具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

下列实施例中未注明具体实验条件的试验方法，通常按照常规实验条件或按照制造厂所建议的实验条件。所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为从商业途径得到的试剂和材料。

实施例1

取1000克丁香加入6000mL的水，水蒸气蒸馏，获得含丁香酚(丁香酚纯度80％)的萃取液，蒸馏2次，得终体积10000mL，即丁香提取物溶液；经低温真空浓缩，可得丁香提取物(约100g)，其中丁香酚纯度80％。

取1000克黄芪，加入5000mL70％乙醇提取2次，挥去乙醇，加至D101树脂柱，吸附半小时后，用5倍柱体积清水冲洗，再用0.2％NaOH清洗柱子，清水洗至中性，20％乙醇冲柱，再用70％乙醇洗柱并收集，挥去乙醇，得2000mL富含黄芪总皂苷的黄芪提取物溶液(黄芪总皂苷纯度70％)，加0.3％山梨酸钾备用。其中，挥去乙醇后，干燥，可得黄芪提取物(约20g)，黄芪总皂苷纯度70％。

取1000mL丁香提取物溶液和1000mL富含黄芪总皂苷的黄芪提取物溶液混合，加入总体积5％的丙二醇，按每瓶10mL分装200瓶鼻喷雾剂。

取1000mL丁香提取物溶液，加入总体积5％的丙二醇，按每瓶10mL分装100瓶鼻喷雾剂，即丁香酚组鼻喷雾剂。

取1000mL富含黄芪总皂苷的黄芪提取物溶液，加入总体积5％的丙二醇，按每瓶10mL分装100瓶鼻喷雾剂，即黄芪总皂苷组鼻喷雾剂。

实施例2

从市场上购置10g丁香酚(纯度90％)，以吐温80溶解，稀释成1000mL；从市场上购置20g黄芪总皂苷(纯度90％)，以吐温80溶解，稀释成1000mL；按1：1混合，分装成200瓶10mL的滴鼻剂。

实施例3

取1000克丁香，粉碎成粗粉，置于超临界提取设备中，压力为25MPa、温度55℃，进行萃取，以压力为6MPa、温度40℃，进行解析，得到淡黄色半透明的提取物100克(丁香酚纯度80％)，加入增溶剂吐温80并稀释得终体积10000mL，即丁香提取物溶液。

取1000克黄芪，加入5000mL水提取2次，浓缩后用水饱和的正丁醇萃取，取正丁醇层液体，挥去正丁醇，无水乙醇清洗，用水溶解，得2000mL富含黄芪总皂苷的提取物溶液(黄芪总皂苷纯度70％)，加0.3％山梨酸钾备用。其中，无水乙醇清洗后，干燥，可得黄芪提取物(约20g)，黄芪总皂苷纯度70％。

取1000mL丁香提取物溶液和1000mL富含黄芪总皂苷的黄芪提取物溶液混合，加入总体积5％的丙二醇，按每瓶10mL分装200瓶鼻喷雾剂。

实施例4鼻腔凝胶剂制备

将实施例1制得的含丁香酚的丁香提取物溶液，富含黄芪总皂苷的黄芪提取物溶液各400mL，分散至0.25％卡波姆为基质的凝胶，均质均匀，用三乙醇胺促凝胶形成，加水至总质量1000g，按10克一瓶分装100瓶。使用时，用棉签取适量凝胶，涂入鼻腔内即可。

效果实施例1药理实验

1、材料和方法

1.1动物

大鼠60只，雌雄各半，重200g±30g。

1.2主要药物与试剂

曲安奈德喷鼻雾剂(皮质激素类药物，江西珍视明药业有限公司生产)、实施例1鼻喷雾剂(自制)、卵白蛋白(OVA)、氢氧化铝、10％中性甲醛固定液、苏木素伊红染液、大鼠IgE酶联免疫试剂盒(南京建成生物科技公司)、Mucin5AC抗体(英国abcam公司)。

鼻喷雾剂黄芪总皂苷含量高效液相蒸发光检测图

色谱条件：

色谱柱：Inertsil ODS-SP(5μm，4.6×250mm)

流动相：乙腈-水32：68

流速：1ml/min

检测器：ELSD-UM3000

从图1可知，实施例1的鼻喷雾剂经高效液相色谱仪检测，主要成分是黄芪总皂苷，黄芪总皂苷的纯度为70％。从图2可知，实施例1的鼻喷雾剂经气质联用色谱(Agilent19095F-123)检测，可知主要成分为丁香酚，丁香酚的纯度为80％。

