芳香烃受体调节剂
阅读说明：本技术 芳香烃受体调节剂 (Aromatic hydrocarbon receptor modulators ) 是由 杨录青 李国栋 张所明 于 2016-12-26 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种式(Ⅰ)所示的芳香烃受体调节剂,及其药学上可接受的盐,式(Ⅰ)中各个基团的定义如说明书中所述。本发明的式(Ⅰ)的化合物可调节AhR活性,可用于抑制癌细胞生长,抑制肿瘤细胞的转移和侵袭。(The invention discloses an aromatic hydrocarbon receptor modulator shown in a formula (I) and pharmaceutically acceptable salts thereof, wherein each group in the formula (I) is defined in the specification. The compound of formula (I) can regulate AhR activity, and can be used for inhibiting cancer cell growth and inhibiting metastasis and invasion of tumor cells.)
本申请是申请号为201611216889.2、申请日为2016年12月26日、发明名称为“芳香烃受体调节剂”的中国发明专利申请的分案申请。
技术领域
本发明属于抗肿瘤化合物
技术领域
，涉及一类具有调节芳香烃受体(AhR)活性的化合物及其药学上可接受的盐。背景技术
由于环境以及生活方式的变化，癌症发病率日趋升高，加上其较高的致死率，严重威胁人类健康。虽然在某些癌症的医学治疗方面取得了显著的进步，靶向药物及免疫治疗大大提高了患者的生存率，但是在过去的20年里，所有癌症患者的总的5年生存率仅提高了月10％。而且由于恶性肿瘤的耐药性或以不受控制方式的转移和快速生长，使得癌症的发现与治疗极其困难。
芳香烃受体(AhR，Aryl hydrocarbon receptor)是一类能够感受外界环境中的异质物(xenobiotic)刺激，并介导毒性反应的胞内转录调控因子。激活后的AhR能够调控许多染色体上基因的表达，并促进对异质物的分解。之前的研究发现该信号还参与一些重要的生物学过程，如信号转导、细胞分化、细胞凋亡等。AhR与免疫调节的关系也是一直以来研究的热点，此前的研究表明AhR能够参与T细胞、巨噬细胞以及DC的分化与功能，另外，在器官移植后的免疫排斥反应中AhR也具有关键的作用。研究发现，利用Dioxin激活小鼠体内的AhR，能够降低小鼠在病毒感染后的存活率，病毒特异性CD8 T细胞的分化与增殖速率也受到了影响。再比如下列化合物中，DIM及其衍生物具有抑制肿瘤活性(Breast CancerRes.Treat.2001,66, 147)，DIM目前处于II期临床研究，用于治疗前列腺癌和子宫颈癌。天然产物ICZ 和FICZ都是AhR激动剂，可以抗哮喘(Chem.Rev.,2002,102,4303；Chem.Rev.,2012, 112,3193；J.Biol.chem.2009,284,2690)。Malassezin(Bioorg.Med.Chem.2001,9,955)。氨基黄酮(aminoflavonone)由NCI开发，处于I期临床。3-羟甲基吲哚 (Indole-3-carbinol)处于II期临床，用做化学保护剂及免疫兴奋剂。Phortress是 PharminoxUniv.of Nottingham开发的AhR激动剂，I期临床用于实体瘤的治疗(Br. J.Cancer,2003,88,599；Mol.Cancer Ther.2004,3,1565)。丹参酮I(Tanshinone I)是一个天然的AhR配体，用于抗肿瘤化学保护剂(Toxicol Appl Pharmacol.2011Apr 1；252(1):18-27)。2-(吲哚乙酰-3-基)呋喃(Food Chem.2011,127,1764–1772)。ITE一个天然的内源性AhR激活剂，具有抗肝癌、前列腺癌、乳腺癌和卵巢癌(Proc.Natl.Acad.Sci.2002，99，14694-9；CN102573470；WO2016040553)。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新的具有AhR活性的如式(Ⅰ)所示的芳香烃受体调节剂，及其药学上可接受的盐，
R'为H、CN、CH2(OH)R0、CmH2m+1、CnH2n-1、CnH2n-3、 其中W0为O或NH；W1为连接键、C(R0)2、 C(R0)2O、C(R0)2OC(R0)2或C(R0)2OC(R0)2C(R0)2；当W为C、S或S(O)时，W2为连接键、O、NR0、CH(N(R0)2)或OCH2C(O)；当W为P(OR0)时，W2为O或NR0；各R0独立地为H、CmH2m+1、CmH2m+1OC(O)、CmH2m+1-rXr、CmH2m+1OC(O)CmH2m、 (环状C4H8NO)CmH2m、CH3(OCH2CH2)u或者CH3(OCH2CH2)uOCH2；
两Ra独立地为H或两Ra共同形成＝O、＝N-CN或＝N-W3-R1，W3为O或NH， R1为H、CmH2m+1、CmH2m+1C(O)、CmH2m+1OC(O)或CmH2m+1S(O)1～2；
A为未取代的或1～3个R取代的C6～C10芳环、或者为未取代的或1～3个R取代的杂1～5个选自N、O和S杂原子的C2～C10杂芳环或杂1～3个选自N、O和S杂原子的含有C＝N的4～7元非芳香杂环；
Q为R，或者为未取代的或1～3个R取代的C6～C10芳环，或者为未取代的或 1～3个R取代的杂1～5个优选1～3个更优选2～3选自N、O和S杂原子的3～10元优选4～7元更优选5～6元杂环优选杂芳环；
R为与C连接的RC或与N连接的RN，其中各个RC独立地为X、CN、R”、- Y-OR”、-Y-C(O)R”、-Y-OC(O)R”、-Y-C(O)OR”、-Y-OC(O)OR”、-Y-NR”2、-Y-C(O)NR”2、 -Y-NR”C(O)R”、-Y-NR”C(O)NR”2、-Y-OC(O)NR”2、-Y-NR”C(O)OR”、-Y-S(O)1～2R”、 -Y-S(O)1～2NR”2或-Y-NR”S(O)1～ 2R”；各个RN独立地为CN、R”、-Y-OR”、-Y-C(O)R”、 -Y-OC(O)R”、-Y-C(O)OR”、-Y-OC(O)OR”、-Y-NR”2、-Y-C(O)NR”2、-Y-NR”C(O)R”、 -Y-NR”C(O)NR”2、-Y-OC(O)NR”2、-Y-NR”C(O)OR”、-Y-S(O)1～2R”、-Y-S(O)1～2NR”2或-Y-NR”S(O)1～2R”；
R”为H、D、CmH2m+1、CnH2n-1、CnH2n-3、CmH2m+1-rXr、CnH2n-1-sXs或CnH2n-3-tXt；
Y为连接键、-CmH2m-、-CnH2n-2-、-CnH2n-4-、-CmH2m-iXi-、-CnH2n-2-jXj-或-CnH2n-4-kXk-；
m＝1～8，n＝2～8，u＝1～5，r≤2m+1，s≤2n-1，t≤2n-3，i≤2m，j≤2n-2，k≤2n-4，X 为卤素；优选地，m＝1～5更优选＝1～3，n＝2～6更优选＝2～4，u＝1～4更优选1～3，X为F、Cl或Br。
其中，(环状C4H8NO)CmH2m中的环状C4H8NO为六元环，N和O处于间位或对位，优选N取代吗啡啉。
CmH2m+1、CmH2m+1-rXr、-CmH2m-和-CmH2m-iXi-可以是直链的也可以是含有支链的饱和烃基，CnH2n-1、CnH2n-1-sXs、-CnH2n-2-和-CnH2n-2-jXj-可以是直链的也可以是含有支链的烯烃基，CnH2n-3、CnH2n-3-tXt、-CnH2n-4-和-CnH2n-4-kXk可以是直链的也可以是含有支链的炔烃基。
