阅读说明：本技术 脱除腰果过敏蛋白的联合方法 (Combined method for removing cashew nut allergic protein ) 是由 张爱琳 迟越 梁筱研 苗颖 刘翠翠 于 2020-12-07 设计创作，主要内容包括：本发明公开了脱除腰果过敏蛋白的联合方法,包括步骤一,原料选取；步骤二,微波与超声波协同；步骤三,高温与高压协同；步骤四,酶处理；步骤五,存储放置；其中在上述步骤一中,人工根据加工条件,选择合适的原始样品蛋白；将选择的原始样品蛋白进行筛选；该脱除腰果过敏蛋白的联合方法,操作简单,利用微波与超声波协同、高温与高压协同、酶处理三种方法协同脱敏,通过每次脱敏后的蛋白浓度及SDS-PAGE电泳图以及WB免疫印迹结果判断其脱敏效果,由于微波与超声波破坏氢键和范德华力,改变了过敏原构象结构使得高温高压处理更好的将蛋白结构展开使酶切位点与疏水基暴露在表外,为酶法脱敏提供了前期条件,有利于脱除腰果过敏蛋白。(The invention discloses a combined method for removing cashew nut allergic protein, which comprises the following steps of firstly, selecting raw materials; step two, microwave and ultrasonic wave are cooperated; thirdly, high temperature and high pressure are cooperated; step four, enzyme treatment; step five, storing and placing; in the first step, selecting proper original sample protein manually according to processing conditions; screening the selected original sample protein; the combined method for removing the cashew nut allergic protein is simple to operate, three methods of microwave and ultrasonic wave synergy, high-temperature and high-pressure synergy and enzyme treatment are utilized for synergistic desensitization, the desensitization effect is judged according to the protein concentration after each desensitization, an SDS-PAGE (sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis) electrophoresis diagram and a WB (white-bar-printing) immunoblotting result, the conformation structure of the allergen is changed due to the fact that the microwaves and the ultrasonic waves destroy hydrogen bonds and van der Waals force, the protein structure is better unfolded through high-temperature and high-pressure treatment, enzyme cutting sites and hydrophobic groups are exposed outside the surface, early-stage conditions are provided for enzyme desensitization, and.)

脱除腰果过敏蛋白的联合方法

技术领域

本发明涉及杏仁过敏蛋白技术领域，具体为脱除腰果过敏蛋白的联合方法。

背景技术

腰果也称为介寿果与树花生，目前已经发现并报道了三种腰果主要的过敏原，分别是豌豆球蛋白、球蛋白和白蛋白，具有高度水溶性，其中包含有腰果过敏人血清IgE识别的主要反应抗原，是腰果的主要过敏原；传统脱除腰果过敏蛋白的方法直接采用酶处理进行脱敏，由于过敏原构象结构的蛋白结构不易展开，导致酶切位点与疏水基无法暴露在表外，不能为酶法脱敏提供了前期条件，造成无法彻底脱除腰果过敏蛋白；针对这些缺陷，设计脱除腰果过敏蛋白的联合方法是很有必要的。

发明内容

本发明的目的在于提供脱除腰果过敏蛋白的联合方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：脱除腰果过敏蛋白的联合方法，包括步骤一，原料选取；步骤二，微波与超声波协同；步骤三，高温与高压协同；步骤四，酶处理；步骤五，存储放置；

其中在上述步骤一中，原料选取包括以下步骤：

1)人工根据加工条件，选择合适的原始样品蛋白；

2)将选择的原始样品蛋白进行筛选，并测定原始样品蛋白浓度为2.5mg/ml；

其中在上述步骤二中，微波与超声波协同包括以下步骤：

1)人工将步骤一2)中原始样品蛋白倒入微波与超声协同机中，调节微波与超声协同机功率为600W；

2)开启微波与超声协同机，调节温度至60-80℃，处理240-260s，微波与超声波协同脱敏后最高浓度为：1.4mg/ml，最低浓度为：0.7mg/ml；

其中在上述步骤三中，高温与高压协同包括以下步骤：

1)人工将步骤二2)中处理后的原始样品蛋白倒入反应釜中，混合搅拌均匀；

2)将反应釜密闭，升高温度至121℃，0.1MPa，持续反应20min，随后静置放置10-20min，高温高压协同后最高浓度为：0.8mg/ml，最低浓度为：0.32mg/ml；

其中在上述步骤四中，酶处理包括以下步骤：

1)人工将步骤三2)中反应釜内部混合物进行搅拌10-20min，随后兑入按3000u/g的酶底物比例添加木瓜蛋白酶与胰蛋白酶，边兑入边搅拌；

2)兑入完成后，密闭反应釜20-40min，酶处理前将浓度浓缩为：10mg/ml，处理后最高浓度为：1.1mg/ml，最低浓度为：0.4mg/ml，即可得到脱敏的腰果蛋白；

