一种治疗硬皮病的中药颗粒制剂及其制备方法
阅读说明：本技术 一种治疗硬皮病的中药颗粒制剂及其制备方法 (Traditional Chinese medicine granular preparation for treating scleroderma and preparation method thereof ) 是由 王强 秦万章 杨春欣 梁健 于 2021-09-06 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种治疗硬皮病的中药颗粒制剂及其制备方法。本发明的治疗硬皮病的中药颗粒制剂的原料包含丹参15～45重量份、当归15～45重量份、黄芪15～45重量份、鸡血藤15～45重量份、牡丹皮15～45重量份和赤芍15～45重量份。本发明还提供了上述治疗硬皮病的中药颗粒剂的制备方法。本发明能够有效地提取出六种原料药的有效成分,所制得的颗粒剂比原丹归活血合剂具有更好的药效,更有效地控制质量和剂量,更方便地服用和携带,更长的储存时间。(The invention discloses a traditional Chinese medicine granular preparation for treating scleroderma and a preparation method thereof. The raw materials of the traditional Chinese medicine granular preparation for treating scleroderma comprise 15-45 parts by weight of salvia miltiorrhiza, 15-45 parts by weight of angelica sinensis, 15-45 parts by weight of astragalus membranaceus, 15-45 parts by weight of caulis spatholobi, 15-45 parts by weight of moutan bark and 15-45 parts by weight of red peony root. The invention also provides a preparation method of the traditional Chinese medicine granules for treating scleroderma. The invention can effectively extract the effective components of six raw material medicines, and the prepared granules have better drug effect than the original Danguihuo blood-activating mixture, more effectively control the quality and the dosage, are more convenient to take and carry, and have longer storage time.)
技术领域
本发明涉及一种治疗硬皮病的中药颗粒制剂及其制备方法，属于复方中药制剂技术领域。
背景技术
硬皮病，又称系统性硬化症(systemic sclerosis,SSc)，是以皮肤和内脏器官结缔组织的纤维化或硬化、萎缩为特点的系统性自身免疫病，是一种多系统炎症、血管病变和免疫失调而导致的广泛组织纤维化。其先有局部皮肤红斑肿胀、继之坚实发亮，灰黄色似蜡样，皮肤、皮下组织、肌肉均可萎缩，往往伴有雷诺现象，而首诊于皮肤科；此后出现肺部、肾脏等内脏器官的损害，其伴有的肺间质病变是临床急重症疾病之一，也是患者住院和死亡的主要原因。从发病原因来说，近代有以下几种看法：①免疫学说；②胶原合成异常学说；③血管学说；④甲基化学说等。这些理论与中医关于本病发病的看法颇为相似，根据硬皮病的表现，属中医“痹症”范畴。