当n＝3～8时，CnH2n-1、CnH2n-1-sXs、-CnH2n-2-和-CnH2n-2-jXj-还可以是环烷烃基。当n＝5～8时，CnH2n-3、CnH2n-3-tXt、-CnH2n-4-和-CnH2n-4-kXk还可以是双烯烃基或环状烯烃基。
本发明的一些较佳实施例中，A为此时式(Ⅰ)变为式(Ⅰ1)，
式(Ⅰ1)中，A1、A2和A3三者之一为O、S或N(R)，其他二者分别独立地为C(R) 或N，具体分三种情形，即若A1为O、S或N(R)，A2和A3分别独立地为C(R)或 N；若A2为O、S或N(R)，A1和A3分别独立地为C(R)或N；若A3为O、S或N(R)， A1和A2分别独立地为C(R)或N。
本发明在式(Ⅰ1)的基础上进一步优选的，A1、A2和A3三者之一为O、S或N(R)，其他二者分别独立地为N，此时A1、A2和A3三者均为杂原子。而在此基础上更进一步优选的，A3固定为N，此时式(Ⅰ1)变为式(Ⅰa)，
式(Ⅰa)中，A1为O、S或N(R)，A2为N；或者A2为O、S或N(R)，A1为N。
本发明在式(Ⅰ1)的基础上还可进一步优选的，A2为CH，此时式(Ⅰ1)变为式(Ⅰ b)，
式(Ⅰb)中，A1为N或C(R)，A3为O、S或N(R)；或者A1为O、S或N(R)， A3为N或C(R)。
本发明在式(Ⅰ1)的基础上还可进一步优选的，A1为N，A3为C(R)，两Ra共同形成＝N-W3-R1或者独立地为H，此时式(Ⅰ1)变为式(Ⅰc)或(Ⅰd)，
式(Ⅰc)和(Ⅰd)中，A2为O、S或N(R)。
本发明在式(Ⅰ1)的基础上还可进一步优选的，A1为N，A3为C(R)，R'为此时式(Ⅰ1)变为式(Ⅰe)，
式(Ⅰe)中，A2为O、S或N(R)。
本发明在式(Ⅰ1)的基础上还可进一步优选的，A1为N，A3为C(R)，R'为此时式(Ⅰ1)变为式(Ⅰf)，
式(Ⅰf)中A2为O、S或N(R)，各R0独立地为H或Ac。
本发明的一些较佳实施例中，Q为B1、B2、B3和B4四者之一为O、 S或N(R)，其他三者分别独立地为C(R)或N，即
B1为O、S或N(R)，B2、B3和B4分别独立地为C(R)或N；
或者B2为O、S或N(R)，B1、B3和B4分别独立地为C(R)或N；
或者B3为O、S或N(R)，B1、B2和B4分别独立地为C(R)或N；
或者B4为O、S或N(R)，B1、B2和B3分别独立地为C(R)或N。
本发明的一些较佳实施例中，Q为B5～B9为C(R)，即Q为苯环；或者B5～B9之一或之二为N，其他的分别独立地为C(R)，即
Q还可为吡啶环，此时B5为N，B6～B9分别独立地为C(R)；或B6为N，B5、 B7～B9分别独立地为C(R)；或B7为N，B5、B6、B8和B9分别独立地为C(R)；
Q还可为哒嗪环，此时B5、B6为N，B7～B9分别独立地为C(R)；或B6和B7为 N，B5、B8和B9分别独立地为C(R)；
Q还可为嘧啶环，此时B5和B7为N，B6、B8和B9分别独立地为C(R)；
Q还可为吡嗪环，此时B5和B8为N，B6、B7和B9分别独立地为C(R)。
本发明在式(Ⅰ1)的基础上还可进一步优选的，A1为N，A2为S，A3为CH，Q 为5元杂芳环，此时式(Ⅰ)变为式(Ⅰg)
其中，B2、B3或B4之一为O、S或N(R)，其他为C(R)或N，即
若B2为O、S或N(R)，B3和B4分别独立地为C(R)或N；
若B3为O、S或N(R)，B2和B4分别独立地为C(R)或N；
若B4为O、S或N(R)，B2和B3分别独立地为C(R)或N。
本发明在式(Ⅰ1)的基础上还可进一步优选的，A1为N，A2为S，A3为CH，Q 为5元杂环，此时式(Ⅰ)变为式(Ⅰh)
B4为O、S或N(R)。
本发明的一些较佳实施例中，A为杂有N和S的非芳香杂环，Q为R，此时式 (Ⅰ)变为式(Ⅰ2)
本发明的一些较佳实施例中，A为此时式(Ⅰ)变为式(Ⅰ3)，
式(Ⅰ3)中，Z1～Z5为C(Q)，即A为苯环；
或者，Z1～Z5之一或之二为N，其他的分别独立地为C(Q)，即
A还可为吡啶环，此时Z1为N，Z2～Z5分别独立地为C(Q)；或Z2为N，Z1、 Z3～Z5分别独立地为C(Q)；或Z3为N，Z1、Z2、Z4和Z5分别独立地为C(Q)；
A还可为哒嗪环，此时Z1和Z2为N，Z3～Z5分别独立地为C(Q)；或Z2和Z3为 N，Z1、Z4和Z5分别独立地为C(Q)；
A还可为嘧啶环，此时Z1和Z3为N，Z2、Z4和Z5分别独立地为C(Q)；
A还可为哌嗪环，此时Z1和Z4为N，Z2、Z3和Z5分别独立地为C(Q)；
或者，Z1～Z5中相邻的两个为C(Q)一起共同形成5～6元碳环或杂1～3个选自 N、O和S杂原子的5～6元杂环，其他三者分别独立地为C(Q)，或者其他三者之二分别独立地为C(Q)剩下一个为N，或者其他三者之一为C(Q)剩下两个为N；按成环的位置分类进行描述具体分以下两种情形：当Z1和Z2为C(Q)并形成5～6元碳环或杂1～3个杂原子选自N、O和S杂原子的5～6元杂环时，Z3～Z5分别独立地为 C(Q)，或者Z3和Z4分别独立地为C(Q)而Z5为N，或者Z3和Z5分别独立地为C(Q) 而Z4为N，或者Z4和Z5分别独立地为C(Q)而Z3为N，或者Z3为C(Q)而Z4和Z5为N，或者Z4为C(Q)而Z3和Z5为N，或者Z5为C(Q)而Z3和Z4为N；当Z2和Z3为C(Q)并形成5～6元碳环或杂1～3个杂原子选自N、O和S杂原子的5～6元杂环时，Z1、Z4和Z5分别独立地为C(Q)，或者Z1和Z4分别独立地为C(Q)而Z5为N，或者Z1和Z5分别独立地为C(Q)而Z4为N，或者Z4和Z5分别独立地为C(Q)而Z1为N，或者Z1为C(Q)而Z4和Z5为N，或者Z4为C(Q)而Z1和Z5为N，或者Z5为 C(Q)而Z1和Z4为N。
本发明的一些较佳实施例中，R'为W1为连接键、C(R0)2O或 C(R0)2OC(R0)2；W2为O或CH(N(R0)2)R0。
在具体的实施例中，各个独立的官能团或取代基可在描述的范围内任意选择以及组合，比如
式(Ⅰ)中R'可为下列取代基之一：
式(Ⅰ1)中的可为下列取代基之一：
式(Ⅰb)中的可为下列取代基之一：
式(Ⅰc)～(Ⅰf)中的可为下列取代基之一：
满足式(Ⅰa)的化合物可为
满足式(Ⅰb)的化合物可为
满足式(Ⅰc)的化合物可为
满足式(Ⅰd)的化合物可为
满足式(Ⅰe)的化合物可为
满足式(Ⅰf)的化合物可为
满足式(Ⅰg)的化合物可为
满足式(Ⅰh)的化合物可为
满足式(Ⅰ1)的化合物还可为
满足式(Ⅰ2)的化合物可为
满足式(Ⅰ3)的化合物可为
本发明式(Ⅰ)所示的芳香烃受体调节剂分为如下5类化合物：
式(ⅠA)(R'为H时)、式(ⅠB)(R'不为H时)、式(ⅠC)(R'为H时)、式(ⅠD)(R'不为H时)、式(ⅠE)(R'为H时)式(ⅠF)(R'不为H)。
其中，式(ⅠA)～式(ⅠF)的合成流程如下所示：
步骤一，原料S(吲哚或者吲哚衍生物)和酰卤化合物(ClC(O)AQ)、醇类或烯类化合物经傅氏反应得到吲哚3位取代的目标化合物IA；
步骤二，目标化合物IA中与R'X或R'OH反应得到目标化合物IB；
步骤三，目标化合物IA或目标化合物IB与H2NW3R1反应得到目标化合物IC或目标化合物ID；
步骤四，目标化合物IA或目标化合物IB经过还原反应得到目标化合物IE或目标化合物IF。
本发明的积极进步效果：本发明的式(Ⅰ)的化合物可结合至AhR，调控由AhR 控制的那些功能和信号通路，从而影响着癌细胞的生长与增殖以及肿瘤细胞的侵袭力。式(Ⅰ)所示的化合物的药物组合物能够用作AhR抑制剂或非组成型AhR激动剂(non-constitutiveAhR agonists)，可用于抑制癌细胞生长，抑制肿瘤细胞的转移和侵袭。
具体实施方式
实施例1化合物1-1和化合物1-2
中间体1a的合成