其中在上述步骤五中，人工将步骤四2)中得到的脱敏腰果蛋白取出装入瓶中，随后放置在阴凉地存储。

根据上述技术方案，所述步骤一1)中选择的原始样品蛋白需要检查合格后使用。

根据上述技术方案，所述步骤二1)中微波与超声协同机使用前需要进行清洗。

根据上述技术方案，所述步骤三2)中反应釜密闭后需要排尽内部空气。

根据上述技术方案，所述步骤四1)中木瓜蛋白酶与胰蛋白酶比例为2∶1。

根据上述技术方案，所述步骤五中装瓶前瓶身需要进行消毒处理。

与现有技术相比，本发明所达到的有益效果是：该脱除腰果过敏蛋白的联合方法，操作简单，成本低，安全可靠，利用微波与超声波协同、高温与高压协同、酶处理三种方法协同脱敏，通过每次脱敏后的蛋白浓度及SDS-PAGE电泳图和WB免疫印迹结果判断其脱敏效果：原始样品的蛋白浓度为2.5mg/ml，微波与超声波协同脱敏后最高浓度为：1.4mg/ml，最低浓度为：0.7mg/ml；高温高压协同脱敏后最高浓度为：0.8mg/ml，最低浓度为：0.32mg/ml；酶处理前将浓度浓缩为10mg/ml，处理后最高浓度为：1.1mg/ml，最低浓度为：0.4mg/ml，从浓度可以看出蛋白含量逐渐减少证明脱敏方法均有效，由于微波与超声波破坏氢键和范德华力，改变了过敏原构象结构使得高温高压处理更好的将蛋白结构展开使酶切位点与疏水基暴露在表外，为酶法脱敏提供了前期条件，有利于脱除腰果过敏蛋白。

附图说明

附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：

图1是本发明的方法流程图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

请参阅图1，本发明提供一种技术方案：脱除腰果过敏蛋白的联合方法，包括步骤一，原料选取；步骤二，微波与超声波协同；步骤三，高温与高压协同；步骤四，酶处理；步骤五，存储放置；

其中在上述步骤一中，原料选取包括以下步骤：

1)人工根据加工条件，选择合适的原始样品蛋白，选择的原始样品蛋白需要检查合格后使用；

2)将选择的原始样品蛋白进行筛选，并测定原始样品蛋白浓度为2.5mg/ml；

其中在上述步骤二中，微波与超声波协同包括以下步骤：

1)人工将步骤一2)中原始样品蛋白倒入微波与超声协同机中，微波与超声协同机使用前需要进行清洗，调节微波与超声协同机功率为600W；

2)开启微波与超声协同机，调节温度至60-80℃，处理240-260s，微波与超声波协同脱敏后最高浓度为：1.4mg/ml，最低浓度为：0.7mg/ml；

其中在上述步骤三中，高温与高压协同包括以下步骤：

1)人工将步骤二2)中处理后的原始样品蛋白倒入反应釜中，混合搅拌均匀；

2)将反应釜密闭，反应釜密闭后需要排尽内部空气，升高温度至121℃，0.1MPa，持续反应20min，随后静置放置10-20min，高温高压协同后最高浓度为：0.8mg/ml，最低浓度为：0.32mg/ml；

其中在上述步骤四中，酶处理包括以下步骤：

1)人工将步骤三2)中反应釜内部混合物进行搅拌10-20min，随后兑入按3000u/g的酶底物比例添加木瓜蛋白酶与胰蛋白酶，木瓜蛋白酶与胰蛋白酶比例为2∶1，边兑入边搅拌；

2)兑入完成后，密闭反应釜20-40min，酶处理前将浓度浓缩为：10mg/ml，处理后最高浓度为：1.1mg/ml，最低浓度为：0.4mg/ml，即可得到脱敏的腰果蛋白；

其中在上述步骤五中，人工将步骤四2)中得到的脱敏腰果蛋白取出装入瓶中，装瓶前瓶身需要进行消毒处理，随后放置在阴凉地存储。

基于上述，本发明的优点在于，该脱除腰果过敏蛋白的联合方法，操作简单，成本低，安全可靠，利用微波与超声波协同、高温与高压协同、酶处理三种方法协同脱敏，通过每次脱敏后的蛋白浓度及SDS-PAGE电泳图和WB免疫印迹结果判断其脱敏效果：原始样品的蛋白浓度为2.5mg/ml，微波与超声波协同脱敏后最高浓度为：1.4mg/ml，最低浓度为：0.7mg/ml；高温高压协同脱敏后最高浓度为：0.8mg/ml，最低浓度为：0.32mg/ml；酶处理前将浓度浓缩为10mg/ml，处理后最高浓度为：1.1mg/ml，最低浓度为：0.4mg/ml，从浓度可以看出蛋白含量逐渐减少证明脱敏方法均有效，由于微波与超声波破坏氢键和范德华力，改变了过敏原构象结构使得高温高压处理更好的将蛋白结构展开使酶切位点与疏水基暴露在表外，为酶法脱敏提供了前期条件，有利于脱除腰果过敏蛋白。

需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。