一种鱼精蛋白修饰的plga包覆淫羊藿苷纳米球的制备方法
阅读说明：本技术 一种鱼精蛋白修饰的plga包覆淫羊藿苷纳米球的制备方法 (Preparation method of protamine-modified PLGA-coated icariin nanospheres ) 是由 孙冬冬 汪泽坤 廖子彧 黎雨晴 王静媛 杨恩东 于 2021-07-12 设计创作，主要内容包括：本发明属于生物纳米材料技术领域,本发明公开了一种鱼精蛋白(PS)修饰的PLGA包覆淫羊藿苷(LCA)纳米球的制备方法,所述鱼精蛋白修饰的PLGA包覆淫羊藿苷纳米球(LCA@PLGA@PS)按照规定份数配比的以下原料：PLGA的二氯甲烷溶液作为油相；淫羊藿苷乙醇溶液作为药物溶液；PVA水溶液作为外水相；鱼精蛋白水溶液为阳离子修饰溶液。本发明首次提出将淫羊藿苷乙醇溶液与PLGA二氯甲烷溶液混合作为油相,通过PVA水溶液作为水相反应生成PLGA包覆淫羊藿苷纳米球,最后将促进细胞吸收的鱼精蛋白修饰在纳米球表面,得到鱼精蛋白修饰的PLGA包覆淫羊藿苷纳米球,制备得到的纳米球尺寸大小均一,安全无毒。本发明旨在提供一种提高淫羊藿苷生物活性的纳米球的制备方法。(The invention belongs to the technical field of biological nano materials, and discloses a preparation method of Protamine (PS) -modified PLGA-coated icariin (LCA) nanospheres, which comprises the following raw materials in parts by weight: a dichloromethane solution of PLGA as an oil phase; icariin ethanol solution as a medicinal solution; PVA water solution is used as an external water phase; the protamine aqueous solution is a cation modification solution. The invention firstly proposes that an icariin ethanol solution and a PLGA dichloromethane solution are mixed to be used as an oil phase, a PVA aqueous solution is used as a water phase to react to generate PLGA coated icariin nanospheres, and finally protamine which promotes cell absorption is modified on the surfaces of the nanospheres to obtain the protamine modified PLGA coated icariin nanospheres. The invention aims to provide a preparation method of nanospheres for improving the biological activity of icariin.)
技术领域
本发明属于生物纳米材料技术领域，具体涉及一种鱼精蛋白修饰的PLGA 包覆淫羊藿苷纳米球的制备方法。
背景技术
PLGA是一种可降解的高分子有机化合物，是目前美国食品药品监督管理局 (FDA)认可的用于临床治疗的生物可降解性材料之一，具有良好的生物相容性、高度的安全无毒且具有良好的成囊的性能，被广泛应用于药剂学领域。PLGA纳米球表面带有负电荷导致其于细胞接触减少，以阳离子修饰PLGA纳米球，可以增加纳米球与带有负电荷的细胞膜相互作用，从而促进PLGA纳米球的细胞摄取。