向Boc-L-缬氨酸(0.8g,3.68mmol)的二氯甲烷和水(12mL/12mL)的悬浮液中，在搅拌状态下加入碳酸氢钠(1.546g,18.411mmol)及四丁基溴化铵(0.237g,0.736mmol)，冷却至0℃以下，将氯甲基氯磺酸酯(0.91g,5.52mmol)慢慢的滴加到反应液中，然后搅拌过夜。反应液用二氯甲烷萃取2次，有机相用水、饱和食盐水各洗1次，再用无水硫酸钠干燥并减压浓缩得粗品，粗品经硅胶柱层析(PE/EA＝20/1)纯化，得油状的中间体1a(0.97g,收率99％)。
化合物1-1的合成
向原料S1(1g,3.763mmol)的二甲基甲酰胺(DMF)(10mL)溶液中在搅拌状态下分批次加入氢化钠(0.165g,4.139mmol)，然后升温至40℃反应1小时，降至室温，慢慢滴加中间体1a(0.97g,3.6mmol)的DMF(2mL)溶液，室温搅拌过夜。将反应液倒入 60mL的冰水中，过滤得粗品，粗品用硅胶柱层析(PE/EA＝20/1～10/1)纯化得到化合物1-1(0.5g,收率28％)。MS(ESI)m/z:516[M+1]+。
化合物1-2的合成
将化合物1-1(0.5g,0.97mmol)溶于二氧六环(2mL)中，滴加氯化氢二氧六环溶液(5mL)，室温反应过夜，过滤得到化合物1-2(0.24g,收率55％)。1H NMR(400MHz, CDCl3):δ9.24(s,1H),8.94(s,1H),8.41(brs,3H),8.35(d,J＝7.6Hz,1H),7.81(d,J＝7.6Hz, 1H),7.39～7.47(m,2H),6.63(d,J＝10.8Hz,1H),6.58(d,J＝10.8Hz,1H),4.02(d,J＝7.6Hz,1H),3.94(s,3H),2.07～2.12(m,1H),0.84(d,J＝7.2Hz,1H),0.80(d,J＝7.2Hz,1H)。 MS(ESI)m/z:416[M+1]+。
实施例2化合物2-1和化合物2-2
中间体2a的合成
方法同中间体1a的合成，由Boc-L-叔亮氨酸(2g,8.647mmol)制得油状的中间体2a(2.3g,收率95％)。
化合物2-1的合成
方法同化合物1-1的合成，由中间体2a(1g,3.6mmol)制得化合物2-1(1.4g,收率74％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.24(s,1H),8.50～8.52(m,1H),8.46(s,1H), 7.57～7.60(m,1H),7.39～7.43(m,1H),6.42(d,J＝11.2Hz,1H),6.17(d,J＝11.2Hz,1H), 5.05(d,J＝9.2Hz,1H),4.10(d,J＝8.4Hz,1H),4.04(s,3H),1.42(s,9H),0.83(s,9H)。 MS(ESI)m/z:530[M+1]+。
化合物2-2的合成
方法同化合物1-2的合成，由化合物2-1(1.4g,2.6mmol)制得化合物2-2(0.85g,收率70％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.24(s,1H),8.94(s,1H),8.36(d,J＝7.2Hz,1H),8.27(brs,3H),7.82(d,J＝7.6Hz,1H),7.39～7.47(m,2H),6.61(s,1H),3.93(s,3H),3.86(s, 3H),0.89(s,9H)。MS(ESI)m/z:430[M+1]+。
实施例3化合物3
中间体3a的合成
称取羟基乙酸甲酯(3g,33.3mmol)，加入二氯甲烷(50mL)和多聚甲醛(1.3g,43.3mmol)，降温到-20℃以下，持续通入现制的氯化氢气体，保持-20℃反应30分钟，撤去氯化氢气体，加入无水硫酸镁和无水硫酸钠，继续保温反应1小时，室温过夜。过滤除去固体，母液室温下浓缩至干后经硅胶柱层析纯化得到中间体3a(1.2g, 收率26％)。
化合物3的合成
方法同化合物1-1的合成，由原料S1(286mg,1mmol)及中间体3a(500mg, 3.6mmol)制得淡黄色固体化合物3(280mg,收率74％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.19(s,1H),8.55～8.56(m,1H),8.45(s,1H),7.63～7.65(m,1H),7.41～7.45(m,2H),5.82(s, 2H),4.12(s,2H),4.03(s,3H),3.77(s,3H)。MS(ESI)m/z:389[M+1]+。
实施例4化合物4-1和化合物4-2
化合物4-1的合成
向Boc-L-缬氨酸(2.17g,10mmol)的DMF(20mL)溶液中加入原料S1(2.86g,10mmol)，搅拌下加入HATU(4.56g,12mmol)及DIEA(2.6g,20mmol)，搅拌过夜。反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取2次，有机相用水、饱和盐水各洗涤1次，再用无水硫酸钠干燥并减压浓缩得粗品，粗品经硅胶柱层析(PE/EA＝4/1)纯化得到化合物 4-1(3.01g,收率62％)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ9.75(s,1H),8.48～8.55(m,3H), 7.47～7.52(m,2H),5.44(d,J＝8.8Hz,1H),5.27(dd,J＝4.0,8.8Hz,1H),4.05(s,3H), 2.37～2.42(m,1H),1.48(s,9H),1.25(d,J＝6.8Hz,3H),1.01(d,J＝6.4Hz,3H)。MS(ESI) m/z:508[M+23]+。
化合物4-2的合成
方法同化合物1-2的合成，由化合物4-1(486mg,1mmol)制得化合物4-2(348mg, 收率77％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.56(s,1H),9.04(s,1H),8.81(brs,3H), 8.46～8.48(m,1H),8.35～8.37(s,1H),7.54～7.60(m,2H),5.01(d,J＝4.8Hz,1H),3.99(s,3H), 2.42～2.47(m,1H),1.17(d,J＝6.8Hz,3H),1.07(d,J＝6.8Hz,3H)。MS(ESI)m/z:386[M+1] +。
实施例5化合物5
中间体5a的合成
三乙二醇单甲醚(2.0g,12.2mmol)溶解在四氢呋喃(20mL)中，搅拌下加入三光气(1.8g,6.1mmol)，冰浴降温至零度，缓慢滴入吡啶(1.5g,19.0mmol)，室温反应1小时。过滤，母液减压浓缩得到无色液体中间体5a(2.1g,收率75.9％)。
化合物5的合成
原料S-1(2.0g,7.0mmol)溶解在四氢呋喃(80ml)中，滴入三乙胺(1.5g,14.9mmol)，冰浴降温至零度，滴入中间体5-1(2.1g,9.3mmol)的二氯甲烷溶液(20mL)，室温反应 1小时。倒入冰水中，二氯甲烷萃取，有机相用饱和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，粗品用硅胶柱层析(PE/EA＝3/1)纯化得白色固体化合物5(2.5g,收率75.8％)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ9.56(s,1H),8.49(s,2H),8.33～8.24(m,1H),7.51～7.39(m, 2H),4.75～4.67(m,2H),4.03(s,3H),4.01～3.94(m,2H),3.80(dd,J＝5.9,3.4Hz,2H), 3.74～3.69(m,2H),3.67～3.62(m,2H),3.53～3.48(m,2H),3.35(s,3H)。LCMS(ESI) m/z:477.2[M+1]+。
实施例6化合物6
中间体6a的合成
