阅读说明：本技术 一种阿维菌素染色剂及其配制及制片方法 (Abamectin staining agent and preparation and tabletting method thereof ) 是由 李�杰 于 2021-06-18 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种阿维菌素染色剂及其配制及制片方法。主要解决现有利用单一染色剂对阿维菌素发酵液进行制片染色染色时间长不易观察的问题。其特征在于：染色剂配方组成包括亚甲基蓝、碱性品红、苯酚、酒精、蒸溜水；染色剂制备方法包括：A液配制,将亚甲基蓝放入容器内,加95%酒精搅拌均匀,加蒸馏水；B液配制,先将碱性品红加入95%酒精混匀；将苯酚加蒸馏水混匀；将配制好的苯酚溶液混入配好的碱性品红溶液中混匀；A液中加入B液混匀,滤纸滴一滴观察颜色扩散情况,内圈为蓝色,外圈为红色,视颜色情况微调A、B液比例。该阿维菌素染色剂制成的片子不但生产菌观察清晰,而且侵染菌死活菌体颜色区分明显。(The invention relates to an abamectin coloring agent and a preparation method and a tablet preparation method thereof. The method mainly solves the problem that the existing method for preparing and dyeing abamectin fermentation liquor by using a single dyeing agent is long in flaking dyeing time and difficult to observe. The method is characterized in that: the coloring agent comprises methylene blue, basic fuchsin, phenol, alcohol and distilled water; the preparation method of the coloring agent comprises the following steps: preparing solution A, putting methylene blue into a container, adding 95% alcohol, stirring uniformly, and adding distilled water; preparing solution B, namely adding basic fuchsin into 95% alcohol and uniformly mixing; adding distilled water into phenol and mixing uniformly; mixing the prepared phenol solution with the prepared basic fuchsin solution and uniformly mixing; and adding the solution B into the solution A, uniformly mixing, dropping a drop of filter paper to observe the color diffusion condition, wherein the inner circle is blue, the outer circle is red, and the A, B liquid proportion is finely adjusted according to the color condition. The tablets prepared by the abamectin coloring agent not only have clear production bacteria observation, but also have obvious color distinction of dead and live bacteria of infected bacteria.)

一种阿维菌素染色剂及其配制及制片方法

技术领域

本发明涉及生物

技术领域

，尤其涉及一种种阿维菌素染色剂的配制及制片方法。

背景技术

传统利用单一染色剂的美兰染色法对阿维菌素发酵液进行制片染色时，染色时间长；使用酒精灯固片，不够安全；用盐酸酒精脱色成本高时间长，而且一次只能制一张片子，数量少，不能满足大批量生产需求，观察时也难以区分侵染杂菌死活。

发明内容

本发明在于克服背景技术中存在的传统利用单一染色剂对阿维菌素发酵液进行制片染色染色时间长不易观察区分侵染杂菌死活的问题，而提供一种阿维菌素染色剂，使用该阿维菌素染色剂制成的片子不但生产菌观察清晰，而且侵染菌死活菌体颜色区分明显。

本发明解决其问题可通过如下技术方案来达到：一种阿维菌素染色剂，其配方组成包括亚甲基蓝、碱性品红、苯酚、酒精、蒸溜水。

本发明还提供一种阿维菌素染色剂的配制方法，包括以下步骤：（1）A液配制，按比例先将亚甲基蓝放入容器内，然后加入一定体积的95%酒精搅拌均匀，后加蒸馏水；

（2）B液配制，先称量碱性品红，将碱性品红加入95%酒精充分混匀配成碱性品红溶液；称量苯酚加蒸馏水混匀配成苯酚溶液；将配制好的苯酚溶液混入配好的碱性品红溶液中，充分混匀；

（3）按比例将A液中加入B液，充分混匀配成混合液，取配成的混合液滴一滴到滤纸上观察颜色扩散情况，视颜色情况微调A、B液比例，至内圈为蓝色，外圈为红色为止。

优选的，A液中亚甲蓝质量:95%酒店精体积:蒸溜水体积为1g:30~60mL:300~600mL。

优选的，B液中碱性品红质量:苯酚质量:95%酒精体积:蒸溜水体积为1g:5~10g:20~50mL:80~150mL。

优选的，染色剂中A液:B液体积比为35:2~5。

本发明还提供一种阿维菌素染色剂的制片方法，包括以下步骤：

1）称取阿维菌素发酵液，并搅拌均匀；

2）取1滴阿维菌素发酵液滴至载玻片上，磕片至载玻片仅有一薄层发酵液；

3）将步骤（2）中有一薄层发酵液的载玻片恒温加热台上110℃烘干固片；

4）用配置好的染色剂在步骤（3）烘干后的载玻片均匀着色，停滞3~5秒钟；

5）蒸馏水冲片着色后的载玻片；

6）将步骤（5）冲片后的载玻片再次恒温加热台上110℃烘干，显微镜下观察，活菌体与死菌体呈现不同颜色。

优选的，所述方法制成的片子在显微镜下观察，活菌体呈蓝色，死菌体呈紫红色。

本发明与上述背景技术相比较可具有如下有益效果：用本发明方法进行阿维菌素染色剂配制及发酵液制片染色，大大缩减制片时间，用恒温加热台比酒精灯更安全，制出片子效果稳定，用蒸馏水脱色比用盐酸酒精，更经济环保，节约时间，并且可同时大量染色制片，充分满足生产需要，制出的片子显微镜下观察，菌体清晰，颜色容易辨别，活菌体程蓝色，死菌体程紫红色。