我们于上世纪七、八十年代，根据硬皮病与气血凝滞、血流瘀阻有关，符合中医应用“活血化瘀”治则治疗的指征，在国内首先用“丹参”等活血化瘀类药物进行治疗之。在此基础上，根据我们提出的硬皮病“血瘀发病论”，研制了丹参的复方制剂治疗各型硬皮病，鉴于硬皮病有较多血瘀症象，如皮肤发硬、关节酸痛、张口伸舌困难等血脉不和、血流阻滞现象，对335例硬皮病患者采用“益气活血、理气活血、活血化瘀”等治则进行治疗，疗效均在94.2％以上；以活血化瘀组最好，总有效率达97.5％，显效率为43.1％。目前一般主张在病情活动期，有关节疼痛、肺间质病变、肾脏危象发生等病情骤急状态，宜采用激素和免疫抑制剂为主，“丹归活血合剂”为辅；待病情稳定后，以“丹归活血合剂”治疗为主，同时撤减激素用量，一般中、轻型的硬皮病，酌情少用或根本不用激素。局限性硬皮病、肢端型硬皮病以不用激素为宜，可单用“丹归活血合剂”治疗，若有必要再加用激素等。从起效速度来看，一般1～2周见效，仅次于“激素”的“亚快速度”；没有明显的副作用，不影响治疗。“丹归活血合剂”不仅能够治疗各型硬皮病，而且对各型红斑狼疮、皮肌炎/多发性肌炎、干燥综合征、混合性结缔组织病、抗磷脂抗体综合征和重叠综合征、类风湿性关节炎、Behcet病、血管炎(中医称之为“脉管炎”如结节性红斑、青斑性血管炎、过敏性紫癜、皮肤变应性结节性血管炎、荨麻疹性血管炎、血栓性静脉炎、各种动脉炎等)、白癜风、扁平苔癣、慢性结节性痒疹、湿疹等几十种疾病也有很好的疗效，适应症广，可行性和重复性好，仅以我院小范围应用情况来看，已治疗了数以千计的病员，取得非常好的效果。“丹归活血合剂”由丹参、当归、鸡血藤、黄芪、牡丹皮及赤芍六味药组方。丹参入心肝两经，具有活血化瘀、镇静安神的作用，历来被视为活血养血的要药；当归能助血液循环，有补血活血的作用；鸡血藤主要有补血、行血、活血调经功能，其含有鸡血醇，能提高患者的白细胞数，改善微循环，调理月经等；黄芪有增强机体免疫功能、补气、固表敛汗、托疮排脓作用；牡丹皮有抗炎抗菌、清热凉血、增加机体免疫、退热、清凉；赤芍有清热凉血、散瘀止痛。本组方集诸药之长，相辅相成，以达到提高疗效，减少副作用，近四十年的临床应用经久不衰，临床实践证明了上述组方的优越性。由于“丹归活血合剂”采用的制备方法是水煎乙醇沉淀法，加入适量蔗糖制成的制剂，成分复杂，质量不易控制，且保存时间较短，不易携带，临床疗效也不稳定，因此需要将“丹归活血合剂”进行制剂改革。
发明内容
本发明的目的是提供一种治疗硬皮病的中药颗粒剂及其制备方法，其能够克服“丹归活血合剂”质量不易控制、容易霉变、不易携带、不易储存的缺点，而在有效成分富集、质量控制、储存时间、携带及疗效等方面均优于“丹归活血合剂”。
为了达到上述目的，本发明对“丹归活血合剂”的制备工艺进行了优化，提供了一种治疗硬皮病的中药颗粒制剂，其原料包含丹参15～45重量份、当归15～45重量份、黄芪15～45重量份、鸡血藤15～45重量份、牡丹皮15～45重量份和赤芍15～45重量份。
本发明还提供了上述的治疗硬皮病的中药颗粒制剂的制备方法，包括如下步骤：
第一步：按比例称取丹参、当归、黄芪、鸡血藤、牡丹皮和赤芍，混合，加8～16倍量水煎煮二次，每次1小时，合并煎液，过滤，滤液浓缩、冷却后加入6倍重量的90vol％乙醇，充分搅拌，静置24h，取上清液减压浓缩至相对密度为1.2～1.3g/cm3，得到流浸膏；
第二步：加入糊精0.6～1.8重量份，混合，80℃干燥，制成干粉，装入塑封袋内，即得治疗硬皮病的中药颗粒制剂。