将三乙二醇单甲醚(10g,60.9mmol)溶于四氢呋喃(100mL)中，0℃下分批加入钠氢(3.2g,60％含量,79.17mmol)，加完后室温搅拌1h，滴入溴乙酸乙酯(20.1g,122mmol)，室温反应3h，直接向反应液中加入水(100mL)，用二氯甲烷萃取，有机相用无水硫酸钠干燥并减压浓缩至干。然后加水(100mL)和氢氧化钠固体(3g,73mmol)，室温搅拌1h，用乙酸乙酯萃取2次，水相用稀盐酸调节至pH＝2～3，再用二氯甲烷/异丙醇(V/V＝10:1) 混合溶剂萃取5次，有机相用无水硫酸钠干燥并减压浓缩干得粗品，粗品经硅胶柱层析 (DCM:CH3OH＝100:1～20:1)纯化得化合物6a(10g,收率74％)。
中间体6b的合成
将化合物6a(2g,8.99mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，加入碳酸氢钠(3.1g,36mmol)、四丁基溴化铵(289mg,0.899mmol)和水(20mL)。降温到0℃以下，滴入氯甲基氯磺酸酯 (1.48g，8.99mmol)的二氯甲烷溶液(10mL)，室温搅拌过夜，静置分层，水相用二氯甲烷萃取2次，有机相用无水硫酸钠干燥并减压浓缩干得粗品，粗品经硅胶柱层析 (DCM:CH3OH＝50：1)纯化得油状液体6b(300mg,收率12.3％)。LCMS(ESI)m/z：271 [M+1]+。
化合物6的合成
将原料S1(1g,3.49mmol)溶于DMF(15mL)中，0℃下加入氢化钠(153mg,60％含量，3.84mmol)，加完后搅拌10min，升温至50℃搅拌1h，冷却到室温，加入化合物6b(0.944mg，3.49mmol)室温反应4h，加入水和二氯甲烷，并用二氯甲烷萃取3次，有机相用无水硫酸钠干燥并减压浓缩干得粗品，粗品经硅胶柱层析(CH3OH:DCM＝0-2％)纯化得化合物 6(650mg,收率35.8％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.25(s,1H),8.52～8.54(m,1H),8.46(s, 1H),7.59～7.61(m,1H),7.41～7.44(m,2H),6.32(s,2H),4.21(s,2H),4.04(s,3H),3.70～3.72(m,2H),3.65～3.68(m,2H),3.60～3.64(m,6H),3.52～3.54(m,2H),3.37(s,3H)。LCMS(ESI)m/z: 521[M+1]+。
实施例7化合物7
中间体7a的合成
方法同6a，起始原料为中间体6a。收率75％。LCMS(ESI)m/z:337.2[M+1]+。
中间体7b的合成
将中间体7a(3.4g,10mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(5mL)，室温搅拌过夜，减压浓缩至干，粗品经硅胶柱层析(CH3OH:DCM＝0-2％)纯化得油状物 7b(2.6g,收率76％)。LCMS(ESI)m/z:281.2[M+1]+。
化合物7
方法同化合物6。收率55％。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.20(s,1H),8.50～8.52(m,1H),8.44(s,1H),7.53～7.56(m,1H),7.40～7.42(m,2H),6.31(s,2H),4.70(s,2),4.25(s,2H), 4.02(s,3H),3.63～3.71(m,10H),3.53～3.55(m,2H),3.37(s,3H)。LCMS(ESI)m/z:579.2 [M+1]+。
实施例8化合物8
中间体8a的合成
将原料S2(188mg,1mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，滴加1滴DMF，冷却到0- 5℃，滴加草酰氯(151mg,1.2mmol)，移去冰浴，室温搅拌1小时。减压浓缩至干，加入二氯甲烷(20mL)溶解，减压浓缩至干得中间体8a，直接用于下一步反应。
化合物8的合成
将中间体8a(1mmol)的二氯甲烷(30mL)溶液滴入到含有无水三氯化铝(164mg,1.2mmol)的二氯甲烷(30mL)悬浊液中，搅拌2小时，将吲哚(143mg,1.2mmol)的二氯甲烷(30mL)溶液慢慢滴入上述反应液中，反应过夜。加入饱和碳酸氢钠溶液洗涤，有机相用饱和盐水洗涤，在用无水硫酸钠干燥并减压浓缩得粗品，粗品经硅胶柱层析(PE/EA＝4/1)纯化得浅黄色固体化合物8(120mg,收率42％)。1H NMR(400MHz, DMSO-d6):δ12.4(brs,1H),9.05(s,1H),8.28～8.30(m,1H),7.62～7.64(m,1H),7.32～7.37 (m,2H),4.00(s,3H)。MS(ESI)m/z:288.0[M+1]+。
实施例9～18化合物9～18
化合物9～18制备方法同实施例8，分别使用对应的酸代替原料S-2，其他原料同实施例8。
化合物9：MS(ESI)m/z:271.1[M+1]+。
化合物10：1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ8.79(brs,1H),8.41～8.43(m,1H),8.24(s,1H), 7.98(d,J＝2.8Hz,1H),7.48～7.50(m,1H),7.31～7.37(m,2H),3.37～3.43(m,1H),1.49(d,J ＝6.8Hz,6H)。
化合物11：1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.49(brs,1H),9.09(s,1H),8.70(s,1H),8.29～8.34(m,1H),7.58～7.60(m,1H),7.29～7.34(m,2H),3.98(s,3H)。
化合物12：1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.73(brs,1H),8.50～8.35(m,1H),7.83(d,J＝3.1Hz,1H),7.55～7.41(m,1H),7.43～7.31(m,2H),6.96(d,J＝4.1Hz,1H),6.69(d,J＝4.2 Hz,1H),4.25(s,3H),3.90(s,3H)。
化合物13：1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.56(brs,1H),9.06(s,1H),7.94(dd, J＝2.8,9.6Hz,1H),7.65(dd,J＝4.8,8.8Hz,1H),7.20(dt,J＝2.8,9.6Hz,1H),4.00(s,3H)。MS(ESI)m/z:306.0[M+1]+。
化合物14：1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.43(brs,1H),8.97(s,1H),7.9(d, J＝2.4Hz,1H),7.52(d,J＝8.8Hz,1H),6.97(dd,J＝2.4,8.8Hz,1H),3.99(s,3H),3.83(s,3H)。MS(ESI)m/z:318.0[M+1]+。
化合物15：1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.07(brs,1H),8.41～8.44(m,1H),8.37(s,1H),8.11(s,1H),7.95(d,J＝2.0Hz,1H),7.48～7.50(m,1H),7.34～7.37(m,2H),3.94(s,3H)。 MS(ESI)m/z:286.0[M+1]+。
化合物16：1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.22(brs,1H),9.10(s,1H), 8.39～8.42(m,1H),8.20～8.30(m,3H),7.53～7.57(m,1),7.26～7.30(m,2H),3.97(s,3H)。MS(ESI)m/z:281.0[M+1]+。
