阅读说明：本技术 一种替代饲用抗生素的中草药复合物智能筛选方法 (Intelligent screening method of Chinese herbal medicine compound for replacing feed antibiotics ) 是由 吴信 于 2020-10-20 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种替代饲用抗生素的中草药复合物智能筛选方法,包括以下步骤：按一定比例称取所用中草药残枝,去除杂质后晒干混合粉碎,然后对发酵前中草药中残枝成份分析以及生物学功能性分析,再按中草药、水、营养盐一定比重混合,升温并浸泡一段时间,从相应的中草药残枝分离和筛选适用于发酵的菌株,通过16S rDNA鉴定其菌属,确立筛选菌株在以相应中草药残枝为底物的成长曲线以及pH和还原糖的变化,将筛选的菌种加入到发酵罐中,并向发酵罐中加入营养物,混匀后得到发酵培养基。本发明可以有针对性的对菌属进行筛选,减少对菌属培养的盲目性,可以较好的替代原有的抗生素制品,且可以对中草药中的废物进行利用,比较环保。(The invention discloses an intelligent screening method of a Chinese herbal medicine compound for replacing feed antibiotics, which comprises the following steps: weighing the used Chinese herbal medicine residual branches according to a certain proportion, removing impurities, drying, mixing, crushing, analyzing the components of the residual branches in the Chinese herbal medicine before fermentation and analyzing the biological functionality, mixing the Chinese herbal medicine, water and nutrient salt according to a certain proportion, heating and soaking for a period of time, separating and screening strains suitable for fermentation from the corresponding Chinese herbal medicine residual branches, identifying the strains through 16S rDNA, determining the growth curve of the screened strains by taking the corresponding Chinese herbal medicine residual branches as substrates and the change of pH and reducing sugar, adding the screened strains into a fermentation tank, adding nutrients into the fermentation tank, and uniformly mixing to obtain a fermentation culture medium. The invention can be used for screening the bacterial genus with pertinence, reduces the blindness of bacterial genus culture, can better replace the original antibiotic product, can utilize the waste in the Chinese herbal medicine, and is more environment-friendly.)

一种替代饲用抗生素的中草药复合物智能筛选方法

技术领域

本发明涉及饲料添加剂生产领域，尤其涉及一种替代饲用抗生素的中草药复合物智能筛选方法。

背景技术

抗生素在人和动物疾病治疗中发挥着重要作用，然而抗生素的长期使用不仅使病原菌产生耐药性，更造成畜产品和生态环境中的药物残留问题，对人类健康安全造成极大威胁，高效、环保、无毒副作用的绿色饲料添加剂在畜禽养殖业中正在逐步替代抗生素，具有广阔的应用前景。

中草药作为饲料添加剂在我国早有记载，依据中医中药理论，进行科学组方配伍，是我国特有的中医理论与实践的产物，一般认为中草药饲料添加剂的有效成分主要有生物碱、甙类、挥发油、鞣质、糖类、氨基酸、蛋白质、酶、油脂、无机成分及色素等，糖甙类可显著增强机体的免疫能力；鞣质对绿脓杆菌、大肠杆菌、霍乱杆菌、白喉杆菌等常见细菌均有抑制作用；生物碱能够增加肠蠕动，使消化液分泌旺盛，食欲增加；有些中草药本身就含有丰富的蛋白质、维生素和矿物元素，兼有药效和营养双重功能，近年来还发现在中草药中游离的有机酸也具有生物活性，如蚁酸具有抗炎镇痛作用，绿原酸具有抗菌效果，植物色素还可以改善畜禽产品(肉、蛋)的色泽等，在肉仔鸡饲粮中添加中草药止痢草提取物后，发现可以改善肉仔鸡的饲料报酬，降低料肉比，同时提高血清IgG水平，降低肉仔鸡球虫病的发生，目前在鸡养殖业上使用较多的中草药种类有白头翁、黄芪、黄连、党参、大黄、炙甘草等，植物提取物的种类主要有皂苷、生物碱、多糖、糖萜素、茶多酚、黄酮、精油等，近几年来，植物精油在畜牧业生产的应用研究也日渐深入，如丁香油、牛至油、百里香醇、茶树油、肉桂油、迷迭香精油等，均具有较好的抗菌、消炎、抗氧化效果，中草药制剂因其来源广泛、价格低廉、安全方便、毒副作用小、无残留、无抗药性等优点而成为一种理想的饲料添加剂，在普通饲养条件下，将制剂添加于日粮中，供动物饲用或饮用，以期预防动物疾病、加速生长、提高生产性能和改善畜禽产品质量，但是目前对中草药的药理作用及作用机制方面的研究还比较薄弱，需要做大量的工作，如长期使用是否有毒副作用，在饲料中是否与其它的营养成分有协同或抵抗效应等，这些问题尚需进行进一步的探讨和研究，这将有利于对中草药饲料添加剂进行进一步的开发和利用。