所述的第一步中丹参、当归、黄芪、鸡血藤、牡丹皮和赤芍的重量比为2.5：1.25：2.5：2.5：1：1。
本发明的原理如下：
根据中药材常规提取方式，拟定以下3种提取工艺，具体步骤参见实施例4：
工艺1.(原丹归活血合剂的制法，即水煎酒沉法)：
取重量比为2.5：1.25：2.5：2.5：1：1的丹参、当归、黄芪、鸡血藤、牡丹皮和赤芍6味中药，提取2次，加水分别为16/12倍。每次加热1小时，合并浓缩冷却；加入浸膏重量2倍量的95vol％乙醇，搅匀，静置过夜，取上清液浓缩后得到干浸膏。
工艺2.(部分药材水煎酒沉法+部分药材乙醇回流法)：
按照丹参、当归、黄芪、鸡血藤、牡丹皮和赤芍6味中药的重量比为2.5：1.25：2.5：2.5：1：1的比例，取丹参、黄芪、鸡血藤3味中药，提取2次，加水分别为16/12倍。每次加热1小时，合并浓缩冷却；加入浸膏重量2倍量的95vol％乙醇，搅匀，静置过夜，取上清液减压回收至干，得干浸膏(I)。
再取当归、牡丹皮和赤芍3味中药，加入5倍量的90％乙醇回流2次，每次回流1小时，合并2次提取物，减压回收至干，得干浸膏(II)。
将干浸膏(I)和干浸膏(II)合并即得。
工艺3.(全部药材乙醇回流法)：
取重量比为2.5：1.25：2.5：2.5：1：1的丹参、当归、黄芪、鸡血藤、牡丹皮和赤芍6味中药，加入5倍量的90vol％乙醇回流2次，每次回流1小时，合并2次提取物，减压回收至干，得干浸膏。
评价3种不同提取工艺的“丹归活血颗粒剂”制剂对硬皮病模型小鼠影响的观察。结果发现丹归活血颗粒剂制剂的3种不同提取工艺的提取物和三七通舒胶囊在改善硬皮病小鼠的结果如下：
第一部分：皮肤方面的改变：
丹归活血制剂干预硬皮病模型小鼠实验12周后，皮肤出现明显改善，表现在皮肤组织的有关炎症与纤维化方面：
(1)皮肤炎症方面：硬皮病小鼠模型组(1.33±0.47)与正常组(0.44±0.39)的皮肤炎症程度相比，差异有显著性(P<0.05)，说明造模是成功的；干预实验12周后，各干预组皮肤炎症均有不同程度的减轻，改善程度最佳的组别分别为AH、AL、CL组。其中AH组(0.17±0.24)、AL组(0.38±0.33)、CL组(0.75±0.25)与模型组(1.33±0.47)相比，差异均有统计学意义(p值均＜0.05)。
(2)皮肤纤维化方面：干预实验12周后，皮肤纤维化程度虽有减轻的趋势，分别为AH组(0.31±0.11)、BL组(0.30±0.17)、D组(0.27±0.19)，但各干预组与模型组(0.49±0.21)相比，差异均无统计学意义(p＞0.05)。
(3)皮肤厚度方面：干预实验12周后，各组皮肤厚度均有不同程度的减小，改善程度最佳的组别分别为AH、AL组。其中AH组(199.98±18.02μm)、AL组(188.59±16.46μm)与模型组(235.68±13.31μm)相比，差异均有统计学意义(p值均＜0.05)。
(4)皮肤羟脯氨酸含量检测：干预实验12周后，各组皮肤组织羟脯氨酸含量均有不同程度的下降，改善程度最佳的组别分别为AL、BH、CL。分别是AL(3024.68±654.15μg/g)、BH(2948.35±1101.89μg/g)和CL(2992.37±560.21μg/g)与模型组(4453.23±1099.18μg/g)相比，差异均有统计学意义(p值均＜0.05)。
第二部分：肺部方面的改变：
丹归活血制剂干预硬皮病模型小鼠实验12周后，肺部组织出现明显改善，表现在肺部组织的有关炎症与纤维化方面：
(1)肺部组织炎症方面：硬皮病模型组肺部组织炎症(1.33±0.47)与正常组(0.69±0.35)相比,差异有统计学意义(p＝0.03)，说明造模成功；干预实验12周后，肺部组织炎症程度均有不同程度的减轻，但其中AH组(0.42±0.34)与模型组(1.33±0.47)相比，差异有统计学意义(p＜0.05)。
