一类新的二酮类化合物
阅读说明：本技术 一类新的二酮类化合物 (Novel diketone compounds ) 是由 许军 彭红 李永华 陶琳 刘成洪 张晓丽 夏龙军 赵岩 王晓霞 邝振英 于 2019-10-25 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一类新的二酮类化合物。该化合物为式I化合物及其药学上可接受的盐、前药和溶剂合物,及包含所述化合物的药物组合物,并涉及其合成方法。此外,本发明涉及包含所述化合物的药物组合物,可用于抑制肿瘤相关性靶点蛋白或基因的活性。(The invention relates to a new diketone compound. The compounds are of formula I and pharmaceutically acceptable salts, prodrugs and solvates thereof, as well as pharmaceutical compositions comprising the compounds, and to methods of synthesizing the same. In addition, the invention relates to a pharmaceutical composition containing the compound, which can be used for inhibiting the activity of tumor-related target proteins or genes.)
技术领域
本发明涉及一类二酮类化合物。该化合物为式(I)化合物及其药学上可接受的盐、前药和溶剂合物，及包含所述化合物的药物组合物，并涉及其合成方法。此外，本发明涉及包含所述化合物的药物组合物，可用于抑制肿瘤相关性靶点蛋白或基因的活性。
背景技术
随着现代化生活节奏的加速，癌症逐渐成为居民死亡的主要原因之一，人们谈癌色变，对于癌症的防治和治疗也变得极为重要。当代医疗科学的飞速发展为肿瘤的治疗和防治提供了动力，科学家们在探索和发现肿瘤靶点的同时也为抗癌药物的设计提供了新思路和方向。目前热门的肿瘤靶点蛋白有STAT3、JAK2、NF-kB、TNF-α等，它们在肿瘤的发生和发展过程中都有着不可忽视的影响。在深入研究靶点蛋白生物活性的基础上，针对它们的抑制剂或激活剂的开发也逐渐成为学术研究的新宠，姜黄素是中药姜黄的主要活性成分，具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化等多种药理活性，目前研究发现姜黄素与上述靶点蛋白有生物学联系，所以对于姜黄素抗癌活性的研究也日趋热门。
STATs家族由7个成员组成，分别是STAT1、STAT2、STAT3、STAT4、STA5a、STAT5b和STAT6，其中STAT3是一种癌症依赖性的转录因子，STAT3信号通路的异常激活是癌症发生的关键。STAT3基因的结构分为氨基端的结构域，卷曲-螺旋的结构域，SH2结构域，DNA的结构域和连接域和C末的结构域。当内环境发生变化时，相关的细胞生长因子通过影响上游的JAKS蛋白，从而引起下游STAT3中结构域的变化，使STAT3发生磷酸化而被异常活化，最终导致肿瘤细胞的无限增殖和不正常凋亡。目前，关于STAT3抑制剂暂无准确批准上市的，所以关于STAT3抑制剂的的后续研究和开发是药物研究的热点。
JAK(Janus kinase)蛋白家族是一类非跨膜型的酪氨酸激酶，由JAK1，JAK2，JAK3和TYK24个成员组成，其中JAK1主要参与细胞因子与受体的结合，JAK2负责介导细胞外配体和受体的信号传导，JAK3与JAK1功能相似，但JAK3仅在造血细胞中表达。通常认为JAK/STAT3轴是细胞内经典的信号通路，在调控细胞增殖、凋亡、血管新生等多个方面承担着关键作用。JAK/STAT3信号通路被细胞外信号刺激而激活，上游的JAK激酶磷酸化聚集，继而催化STAT3蛋白，使其发生磷酸化形成二聚体，进入细胞核内，调节肿瘤基因转录活性。相对于STAT3抑制剂的研究而言，JAK2抑制剂的研究较成熟，目前，已获得FDA批准上市的JAK抑制剂有托法替尼(tofacitinib)和鲁索利替尼(ruxolitinib)。2006年FDA批准来他替尼(lestaurtinib)做为JAKS的一种靶向抑制剂，来他替尼对部分肿瘤的研究也正处于临床研究阶段。
研究发现，激活和转录因子kappa B(nuclear factor ofkappa B，NF-kB)作为一种核转录因子，和免疫应答、炎症反应以及细胞的增生、转化以及细胞的凋亡等病理生理过程密切相关。NF-kB家族中有5个成员，即RelA(p65)、RelB、c-Rel、p50(NF-κB1)和p52(NF-κB2)，其中p50和RelA是主要发挥生理作用的蛋白。当细胞受到炎症或者氧化刺激后，NF-κB被激活并进入细胞核，与相应的靶序列结合，调节编码细胞因子、生长因子、细胞粘附分子以及影响凋亡的基因表达，介导肿瘤发生发展、血管形成、转移等过程。有关NF-κB抑制剂的研究资料也较多，目前批准上市的抑制有吡咯二硫氨基甲酸酯(pyrrolidine dithio-carbamate，PDTC)、脱氢环氧甲基醌霉素(DHMEQ)等，更多的小分子抑制剂都在研究待开发阶段，例如：BAY11-7082等
TNF-α是一种重要的炎症细胞因子，主要由活化的单核巨噬细胞和淋巴细胞等分泌，参与人体炎性反应、免疫稳态和宿主防御等过程，具有抗肿瘤、免疫调节、炎症介导、细胞毒性、细胞凋亡以及损伤血管内皮细胞等一系列生物学作用。生理状态下，适量的TNF-α能有助于机体抵抗病原菌和防御肿瘤，但当超过一定量时，TNF-α能引起多种病理性的损伤，促进肿瘤发生，因此，TNF-α也被认为是癌症病理的调控关联子。现在，rhTNFR做为TNF-α抑制剂已经广泛应用于临床，且有良好的疗效，所以关于TNF-α抑制剂的研究任重而道远。
目前，多种新型抗癌药物已被广泛地应用在医学中，姜黄素也因为它优越的抗氧化性和抗癌活性倍受关注。姜黄素是一种小分子二酚类物质，主要是从姜黄类植物中提取而来，研究发现它具有抗感染、抗氧化、抗凝、抗炎症、抗肿瘤等多种药理作用，对癌症、自身免疫疾病、心血管、糖尿病、动脉粥样硬化、卒中、代谢性疾病、神经退行性疾病等有效。姜黄素是一种天然的酚类抗氧化剂，具有抗肿瘤活性，常将其作为治疗预防不同癌症的药物成分，STAT3是常见的肿瘤治疗的干预靶点，所以STAT3也成为了姜黄素众多抗癌靶点的研究对象之一。目前研究发现，姜黄素的功能与JAK/STAT信号通路抑制剂AG490类似，通过参与JAK/STAT信号通路的传导，可以同时或单独作用于JAK2和STAT3，调节STAT3的表达，抑制JAK2活性的同时抑制STAT3的磷酸化，从而对一些肿瘤疾病的发生发展达到抑制作用。目前研究已经证实姜黄素可以通过抑制细胞因子中NF-kB的激活从而抑制TNF-α、IL-6、IL-1β等细胞因子的释放，从而抑制促炎细胞因子，有效抑制炎症反应，因此具有治疗神经炎症疾病的潜力，目前也已被尝试用于治疗各种与脑部相关的各种慢性疾病和癌症。由此可见植物中的提取物姜黄素具有广泛、良好且安全的药理活性，它可通过抗氧化或者抗炎而发挥防癌作用，除此之外还可以增加目前在研或者上市的肿瘤靶点抑制剂的敏感性，但是，低溶解性和低生物利用度却限制了姜黄素的应用。