化合物17：1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.17(brs,1H),8.43～8.47(m,1H),8.30(brs,2H),7.70(s,1H),7.54～7.56(m,2H),7.38～7.40(m,2H),4.09(s,3H)。MS(ESI)m/z:286.0[M+1]+。
化合物18：1H NMR(400MHz,DMSO):δ12.20(brs,1H),9.23～9.24(m,1H),8.76(s,1H),8.51(dd,J＝8.0,J＝2.0,1H),8.35～8.52(m,1H),8.14(dd,J＝8.4,J＝0.8,1H),7.53～7.56(m,1H),7.25～7.31(m,2H),3.95(s,3H)。MS(ESI)m/z:281[M+1]+。
实施例19化合物19-1、19-2
中间体19a的合成
将5-甲氧基吲哚(10g,68mmol)加入250mL的三口瓶中，加入甲基叔丁基醚 (75mL)溶解，降温到-10℃，慢慢滴入草酰氯(9.5g,74mmol)，控制滴入温度低于-5℃，滴完后继续低温搅拌1h，撤去冰浴室温搅拌30分钟，加入石油醚100mL，搅拌30 分钟，过滤，滤饼用石油醚和甲基叔丁基醚混合液洗涤，干燥得中间体19a(15.5g, 收率97％)。LCMS(ESI)m/z：234[M+1]+(将产物用甲醇稀释，酰氯转化成甲酯)。
中间体19b的合成
在0℃下，将中间体19a(15.5g)分批加入到52.3g浓氨水(25％)和100mL乙醇的混合物中，加毕，在10℃反应2h。反应混合物倒入100mL冰水，搅拌30分钟，过滤，滤饼烘干得到浅灰色固体，即中间体19b(10.5g)。LCMS(ESI)m/z：219[M+1]+。
中间体19c的合成
将中间体19b(10g,45.8mmol)悬浮在150mL乙酸乙酯中，加入吡啶(10.87g,137.5mmol)，降温至10℃以下，慢慢滴入三氟乙酸酐(14.43g,68.7mmol)，约30分钟滴完，滴毕，继续10℃反应2h。反应液倒入100mL冰水中，用乙酸乙酯萃取2 次，有机相合并，用饱和碳酸氢钠洗涤2次，0.5N的稀盐酸洗涤2次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品固体8.8g，用乙酸乙酯：二氯甲烷＝5:1的混合溶剂洗涤，过滤得中间体19c(7.2g,收率78％)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ12.76(bis, 1H),8.53(s,1H)，7.48～7.51(m,2H)，6.99(dd,J＝8.8Hz,J＝2.4Hz,1H),3.80(s,3H)。 MS(ESI)m/z:201.0[M+1]+。
化合物19-1的合成
将中间体19c(2g,10mmol)溶解在N,N’-二甲基酰胺(15mL)中，加入L-半胱氨酸甲酯盐酸盐(1.72g,10mmol)，DBU(152mg,1mmol)，升温到40℃反应3h。冷却到室温，将反应液滴入80mL冰稀盐酸(含0.1mmol HCl)中，搅拌20分钟，过滤，滤饼压干，用少量二氯甲烷洗涤，干燥得中间体19-1(3.1g,收率97％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.78(brs,1H),8.71(d,J＝2.8Hz,1H),7.97(d,J＝2.8Hz,1H), 7.33(d,J＝8.8Hz,1H),6.97(dd,J＝8.8Hz,J＝2.8Hz，1H),5.48(t，J＝8.8Hz,1H),3.92(s, 3H),3.89(t,3H),3.61(d,J＝9.6Hz,2H)。MS(ESI)m/z:319.0[M+1]+。
化合物19-2的合成
将化合物19-1(2.6g,8.16mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中，在80℃下鼓空气泡反应12h。将反应液滴入到冰水中搅拌20分钟，过滤，滤饼水洗，干燥得到化合物19-2(2.5g，收率96)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.23(d,J＝3.6Hz, 1H),9.02(brs,1H),8.44(s,1H),8.05(d,J＝2.4Hz,1H),7.37(d,J＝8.8Hz,1H),6.99(dd, J＝8.8Hz,J＝2.4Hz,1H),4.03(s,3H),3.95(s,3H)。MS(ESI)m/z:317.0[M+1]+。
实施例20化合物20-1、20-2
化合物20-1和化合物20-2的合成路线同实施例19，起始原料用5-氟吲哚代替 5-甲氧基吲哚，相关结构鉴定数据如下，
中间体20b:MS(ESI)m/z:207.2[M+1]+。
中间体20c:1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.94(brs,1H),8.68(s,1H),7.70(dd, J＝2.4,9.2Hz,1H),7.62(dd,J＝4.4,8.8Hz,1H),7.24(dt,J＝2.4,9.2Hz,1H)。MS(ESI) m/z:189[M+1]+。
化合物20-1:1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.42(brs,1H),8.69(d,J＝3.2Hz, 1H),7.87(dd,J＝2.4,8.8Hz,1H),7.59(dd,J＝4.4,8.8Hz,1H),7.16(dt,J＝2.4,9.2Hz, 1H),5.67(dd,J＝8.4,10.0Hz,1H),3.92(s,3H),3.68(dd,J＝11.2,10.0Hz,1H),3.55(dd, J＝8.4,11.2Hz,1H)。MS(ESI)m/z:307[M+1]+。
化合物20-2:1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.48(brs,1H),9.13(s,1H),8.89(s,1H),7.97(dd,J＝2.4,9.6Hz,1H),7.62(dd,J＝4.4,8.8Hz,1H),7.17(dt,J＝2.4,9.2Hz,1H),3.92(s,3H)。MS(ESI)m/z:305[M+1]+。
实施例21化合物21
化合物21的合成
将1-溴-3-甲基-2-丁酮(0.8g,4.89mmol)溶于乙醇(25mL)中，搅拌下加入原料 S3(1.0g,4.89mmol)，加热至80℃，反应2h，冷却至室温，过滤并乙醇洗涤得化合物21(0.6g,收率45％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.22(brs,1H),9.10(d, J＝3.2Hz,1H),8.31～8.33(m,1H),7.77(s,1H),7.57～7.59(m,1H),7.25～7.31(m,2H), 3.16～3.23(m,1H),1.36(d,J＝6.8Hz,6H)。
实施例22化合物22
化合物22的合成同化合物21的合成,由原料S3(1.0g,4.89mmol)制得化合物 22(1.2g，收率80％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.30(brs,1H),9.30(s,1H), 8.69(dd,J＝1.2,4.2Hz,1H),8.65(s,1H),8.34～8.36(m,1H),8.32(d,J＝1.2Hz,1H), 8.01(dt,J＝2.0,7.2Hz,1H),7.60～7.62(m,1H),7.44～7.47(m,1H),7.30～7.34(m,2H)。
