加工品，优选地，是指经过任意程度的加工工序后成为可以直接食用的状态。从通常的含义来讲，包括所有的食品、食品添加剂、功能性食品及饮料。

可以添加本发明的抗癌用组合物的食品有例如各种食品类、饮料、口香糖、茶、维生素复合剂、功能性食品等。进一步地，本发明中可以使用的食品有特殊营养食品(例如，调制乳类、婴幼儿食品等)、肉食加工品、鱼肉制品、豆腐类、冻类、面类(例如，拉面类、面条类等)、面包类、健康辅助食品、调味食品(例如，酱油、黄豆酱、辣椒酱、混合酱等)、调味汁类、饼干类(例如，小食品类)、糖果类、巧克力类、口香糖类、冰激凌类、乳制品(例如，发酵乳、乳酪等)、其他加工食品、泡菜、腌制食品(各种泡菜类、酱菜等)、饮料(例如，水果饮料、蔬菜类饮料、豆乳类、发酵饮料类等)、天然调味料(例如，拉面汤等)等，但不限定于此。上述食品、饮料或食品添加剂可以通过通常的制备方法制备。

并且，上述“功能性食品”是指为了使食品的功能适用、表达特定的目的而在食品中利用物理、生化学、生物工学手段来赋予附加价值的食品组，或者为了对活体充分表达食品组合中所具有的活体防御节律调节、与疾病防止和恢复等相关的体内调节功能而设计并加工的食品，具体地，可以为保健功能食品。上述功能性食品可以包含食品学上可接受的食品辅助添加剂，还可以包含制备功能性食品时通常使用的适当的载体、赋形剂及稀释剂。

并且，上述“饮料”是指为了解渴或享受味道而喝的总称，包括功能性饮料。除包含作为必需成分而被指示比例的上述用于预防及改善癌症症状的组合物外，上述饮料所包含的其他成分没有特别限制，可以与普通的饮料一样包含多种香味剂或天然碳水化合物等额外成分。

进而，除上所述外，包含本发明的组合物的食品还可以包含多种营养剂、维生素、矿物质(电解质)、合成风味剂及天然风味剂等的风味剂、着色剂及填充剂(奶酪、巧克力等)、果胶酸及其盐、褐藻酸及其盐、有机酸、保护性胶体增稠剂、pH调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、酒精、用于碳酸饮料的碳酸化剂等，可以单独或组合来使用上述成分。

在包含本发明的抗癌用组合物的食品中，包含上述本发明的组合物的量可以为食品总重量的0.001重量百分比至100重量百分比，优选地，可以为0.1重量百分比至40重量百分比，在饮料的情况下，以100ml为基准，可以包含0.001g至5g，优选地，可以包含0.01g至2g，但在以健康及卫生为目的，或者以健康调节为目的的长期服用的情况下，可以在上述范围以下。有效成分在安全层面上没有任何问题，因此可以使用上述范围以上的量，不以上述范围为限定。

因此，本发明可以提供包含本发明的漆树提取物作为有效成分的用于预防或改善癌症疾病的保健功能食品，上述食品的形态可以为粉末、颗粒、片剂、胶囊或饮料的形态，但不限定于此。

另一方面，抗癌剂组合物的剂型可以根据使用方法而制备为优选形态，尤其，为了在向哺乳动物给药后能够提供活性成分的迅速、持续或延迟的释放，以选择本发明所属技术领域公知的方法进行剂型化为佳。

具体剂型可以剂型化为选自贴膏(PLASTERS)、颗粒剂(GRANULES)、润肤剂(LOTIONS)、擦剂(LINIMENTS)、柠檬水剂(LEMONADES)、芳香水剂(AROMATICWATERS)、粉剂(POWDERS)、糖浆剂(SYRUPS)、眼用软膏剂(OPHTALMIC OINTMENTS)、液剂(LIQUIDS ANDSOLUTIONS)、喷雾剂(AEROSOLS)、提取剂(EXTRACTS)、滋补剂(ELIXIRS)、软膏剂(OINTMENTS)、流浸膏剂(FLUIDEXTRACTS)、乳剂(EMULSIONS)、悬浮剂(SUSPESIONS)、煎剂(DECOCTIONS)、浸制剂(INFUSIONS)、眼膏(OPHTHALMIC SOLUTIONS)、片剂(TABLETS)、栓剂(SUPPOSITIORIES)、注射剂(INJECTIONS)、酒精剂(SPIRITS)、泥敷剂(CATAPLSMA)、胶囊剂(CAPSULES)、霜剂(CREAMS)、含片剂(TROCHES)、酊剂(TINCTURES)、糊剂(PASTES)、丸剂(PILLS)、软质或硬质的明胶胶囊、包衣片剂、散剂、颗粒剂以及胶囊剂中的任一种形态。

制备为包衣片剂的情况下，可以向作为主成分的增加漆黄素的漆树提取物添加滑石粉、羟丙基甲基纤维素、聚乙二醇后以公知的方法混合并压片，或者添加乳糖、硬脂酸镁、胶体二氧化硅、羟丙基甲基纤维素、聚乙二醇、二氧化钛后以公知的方法混合并压片。

制备为散剂的情况下，可以向作为上述主成分的增加漆黄素的漆树提取物添加白糖、乳糖、微晶纤维素后以公知的方法制备，或者向上述主成分添加甘露醇、玉米淀粉、胶体二氧化硅后以公知的方法制备。