本专利在已合成和发现的姜黄素类似物的基础上，通过在姜黄素原有的结构上面通过修饰酯基、卤素和饱和烷烃基等基团来增加其脂溶性和稳定性，修饰羟基、羧基、氨基，羰基等基团来增加其水溶性降低其毒性，修饰醚键和巯基可以使二酮类化合物更好的通过生物膜，引入磺酸基可以增加化合物的水溶性等一系列的结构修饰，参照仿生合成发明了一类具有良好的生物活性和安全性的二酮类化合物。
发明内容
本发明的目的在于：合成一类新的二酮类化合物。
本发明的另一目的是提供一种本发明所述一类新的二酮类化合物的合成方法。
本发明的另一目的是一类新的二酮类化合物治疗肿瘤时的应用。
本发明的一类新的二酮类化合物的化合物结构为：一种式(Ⅰ)的新化合物：
包括其药学上可接受的盐、前药和溶剂合物，其中：
A选自H，其中A1选自芳香苯环基和芳香杂环基，A1任选被一个或多个相同或不同的R1所取代；
B选自H，其中B1选自芳香苯环基和芳香杂环基，B1任选被一个或多个相同或不同的R1所取代；
M选自其中M1选自芳香苯环基和芳香杂环基，M1任选被一个或多个相同或不同的R1所取代；
R1是H、OH、卤素、OR2、CN、NO2、COOH、CF3、C(O)NH2、OCOR2，SCOR2、C1-8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基，其中C1-8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基任选被一个或多个相同或不同的R3取代；
R2是H、C3-7环烷基、C5-7芳香环基、C5-7芳香杂环基、C7-11芳香双环基、C7-11芳香杂双环基，C1-8烷基，C2-8烯基、C2-8炔基，其中这些环烃基和脂肪烃基上任选被一个或多个相同或不同的R3取代；
R3是H、CN、NO2、CF3、COOH、COOR4、CONHR4、CONR5R5’、SONR6R6’、COR7、R8OH、卤素，苯、C3-7环烷基、C5-7芳香杂环基、C7-11芳香双环基、C7-11芳香杂双环基，其中这些环上任选被一个或多个相同或不同的R9取代；C1-8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基，这些脂肪烃基任选被一个或多个相同或不同的R10取代；
R4是苯、C3-7环烷基、C5-7芳香杂环基、C7-11芳香双环基、C7-11芳香杂双环基，其中这些环上任选被一个或多个相同或不同的R9取代；
R5\R5’分别是H、CN、NO2、CF3、COOH、COOR4、CONR5R5’、SONR6R6’、COR7、R8OH、卤素、苯、C3-7环烷基、C5-7芳香杂环基、C7-11芳香双环基、C7-11芳香杂双环基，其中这些环上任选被一个或多个相同或不同的R9取代；
R6\R6’分别是H、CN、NO2、CF3、COOH、COOR4、CONR5R5’、SONR6R6’、COR7、R8OH、卤素；苯、C3-7环烷基、C5-7芳香杂环基、C7-11芳香双环基、C7-11芳香杂双环基，其中这些环上任选被一个或多个相同或不同的R9取代；
R7是H、CN、NO2、CF3、COOH、COOR4、CONR5R5’、SONR6R6’、COR7、R8OH、卤素；苯、C3-7环烷基、C5-7芳香杂环基、C7-11芳香双环基、C7-11芳香杂双环基，其中这些环上任选被一个或多个相同或不同的R9取代；
R8是H、苯、C3-7环烷基、C5-7芳香杂环基、C7-11芳香双环基、C7-11芳香杂双环基，其中这些环上任选被一个或多个相同或不同的R9取代；
R9是H、CN、NO2、CF3、COOH、COOR4、CONR5R5’、SONR6R6’、COR7、R8OH、卤素；苯、C3-7环烷基、C5-7芳香杂环基、C7-11芳香双环基、C7-11芳香杂双环基，其中这些环上任选被一个或多个相同或不同的R10取代；
R10是H、CN、NO2、CF3、COOH、COOR4、CONR5R5’、SONR6R6’、COR7、R8OH、卤素、C1-8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基苯、C3-7环烷基、C5-7芳香杂环基、C7-11芳香双环基、C7-11芳香杂双环基。
式(Ι)的化合物选自：
(1)1-(4-甲氧基-苯基)-7-对甲苯基-庚-1，6-二烯-3，5-二酮
(2)1-(4-烯丙基苯基)-7-(4-环己基氧基-苯基)-庚-1，6-二烯-3，5-二酮
(3)1’，1-((1E，6E)-3，5-二氧代庚-1，6-二烯-1，7-二基)双(2-甲氧基-4，1-亚苯基))1，1'-双(4-氟苯基)双(环丙烷-1，1-二羧酸酯)
(4)乙酸-4-[3，5-二氧代-7-(4-戊-4-炔基-苯基)-庚-1，6-二烯基]-苯基酯
(5)环己烷羧酸4-(7-{2-溴-4-[1-(3-甲基-丁酰基)-环丙烷羰氧基]-苯基}-3，5-二氧代-庚-1，6-二烯基)-2-乙基-苯酯
(6)4-((1E，6E)-7-(4-((1-(氯羰基)环丙烷-1-羰基)氧基)-2-甲基苯基)-3，5-二氧代-1，6-二烯-1-基)苯基1-(环己基氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酸酯
(7)4-((1E，6E)-7-(4-((1-(氯羰基)叔丁基-1-羰基)氧基)-2-甲基苯基)-3，5-二氧代-1，6-二烯-1-基)苯基1-(甲酰基)环丙烷-1-羧酸酯
(8)4-((1E，6E)-7-(4-((1-((4-氯苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羰基)氧基)苯基)-3，5-二氧代-1，6-二烯-1--)-甲基苯基-1-((4-氟苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酸酯
(9)1-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-7-(6-甲基-吡啶-3-基)-庚-1，6-二烯-3，5-二酮
(10)1-(6-甲基-吡啶-3-基)-7-(4-苯氧基-苯基)-庚-1，6-二烯-3，5-二酮
(11)5-(1E，6E)-1-(5-(戊-4-炔-1-基)吡啶-2-基)-7-(四氢-2H-吡喃-4-基)庚-1，6-二烯-3，5-二酮