实施例23化合物23
中间体23a的合成
将原料S4(4.0g,23.5mmol)溶于甲醇(50mL)中，降温到0℃以下，持续通入干燥的氯化氢气体，反应8小时，停止通气，密封搅拌过夜，过滤得到5.4g黄色固体，即中间体23a，直接用于后续反应。
中间体23b的合成
将中间体23a(5.4g,19.6mmol)溶于乙腈(15mL)中，加入2,3-二氨基丙酸甲酯盐酸盐(3.7g,19.6mmol)，滴入三乙胺(10g,98mmol)，回流反应5h，减压除去溶剂，加入水和二氯甲烷溶解、分层，水相用二氯甲烷萃取2次，有机相合并后用饱和食盐水洗涤，再用无水硫酸钠干燥并减压浓缩得粗品，粗品经硅胶柱层析纯化得中间体 23b(2.4g,收率45％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.19(s,1H),8.91(d,J＝2.8Hz,1H), 8.44(dd,J＝6.8Hz,J＝1.6Hz,1H),7.41～7.43(m,1H),7.30～7.36(m,2H),4.67(brs,1H), 4.18(d,J＝7.6Hz,2H),3.82(s,3H),1.87(brs,1H)。MS(ESI)m/z:272[M+1]+。
化合物23的合成
将中间体23b(1.2g,4.42mmol)溶解在DMF(20mL)中，加氢氧化钠(530mg,13.3mmol)，60℃下通入空气搅拌反应3h，冷却，倒入冰水中，用乙酸乙酯萃取三次，有机相用饱和盐水洗涤，再用无水硫酸钠干燥并减压浓缩得粗品，粗品用 PE:EA＝2:1混合溶剂洗涤得到化合物23(960mg,收率81％)。1H NMR(400MHz, DMSO):δ13.69(brs,1H),12.20(s,1H),9.15(s,1H),8.32～8.36(m,1H),8.03(s,1H), 7.55～7.59(m,1H),7.24～7.30(m,2H),3.83(s,3H)。MS(ESI)m/z:270[M+1]+。
实施例24化合物24
中间体24a的合成
将原料S1(2.86g,10mmol)溶于混合溶剂THF/MeOH/H2O(16/15/15mL)中，室温下搅拌过夜。反应液用4N的盐酸调节至pH＝4-5，然后过滤，滤饼用水洗涤并真空干燥得中间体24a(2.6g,收率96％)。MS(ESI)m/z:271[M-1]-。
中间体24b的合成
将中间体24a(1.36g,5mmol)溶于THF(20mL)中，加2滴DMF，滴加草酰氯 (755mg,6mmol)，室温反应2h，减压浓缩至干后溶于THF(20mL)中，然后滴加到80％的水合肼(2mL,57mmol)中，搅拌过夜，反应液减压浓缩至5mL后过滤，滤饼用THF 洗涤，干燥得中间体24b(1.38g,收率97％)。
化合物24的合成
将中间体24b(1.0g,3.5mmol)、对甲苯磺酸一水合物(20mg)和原甲酸三甲酯(5mL)的混合物加热至80℃，搅拌过夜，倒入冰水中，过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤，干燥得化合物24(280mg,收率27％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.45(brs,1H), 9.43(s,1H),9.15(s,1H),8.95(s,1H),8.32(m,1H),7.61(m,1H),7.32(m,2H)。MS(ESI) m/z:297[M+1]+。
实施例25化合物25-1、25-2
化合物25-1和25-2的合成
将原料S1(1.0g,3.5mmol)溶于吡啶(15mL)中，加入甲氧基胺盐酸盐(1.75g,21mmol)，加热至90℃反应24h，冷却至室温，加水稀释，用乙酸乙酯萃取2次，有机相用1N的盐酸洗涤2次，饱和盐水洗涤，再用无水硫酸钠干燥并减压浓缩得粗品，粗品用硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝20:1～5:17)纯化得化合物25-1(410mg) 和化合物25-2(300mg)，收率64.3％。
化合物25-1：1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.54(d,J＝3.2Hz,1H),8.51(brs,1H),8.42(s,1H),8.37～8.39(m,1H),7.41～7.43(m,1H),7.25～7.29(m,2H),4.32(s,3H),4.00(s, 3H)。MS(ESI)m/z:316[M+1]+。
化合物25-2：1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.94(bis,1H),8.24(s,1H),7.80(d, J＝2.8Hz,1H),7.40(d,J＝7.6Hz,1H),7.29～7.31(m,1H),7.14～7.18(m,1H),7.09～7.13(m,1H),4.16(s,3H),3.92(s,3H)。MS(ESI)m/z:316[M+1]+。
实施例26化合物26-1、26-2
化合物26-1和26-2的合成
方法同化合物25-1和25-2的合成,由原料S1(324mg,1.13mmol)和盐酸羟胺(696mg, 10mmol)制得化合物26-1和26-2(149mg,收率44％)。
化合物26-1：1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.00(s,1H),8.26(s,1H),8.19(d,J＝8.0Hz， 1H),7.80(d,J＝2.8Hz，1H),7.47(d,J＝8.0Hz，1H),7.09～7.19(m,2H),3.93(s,3H)。MS(ESI) m/z:302[M+1]+。
化合物26-2：1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.58(s,1H),8.45(s,1H),8.27(d,J＝3.2Hz， 1H),7.40(dd,J＝7.2Hz，J＝1.6Hz，1H),7.33(d,J＝8.0Hz，1H),7.20～7.28(m，2H),4.01(s, 3H)。MS(ESI)m/z:302[M+1]+。
实施例27化合物27
向中间体24a(1.36g,5mmol)的DMF(20mL)溶液中，加入甘氨酸甲酯盐酸盐(753mg,6mmol)及HATU(2.26g,6mmol)及DIEA(2.3g,10mmol)，室温搅拌2小时，反应混合物倒入100mL冰水中，过滤，滤饼经乙酸乙酯洗涤后干燥得化合物 27(1.45g,收率84.5％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.40(d,J＝2.0Hz,1H),9.43(d, J＝3.2Hz,1H),9.29(t,J＝2.4Hz,1H),8.66(s,1H),8.32～8.35(m,1H),7.58～7.60(m,1H), 7.27～7.34(m,2H),4.13(d,J＝6.4Hz,2H),3.70(s,3H)。
实施例28化合物28
中间体28a的合成
将原料S1(7g,24mmol)溶于THF(42mL)和甲醇(168mL)的混合溶剂中，用冰盐浴降温到0℃，然后分批次慢慢加入硼氢化钠(4.6g,122.mmol)，再移去冰盐浴，升至室温反应1小时。将反应液倒入冰水中，过滤，滤饼经甲醇洗涤后干燥得中间体28a(6.8g, 收率98％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.07(s,1H),8.46(s,1H),7.48(d,J＝8.0Hz,1H), 7.37(d,J＝8.0Hz,1H),7.34(d,J＝2.4Hz,1H),7.07(dt,J＝0.8,8.0Hz,1H),6.96(dt,J＝0.8,8.0Hz, 1H),6.68(d,J＝4.0Hz,1H),6.18(d,J＝4.0Hz,1H),3.77(s,3H)。MS(ESI)m/z:291.0[M+1]+。