鱼精蛋白(PS)是一种强碱性的蛋白质，具有良好的营养性和功能性，能降血压、抑肿瘤、抑制血液凝固等，鱼精蛋白还可以作为细胞穿膜肽促进疏水性物质进入细胞，并且不会产生明显的毒副作用。用鱼精蛋白包覆纳米粒可以增加其与细胞膜相互作用，从而促进细胞对纳米球的吸收。
淫羊藿苷(LCA)是一种从淫羊藿中分离提取的黄酮类化合物，是淫羊霍的主要活性成份，具有多种生物学活性，如可以调节机体免疫功能、促进骨生长、延缓衰老、抗菌、抗肿瘤、抗炎、抗病毒等。但淫羊藿苷具有极低的水溶性，不宜直接给药作用于组织和细胞，从而限制了其在医学上的应用。
发明内容
本发明的目的在于解决上述现有技术的缺陷而提供一种鱼精蛋白修饰的 PLGA包覆淫羊藿苷([email protected]@PS)纳米球的制备方法，使得PLGA包覆淫羊藿苷纳米球可以与细胞膜相互作用从而促进细胞对纳米球的吸收，也同时提高了疏水性药物淫羊藿苷的生物利用度，更有利于发挥其功效。除此之外，鱼精蛋白修饰的PLGA包覆淫羊藿苷纳米球具有较高稳定性和较高的安全性，具有一定的研究价值和临床应用潜力。
为了实现上述目的，本发明所设计的一种鱼精蛋白修饰的PLGA包覆淫羊藿苷纳米球的制备方法，包括按照规定份数配比的以下原料：油相、药物溶液、外水相、阳离子修饰溶液，所述PLGA的二氯甲烷溶液作为油相；所述淫羊藿苷乙醇溶液作为药物溶液；所述PVA水溶液作为外水相；所述鱼精蛋白水溶液为阳离子修饰溶液。所述鱼精蛋白修饰的PLGA包覆淫羊藿苷纳米球的制备方法，其包括以下步骤：
步骤1：配置PLGA二氯甲烷溶液；配置淫羊藿苷乙醇溶液；配置PVA水溶液；配置鱼精蛋白水溶液。
步骤2：将淫羊藿苷乙醇溶液加入PLGA二氯甲烷溶液中，搅拌反应15min，在冰浴中超声2min，将淫羊藿苷-PLGA溶液滴加于PVA的外水相中，搅拌反应15min，在冰浴中超声2min形成复乳，在常温下搅拌4h，离心收集并去离子水洗涤两次，得到PLGA包覆淫羊藿苷纳米球。
步骤3：将步骤2中得到的PLGA包覆淫羊藿苷纳米球重悬于一定浓度的鱼精蛋白，搅拌反应12h，离心收集并用去离子水清洗两次去除多余的鱼精蛋白，得到鱼精蛋白修饰的PLGA包覆淫羊藿苷纳米球。
作为上述发明的进一步优化方案，所述PLGA溶液的浓度为50mg/mL-100 mg/mL，淫羊藿苷溶液浓度为0.5mg/mL-5mg/mL，PVA溶液浓度为15mg/mL-30 mg/mL。
作为上述发明的进一步优化方案，所述步骤1中二氯甲烷：乙醇体积比为2： 1-5：1。
作为上述发明的进一步优化方案，所述步骤2和步骤3中离心收集条件为 80000g-12000g，4℃离心10min。
作为上述发明的进一步优化方案，所述步骤3中阳离子修饰溶液-鱼精蛋白溶液浓度为2mg/mL-10mg/mL。
本发明的有益效果在于：本发明得到了一种鱼精蛋白修饰的PLGA包覆淫羊藿苷纳米球的制备方法，本发明首次提出将淫羊藿苷乙醇溶液与PLGA二氯甲烷溶液混合作为油相，通过PVA水溶液作为水相反应生成PLGA包覆淫羊藿苷纳米球，最后将促进细胞吸收的鱼精蛋白修饰在纳米球表面，得到鱼精蛋白修饰的PLGA包覆淫羊藿苷纳米球，制备得到的纳米球尺寸大小均一，整个制备条件简单温和、低成本和安全环保，提高了淫羊藿苷在生物医学领域的应用范围。
附图说明
图1：(A)[email protected](对比例1)和(B)[email protected]@PS(实施例1)的透射电子显微镜图(TEM)；(C)[email protected]和(D)[email protected]@PS的扫描电子显微镜图 (SEM)。
图2：(A)实施例1中得到的[email protected](对比例1)、[email protected]@PS(实施例1)、鱼精蛋白、淫羊藿苷、PLGA的紫外分光光谱；(B)实施例1中得到的 [email protected](对比例1)、[email protected]@PS(实施例1)、鱼精蛋白、淫羊藿苷、PLGA 的傅里叶红外光谱；(C)实施例1中得到的[email protected](对比例1)和 [email protected]@PS(实施例1)的Zeta电位分析；(D)实施例1中得到的 [email protected](对比例1)和[email protected]@PS(实施例1)的粒径分析；
具体实施方式