(12)5-((1E，6E)-7-(5-((3，3-二甲基丁酰)硫基)四氢-2H-吡喃-3-基)-3，5-二氧代-1，6-二烯-1-基)吡啶-2-基1-(3，3-二甲基丁基)环丙烷-1-羧酸酯
(13)6-((1E，6E)-7-(3-溴-5-((1-(3-甲基丁酰基)环丙烷-1-羰基)氧基)吡啶-2-基)-3，5-二氧代-1，6-二烯-1-基)-4-乙基吡啶-3-基1-(3-甲基丁酰基)环丙烷-1-羧酸酯
(14)6-((1E，6E)-7-(4-((1-氨基甲酰基环丙烷-1-羰基)氧基)苯基)-3，5-二氧代-1，6-二烯-1-基)-5-甲基4H-吡喃-3-基1-(4，4-二甲基戊酰基)环丙烷-1-羧酸酯
(15)6-((1E，6E)-7-(5-((1-((4-氯苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羰基)氧基)-3，4-二甲基-4H-噻喃-2-基)-3，5-二氧代庚-1，6-二烯-1-基)-4，5-二甲基-4H-噻喃-3-基1-((4-氟苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酸酯
(16)6-((1E，6E)-7-(5-((1-((4-氯苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羰基)氧基)-3，4-二甲基-4H-吡喃-2-基)-3，5-二氧代庚-1，6-二烯-1-基)-4，5-二甲基-4H-噻喃-3-基1-((4-氟苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酸酯
(17)4-(1--(((6-((1E，6E)-7-(4-((1-((4-环己基苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羰基)氧基)-2-甲基苯基)-3，5-二氧代庚-1，6-二烯-1-基)-4H-吡喃-3-基)氧基)羰基)环丙烷-1-甲酰胺基)苯甲酸
(18)3-(2-((1-((4-丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羰基)氧基)-5-((1E，6E)-7-(2-氯-4-((1-((4-((2E，4E)-6-(二甲基氨基)-6-氧代己烷-2，4-二烯-2-基)苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羰基)氧基)-3-乙基苯基)-3，5--二氧代-1，6-二烯-1-基)苯基)丙酸
(19)3-(2-((1-((4-丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羰基)氧基)-5-((1E，6E)-7-(2-氯-3-乙基-4-((1-((4-(2-异丙基-4，5-二甲基环己基)苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羰基)氧基)苯基)-3，5-二氧代-1，6-二烯-1-基)苯基)丙酸
(20)4-(1-((4-((1E，6E)-7-(3-(氰基甲基)-4-((1-((4-环己基苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羰基)氧基-2-环己基乙基)苯基)-3，5-二氧代-1，6-二烯-1-基)苯氧基)羰基)环丙烷-1-甲酰氨基)苯甲酸甲酯
(21)(1E，6E)-1，7-双(6-溴吡啶-2-基)庚-1，6-二烯-3，5-二酮
(22)(1E，6E)-1，7-双(5-溴吡啶-3-基)庚-1，6-二烯-3，5-二酮
(23)((1E，6E)-3，5-二氧杂庚基-1，6-二烯-1，7-二基)双(2-甲氧基-4，1-亚苯基)双(1-((4-氟苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酸盐)
(24)(1E，6E)-1-(6-溴吡啶-2-基)-7-苯基-1，6-二烯-3，5-二酮
(25)(1E，6E)-1-(5-溴吡啶-3-基)-7-苯基-1，6-二烯-3，5-二酮
(26)(1E，6E)-1-(6-溴吡啶-2-基)-7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)庚-1，6-二烯-3，5-二酮
(27)(1E，6E)-1-(5-溴吡啶-3-基)-7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)庚-1，6-二烯-3，5-二酮
(28)3-亚苄基戊烷-2，4-二酮
(29)3-(3-羟基-4-甲氧基亚苄基)戊烷-2，4-二酮
(30)1-(5-(2-乙酰基-3-氧代丁-1-烯-1-基)-2-甲氧基苯基)1-(4-氟苯基)环丙烷-1，1-二羧酸酯
具体实施方式
实施案例1.
化合物名称：1-(4-甲氧基-苯基)-7-对甲苯基-庚-1，6-二烯-3，5-二酮
化合物结构：
合成路线：
合成方法：
将1.0g乙酰丙酮和0.35三氧化二硼先加入装有30mL乙酸乙酯的250mL三口瓶中，并装入微波反应炉，开启回流装置。启动微波反应炉中，开始程序，开始加温，在50℃条件下反应10min，再加入3.0g对茴香醛和9.2g硼酸三丁酯，搅拌1min，将稀释在20mL乙酸乙酯中的0.5g三乙胺在9min内逐滴加入到反应液中，滴加完全后，程序自动进行下一步，升温至80℃，反应15min后，加入49mL 1mol/LHCl继续反应5min后停止反应。取出反应三口瓶，再向反应液加入一定量乙酸乙酯和足量的水萃取，取出有机层，再用无水硫酸钠脱水，减压蒸除溶剂，最后用甲醇重结晶得到橙黄色针状晶体，于40℃下干燥6h，得到中间体1，称重，计算产率。
将1.0g中间体1和0.35三氧化二硼先加入装有30mL乙酸乙酯的250mL三口瓶中，并装入微波反应炉，开启回流装置。启动微波反应炉中，开始程序，开始加温，在50℃条件下反应10min，再加入3.0g对甲基苯甲醛和9.2g硼酸三丁酯，搅拌1min，将稀释在20mL乙酸乙酯中的0.5g三乙胺在9min内逐滴加入到反应液中，滴加完全后，程序自动进行下一步，升温至80℃，反应15min后，加入49mL 1mol/LHCl继续反应5min后停止反应。取出反应三口瓶，再向反应液加入一定量乙酸乙酯和足量的水萃取，取出有机层，再用无水硫酸钠脱水，减压蒸除溶剂，最后用甲醇重结晶得到橙黄色针状晶体，于40℃下干燥6h，得到目标化合物，称重，计算产率。
1H-NMR(400MHZ，CDCl3，TMS，ppm):
δ4.59(2H)，δ7.19(1H)，δ7.38(1H)，δ7.38(1H)，δ7.19(1H)，δ7.13(1H)，δ6.68(1H)，δ6.68(1H)，δ7.13(1H)，δ5.0(1-OH)，δ6.67(1H)，δ6.67(1H)，δ7.54(1H)，δ7.54(1H)
实施案例2.
