一种封片新方法
阅读说明：本技术 一种封片新方法 (New method for sealing sheet ) 是由 马雪松 于 2021-06-16 设计创作，主要内容包括：一种封片新方法。本发明属于生物技术领域,公开了一种水性UV固化树脂在封片中的应用,本发明水性UV固化树脂经紫外光照射10秒-1分钟内即可完成固化,固化后的样本,背景明亮清澈,细胞核结构清晰,细胞膜边界对比度高,色彩无失真现象,染色液无被溶解晕染情况；与中性树胶的封片效果相同,但背景明显更加明亮,透光度方面优于中性树胶；由于不需要使用乙醇、二甲苯等溶剂,整个流程高效快捷,绿色环保,质量提升。(A novel method for sealing a sheet. The invention belongs to the technical field of biology, and discloses an application of water-based UV (ultraviolet) curing resin in a sealing piece, the water-based UV curing resin can be cured within 10 seconds to 1 minute after being irradiated by ultraviolet light, a cured sample has bright and clear background, clear nucleus structure, high cell membrane boundary contrast, no color distortion phenomenon and no dissolved dyeing halo condition of a dyeing solution; the sealing effect of the sealing film is the same as that of neutral gum, but the background is obviously brighter, and the transmittance of the sealing film is superior to that of the neutral gum; because solvents such as ethanol, dimethylbenzene and the like are not needed, the whole process is efficient and quick, green and environment-friendly, and the quality is improved.)
技术领域
本发明属于生物
技术领域
，具体涉及一种载玻片表面封固新方法。背景技术
在医学检测领域，将细胞成分或组织切片转移至载玻片上，经染色等处理后，进行显微镜观察，是重要的检测手段之一，应用十分广泛。为防止样本暴露在空气中氧化变色，或防止外来污染，使样本片子能够长久保存，需要将载玻片有样本的区域，用合适的方法封固起来，此过程称为封片。
目前常用的封片方法，是使用有机溶剂如乙醇、二甲苯等对载玻片的样本区域进行脱水、脱乙醇等步骤，然后滴加中性树胶或封片胶，再贴附盖玻片来进行封片。待胶固化后，即形成了两面为玻璃中间为透明封固层的三明治结构，最终将样本封固在了固化的胶内。上述传统方法虽然应用广泛，但不足之处十分明显。首先，操作步骤繁琐，需消耗大量时间；“脱水”需要至少2次或更多次才能完成，将片子浸泡在二甲苯中进行脱醇，时间很长。其次，在封片过程中需要使用乙醇、二甲苯等有机溶剂进行脱水、脱醇处理，污染环境；最后，固化时间较长，至少几个小时甚至几天。中性树胶自然干透固化，至少36小时，即使用烤箱烘干，也至少2小时。
而使用乙醇、二甲苯这样的危险品和高度类似试剂，完全是为了迎合中性树胶的使用，而不是为了染色本身。由于细胞内部75％都是水，因此，染色液必然是水溶性的，才能够进入细胞进行染色。这就决定了染色液的基质必然是水或可与水互溶的溶剂，通常使用甲醇或乙醇等。中性树胶是由加拿大树胶用二甲苯稀释而配制成的，与水不互溶。因此，要想使用中性树胶进行最后的封固，必须要将染色后的细胞内部液体，全部置换成二甲苯，或者可与二甲苯互溶的溶剂，否则，会因为不互溶而出现雾状甚至牛奶状的后果，导致无法看清细胞。只要找到合适的中性树胶替代品，即可省略乙醇及二甲苯等有机溶剂的使用。
因此，如何提供一种绿色环保、高效快捷的封片新方法是研究人员迫切需要解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种封片新方法，以解决现有封片方法步骤繁琐、耗时长及污染环境等问题。
为解决上述技术问题，本发明提供了以下技术方案：
本发明提供了一种水性UV固化树脂在封片中的应用。
其中，本发明所述水性UV固化树脂为在UV固化树脂的基础上引入了水性基团或链段，使树脂具有一定的亲水性和吸水性。
优选的，所述水性UV固化树脂为不饱和聚酯类树脂、聚氨酯丙烯酸酯或环氧丙烯酸酯。
本发明还提供了一种封片方法，样本用水性UV固化树脂封片，紫外光照射固化。
优选的，所述样本为细胞成分或组织切片。
优选的，所述样本为染色样本或非染色样本。
优选的，所述样本染色后用清水冲洗。
优选的，所述紫外光的波长为315-400nm。
优选的，所述紫外光照射时间为10秒-1分钟。