(2)肺部组织纤维化方面：干预实验12周后，肺纤维化均有不同程度减轻的趋势，但各组与模型组(0.45±0.20)相比，差异均无统计学意义(p＞0.05)。
(3)肺部组织羟脯氨酸含量检测：干预实验12周后，各组肺组织羟脯氨酸含量均有不同程度的下降，改善程度最佳的组别依次为AH、BH、CH、CL。AH组(253.92±114.11μg/g)、BH组(212.86±61.24μg/g)、CH组(229.05±86.33μg/g)和CL组(284.23±46.23μg/g)与模型组(349.22±49.65μg/g)相比，差异均有统计学意义(p值均＜0.05)。
经过上述化学和药效学研究，确定了治疗硬皮病的中药颗粒制剂的制备方法：
取丹参、当归、黄芪、鸡血藤、牡丹皮和赤芍6味中药，提取2次，加水8～16倍。每次加热1小时，合并浓缩，冷却；加入浸膏重量2倍重量的95vol％乙醇，搅匀，静置24h，取上清液减压浓缩至相对密度为1.2～1.3g/cm3，加入糊精0.6～1.8重量份，混合，80℃干燥，制成干粉，装入塑封袋内，即得治疗硬皮病的中药颗粒制剂。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
1.本发明的制备方法能够有效地提取出六种原料药中对治疗硬皮病有疗效的成分，所制得的颗粒剂具有良好的药效；
2.本发明制备的颗粒剂剂型，可以有效地控制质量，更方便的服用和携带，剂量准确，储存时间更长。
附图说明
图1为AH、AL组(工艺1高、低剂量组)小鼠的皮肤病理组织HE染色图；
图2为BH、BL组(工艺2高、低剂量组)小鼠的皮肤病理组织HE染色图；
图3为BH、BL组(工艺3高、低剂量组)小鼠的皮肤病理组织HE染色图；
图4为阳性对照组(D组，三七通舒胶囊阳性对照)、阴性对照组(E组，SSc模型组)小鼠的皮肤病理组织HE染色图；
图5为正常小鼠(F组，空白对照组)的皮肤病理组织HE染色图；
图6为AH、AL组(工艺1高、低剂量组)小鼠的皮肤病理组织Masson染色图；
图7为BH、BL组(工艺2高、低剂量组)小鼠的皮肤病理组织Masson染色图；
图8为BH、BL组(工艺3高、低剂量组)小鼠的皮肤病理组织Masson染色图；
图9为阳性对照组(D组，三七通舒胶囊阳性对照)、阴性对照组(E组，SSc模型组)小鼠的皮肤病理组织Masson染色图；
图10为正常小鼠(F组，空白对照组)的皮肤病理组织Masson染色图；
图11为各组硬皮病小鼠皮肤组织炎症程度比较(X±S，N＝6～8)；
图12为各组硬皮病小鼠皮肤组织胶原纤维比较(X±S，N＝6～8)；
图13为各组硬皮病小鼠皮肤组织胶原蛋白含量比较(X±S，μg/g，N＝6～8)；
图14为各组硬皮病小鼠皮肤组织厚度比较(X±S，μm，N＝6～8)；
图15为AH、AL组(工艺1高、低剂量组)小鼠的肺部病理组织HE染色图；
图16为BH、BL组(工艺2高、低剂量组)小鼠的肺部病理组织HE染色图；
图17为BH、BL组(工艺3高、低剂量组)小鼠的肺部病理组织HE染色图；
图18为阳性对照组(D组，三七通舒胶囊阳性对照)、阴性对照组(E组，SSc模型组)小鼠的肺部病理组织HE染色图；
图19为正常小鼠(F组，空白对照组)的肺部病理组织HE染色图；
图20为AH、AL组(工艺1高、低剂量组)小鼠的肺部病理组织Masson染色图；
图21为BH、BL组(工艺2高、低剂量组)小鼠的肺部病理组织Masson染色图；
图22为BH、BL组(工艺3高、低剂量组)小鼠的肺部病理组织Masson染色图；
图23为阳性对照组(D组，三七通舒胶囊阳性对照)、阴性对照组(E组，SSc模型组)小鼠的肺部病理组织Masson染色图；