化合物名称：1-(4-烯丙基苯基)-7-(4-环己基氧基-苯基)-庚-1，6-二烯-3，5-二酮
化合物结构：
合成方法参照实施案例1
1H-NMR(400MHZ，CDCl3，TMS，ppm):
δ4.59(2H)，δ7.18(1H)，δ7.01(1H)，δ7.01(1H)，δ7.18(1H)，δ3.22(2H)，δ7.19(1H)，δ6.72(1H)，δ6.72(1H)，δ7.19(1H)，δ3.64(1H)，δ1.82(2H)，δ1.44(2H)，δ1.44(2H)，δ1.44(2H)，δ1.82(2H)，δ6.67(1H)，δ6.67(1H)，δ7.54(1H)，δ7.54(1H)
实施案例3.
化合物名称：1’，1-(((1E，6E)-3，5-二氧代庚-1，6-二烯-1，7-二基)双(2-甲氧基-4，1-亚苯基))1，1'-双(4-氟苯基)双(环丙烷-1，1-二羧酸酯)
化合物结构：
合成路线：
合成方法：
称取2.16mmol的1-((4-氟苯氧基)羰基)环丙烷-1-羧酸，2.16mmol的EDCI和2.16mmol的DMAP于100ml的圆底烧瓶中，加入25ml的无水二氯甲烷，磁力搅拌1h，然后加入2.16mmol的姜黄素，常温搅拌12h，TLC检测反应程度，带原料基本消失后，停止反应，减压浓缩，加入3.3g硅胶拌样，减压蒸干，上硅胶柱，石油醚-丙酮洗脱，丙酮重结晶，得到化合物。
1H-NMR(400MHZ，CDCl3，TMS，ppm):
δ7.18(1H)，δ7.18(1H)，δ7.23(1H)，δ7.23(1H)，δ7.10(1H)，δ7.10(1H)，δ7.17(1H)，δ7.17(1H)，δ7.30(1H)，δ7.30(1H)，δ7.17(1H)，δ7.17(1H)，δ7.18(1H)，δ7.18(1H)，δ3.87(3H)，δ3.87(3H)，δ4.59(2H)，δ7.60(H)，δ7.60(H)，δ6.91(H)，δ6.91(H)
实施案例4.
化合物名称：1-(3，3-二甲基-丁基)-环丙烷甲酸4-{7-[4-(3，3-二甲基-丁酰氧基)-苯基]-3，5-二氧代-庚-1，6-二烯基}-苯酯
化合物结构：
合成方法参照实施案例1和3
1H-NMR(400MHZ，CDCl3，TMS，ppm):
δ4.59(2H)，δ7.27(1H)，δ7.02(1H)，δ7.02(1H)，δ7.27(1H)，δ7.27(1H)，δ7.02(1H)，δ7.02(1H)，δ7.27(1H)，δ2.15(2H)，δ1.06(3H)，δ1.06(3H)，δ1.48(2H)，δ0.41(2H)，δ0.41(2H)，δ1.21(2H)，δ1.06(3H)，δ1.06(3H)，δ1.06(3H)，δ6.67(1H)，δ6.67(1H)，δ7.54(1H)，δ7.54(1H)
实施案例5.
化合物名称：乙酸-4-[3，5-二氧代-7-(4-戊-4-炔基-苯基)-庚-1，6-二烯基]-苯基酯
化合物结构：
合成方法参照实施案例1和3
1H-NMR(400MHZ，CDCl3，TMS，ppm):
δ4.59(2H)，δ7.25(1H)，δ7.07(1H)，δ7.07(1H)，δ7.25(1H)，δ2.55(2H)，δ7.27(1H)，δ7.02(1H)，δ7.02(1H)，δ7.27(1H)，δ1.79(2H)，δ2.03(2H)，δ1.82(1H)，δ2.08(3H)，δ6.67(1H)，δ6.67(1H)，δ7.54(1H)，δ7.54(1H)
实施案例6.
化合物名称：环己烷羧酸4-(7-{2-溴-4-[1-(3-甲基-丁酰基)-环丙烷羰氧基]-苯基}-3，5-二氧代-庚-1，6-二烯基)-2-乙基-苯酯
化合物结构：
合成方法参照实施案例1和3
1H-NMR(400MHZ，CDCl3，TMS，ppm):
δ4.59(2H)，δ7.16(1H)，δ6.96(1H)，δ7.19(1H)，δ7.13(1H)，δ6.97(1H)，δ7.09(1H)，δ2.27(1H)，δ0.69(2H)，δ0.69(2H)，δ2.41(2H)，δ2.06(1H)，δ1.01(3H)，δ1.01(3H)，δ2.59(2H)，δ1.24(3H)，δ1.67(2H)，δ1.44(2H)，δ1.44(2H)，δ1.44(2H)，δ1.67(2H)，δ6.50(1H)，δ6.67(1H)，δ7.54(1H)，δ7.54(1H)
实施案例7.
化合物名称：4-((1E，6E)-7-(4-((1-(氯羰基)环丙烷-1-羰基)氧基)-2-甲基苯基)-3，5-二氧代-1，6-二烯-1-基)苯基1-(环己基氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酸酯
化合物结构：
合成方法参照实施案例1和3
1H-NMR(400MHZ，CDCl3，TMS，ppm):
δ4.59(2H)，δ7.15(1H)，δ6.83(1H)，δ6.82(1H)，δ7.27(1H)，δ7.02(1H)，δ7.02(1H)，δ7.27(1H)，δ0.74(2H)，δ0.74(2H)，δ2.35(3H)，δ8.0(1-NH)，δ0.69(2H)，δ0.69(2H)，δ3.54(1H)，δ1.66(2H)，δ1.44(2H)，δ1.44(2H)，δ1.66(2H)，δ6.50(1H)，δ6.67(1H)，δ7.81(1H)，δ7.54(1H)
实施案例8.
化合物名称：4-((1E，6E)-7-(4-((1-(氯羰基)叔丁基-1-羰基)氧基)-2-甲基苯基)-3，5-二氧代-1，6-二烯-1-基)苯基1-(甲酰基)环丙烷-1-羧酸酯
化合物结构：
合成方法参照实施案例1和3
1H-NMR(400MHZ，CDCl3，TMS，ppm):
δ4.59(2H)，δ7.15(1H)，δ6.83(1H)，δ6.82(1H)，δ7.27(1H)，δ7.02(1H)，δ7.02(1H)，δ7.27(1H)，δ0.69(2H)，δ0.69(2H)，δ2.37(2H)，δ2.35(3H)，δ6.0(2-NH)，δ0.69(2H)，δ0.69(2H)，δ1.06(3H)，δ1.06(3H)，δ1.06(3H)，δ6.50(1H)，δ6.67(1H)，δ7.81(1H)，δ7.54(1H)
实施案例9.