优选的，所述紫外光源与玻片的距离小于10cm。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明利用水性UV固化树脂来替代中性树胶进行封片。水性UV固化树脂是成熟的工业产品，生产企业众多，原料易得，无需使用者自己费时配制，有利于大规模采购和推广。
本发明水性UV固化树脂因为内含紫外线光固化引物，因此，只要使用一定强度的紫外光近距离照射，在10秒-1分钟内，即可固化成坚固的透明树脂层。其折光率和封固强度，与中性树胶固化的效果一致，甚至优于中性树胶。
经固化后的样本，背景明亮清澈，细胞核结构清晰，细胞膜边界对比度高，色彩无失真现象，染色液无被溶解晕染情况；与中性树胶的封片效果相同，但背景明显更加明亮，透光度方面优于中性树胶。
本发明完全取消了乙醇、二甲苯等危险品及高毒性试剂，操作步骤比传统方法至少省略了50％，固化时间缩短到传统的方法的千分之一。整个流程高效快捷，绿色环保，质量提升。
附图说明
具体实施方式
本发明提供了一种水性UV固化树脂在封片中的应用。本发明中所述水性UV固化树脂为在UV固化树脂的基础上引入了水性基团或链段，使树脂具有一定的亲水性和吸水性。常见的水性UV固化树脂的合成方法有两种：一种是在传统树脂的分子链上引入亲水性基团，如UP(不饱和聚酯类树脂)；另一种是与丙烯酸酯反应生成水性丙烯酸酯类低聚物，如PUA(聚氨酯丙烯酸酯)、EA(环氧丙烯酸酯)等。水性UV固化树脂作为一种新型、环保和节能型树脂，具有无溶剂臭味、无毒、无污染、操作方便、残胶易清理、固含量高和储运安全方便等优点，是环保节能型UV固化树脂的发展方向，其各项性能均优于传统的UV固化树脂。本发明可以采取以上水性UV固化树脂类型的任意一种。
本发明提供了一种封片方法，样本用水性UV固化树脂封片，紫外光照射固化。水性UV固化树脂可以与水互溶，也可以用少量水稀释，流动性与中性树胶一致。本发明中，直接在样本区域滴几滴水性UV固化树脂，贴附一张盖玻片，水性UV树脂就会弥散在载玻片和盖玻片之间，完成封片。由于水性UV固化树脂内含紫外线光固化引物，因此，只需一定强度的紫外光近距离照射，即可固化成坚固的透明树脂层。本发明中，紫外光的波长优选为315-400nm，更优选为365nm-395nm，可根据生产企业的具体要求灵活选用相应波长；紫外光照射时间为10秒-1分钟，优选为30秒，固化时间短；紫外光源与玻片的距离小于10cm，优选为8cm，以保证固化效果。
本发明中，样本优选为经过染色后的细胞成分或组织切片。本发明对染色方法没有特殊限定，采用本领域所熟知的染色方法即可。样本染色后用清水冲洗，清洗掉多余的染色液。
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例对本发明进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
将经过染色清洗后的细胞样本上滴加水性UV固化树脂，贴附一张盖玻片，待水性UV固化树脂弥散在载玻片和盖玻片之间后，完成封片。然后，将封好的片子放在距离紫外灯8nm处，于315nm波长下照射10秒，完成固化。
实施例2
将经过染色清洗后的组织切片样本上滴加水性UV固化树脂，贴附一张盖玻片，待水性UV固化树脂弥散在载玻片和盖玻片之间后，完成封片。然后，将封好的片子放在距离紫外灯5nm处，于400nm波长下照射30秒，完成固化。
实施例3
将经过染色清洗后的组织切片样本上滴加水性UV固化树脂，贴附一张盖玻片，待水性UV固化树脂弥散在载玻片和盖玻片之间后，完成封片。然后，将封好的片子放在距离紫外灯9nm处，于395nm波长下照射40秒，完成固化。
实施例4
将实施例1中的固化样本在390-600nm的测试波长下，折光率可以达到1.6-2.0，与载玻片1.5-3.3的折光率非常一致。
实施例5
取同一宫颈细胞样本，平均制成两张细胞涂片，同时用苏木素-伊红染色，同时分别用水性UV树脂和中性树胶进行封片，采用水性UV树脂封片固化方法同实施例1，采用中性树脂封片自然干透固化，然后用显微镜在40倍物镜下观察。
具体地，两种封片方法流程如下：
通用步骤：
带有宫颈细胞的载玻片在95％乙醇中浸泡10分钟进行固定，然后用苏木素染液浸泡2分钟，取出用清水洗干净，放入1％盐酸酒精2秒进行分化，然后流水清洗干净，放入伊红染液浸泡10秒，流水漂洗干净。
接下来是两种封片方法各自流程：
1)本发明方法：直接滴加2滴水性UV固化树脂，用盖玻片覆盖并轻轻压紧，然后，将封好的片子放在距离紫外灯8nm处，于315nm波长下照射10秒，完成固化。
2)中性树胶方法：将载玻片放入75％乙醇浸泡1分钟，然后放入85％乙醇浸泡1分钟，放入95％乙醇浸泡1分钟，放入无水乙醇浸泡1分钟，再放入第二道无水乙醇浸泡1分钟，接下来，放入第一道二甲苯中浸泡1分钟，再放入第二道二甲苯中浸泡1分钟，接着放入第三道二甲苯中浸泡1分钟。最后，滴加2滴中性树胶，用盖玻片覆盖并轻轻压紧，自然晾干或烘箱烘干。
结果发现，采用水性UV树脂固化后，背景明亮清澈，细胞核结构清晰，细胞膜边界对比度高，色彩无失真现象，染色液无被溶解晕染情况。与中性树胶的封片效果相同，但背景明显更加明亮，在感官方面，透光度方面优于中性树胶。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
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