图24为正常小鼠(F组，空白对照组)的肺部病理组织Masson染色图；
图25为各组肺部组织炎症程度比较(X±S，N＝6～8)；
图26为各组硬皮病小鼠肺部组织胶原纤维比较(X±S，N＝6～8)；
图27为各组硬皮病小鼠肺部组织胶原蛋白含量比较(X±S，N＝6～8)。
具体实施方式
为使本发明更明显易懂，兹以优选实施例，并配合附图作详细说明如下。
实施例1
治疗硬皮病的中药颗粒制剂的制备：
取经过鉴定的丹参、当归、黄芪、鸡血藤、牡丹皮和赤芍6味中药各547.6g、273.7g、547.6g、547.6g、219.2g、219.2g(共2354.9g)，放入提取罐中混合，分别加入8倍重量水提取两次，每次各1h，合并提取液浓缩后加6倍重量的90vol％乙醇(14.1294kg)，静置24h后过滤，滤液减压回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.287g/cm3，得丹归活血流浸膏411.00g。加入对药效成分无干扰的药用辅料糊精，按丹归活血流浸膏：糊精的质量比＝1：0.6的比例混合，80℃干燥，制成干粉，分装在塑料袋中，制成的“袋泡茶”成品重量差异小，保证颗粒剂的质量符合中国药典的规定。
实施例2
治疗硬皮病的中药颗粒制剂的制备：
取经过鉴定的丹参、当归、黄芪、鸡血藤、牡丹皮和赤芍6味中药各547.6g、273.7g、547.6g、547.6g、219.2g、219.2g(共2354.9g)，放入提取罐中混合，分别加入8倍重量水提取两次，每次各1h，合并提取液浓缩后加6倍重量的90vol％乙醇(14.1294kg)，静置24h后过滤，滤液减压回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.293g/cm3，得丹归活血流浸膏519.4g。加入对药效成分无干扰的药用辅料糊精，按丹归活血流浸膏：糊精的质量比＝1：1.2的比例混合，80℃干燥，制成干粉，分装在塑料袋中，制成的“袋泡茶”成品重量差异小，保证颗粒剂的质量符合中国药典的规定。
实施例3
治疗硬皮病的中药颗粒制剂的制备：
取经过鉴定的丹参、当归、黄芪、鸡血藤、牡丹皮和赤芍6味中药各547.6g、273.7g、547.6g、547.6g、219.2g、219.2g(共2354.9g)，放入提取罐中混合，分别加入8倍重量水提取两次，每次各1h，合并提取液浓缩后加6倍重量的90vol％乙醇(14.1294kg)，静置24h后过滤，滤液减压回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.281g/cm3，得丹归活血流浸膏452.8g。加入对药效成分无干扰的药用辅料糊精，按丹归活血流浸膏：糊精的质量比＝1：1.8的比例混合，80℃干燥，制成干粉，分装在塑料袋中，制成的“袋泡茶”成品重量差异小，保证颗粒剂的质量符合中国药典的规定。
实施例4
三种提取工艺的化学和药效学研究：
工艺1：按照药材总重量为2000g，取重量比为2.5：1.25：2.5：2.5：1：1的丹参、当归、黄芪、鸡血藤、牡丹皮和赤芍6味中药，提取2次，加水分别为16/12倍。每次加热1小时，合并浓缩冷却；加入浸膏重量2倍量的95vol％乙醇，搅匀，静置过夜，取上清液浓缩后得到干浸膏，加水稀释至250mL，相当于1mL＝8g生药。
工艺2：按照按照药材总重量为2000g，丹参、当归、黄芪、鸡血藤、牡丹皮和赤芍6味中药的重量比为2.5：1.25：2.5：2.5：1：1的比例，取丹参、黄芪、鸡血藤3味中药，提取2次，加水分别为16/12倍。每次加热1小时，合并浓缩冷却；加入浸膏重量2倍量的95vol％乙醇，搅匀，静置过夜，取上清液减压回收至干，得干浸膏(I)。
再取当归、牡丹皮和赤芍3味中药，加入5倍量的90％乙醇回流2次，每次回流1小时，合并2次提取物，减压回收至干，得干浸膏(II)。