化合物名称：4-((1E，6E)-7-(4-((1-((4-氯苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羰基)氧基)苯基)-3，5-二氧代-1，6-二烯-1--)-甲基苯基-1-((4-氟苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酸酯
化合物结构：
合成方法参照实施案例1和3
1H-NMR(400MHZ，CDCl3，TMS，ppm):
δ4.59(2H)，δ7.15(1H)，δ6.83(1H)，δ6.82(1H)，δ7.27(1H)，δ7.02(1H)，δ7.02(1H)，δ7.27(1H)，δ0.79(2H)，δ0.79(2H)，δ8.0(1-NH)，δ2.35(3H)，δ8.0(1-NH)，δ0.79(2H)，δ0.79(2H)，δ1.06(3H)，δ1.06(3H)，δ1.06(3H)，δ6.50(1H)，δ6.67(1H)，δ7.81(1H)，δ7.54(1H)
实施案例10.
化合物名称：1-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-7-(6-甲基-吡啶-3-基)-庚-1，6-二烯-3，5-二酮
化合物结构：
合成方法参照实施案例1
1H-NMR(400MHZ，CDCl3，TMS，ppm):
δ4.59(2H)，δ7.78(1H)，δ7.22(1H)，δ8.71(1H)，δ2.55(3H)，δ7.37(1H)，δ6.63(1H)，δ7.79(1H)，δ3.37(3H)，δ6.67(1H)，δ6.67(1H)，δ7.57(1H)，δ7.54(1H)
实施案例11.
化合物名称：1-(6-甲基-吡啶-3-基)-7-(4-苯氧基-苯基)-庚-1，6-二烯-3，5-二酮
化合物结构：
合成方法参照实施案例1
1H-NMR(400MHZ，CDCl3，TMS，ppm):
δ4.59(2H)，δ7.78(1H)，δ7.22(1H)，δ8.71(1H)，δ2.55(3H)，δ7.26(1H)，δ6.87(1H)，δ6.87(1H)，δ7.26(1H)，δ6.92(1H)，δ7.22(1H)，δ6.98(1H)，δ3.37(3H)，δ6.67(1H)，δ6.67(1H)，δ7.57(1H)，δ7.54(1H)
实施案例12.
化合物名称：5-(1E，6E)-1-(5-(戊-4-炔-1-基)吡啶-2-基)-7-(四氢-2H-吡喃-4-基)庚-1，6-二烯-3，5-二酮
化合物结构：
合成方法参照实施案例1
1H-NMR(400MHZ，CDCl3，TMS，ppm):
δ4.59(2H)，δ2.28(1H)，δ8.61(1H)，δδ7.55(1H)，δ7.40(1H)，δ2.55(2H)，δ1.60(2H)，δ3.60(2H)，δ3.60(2H)，δ1.60(2H)，δ1.79(2H)，δ2.30(2H)，δ1.82(1H)，δ7.82(1H)，δ6.13(1H)，δ7.75(1H)，δ6.82(1H)
实施案例13.
化合物名称：5-((1E，6E)-7-(5-((3，3-二甲基丁酰)硫基)四氢-2H-吡喃-3-基)-3，5-二氧代-1，6-二烯-1-基)吡啶-2-基1-(3，3-二甲基丁基)环丙烷-1-羧酸酯
化合物结构：
合成方法参照实施案例1和3
1H-NMR(400MHZ，CDCl3，TMS，ppm):
δ4.59(2H)，δ2.28(1H)，δ7.79(1H)，δ6.63(1H)，δ7.73(1H)，δ2.23(2H)，δ2.91(1H)，δ4.23(2H)，δ3.60(2H)，δ1.48(2H)，δ0.41(2H)，δ0.41(2H)，δ1.21(2H)，δ1.06(3H)，δ1.06(3H)，δ1.06(3H)，δ2.23(2H)，δ1.06(3H)，δ1.06(3H)，δ1.06(3H)，δ6.67(1H)，δ6.13(1H)，δ7.54(1H)，δ6.82(1H)
实施案例14.
化合物名称：6-((1E，6E)-7-(3-溴-5-((1-(3-甲基丁酰基)环丙烷-1-羰基)氧基)吡啶-2-基)-3，5-二氧代-1，6-二烯-1-基)-4-乙基吡啶-3-基1-(3-甲基丁酰基)环丙烷-1-羧酸酯
化合物结构：
合成方法参照实施案例1和3
1H-NMR(400MHZ，CDCl3，TMS，ppm):
δ4.59(2H)，δ8.87(1H)，δ7.67(1H)，δ7.54(1H)，δ8.61(1H)，δ0.69(2H)，δ0.69(2H)，δ2.41(2H)，δ2.06(1H)，δ1.01(3H)，δ1.01(3H)，δ2.59(2H)，δ1.24(3H)，δ0.69(2H)，δ0.69(2H)，δ2.41(2H)，δ2.06(1H)，δ1.01(3H)，δ1.01(3H)，δ7.28(1H)，δ7.28(1H)，δ7.75(1H)，δ7.75(1H)
实施案例15.
化合物名称：6-((1E，6E)-7-(4-((1-氨基甲酰基环丙烷-1-羰基)氧基)苯基)-3，5-二氧代-1，6-二烯-1-基)-5-甲基4H-吡喃-3-基1-(4，4-二甲基戊酰基)环丙烷-1-羧酸酯
化合物结构：
合成方法参照实施案例1和3
1H-NMR(400MHZ，CDCl3，TMS，ppm):
δ4.59(2H)，δ2.66(2H)，δ2.66(2H)，δ0.69(2H)，δ0.69(2H)，δ2.37(2H)，δ1.71(3H)，δ6.0(2-NH)，δ0.69(2H)，δ0.69(2H)，δ1.06(3H)，δ1.06(3H)，δ1.06(3H)，δ6.33(1H)，δ6.33(1H)，δ7.40(1H)，δ7.40(1H)，δ5.80(1H)，δ4.65(1H)，δ5.80(1H)
实施案例16.
化合物名称：6-((1E，6E)-7-(5-((1-((4-氯苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羰基)氧基)-3，4-二甲基-4H-噻喃-2-基)-3，5-二氧代庚-1，6-二烯-1-基)-4，5-二甲基-4H-噻喃-3-基1-((4-氟苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酸酯
化合物结构：
合成方法参照实施案例1和3
1H-NMR(400MHZ，CDCl3，TMS，ppm):
δ4.59(2H)，δ3.01(1H)，δ3.01(1H)，δ0.79(2H)，δ0.79(2H)，δ8.0(1-NH)，δ1.71(3H)，δ8.0(1-NH)，δ0.79(2H)，δ0.79(2H)，δ7.62(1H)，δ6.95(1H)，δ6.95(1H)，δ7.62(1H)，δ7.58(1H)，δ7.25(1H)，δ7.25(1H)，δ7.58(1H)，δ1.71(3H)，δ1.26(3H)，δ1.26(3H)，δ6.33(1H)，δ6.33(1H)，δ7.40(1H)，δ7.40(1H)，δ5.60(1H)，δ5.60(1H)
实施案例17.