化合物28的合成
将中间体28a(3g,10.4mmol)溶于甲醇(25mL)中，搅拌下加入锌粉(2g,31.2mmol)，氮气保护，100℃回流1小时，然后将反应液滴加到冰水中，过滤得到粗品1.8g。取粗品(200mg)用硅胶柱层析(PE/EA＝4/1～2/1)纯化得化合物28(20mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.06(s,1H),8.32(s,1H),7.39～7.44(m,3H),7.10(dt,J＝1.1, 8.0Hz,1H),6.98(dt,J＝1.1,8.0Hz,1H),4.05(s,2H),3.81(s,3H)。MS(ESI)m/z:275.0[M+1]+。
实施例29化合物29
中间体29a的合成
将中间体24a(1.36g,5mmol)溶于THF(20mL)中，加2滴DMF，滴加草酰氯 (755mg,6mmol)，室温反应2小时，减压浓缩至干，溶解在THF(20mL)中后滴加到浓氨水(10mL)中，搅拌过夜。减压浓缩至5mL，过滤，滤饼经THF洗涤后干燥得中间体29a(1.3g,收率95％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.27(s,1H),9.52(s,1H), 8.61(s,1H),8.31～8.35(m,1H),7.57～7.60(m,1H),8.28(s,1H),7.81(s,1H),7.26～7.34(m,2H). MS(ESI)m/z:272.0[M+1]+。
化合物29的合成
将中间体29a(17g,62.66mmol)溶于乙酸乙酯(250mL)中，加入吡啶14.87g(187.9mmol)，室温下滴加三氟乙酸酐(19.7g,93.99mmol)，室温搅拌4小时，减压浓缩至干，用乙酸乙酯重结晶得化合物29(14g,收率88％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ 12.44(s,1H),9.15(s,1H),9.03(d,J＝3.6Hz,1H),8.28～8.31(m,1H),7.57～7.62(m,1H), 7.29～7.34(m,2H)。MS(ESI)m/z:254.0[M+1]+。
实施例30化合物30-1、30-2
化合物30-1的合成
将化合物29(1g,3.9mmol)溶于甲醇(100mL)中，氮气置换三次，滴加甲醇钠溶液(金属钠0.23g,10mmol,甲醇50mL)，室温搅拌4小时，滴加L-丝氨酸甲酯盐酸盐(1.8g，11.6mmol)的甲醇(50mL)溶液，加热至55℃，搅拌2小时，倒入冰水，过滤得粗品，粗品经硅胶柱层析(PE:EA＝1：1)纯化得化合物30-1(0.4g收率29％)。1H NMR(400MHz, DMSO-d6):δ12.33(s,1H),9.10(d,J＝2.9Hz,1H),8.73(s,1H),8.44～8.21(m,1H),7.69～7.49 (m,1H),7.40～7.21(m,2H),5.06(dd,J＝10.0,8.0Hz,1H),4.76～4.57(m,2H),3.74(s,3H)。MS(ESI)m/z:356.0[M+1]+。
化合物30-2的合成
将化合物30-1(200mg，0.56mmol)溶于四氢呋喃(50mL)中，加入二氧化锰(1000mg，11.56mmol)回流过夜，冷却，过滤，滤液减压浓缩至干得粗品，粗品经硅胶柱层析 (PE:EA＝2：1)纯化得化合物30-2(25mg收率12％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ 12.37(s,1H),9.17(d,J＝2.7Hz,1H),9.09(s,1H),8.90(s,1H),8.37～8.29(m,1H),7.66～7.59 (m,1H),7.38～7.26(m,2H),3.89(s,3H)。MS(ESI)m/z:354[M+1]+。
实施例31化合物31-1、31-2
化合物31-1：方法同化合物30-1。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.41(s,1H), 9.08(d,J＝3.1Hz,1H),8.63(s,1H),8.42～8.24(m,1H),7.68～7.49(m,1H),7.31(m,2H),4.47(t,J＝8.5Hz,2H),3.48(t,J＝8.5Hz,2H)。MS(ESI)m/z:314.0[M+1]+。
化合物31-2：方法同化合物30-2。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ12.41(s,1H), 9.13(d,J＝3.2Hz,1H),8.64(s,1H),8.37～8.30(m,1H),8.01(d,J＝3.2Hz,1H),7.91(d,J＝3.2Hz,1H),7.65～7.57(m,1H),7.35～7.27(m,2H)。MS(ESI)m/z:312.0[M+1]+。
实施例32化合物32-1、32-2
化合物32-1：方法同化合物30-1。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.43(s,1H), 9.04(s,1H),8.70(s,1H),8.29～8.344(m,1H),7.57～7.60(m,1H),7.21～7.34(m,2H),5.48(dd, J＝9.2,8.4Hz,1H),3.78(dd,J＝6.0,11.6Hz,1H),3.75(s,3H),3.67(dd,J＝11.6,8.4Hz,1H)。MS (ESI)m/z:372.0[M+1]+。
化合物32-2：方法同化合物30-2。MS(ESI)m/z:370.0[M+1]+。
实施例33化合物33-1、33-2
化合物33-1：方法同化合物30-1。MS(ESI)m/z:298.0[M+1]+。
化合物33-2：方法同化合物30-2。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ12.41(s,1H), 9.13(d,J＝3.2Hz,1H),8.64(s,1H),8.37～8.30(m,1H),7.65～7.57(m,1H),7.52(brs,1H),7.35～7.27(m,2H),7.11(brs,1H)。MS(ESI)m/z:296.0[M+1]+。
实施例34化合物34
中间体34a的合成参考J.Am.Chem.Soc.,2002,124(44).13179-13184。
中间体34b的合成见J.Med.Chem.,1961,4,259-296。
中间体34c的合成
将化合物34b(1.18g,10mmol)和三乙胺(3.03g,30mmol)溶解在二氯甲烷(15mL)中, 在0℃下滴加化合物34a(2.07g,10mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液。反应混合物在室温下搅拌过夜。加30mL水稀释，二氯甲烷萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得中间体34c(2.8g，收率97％)。MS(ESI)m/z:290.0[M+1]+。
化合物34的合成