将干浸膏(I)和干浸膏(II)合并后加水稀释至250mL，相当于1mL＝8g生药。
工艺3：按照药材总重量为2000g，取重量比为2.5：1.25：2.5：2.5：1：1的丹参、当归、黄芪、鸡血藤、牡丹皮和赤芍6味中药，加入5倍量的90vol％乙醇回流2次，每次回流1小时，合并2次提取物，减压回收至干，得干浸膏，加水稀释至250mL，相当于1mL＝8g生药。
采用高效液相色谱法测定3种工艺制成的浸膏中主要有效成分丹参素的含量：
1.色谱条件:
色谱柱：Phenomenex Hyper Clore BDS-C18(4.6mm×250mm,5μm)；
流动相：0.05％三氟乙酸(A)-甲醇(B)；
梯度洗脱：0～15min，A：85％→15％，B：15％→85％；
流速：1.0mL·min-1；
柱温：35℃；
检测波长:280nm；
进样量10μL；
2.对照品溶液的制备:
精密称取丹参素钠8.5mg，加蒸馏水定容至10mL；
3.供试品溶液的制备:
精密称取提取的丹归活血浸膏0.85g，置具塞锥形瓶中，精密加入蒸馏水10mL，称定重量，浸泡30分钟，超声30分钟，放冷，再称定重量，用蒸馏水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
结果显示：工艺1提取方法中丹参素效率最高，其它两种提取方法含量稍低且含量比较接近，而且当归、黄芪、鸡血藤、牡丹皮和赤芍不影响丹参素的测定。
三种不同提取工艺所得产物的药效学的预实验：
方法如下：
1、动物分组：
SPF级封闭状态下正常饲料喂养的BALB/c 6周龄，按体重将72只小鼠随机平均分成9组；分别分为工艺1高剂量组(AH组，0.875g生药/10g)、低剂量组(AL组，0.265g生药/10g)；工艺2高剂量组(BH组，0.875g生药/10g)、低剂量组(BL组，0.265g生药/10g)；工艺3高剂量组(CH组，0.875g生药/10g)、低剂量组(CL组，0.265g生药/10g)；三七通舒胶囊对照组(D组，0.124g胶囊/10g)和模型组(E组，生理盐水0.1mL/10g)。连续饲养12周，每次小鼠灌胃容量0.1mL/10g；每日1次。8只BALB/c正常对照组(F组)；服用生理盐水。
2、观察指标：
(1)一般情况观察：实验起点开始后每隔3～5天称体重直至实验结束；在给药期间仔细观察小鼠的食欲、毛发的变化、活动度等情况。
(2)观察指标：留取皮肤和肺部组织，进行常规病理(HE染色，半定量分析)和Masson染色(胶原容积分数法)、真皮厚度测量、羟脯氨酸(HYP)检测(样本碱水法)。
3、统计方法
采用R软件(版本：3.6)“ggsignif”R语言包进行组间两两比较，采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。
采用硬皮病模型小鼠对3种不同提取工艺的丹归活血浸膏进行药效评价，以三七通舒胶囊为阳性对照，结果发现3种不同提取工艺的提取的丹归活血浸膏和三七通舒胶囊在改善硬皮病小鼠的结果如下：
(一)一般情况观察：
实验开始前，各组小鼠体重无差别，但有皮毛枯萎，伴有脱落，状态不佳，活动减少，迟缓；随着观察时间的增加，各组小鼠饮食、活动逐渐恢复正常，外表皮毛也逐渐润泽。但在观察治疗过程中，出现小鼠死亡现象等。干预治疗12周后，动物死亡情况：AH组2只、BH组1只和CH组1只；这些死亡的小鼠可能与药物浓度太高、液体太粘稠有关。
(二)各组皮肤组织检测：
各组皮肤组织HE染色结果如图1～5所示，Masson染色结果如图6～10所示。其中，造模组小鼠皮肤相比对照组HE染色结果(图4)，显示真皮层显著增厚，胶原纤维束数量增多，形状增粗，排列紧密，向深部扩展至部分替代皮下脂肪脂肪组织；在真皮深部看到的典型的血管壁增厚纤维化；对照组(图5)小鼠皮肤组织无明显病理改变。具体表现在以下几个方面：