附图说明

附图1是用本发明实施例制作的片子在显微镜下成像结果；

附图2是传统制片染色方法制作的片子在显微镜下成像结果。

具体实施方式

：

下面将结合本发明附图及实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

该阿维菌素染色剂的配制方法，包括以下步骤：

1）、A液配制：先称量亚甲基蓝1g放入容器内，然后加入30mL95%酒精搅拌均匀，加蒸馏水至300mL。

2）、B液配制：先称量1g碱性品红，加入20mL95%酒精，充分混匀。称量5g苯酚加80~150mL蒸馏水混匀。将苯酚溶液混人碱性品红中，充分混匀。

3）、A液、B液混合液配制：每70mLA液中加入4mLB液，充分混匀，滤纸滴一滴观察颜色扩散情况，内圈为蓝色，外圈为红色，视颜色情况微调A、B液比例。

该阿维菌素染色剂的制片方法包括以下步骤：

阿维菌素发酵液搅拌均，取1滴至载玻片上，磕片至载玻片仅有一薄层发酵液，恒温加热台上110℃烘干固片，用配置好的染色剂均匀着色，停滞3秒钟，蒸馏水冲片，再次恒温加热台上110℃烘干，显微镜下观察，活菌体程蓝色，死菌体程紫红色。

实施例2

该阿维菌素染色剂的配制方法，包括以下步骤：

1）、A液配制：先称量亚甲基蓝1g放入容器内，然后加入60mL95%酒精搅拌均匀，加蒸馏水至600mL。

2）、B液配制：先称量1g碱性品红，加入50mL95%酒精，充分混匀。称量10g苯酚加150mL蒸馏水混匀。将苯酚溶液混人碱性品红中，充分混匀。

3）、A液、B液混合液配制：每70mLA液中加入10mLB液，充分混匀，滤纸滴一滴观察颜色扩散情况，内圈为蓝色，外圈为红色，视颜色情况微调A、B液比例。

该阿维菌素染色剂的制片方法包括以下步骤：

阿维菌素发酵液搅拌均，取1滴至载玻片上，磕片至载玻片仅有一薄层发酵液，恒温加热台上110℃烘干固片，用配置好的染色剂均匀着色，停滞5秒钟，蒸馏水冲片，再次恒温加热台上110℃烘干，显微镜下观察，活菌体程蓝色，死菌体程紫红色。

实施例3

该阿维菌素染色剂的配制方法，包括以下步骤：

1）、A液配制：先称量亚甲基蓝1g放入容器内，然后加入50mL95%酒精搅拌均匀，加蒸馏水至500mL。

2）、B液配制：先称量1g碱性品红，加入30mL95%酒精，充分混匀。称量8g苯酚加100mL蒸馏水混匀。将苯酚溶液混人碱性品红中，充分混匀。

3）、A液、B液混合液配制：每70mLA液中加入7mLB液，充分混匀，滤纸滴一滴观察颜色扩散情况，内圈为蓝色，外圈为红色，视颜色情况微调A、B液比例。

该阿维菌素染色剂的制片方法包括以下步骤：

阿维菌素发酵液搅拌均，取1滴至载玻片上，磕片至载玻片仅有一薄层发酵液，恒温加热台上110℃烘干固片，用配置好的染色剂均匀着色，停滞4秒钟，蒸馏水冲片，再次恒温加热台上110℃烘干，显微镜下观察，活菌体程蓝色，死菌体程紫红色。

对比例1

传统阿维菌素美兰染色：取阿维菌素发酵液搅拌均匀，取1滴至载玻片上，磕片至载玻片仅有一薄层发酵液，酒精灯上方烘干（以手放置玻片下不烫为宜），酒精灯焰上来回三次固定片，用配置好的美兰染色1min，蒸馏水冲洗，然后用盐酸酒精脱色30s，蒸馏水冲洗，吸干，显微镜下观察，死活菌体一致程蓝色。

传统美兰染色方法制片时间长，使用酒精灯有失火的安全隐患，其中用到盐酸酒精脱色，配置时用到盐酸属易制毒试剂，并且盐酸属强酸配置时存在安全隐患，成本较本发明制片用蒸馏水高，传统美兰染色，用酒精灯一次仅能制一张片子，不能同时进行多片同时干燥、固定，操作步骤较本发明繁琐，传统美兰染色属单染色，不具备鉴别能力。

本实施例1-3制作的片子在显微镜下成像结果见附图1；对比例使用传统制片染色方法制作的片子在显微镜下成像结果见附图2。

附图中1中成蓝色菌丝团状为生产菌阿维链霉菌，成紫红色椭圆状为酵母菌。附图2中成蓝色菌丝团状为生产菌阿维链霉菌，颜色略浅椭圆状为酵母菌。生产菌制片时为活菌，酵母菌为发酵培养基成分，是经高温灭菌后的死菌。对比两图，用该发明阿维菌素染色剂的配制及制片方法制作的片子，菌体清晰，颜色容易辨别，活菌体呈蓝色，死菌体呈紫红色。而使用传统方法制作的片子，颜色基本都呈蓝色，难以区分侵染杂菌死活。并且使用本发明方法可同时大量染色制片，充分满足生产需要。