化合物名称：6-((1E，6E)-7-(5-((1-((4-氯苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羰基)氧基)-3，4-二甲基-4H-吡喃-2-基)-3，5-二氧代庚-1，6-二烯-1-基)-4，5-二甲基-4H-噻喃-3-基1-((4-氟苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酸酯
化合物结构：
合成方法参照实施案例1和3
1H-NMR(400MHZ，CDCl3，TMS，ppm):
δ4.59(2H)，δ3.01(1H)，δ2.83(1H)，δ0.79(2H)，δ0.79(2H)，δ8.0(1-NH)，δ1.71(3H)，δ8.0(1-NH)，δ0.79(2H)，δ0.79(2H)，δ7.62(1H)，δ6.95(1H)，δ6.95(1H)，δ7.62(1H)，δ7.58(1H)，δ7.25(1H)，δ7.25(1H)，δ7.58(1H)，δ1.71(3H)，δ1.26(3H)，δ1.26(3H)，δ6.33(1H)，δ6.33(1H)，δ7.40(1H)，δ7.40(1H)，δ5.60(1H)，δ5.60(1H)
实施案例18.
化合物名称：4-(1--(((6-((1E，6E)-7-(4-((1-((4-环己基苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羰基)氧基)-2-甲基苯基)-3，5-二氧代庚-1，6-二烯-1-基)-4H-吡喃-3-基)氧基)羰基)环丙烷-1-甲酰胺基)苯甲酸
化合物结构：
合成方法参照实施案例1和3
1H-NMR(400MHZ，CDCl3，TMS，ppm):
δ12.71(1-OH)，δ10.02(1-NH)，δ10.02(NH)，δ1.74(2H)，δ1.61(2H)，δ1.61(2H)，δ7.44(1H)，δ7.85(1H)，δ7.20(1H)，δ7.30(1H)，δ7.98(1H)，δ7.44(1H)，δ7.85(1H)，δ7.20(1H)，δ7.98(1H)，δ7.52(1H)，δ7.29(1H)，δ2.72(1H)，δ2.66(2H)，δ1.86(2H)，δ1.86(2H)，δ1.53(2H)，δ1.53(2H)，δ1.46(2H)，δ3.45(2H)，δ2.41(3H)，δ4.59(2H)，δ5.80(H)，δ4.65(H)，δ7.40(H)，δ7.97(H)，δ6.33(H)，δ6.74(H)
实施案例19.
化合物名称：3-(2-((1-((4-丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羰基)氧基)-5-((1E，6E)-7-(2-氯-4-((1-((4-((2E，4E)-6-(二甲基氨基)-6-氧代己烷-2，4-二烯-2-基)苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羰基)氧基)-3-乙基苯基)-3，5--二氧代-1，6-二烯-1-基)苯基)丙酸
化合物结构：
合成方法参照实施案例1和3
1H-NMR(400MHZ，CDCl3，TMS，ppm):
δ12.03(1-OH)，δ10.02(1-NH)，δ10.02(NH)，δ1.74(2H)，δ1.74(2H)，δ1.61(2H)，δ1.61(2H)，δ7.72(1H)，δ7.59(1H)，δ7.20(1H)，δ8.10(1H)，δ7.44(1H)，δ7.60(1H)，δ7.72(1H)，δ7.59(1H)，δ7.52(1H)，δ8.10(1H)，δ7.44(1H)，δ7.18(1H)，δ7.27(1H)，δ3.02(3H)，δ3.02(3H)，δ3.45(2H)，δ2.79(2H)，δ2.71(2H)，δ2.51(2H)，δ2.96(2H)，δ4.59(2H)，δ1.51(2H)，δ2.12(3H)，δ1.18(3H)，δ0.98(3H)，δ7.97(H)，δ6.57(H)，δ6.74(H)，δ6.91(H)，δ5.42(H)，δ7.36(H)
实施案例20.
化合物名称：3-(2-((1-((4-丁基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羰基)氧基)-5-((1E，6E)-7-(2-氯-3-乙基-4-((1-((4-(2-异丙基-4，5-二甲基环己基)苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羰基)氧基)苯基)-3，5-二氧代-1，6-二烯-1-基)苯基)丙酸
化合物结构
合成方法参照实施案例1和3
1H-NMR(400MHZ，CDCl3，TMS，ppm):
δ12.03(1-OH)，δ10.02(1-NH)，δ10.02(NH)，δ1.74(2H)，δ1.74(2H)，δ1.61(2H)，δ1.61(2H)，δ7.44(1H)，δ7.72(1H)，δ7.20(1H)，δ7.20(2H)，δ7.52(1H)，δ8.10(1H)，δ7.18(1H)，δ7.27(1H)，δ2.62(1H)，δ1.62(1H)，δ1.44(1H)，δ1.44(1H)，δ1.79(2H)，δ1.45(2H)，δ1.41(1H)，δ3.45(2H)，δ2.79(2H)，δ2.71(2H)，δ0.88(3H)，δ0.88(3H)，δ2.51(2H)，δ2.96(2H)，δ4.59(2H)，δ1.51(2H)，δ0.83(3H)，δ0.83(3H)，δ1.18(3H)，δ0.98(3H)，δ7.97(H)，δ7.60(H)，δ6.74(H)，δ6.91(H)
实施案例21.
化合物名称：4-(1-((4-((1E，6E)-7-(3-(氰基甲基)-4-((1-((4-环己基苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羰基)氧基-2-环己基乙基)苯基)-3，5-二氧代-1，6-二烯-1-基)苯氧基)羰基)环丙烷-1-甲酰氨基)苯甲酸甲酯
化合物结构
合成方法参照实施案例1和3
1H-NMR(400MHZ，CDCl3，TMS，ppm):
δ10.02(1-NH)，δ10.02(NH)，δ1.74(2H)，δ1.74(2H)，δ1.61(2H)，δ1.61(2H)，δ7.28(1H)，δ7.44(1H)，δ7.75(1H)，δ7.20(1H)，δ7.16(2H)，δ7.83(1H)，δ7.62(1H)，δ7.28(1H)，δ7.44(1H)，δ7.75(1H)，δ7.20(1H)，δ7.62(1H)，δ7.83(1H)，δ7.34(1H)，δ7.54(1H)，δ2.72(1H)，δ1.50(1H)，δ1.86(2H)，δ1.86(2H)，δ1.63(2H)，δ1.63(2H)，δ1.53(2H)，δ1.53(2H)，δ1.53(2H)，δ1.53(2H)，δ1.46(2H)，δ1.46(2H)，δ4.49(2H)，δ3.45(2H)，δ4.33(2H)，δ1.70(2H)，δ4.59(2H)，δ7.60(H)，δ7.60(H)，δ6.91(H)，δ6.91(H)
实施案例22.