1.3模型制备与分组治疗

大鼠适应性喂养一周后，雌雄各半随机共取60只采用卵白蛋白OVA致敏法造模处理：腹腔注射1mL OVA悬液(含0.9％氯化钠，20mgOVA，30mg氢氧化铝)，隔日一次，共8次(15d)以基础致敏；第16天开始用10％OVA生理盐水液滴入大鼠两前鼻孔，每侧50μL，每日1次，连续10天以激发过敏性鼻炎。造模成功后，随机为模型组、阳性对照组、丁黄组(实施例1的鼻喷雾剂，丁香酚与黄芪总皂苷复配协同)、丁香酚组(单独使用实施例1的丁香酚组鼻喷雾剂)、黄芪总皂苷组(单独使用实施例1的黄芪总皂苷组鼻喷雾剂)；每组个数10只，另取10只作正常组，同前作腹腔注射及滴鼻，但给予药物皆为生理盐水。

正常组、模型组用生理盐水滴鼻、阳性对照组用曲安奈德喷鼻雾剂滴鼻，中药组分别滴对应中药，各给药组均给50μL，1次/日，连续2周，以移液枪滴加在大鼠两侧鼻孔。

1.4检测指标

1.4.1血清IgE含量检测

大鼠麻醉后腹腔动脉取血，分离血清，按试剂盒说明书进行酶联免疫实验。

1.4.2组织形态学观察

大鼠取血后，迅速切除鼻部并分离出鼻黏膜，中性甲醛固定，常规脱水、透明、浸蜡、包埋、制作3μm厚的石蜡切片，并做HE染色，光学显微镜下观察局部黏膜粘液腺增生及炎症病理情况。

1.4.3免疫组化检测

大鼠鼻粘膜石蜡切片，并按SABC法免疫组化，光学显微镜下观察局部黏膜杯状细胞分泌粘蛋白MUC5AC病理情况。

1.5统计学分析方法

通过SPSS 17.0软件进行数据处理，采用单因素方差分析法(One-Way ANOVA)分析，数据以(均数±标准差)表示。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2结果

2.1各组大鼠血液IgE含量检测结果

表1各处理组大鼠血液IgE含量检测结果

与正常组比较，*P<0.05；与模型组比较，#P<0.05；与阳性对照组对比，◆P<0.05。

表1的结果说明，本发明实施例1的丁黄组鼻喷雾剂在降低过敏主要介质IgE方面优于皮质激素类药物曲安奈德(阳性对照组)，丁香酚与黄芪总皂苷配合，发挥了协同效应，效果超过单用丁香酚和单用黄芪总皂苷。

2.2鼻粘膜病理观察

光学显微镜100倍下观察大鼠鼻粘膜，相较于正常组(图3)，模型组(图4)可见鼻甲黏膜上皮增厚，粘液腺(箭头所指)大量增生，呈现典型的过敏性鼻炎病理学特征。而丁黄组(图5)与阳性对照组(图6)黏膜肿胀充血程度较轻，粘液腺增生明显减少，丁黄组较阳性对照组降低粘液腺效果更好，单独丁香酚组作用(图7)和单独黄芪总皂苷组作用(图8)显示病理改善未及丁黄组。

2.3鼻粘膜分泌型粘蛋白MUC5AC免疫组化病理观察

与正常组鼻粘膜(图9)相比，模型组(图10)棕黄色的粘蛋白MUC5AC阳性反应产物明显增多。与模型组相比，阳性对照组(图12)、黄芪总皂苷组(图14)、丁香酚组(图13)、丁黄组(图11)均能减少MUC5AC阳性反应产物，其中以丁黄组最为明显，说明黄芪总皂苷和丁香酚联用，发挥了协同效应。

效果实施例2人群试验

1、分组

过敏性鼻炎患者40人，分成两组，分别是阳性对照组和丁黄组，各20人。变应性鼻炎的西医诊断标准参考《变应性鼻炎诊断和治疗指南2015》中的诊断标准。

2、药物

阳性对照组使用曲安奈德鼻喷雾剂(江西珍视明药业有限公司，批号191104)，丁黄组使用自制鼻喷雾剂(含丁香酚和黄芪总皂苷，按实施例1方法制作)。

两组患者早中晚喷鼻3次/天，2喷/每个鼻孔。疗程为2周。

3、评价标准

参照《变应性鼻炎的诊治原则和推荐方案(2004年，兰州)》判定治疗疗效。治愈：症状完全消失，症状评分为0分；显效：症状评分减少≥65％；有效：症状评分减少在26％～65％；无效：症状评分减少≤25％。

4、统计学处理

运用SPSS 24.0软件进行统计分析，计量资料采用均数±标准差表示，组间比较采用独立样本t检验，计数资料采用百分比(％)表示，采用卡方检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

5、结果

两组患者临床疗效的比较

丁黄组的起效快，在喷后1～3分钟即能起效；

治疗2周后，丁黄组的总有效率为95％，阳性对照组为85％，特别在治愈率方面，丁黄组明显优于阳性对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2阳性对照组和丁黄组的临床疗效结果

与阳性对照组比较，*P<0.05。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。