将中间体34c(5g,17.286mmol)溶于DMF(200mL)中，搅拌下加入三乙胺(5.2g，51.86mmol)，然后加入THF(100mL)，氮气保护下，慢慢滴加二氯甲烷(50mL)溶解的对甲苯磺酰氯(9.88g,51.86mmol)，1h加毕，然后室温反应过夜。减压浓缩除去二氯甲烷和 THF后，滴加到冰水中，搅拌，过滤得粗品，粗品经硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝50/1～10/1)得到化合物34(0.5g,收率10％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.53(brs, 1H),8.90(s,1H),8.27～8.29(m,1H),7.60～7.62(m,1H),7.32～7.37(m,2H),4.02(s,3H)。MS(ESI) m/z:272.1[M+1]+。
实施例35化合物35
将化合物29(2g,7.9mmol)加入到密封反应器中，加入DMF(30mL)搅拌，氯化铵(0.49g,9.2mmol)，叠氮化钠(0.6g,9.2mmol)，将反应器密封，油浴120℃反应过夜，将反应液降至室温滴加到200mL冰水中，用乙酸乙酯萃取(150mL)，水相用2N的盐酸调pH 为酸性；析出固体，然后过滤，水洗，干燥，得到化合物35(1.8g,77％)。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6):δ12.50(s,1H),9.48(d,J＝3.6Hz,1H),8.88(s,1H),8.36～8.34(m,1H), 7.62～7.60(m,1H),7.34～7.31(m,2H)。MS(ESI)m/z:297.0[M+1]+。
实施例36化合物36
将化合物29(0.5g,1.7mmol)悬浮在10mL乙二醇甲醚中，加入2mL醋酸及醋酸甲脒(0.215g,2.07mmol)，氮气保护，油浴回流24小时，减压蒸馏，粗品经硅胶柱层析(DCM/甲醇＝200/1～20/1)纯化得化合物35(0.32g,收率55％)。1H NMR(400MHz, DMSO-d6):δ12.41(s,1H),10.6(s,1H),10.05(s,1H),9.55(s,1H),8.72(s,1H), 8.32～8.34(m,1H),7.58～7.59(m,1H),7.28～7.33(m,2H)。MS(ESI)m/z:296.0[M+1]+。
实施例37化合物37
将化合物1-1(500mg,0.97mmol)溶于甲醇(2mL)中，滴加0.1N甲醇钠溶液 (2mL)，室温反应过夜，过滤，固体用甲醇洗涤，干燥得到化合物37(153mg,收率 50％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.25(s,1H),8.93(s,1H),8.35(d,J＝7.6Hz,1H), 7.81(d,J＝7.6Hz,1H),7.39～7.47(m,2H),6.92(t,1H),5.6(d,2H),3.94(s,3H)。MS(ESI) m/z:317[M+1]+。
实施例38化合物38-1～化合物38-4
化合物38-1、38-2的合成
原料S-1(1.07g,3.78mmol)溶解在THF(50mL)中，加入2,3,4,6-四乙酰基葡萄糖(2.6g，7.55mmol)，氮气保护下，加入三苯基膦(2g,7.55mmol)，降温至-15℃，滴加偶氮二甲酸二异丙酯(1.53g,7.55mmol),反应液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取(100mL X 2)，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯：10/1-2/1)，得化合物38-1(650mg)和化合物38-2(600mg)(收率54％)。化合物38-1：1H NMR (400MHz,CDCl3):1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.18(s,1H),8.52～8.54(m,1H),8.44 (s,1H),7.60～7.63(m,1H),7.38～7.42(m,2H),5.72(d,J＝9.2Hz,1H),5.64(t,J＝9.2Hz,1H), 5.50(t,J＝9.6Hz,1H),5.40(d,J＝9.6Hz,2H),4.35(dd,J＝4.8，12.4Hz，2H),4.27(dd, J＝2.4，12.4Hz,1H),4.07(s,3H),4.05～4.10(m,1H),2.16(s,3H),2.13(s,3H),2.05(s,3H), 1.74(s,3H)；MS(ESI)m/z:617.14[M+1]+。化合物38-2：δ9.20(s,1H),8.56～8.49(m,1H), 8.45(s,1H),7.87～7.80(m,1H),7.44～7.35(m,2H),5.92(d,J＝5.2Hz,1H),5.35(t,J＝2.3Hz, 1H),4.99(dt,J＝9.4,1.7Hz,1H),4.38～4.25(m,2H),4.21～4.12(m,2H),4.04(s,3H),2.21(s, 3H),2.18(s,3H),2.16(s,3H),2.07(s,3H)；MS(ESI)m/z:617.14[M+1]+。
化合物38-3、38-4的合成
将化合物38-1(200mg,0.325mmol)溶解在甲醇(10mL)中，加入甲醇钠(190mg，3.57mmol)，室温搅拌5h。反应液倒入饱和氯化钠水溶液中，加入乙酸乙酯50mL，用枸橼酸调节pH至中性，分离有机相，水相用乙酸乙酯再萃取一次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干，硅胶柱层析纯化(甲醇/二氯甲烷：5％-10％)得化合物38-3(40mg)和化合物38-4(5mg)。化合物38-3：MS(ESI)m/z:491.1[M+1]+。化合物38-4：MS(ESI)m/z:449.1[M+1]+。
效果实施例1
AhR激动试验(参考激动剂MeBio的活性测定：Oncogene(2004)23,4400– 4412)
试验材料(plasmids)：表达天然(Human Hepatoma Huh-7)的AhR受体报告基因细胞，在报告载体包含连接于上游受体特异性遗传应答元素(GRE)功能性的萤火虫荧光素酶基因。
AhR激动试验包括以下三个步骤：
1、植入细胞：在细胞恢复培养基(CRM；含有10％活性炭处理的FBS)中制备 AhR受体报告细胞的悬浮液。然后将制备好的悬浮液(100μL)分配到一个白色的96 孔培养板的孔中。
2、在实验即将开始前，将Master Stocks用适当的化合物筛选实验培养基(CSM：含有10％活性炭处理的FBS)稀释成“2X浓度”的处理培养基。测试化合物用含0.2％ DMSO的CSM培养基梯度稀释，使得各处理组各实验孔中DMSO的终浓度均为 0.1％。将处理培养基加入到已经预先铺好含报告基因细胞的培养板中(100uL/孔)，双复孔。将实验板放入37℃培养箱培养24小时。
3、荧光检测及分析：孵化完成后，弃去处理培养基并加入100μL/孔的萤光素酶检测试剂，测定每一个孔的Ave RLU(平均相对荧光强度)和各组实验的变异系数，由实验组的不同浓度的测试化合物的Ave RLUTest Cmpd和空白对照组的Ave RLUVehicle的比值，定量确定不同浓度的测试化合物作用下的AhR受体的活性，确定激活倍数以及EC50。
数据处理方法参考J.Biomol.Screen,1999,4(2),67-73。
各化合物的EC50如表1所示，其中A表示0.001μM＜EC50≤1.0μM，B表示1.0μM ＜EC50≤10.0μM，C表示10.0μM＜EC50≤100μM。
表1各化合物的EC50
由表1可知，上述各化合物可结合至AhR并调控由AhR控制的那些功能和信号通路，进而可影响癌细胞的生长与增殖以及肿瘤细胞的侵袭力，因此本发明的式(Ⅰ)所示的化合物的药物组合物能够用作AhR抑制剂或非组成型AhR激动剂 (non-constitutive AhRagonists)，可用于抑制癌细胞生长，抑制肿瘤细胞的转移和侵袭。
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