化合物名称：(1E，6E)-1，7-双(6-溴吡啶-2-基)庚-1，6-二烯-3，5-二酮
化合物结构：
合成方法参照实施案例1
1H-NMR(400MHZ，CDCl3，TMS，ppm):
δ7.41(1H)，δ7.62(1H)，δ7.41(1H)，δ7.62(1H)，δ7.69(1H)，δ7.69(1H)，δ7.75(H)，δ7.75(H)，δ7.52(H)，δ7.52(H)
实施案例23.
化合物名称：(1E，6E)-1，7-双(5-溴吡啶-3-基)庚-1，6-二烯-3，5-二酮
化合物结构：
合成方法参照实施案例1
1H-NMR(400MHZ，CDCl3，TMS，ppm):
δ8.41(1H)，δ9.02(1H)，δ8.41(1H)，δ9.02(1H)，δ8.22(1H)，δ8.22(1H)，δ4.59(2H)，δ7.70(H)，δ7.70(H)，δ6.91(H)，δ6.91(H)
实施案例24.
化合物名称：(((1E，6E)-3，5-二氧杂庚基-1，6-二烯-1，7-二基)双(2-甲氧基-4，1-亚苯基)双(1-(((4-氟苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酸盐)
化合物结构：
合成方法参照实施案例1和3
1H-NMR(400MHZ，CDCl3，TMS，ppm):
δ10.02(OH)，δ10.02(OH)，δ1.74(2H)，δ1.74(2H)，δ1.74(2H)，δ1.74(2H)，δ7.14(1H)，δ7.14(1H)，δ7.23(1H)，δ7.10(1H)，δ7.59(1H)，δ7.59(1H)，δ7.23(1H)，δ7.30(1H)，δ7.14(1H)，δ7.14(1H)，δ7.10(1H)，δ7.59(1H)，δ7.59(1H)，δ7.30(1H)，δ3.87(3H)，δ3.87(3H)，δ4.59(2H)，δ7.60(H)，δ7.60(H)，δ6.91(H)，δ6.91(H)
实施案例25.
化合物名称：(1E，6E)-1-(6-溴吡啶-2-基)-7-苯基-1，6-二烯-3，5-二酮
化合物结构：
合成方法参照实施案例1
1H-NMR(400MHZ，CDCl3，TMS，ppm):
δ7.62(1H)，δ7.54(1H)，δ7.41(1H)，δ7.54(1H)，δ7.69(1H)，δ7.38(1H)，δ7.38(1H)，δ7.33(1H)，δ4.59(2H)，δ7.75(H)，δ7.60(H)，δ7.52(H)，δ6.91(H)
实施案例26.
化合物名称：(1E，6E)-1-(5-溴吡啶-3-基)-7-苯基-1，6-二烯-3，5-二酮
化合物结构：
合成方法参照实施案例1
1H-NMR(400MHZ，CDCl3，TMS，ppm):
δ7.62(1H)，δ7.54(1H)，δ7.41(1H)，δ7.54(1H)，δ7.69(1H)，δ7.38(1H)，δ7.38(1H)，δ7.33(1H)，δ4.59(2H)，δ7.75(H)，δ7.60(H)，δ7.52(H)，δ6.91(H)
实施案例27.
化合物名称：(1E，6E)-1-(6-溴吡啶-2-基)-7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)庚-1，6-二烯-3，5-二酮
化合物结构：
合成方法参照实施案例1
1H-NMR(400MHZ，CDCl3，TMS，ppm):
δ9.55(OH)，δ7.62(1H)，δ7.11(1H)，δ7.41(1H)，δ6.99(1H)，δ6.79(1H)，δ7.69(1H)，δ3.83(3H)，δ4.59(2H)，δ7.75(H)，δ7.60(H)，δ7.52(H)，δ6.91(H)
实施案例28.
化合物名称：(1E，6E)-1-(5-溴吡啶-3-基)-7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)庚-1，6-二烯-3，5-二酮
化合物结构：
合成方法参照实施案例1
1H-NMR(400MHZ，CDCl3，TMS，ppm):
δ9.55(OH)，δ8.41(1H)，δ9.02(1H)，δ8.22(1H)，δ7.11(1H)，δ6.99(1H)，δ6.79(1H)，δ3.83(3H)，δ4.59(2H)，δ7.70(H)，δ7.60(H)，δ7.69(H)，δ6.91(H)
实施案例29.
化合物名称：3-亚苄基戊烷-2，4-二酮
化合物结构：
合成方法参照实施案例1
1H-NMR(400MHZ，CDCl3，TMS，ppm):
δ7.54(1H)，δ7.54(1H)，δ7.18(1H)，δ7.54(1H)，δ7.54(1H)，δ7.18(1H)，δ7.38(1H)，δ7.38(1H)，δ7.19(1H)，δ7.38(1H)，δ7.38(1H)，δ7.19(1H)，δ7.33(1H)，δ7.33(1H)，δ7.08(1H)，δ4.50(1H)，δ7.60(H)，δ7.60(H)，δ6.91(H)，δ6.91(H)
实施案例30.
化合物名称：3-(3-羟基-4-甲氧基亚苄基)戊烷-2，4-二酮
化合物结构：
合成方法参照实施案例1和3
1H-NMR(400MHZ，CDCl3，TMS，ppm):
δ9.42(OH)，δ6.98(1H)，δ6.67(1H)，δ6.71(1H)，δ3.86(3H)，δ4.50(1H)，δ2.43(3H)，δ2.43(3H)
实施案例31.