制备为颗粒剂的情况下，可以向作为上述主成分的增加漆黄素的漆树提取物添加白糖和玉米淀粉后以公知的方法来制备，或者向上述主成分添加甘露醇、乳糖、聚维酮、胶体二氧化硅后以公知的方法制备。

制备为胶囊剂的情况下，可以向作为上述主成分的增加漆黄素的漆树提取物添加微晶纤维素、玉米淀粉、羟丙基纤维素、硬脂酸镁后以公知的方法来制备，或者向上述主成分添加乳糖、聚维酮、胶体二氧化硅、滑石粉、硬脂酸镁后以公知的方法制备。

本发明的抗癌用组合物的给药量以考虑给药方法、服用人员的年龄、性别及体重以及疾病的重症度等后决定为佳。作为一例，以有效成分为基准时，可以一日以0.1mg/kg(体重)至100mg/kg(体重)的量给药本发明的抗癌用组合物一次以上。但上述给药量仅为用于例示的一例，不限定于上述范围，这样的服用量还可以由专科医生根据患者的重症度及患者的状态来调节。

以下，在下述实施例中更为详细地说明本发明。但本发明的发明要求保护范围不限定于下述实施例，还包括与之等价的所有技术思想的变形。

实施例1

从京东市场购入10kg的韩国产漆树并充分干燥后，向其加入90L的水，在95℃的温度下提取6小时，过滤后，进行真空浓缩，粉末化后获得580g的漆树提取粉末(将其称为试样1)。

取100g上述试样1并将其溶解于5倍的水中，加热至95℃后，向其加入10g的作为催化剂的铬粉末(100目)并反应6小时后，为了溶解形成为沉淀的漆黄素，加入2000ml的酒精并混合后，使用0.5μm的过滤器过滤来除去包括催化剂在内的不溶性物质，浓缩并粉末化后，获得93g(将其称为试样2)。

接着，取100g上述试样1并将其溶解于5倍的水中，加热至95℃后，向其加入1g的作为催化剂的担载于活性炭的铬催化剂(担载铬的含量为以重量比的10％(w/w))，反应6小时后，为了溶解形成为沉淀的漆黄素，加入2000ml的酒精并混合后，使用0.5μm的过滤器过滤来除去包括催化剂在内的不溶性物质，浓缩并粉末化后，获得94.5g(将其称为试样3)。

接着，取6份10g的试样1，将它们分别溶解于5倍的水中，加热至95℃后，分别向它们加入1g的作为催化剂的铂、氧化铬(Cr₂O₃)、(NH₄)₂CrO₄、铜、镍、硅粉末，反应6小时后，为了溶解形成为沉淀的漆黄素，分别加入200ml的酒精并混合后，使用0.5μm的过滤器过滤来除去包括催化剂在内的不溶性物质，浓缩并粉末化后，分别获得9.8g、9.3g、9.7g、9.8g、9.9g、9.9g(将它们分别称为试样4、试样5、试样6、试样7、试样8、试样9)。

比较例1

为了比较与以往技术间的差异，与上述实施例1同样，充分干燥1kg的漆树后，向其加入10L的水，在95℃的温度下提取6小时，过滤后，进行真空浓缩，当固体成分的浓度到达10.5Bx时，获得610ml的浓缩液，在玻璃烧瓶中一边鼓泡氧气，一边在90℃的温度下处理3小时。而后将其粉末化后，最终获得57g(将其称为比较例1)。

为了分析含量，使用高速液相色谱法分析黄颜木素和漆黄素。分析条件采用通常已知的黄酮类化合物分析条件。其结构如表1所示。

表1

转化率以(漆黄素增加量/初期黄颜木素含量)×100来计算。

如上述表1所示，可以证明，在将黄颜木素转化为漆黄素时，与以往技术相比，本发明中记载的方法表现出绝对高的转化率。

实施例2

为了比较根据添加催化剂的步骤的转化率的差异，与上述实施例1同样的，利用10kg的漆树制备提取液后，过滤提取液中的1L后，浓缩至固体成分量为11.2％(w/v)后，向其加入与固体成分相比为1％(w/w)的担载于活性炭的铬催化剂(与上述实施例1的试样3相同)，以相同的方式反应后，向其加入250ml的酒精并溶解，过滤后粉末化，最终获得57.3g的增加漆黄素的漆树提取物。使用高速液相色谱法分析的结果，漆黄素的含量为9.9％(w/w)，转化为漆黄素的转化率为68％。

实施例3

以上述获得的试样为对象，对根据漆黄素增加的抗癌活性进行比较。通常，确认抑制癌症转移的功效的方法主要使用比较附着(Adhesion)、侵袭(Invasion)、转移(Migration)的方法。在本发明中，以试样1和试样4为对象比较转移癌的抑制效果。以源自胃癌的细胞AGS细胞为对象的转移抑制的比较结果如图3所示。与作为无处理组的试样1相比，作为漆黄素含量增加的漆树提取物的试样4表现出显著提高的抑制源自胃癌细胞的AGS细胞的转移的结果。由此可以证明，根据本发明的制备方法制备的漆树提取物表现出对癌症转移的抑制功效。

产业上的可利用性

本发明涉及增加了具有更为强力的抗癌活性的漆黄素的含量的漆树提取物的制备方法及组合物，能够开发为保健功能食品、功能性食品材料、天然物抗癌剂等，可以开发为无副作用并具有抑制癌症转移效果的药品。