下面结合附图对本申请作进一步详细描述，有必要在此指出的是，以下具体实施方式只用于对本申请进行进一步的说明，不能理解为对本申请保护范围的限制，该领域的技术人员可以根据上述申请内容对本申请作出一些非本质的改进和调整。
本发明还公开了一种淫羊藿苷功能化纳米硒的制备方法，其包括以下步骤：实施例1：
在本实施例中具体制备方法步骤如下：
步骤1：称取200mg的PLGA溶解于4mL二氯甲烷中；称取2mg淫羊藿苷溶于1mL乙醇中；称取140mg的PVA溶解于8mL水中；称取50mg鱼精蛋白溶于10mL水中。
步骤2：将淫羊藿苷乙醇溶液加入PLGA二氯甲烷溶液中，搅拌反应15min，在冰浴中超声2min，将淫羊藿苷-PLGA溶液滴加于PVA的外水相中，搅拌反应15min，在冰浴中超声2min形成复乳，在常温下搅拌4h，10000g，4℃离心10min收集并去离子水洗涤两次，得到PLGA包覆淫羊藿苷纳米球。
步骤3：将步骤2中得到的PLGA包覆淫羊藿苷纳米球重悬于5mg/mL的鱼精蛋白水溶液中，搅拌反应12h，10000g，4℃离心10min收集并去离子水洗涤两次，得到鱼精蛋白修饰的PLGA包覆淫羊藿苷纳米球。
对比例1：
在本实施例中具体制备方法步骤如下：
步骤1：称取200mg的PLGA溶解于4mL二氯甲烷中；称取2mg淫羊藿苷溶于1mL乙醇中；称取140mg的PVA溶解于8mL水中；称取50mg鱼精蛋白溶于10mL水中。
步骤2：将淫羊藿苷乙醇溶液加入PLGA二氯甲烷溶液中，搅拌反应15min，在冰浴中超声2min，将淫羊藿苷-PLGA溶液滴加于PVA的外水相中，搅拌反应15min，在冰浴中超声2min形成复乳，在常温下搅拌4h，10000g，4℃离心10min收集并去离子水洗涤两次，得到PLGA包覆淫羊藿苷纳米球。
对比例2：
步骤1：称取200mg的PLGA溶解于4mL二氯甲烷中；准备1mL乙醇；称取140mg的PVA溶解于8mL水中；称取50mg鱼精蛋白溶于10mL水中。
步骤2：将1mL乙醇加入PLGA二氯甲烷溶液中，搅拌反应15min，在冰浴中超声2min，将PLGA溶液滴加于PVA的外水相中，搅拌反应15min，在冰浴中超声2min形成复乳，在常温下搅拌4h，10000g，4℃离心10min收集并去离子水洗涤两次，得到PLGA纳米球。
步骤3：将步骤2中得到的PLGA纳米球重悬于5mg/mL的鱼精蛋白水溶液中，搅拌反应12h，10000g，4℃离心10min收集并去离子水洗涤两次，得到鱼精蛋白修饰的PLGA纳米球。
将产物进行Zeta电位分析、粒径分析、紫外分光光谱分析和傅里叶红外光谱分析。
采用TEM和SEM检查了实施例1和对比例1中鱼精蛋白修饰前后 [email protected]的形态。如图1A、1C所示，[email protected](对比例1)呈现球形结构，表面光滑，平均粒径在180nm左右(图2D)；如图1B、1D所示， [email protected]@PS(实施例1)也呈现球形结构，表面有鱼精蛋白修饰，平均粒径怎家到了260nm左右(图2D)。
对实施例1和对比例1的紫外-可见吸收光谱(图2A)、傅里叶红外红外(图 2B)和Zeta电位分析(图2C)，获得产物特性分析。如图2A所示，在270nm 处为淫羊藿苷的紫外特征峰，在241nm处为PLGA的紫外特征峰，在295nm 处为鱼精蛋白的紫外特征峰，[email protected]表现出PLGA和淫羊藿苷的紫外特征峰，而[email protected]@PS表现出PLGA、淫羊藿苷和鱼精蛋白的紫外特征峰。如图2B所示，淫羊藿苷在1591cm-1、1258cm-1表现为苯环的变形振动特征吸收峰，1756cm-1表现为PLGA的羰基吸收峰，635cm-1和1934cm-1表现为鱼精蛋白硫酸根的伸缩振动特征峰，[email protected]@PS表现出以上表述的所有特征峰。如图2C所示，鱼精蛋白修饰前后纳米球Zeta电位由-15.6mV变为9.4mV，这种电位正负的变化，表面鱼精蛋白的成功修饰。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。
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