化合物名称：1-(5-(2-乙酰基-3-氧代丁-1-烯-1-基)-2-甲氧基苯基)1-(4-氟苯基)环丙烷-1，1-二羧酸酯
化合物结构：
合成方法参照实施案例1
1H-NMR(400MHZ，CDCl3，TMS，ppm):
δ1.91(2H)，δ7.18(1H)，δ7.32(1H)，δ6.84(1H)，δ7.17(1H)，δ7.10(1H)，δ7.18(1H)，δ7.17(1H)，δ3.83(1H)，δ4.50(1H)，δ2.43(3H)，δ2.43(3H)
实施例32：对STAT3蛋白的抑制作用
研究化合物对纯化的重组STAT3活性的影响，是从酶学水平研究化合物对STAT3的抑制活性。其实验原理为采用一种发光法酶检测方法，用于检测STAT3与底物Poly(4:1Glu，Tyr)肽反应产生的ADP含量：ADP转化为ATP后，ATP即可作为Ultra-Glo萤光素酶催化反应的底物，产生光信号。发光信号与ADP的量和酶活性正相关。因此，通过观察化合物对STAT3与底物反应产生的发光信号来确定其对重组的STAT3的抑制效果。
实验方法：
基本过程如下：选用取最低浓度0.0001递增为8um的10个浓度单位的化合物与STAT3在37度孵育1小时，然后加入底物及ATP混合，37度反应1小时后加入一定量的ADP-Glo混合2分钟，室温反应1小时。再加入检测试剂，室温孵育1小时，用化学发光仪检测。观察化合物对STAT3的抑制作用，用IC50表示。结果见表1。
表1 STAT3的激活作用实验结果
化合物
对STAT3的抑制作用IC<sub>50</sub>(μM)
本发明实施例1化合物
<35
本发明实施例2化合物
<29
本发明实施例3化合物
<30
本发明实施例4化合物
<28
本发明实施例5化合物
<35
本发明实施例6化合物
<34
本发明实施例7化合物
<34
本发明实施例8化合物
<32
本发明实施例9化合物
<35
本发明实施例10化合物
<34
本发明实施例11化合物
<35
本发明实施例12化合物
<35
本发明实施例13化合物
<31
本发明实施例14化合物
<32
本发明实施例15化合物
<34
本发明实施例16化合物
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本发明实施例17化合物
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本发明实施例18化合物
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本发明实施例19化合物
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本发明实施例20化合物
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本发明实施例21化合物
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本发明实施例22化合物
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本发明实施例23化合物
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本发明实施例24化合物
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本发明实施例25化合物
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本发明实施例26化合物
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本发明实施例27化合物
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本发明实施例28化合物
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本发明实施例29化合物
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本发明实施例30化合物
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实施例33：对NF-κB蛋白的抑制作用
研究化合物对纯化的重组NF-κB活性的影响，是从酶学水平研究化合物对NF-κB的抑制活性。其实验原理为采用一种发光法酶检测方法，用于检测NF-κB与底物Poly(4:1Glu，Tyr)肽反应产生的ADP含量：ADP转化为ATP后，ATP即可作为Ultra-Glo萤光素酶催化反应的底物，产生光信号。发光信号与ADP的量和酶活性正相关。因此，通过观察化合物对NF-κB与底物反应产生的发光信号来确定其对重组的NF-κB的抑制效果。
实验方法：
基本过程如下：选用取最低浓度0.0001递增为8um的10个浓度单位的化合物与NF-κB在37度孵育1小时，然后加入底物及ATP混合，37度反应1小时后加入一定量的ADP-Glo混合2分钟，室温反应1小时。再加入检测试剂，室温孵育1小时，用化学发光仪检测。观察化合物对NF-κB的抑制作用，用IC50表示。结果见表2。
表2NF-κB的激活作用实验结果
实施例34：对NF-κB蛋白的抑制作用
研究化合物对纯化的重组NF-κB活性的影响，是从酶学水平研究化合物对NF-κB的抑制活性。其实验原理为采用一种发光法酶检测方法，用于检测NF-κB与底物Poly(4:1Glu，Tyr)肽反应产生的ADP含量：ADP转化为ATP后，ATP即可作为Ultra-Glo萤光素酶催化反应的底物，产生光信号。发光信号与ADP的量和酶活性正相关。因此，通过观察化合物对NF-κB与底物反应产生的发光信号来确定其对重组的NF-κB的抑制效果。
实验方法：
基本过程如下：选用取最低浓度0.0001递增为8um的10个浓度单位的化合物与NF-κB在37度孵育1小时，然后加入底物及ATP混合，37度反应1小时后加入一定量的ADP-Glo混合2分钟，室温反应1小时。再加入检测试剂，室温孵育1小时，用化学发光仪检测。观察化合物对NF-κB的抑制作用，用IC50表示。结果见表3。
表3 NF-κB的激活作用实验结果
实施例35：对JAK2蛋白的抑制作用
研究化合物对纯化的重组JAK2活性的影响，是从酶学水平研究化合物对JAK2的抑制活性。其实验原理为采用一种发光法酶检测方法，用于检测JAK2与底物Poly(4:1Glu，Tyr)肽反应产生的ADP含量：ADP转化为ATP后，ATP即可作为Ultra-Glo萤光素酶催化反应的底物，产生光信号。发光信号与ADP的量和酶活性正相关。因此，通过观察化合物对JAK2与底物反应产生的发光信号来确定其对重组的JAK2的抑制效果。
实验方法：
基本过程如下：选用取最低浓度0.0001递增为8um的10个浓度单位的化合物与JAK2在37度孵育1小时，然后加入底物及ATP混合，37度反应1小时后加入一定量的ADP-Glo混合2分钟，室温反应1小时。再加入检测试剂，室温孵育1小时，用化学发光仪检测。观察化合物对JAK2的抑制作用，用IC50表示。结果见表4。
表4 JAK2的激活作用实验结果
化合物
对JAK2的抑制作用IC<sub>50</sub>(μM)
本发明实施例1化合物
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本发明实施例2化合物
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本发明实施例3化合物
<35
本发明实施例4化合物
<33
本发明实施例5化合物
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本发明实施例6化合物
<23
本发明实施例7化合物
<35
本发明实施例8化合物
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本发明实施例9化合物
<35
本发明实施例10化合物
<35
本发明实施例11化合物
<34
本发明实施例12化合物
<35
本发明实施例13化合物
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本发明实施例14化合物
<35
本发明实施例15化合物
<35
本发明实施例16化合物
<35
本发明实施例17化合物
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本发明实施例18化合物
<29
本发明实施例19化合物
<28
本发明实施例20化合物
<35
本发明实施例21化合物
<34
本发明实施例22化合物
<33
本发明实施例23化合物
<29
本发明实施例24化合物
<24
本发明实施例25化合物
<25
本发明实施例26化合物
<28
本发明实施例27化合物
<29
本发明实施例28化合物
<31
本发明实施例29化合物
<32
本发明实施例30化合物
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实施例36：对TNF-α蛋白的抑制作用
研究化合物对纯化的重组TNF-α活性的影响，是从酶学水平研究化合物对TNF-α的抑制活性。其实验原理为采用一种发光法酶检测方法，用于检测TNF-α与底物Poly(4:1Glu，Tyr)肽反应产生的ADP含量：ADP转化为ATP后，ATP即可作为Ultra-Glo萤光素酶催化反应的底物，产生光信号。发光信号与ADP的量和酶活性正相关。因此，通过观察化合物对TNF-α与底物反应产生的发光信号来确定其对重组的TNF-α的抑制效果。
实验方法：
基本过程如下：选用取最低浓度0.0001递增为8um的10个浓度单位的化合物与TNF-α在37度孵育1小时，然后加入底物及ATP混合，37度反应1小时后加入一定量的ADP-Glo混合2分钟，室温反应1小时。再加入检测试剂，室温孵育1小时，用化学发光仪检测。观察化合物对TNF-α的抑制作用，用IC50表示。结果见表5。
表5 TNF-α的激活作用实验结果
实施例37：小鼠急性毒性试验
取化合物，观察小鼠单次口服灌胃给药急性毒性，计算LD50。结果见表6。
表6小鼠单次口服灌胃给药急性毒性实验结果