现有的替代饲用抗生素的中草药复合物筛选方法不够完善，不能有效对目标产物进行筛选与培养，不够绿色环保，为此，我们提出了一种替代饲用抗生素的中草药复合物智能筛选方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种替代饲用抗生素的中草药复合物智能筛选方法，解决了替代饲用抗生素的中草药复合物筛选方法不够完善，不能有效对目标产物进行筛选与培养，不够绿色环保的问题。

为了达到上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明提供一种替代饲用抗生素的中草药复合物智能筛选方法，通过以下步骤制备而成：

(1)：按一定比例称取所用中草药残枝，去除杂质后晒干混合粉碎；

(2)：对发酵前中草药中残枝成份分析以及生物学功能性分析；

(3)：按中草药、水、营养盐重量比为2∶8∶6混合，升温至95～100℃浸泡2～4小时，进行中药水溶活性物质浸提和灭菌；

(4)从相应的中草药残枝分离和筛选适用于发酵的菌株，通过16SrDNA鉴定其菌属，测定纤维素酶、木质素酶、木聚糖酶、蛋白酶和淀粉酶的活性，检测分离菌株的溶血性和抗生素耐性等，确立筛选菌株在以相应中草药残枝为底物的成长曲线以及pH和还原糖的变化；

(5)：将步骤(4)中筛选的菌种加入到发酵罐中，并向发酵罐中加入营养物，混匀后得到发酵培养基；

(6)：发酵结束后对发酵液进行过滤，得到的过滤液加入到浓缩机中，将滤渣与浓缩液进行烘干得到块状抗生素替代物，将块状抗生素替代物粉碎即可得到产品；

(7)对发酵后中草药中残枝成份分析以及生物学功能性分析。

优选的，所述中草药残枝包括杜仲15-29份、黄芪10-20份、藤茶25-35份、桑树16-31份、栀子10-21份。

优选的，所述中草药残枝的组分及重量成分组成包括：杜仲16份、黄芪14份、藤茶26份、桑树24份、栀子20份。

优选的，所述中草药残枝的组分及重量成分组成包括：杜仲18份、黄芪20份、藤茶27份、桑树25份、栀子10份。

优选的，所述中草药残枝的组分及重量成分组成包括：杜仲17份、黄芪18份、藤茶25份、桑树27份、栀子13份。

优选的，所述步骤(4)中的营养物由糖类、蛋白胨、生长因子、牛肉膏和无机盐类组成，重量比为1：0.35-0.5：0.6-0.8：0.3-0.45：0.2-0.3，所述糖类包括：葡萄糖、蔗糖，所述生长因子包括维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶，所述无机盐类包括钾、钠、铁、镁、钙、磷、硫。

优选的，步骤(5)中发酵的pH值为7.0-7.3，发酵温度为29℃-31℃。

优选的，步骤(5)中采用反复半分批式操作进行发酵，反复半分批式的方法为：流加操作完成后，取出部分反应系，剩余部分重新加入一定量底物，再按流加式操作进行。

优选的，步骤(4)中采用16SrDNA鉴定的方法为：核酸提取→基因扩增→产物纯化→测序反应→序列比对。

本发明的有益效果：先从相应的中草药残枝分离和筛选适用于发酵的菌株，通过16SrDNA鉴定其菌属，测定纤维素酶、木质素酶、木聚糖酶、蛋白酶和淀粉酶的活性，检测分离菌株的溶血性和抗生素耐性等，确立筛选菌株在以相应中草药残枝为底物的成长曲线以及pH和还原糖的变化，可以有针对性的对菌属进行筛选，减少对菌属培养的盲目性，可以较好的替代原有的抗生素制品，且可以对中草药中的废物进行利用，比较环保。