①皮肤组织炎症程度：
模型组(1.33±0.47)与正常组(0.44±0.39)炎症程度相比较均有显著性差异(P<0.05)，说明造模是成功的；药物干预12周后，其中AH组(0.17±0.24)，AL组(0.38±0.33)，CL组(0.75±0.25)与E组(模型组)(1.33±0.47)相比，皮肤炎症程度明显减轻，P值分别为0.0014、0.0041和0.039，如图11所示。
②皮肤组织胶原纤维改变比较:
模型动物干预12周后，各干预组皮肤纤维化均有不同程度的减小趋势，改善程度组别依次为AH组(0.31±0.11)、BL组(0.30±0.17)和D组(0.27±0.19)；但与模型组(0.49±0.21)相比，均无统计学意义(p＞0.05)，如图12所示。
③各组皮肤组织胶原蛋白含量变化：
干预实验12周后，各组皮肤纤维化均有不同程度的减轻，其中AL组(3024.68±654.15μg/g)，BH组(2948.35±1101.89μg/g)和CL组(2992.37±560.21μg/g)与模型组(4453.26±1099.18μg/g)相比；以及硬皮病模型组与正常对照组(2810.11±458.45μg/g)相比(p＝0.019)，差异均有统计学意义(p值均＜0.05)，如图13所示。
④皮肤厚度改变：
干预实验12周后，各干预组皮肤厚度均有不同程度的减小，其中AH组(199.98±18.02μm)，AL组(188.59±16.46μm)与模型组(235.68±13.30μm)相比，差异有统计学意义(p值均＜0.05)，如图14所示。
(三)各组肺部组织炎症程度检测：
各组肺部组织HE染色结果如图15～19所示，Masson染色结果如图20～24所示，造模组小鼠肺组织中可见肺泡间隔增宽伴炎症细胞渗出及浸润，肺泡结构破坏，可见肺组织血管增生、扩张(图18)；对照组小鼠肺泡结构正常(图19)。
①各组肺部组织炎症程度检测：
模型组肺部组织炎症(1.33±0.47)与正常组(0.69±0.35)相比,差异有统计学意义(p＝0.03)，说明造模成功；干预作用12周后，各干预组肺部组织炎症程度均有不同程度的减轻；其中AH组(0.42±0.34)与模型组(1.33±0.47)相比，差异有统计学意义(p＜0.05)，如图25所示。
②各组肺部组织胶原纤维改变检测：
干预实验12周后，各干预组肺部组织纤维化均有不同程度的减轻，改善程度最佳的组别依次为AH组(0.32±0.09)、AL组(0.31±0.09)、BL组(0.31±0.13)，但与模型组(0.45±0.20)相比；差异均无统计学意义(p＞0.05))，如图26所示。
③各组肺部组织胶原蛋白含量变化：
干预实验12周后，各组肺部组织纤维化均有不同程度的减轻，其中AH组(253.92±114.11μg/g)、BH组(212.86±61.24μg/g)、CH组(229.05±86.33μg/g)、CL组(284.23±46.23μg/g)与模型组(349.22±49.65μg/g)相比，以及模型组(349.22±49.65μg/g)与正常组(229.30±65.93μg/g)相比，差异均有统计学意义(p值均＜0.05)，如图27所示。
上述实施例仅为本发明的优选实施例，并非对本发明任何形式上和实质上的限制，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明的前提下，还将可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。
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