本发明公开了一种R-2-羟基苯丁腈的制备方法及其应用,R-2-羟基苯丁腈的制备方法包括,将苯丙醛和氰醇裂解酶加入溶剂中,滴加氰化钠溶液,反应合成R-2-羟基苯丁腈；将合成的R-2-羟基苯丁腈加入无水乙醇和水中,通入氯化氢气体,反应生成R-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯；其中,所述氰醇裂解酶采用巴达木种子或杏仁为酶源。本发明提供的一种R-2-羟基苯丁腈的制备方法,制得的产品含量大于99％,手性99.9％以上,采用市场上易采购且便宜的苯丙醛作为主原料,实现绿色环保生产。