具体实施方式

下面结合实施例，对本发明的具体实施方式作进一步描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，而不能以此来限制本发明的保护范围。

实施例1

制作方法具体步骤如下：

(1)按照组分及重量成分组成准备：杜仲16份、黄芪14份、藤茶26份、桑树24份、栀子20份，去除杂质后晒干混合粉碎；

(2)：对发酵前中草药中残枝成份分析以及生物学功能性分析；

(3)：按中草药、水、营养盐重量比为2∶8∶6混合，升温至95～100℃浸泡2～4小时，进行中药水溶活性物质浸提和灭菌；

(4)从相应的中草药残枝分离和筛选适用于发酵的菌株，通过16SrDNA鉴定其菌属，测定纤维素酶、木质素酶、木聚糖酶、蛋白酶和淀粉酶的活性，检测分离菌株的溶血性和抗生素耐性等，确立筛选菌株在以相应中草药残枝为底物的成长曲线以及pH和还原糖的变化；

(5)：将步骤(4)中筛选的菌种加入到发酵罐中，并向发酵罐中加入营养物，混匀后得到发酵培养基；

(6)：发酵结束后对发酵液进行过滤，得到的过滤液加入到浓缩机中，将滤渣与浓缩液进行烘干得到块状抗生素替代物，将块状抗生素替代物粉碎即可得到产品；

(7)对发酵后中草药中残枝成份分析以及生物学功能性分析。

实施例2

制作方法具体步骤如下：

(1)根据组分及重量成分组成准备：所述中草药残枝的组分及重量成分组成包括：杜仲18份、黄芪20份、藤茶27份、桑树25份、栀子10份；

(2)：对发酵前中草药中残枝成份分析以及生物学功能性分析；

(3)：按中草药、水、营养盐重量比为2∶8∶6混合，升温至95～100℃浸泡2～4小时，进行中药水溶活性物质浸提和灭菌；

(4)从相应的中草药残枝分离和筛选适用于发酵的菌株，通过16SrDNA鉴定其菌属，测定纤维素酶、木质素酶、木聚糖酶、蛋白酶和淀粉酶的活性，检测分离菌株的溶血性和抗生素耐性等，确立筛选菌株在以相应中草药残枝为底物的成长曲线以及pH和还原糖的变化；

(5)：将步骤(4)中筛选的菌种加入到发酵罐中，并向发酵罐中加入营养物，混匀后得到发酵培养基；

(6)：发酵结束后对发酵液进行过滤，得到的过滤液加入到浓缩机中，将滤渣与浓缩液进行烘干得到块状抗生素替代物，将块状抗生素替代物粉碎即可得到产品；

(7)对发酵后中草药中残枝成份分析以及生物学功能性分析。

实施例3

制作方法具体步骤如下：

(1)根据组分及重量成分组成准备：所述中草药残枝的组分及重量成分组成包括：杜仲17份、黄芪18份、藤茶25份、桑树27份、栀子13份；

(2)：对发酵前中草药中残枝成份分析以及生物学功能性分析；

(3)：按中草药、水、营养盐重量比为2∶8∶6混合，升温至95～100℃浸泡2～4小时，进行中药水溶活性物质浸提和灭菌；

(4)从相应的中草药残枝分离和筛选适用于发酵的菌株，通过16SrDNA鉴定其菌属，测定纤维素酶、木质素酶、木聚糖酶、蛋白酶和淀粉酶的活性，检测分离菌株的溶血性和抗生素耐性等，确立筛选菌株在以相应中草药残枝为底物的成长曲线以及pH和还原糖的变化；

(5)：将步骤(4)中筛选的菌种加入到发酵罐中，并向发酵罐中加入营养物，混匀后得到发酵培养基；

(6)：发酵结束后对发酵液进行过滤，得到的过滤液加入到浓缩机中，将滤渣与浓缩液进行烘干得到块状抗生素替代物，将块状抗生素替代物粉碎即可得到产品；

(7)对发酵后中草药中残枝成份分析以及生物学功能性分析。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。