阅读说明：本技术 盐酸头孢吡肟药物制剂治疗中耳炎的新适应症 (New indication of cefepime hydrochloride medicinal preparation for treating otitis media ) 是由 傅苗青 周白水 郭丽娟 吴丰喆 马庆双 俞玉萍 李秋荣 应鹏 于 2020-04-25 设计创作，主要内容包括：本发明涉及药物制备技术领域,公开了一种盐酸头孢吡肟、制剂、制备方法及治疗中耳炎的新适应症。本发明中特定制备方法提供的盐酸头孢吡肟杂质含量低,稳定性高,药效显著,提高了制剂产品的质量,利于保证制剂产品的安全性和有效性,具有制备治疗中耳炎药物方面的用途。(The invention relates to the technical field of medicine preparation, and discloses cefepime hydrochloride, a preparation method and a new indication for treating otitis media. The cefepime hydrochloride provided by the specific preparation method disclosed by the invention is low in impurity content, high in stability and remarkable in drug effect, the quality of a preparation product is improved, the safety and the effectiveness of the preparation product are favorably ensured, and the cefepime hydrochloride has an application in preparing a drug for treating otitis media.)

盐酸头孢吡肟药物制剂治疗中耳炎的新适应症

技术领域

本发明涉及药物制备技术，具体涉及一种盐酸头孢吡肟组合物、制备方法及其应用。

背景技术

盐酸头孢吡肟，英文名称：CEFEPIME HYDROCHLORIDE，1997年由百时美施贵宝(Bristol-Myers Squibb)公司上市，为第四代头孢菌素类抗生素，其抗菌作用机制为影响细菌细胞壁的合成。与其它头孢菌素类药相似，能抑制转肽酶在细胞壁合成的最后一步交叉连接中的转肽作用，使交叉连接不能形成，从而影响细胞壁合成，导致细菌溶菌死亡。

盐酸头孢吡肟的化学名为1-[[(6R，7R)-7-[(2Z)-(2-氨基-4-噻唑基)(甲氧亚氨基)乙酰胺基)]-2-羧基-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂二环[4.2.0]辛-2-烯-3-基]-1-甲基吡咯烷鎓盐酸盐，其分子式为C₁₉H₂₄N₆O₅S₂·2HCl·H₂O，分子量为571.50，结构式如下：

盐酸头孢吡肟抗菌活性强，抗菌谱较广，对革兰阳性菌及革兰阴性菌包括肠杆菌属、绿脓杆菌、嗜血杆菌属、奈瑟淋球菌属、葡萄球菌及链球菌等均有较强抗菌活性。但其适应症和新用途有待进一步拓张。

由于盐酸头孢吡肟注射使用，也产生了很多不良反应，最常见的为过敏反应。过敏反应发病迅速，治疗困难，一旦治疗不及时就会产生严重后果。

虽然盐酸头孢吡肟注射剂为无菌制剂，大大降低了不良反应的发生，但是，由于盐酸头孢吡肟在合成、纯化、制剂制备中残存或引入杂质，会引起盐酸头孢吡肟稳定性变差，引起头孢吡肟形成大分子聚合物，最终导致过敏反应的发生。另外，有些杂质还会对人体产生药理危害，不利于人体健康。

针对上述问题，本发明人对盐酸头孢吡肟进行了质量研究，从而提供了一种安全、有效和质量可控的盐酸头孢吡肟及其制剂。

发明内容

本发明人经过锐意研究，通过对原料合成工艺进行改进，提供了一种低杂质含量的盐酸头孢吡肟化合物；制备该盐酸头孢吡肟化合物的工艺能够有效控制产品中的杂质，利于提高产品或相应制剂的使用安全性和保障临床治疗效果，并提高了生产效率，从而完成本发明。

本发明目的是提供以下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种盐酸头孢吡肟的制备方法，该制备方法以下步骤：

步骤1)，取ACLE·HCl和反应溶剂I加入反应容器中，0～4℃下滴加活化剂，滴加完毕后进行升温反应，得到的反应液与甲酸反应，生成化合物1；

步骤2)，化合物1和反应溶剂II混合，在0～4℃下滴加三氟乙酸(TFA)，滴加完毕后升温反应，然后进行析晶，获得化合物2；

步骤3)，在0～4℃下向化合物2中滴加N-甲基吡咯烷，滴加完毕后升温反应，反应结束后，加入析晶溶剂中，得到化合物3；

步骤4)，化合物3脱去7位氨基保护，得到化合物4；

步骤5)，化合物4和反应溶剂III混合，在20～30℃下加入催化剂和AE-活性脂，反应完成后用盐酸调pH，经后处理，得到化合物5。

第二方面，本发明提供了上述制备方法制得的盐酸头孢吡肟，其中有效组分盐酸头孢吡肟(C₁₈H₁₆N₈Na₂O₇S₃·3.5H₂O)的质量含量大于98.00％。

所述盐酸头孢吡肟中包括杂质A，

杂质A，其质量含量不高于0.2％；

杂质B，

杂质B，其质量含量不高于0.2％。

第三方面，本发明还提供了以上述盐酸头孢吡肟为有效成分的盐酸头孢吡肟制剂，所述制剂类型包括注射剂、颗粒剂、片剂、滴丸剂、胶囊剂，优选为注射剂，

所述制剂中还可以包括药学上可接受的没有配伍禁忌的药用辅料，盐酸头孢吡肟与药用辅料的重量比为10：(0.1-10)。

第四方面，本发明还提供了上述盐酸头孢吡肟、盐酸头孢吡肟制剂，在制备治疗中耳炎药物方面的用途。

根据本发明提供的盐酸头孢吡肟、制备方法及其应用，具有以下有益效果：

(1)根据本发明提供的盐酸头孢吡肟的制备方法，有效保证了原料高含量、低杂质，有利于提高使用安全性和相应制剂的临床治疗效果；

(2)相比于现有方法，本发明中合成路线没有使用不利于环境保护的氯氟烃类溶剂(Freon TF和四氯化碳)；

合成路线中，各步反应可在温和条件下进行，不需要在绝对干燥的条件下反应，从而具有了可规模化生产的优势。

(3)根据本发明提供的盐酸头孢吡肟组合物及其制剂，具有有效的制备治疗中耳炎的药物方面的应用。

具体实施方式

以下通过具体实施方式本发明进行进一步说明，本发明的特点和优点将随着这些说明而变得更为清楚。

本发明的目的在于提供一种盐酸头孢吡肟，要求其有效组分盐酸头孢吡肟(C₁₉H₂₄N₆O₅S₂·2HCl·H₂O)的质量含量不低于98.00％，优选不低于99.00％，更优选不低于99.50％，最优选不低于99.90％。

为此，本发明人对盐酸头孢吡肟的合成工艺进行了长期深入研究，以期通过获得低杂质含量的盐酸头孢吡肟，提高盐酸头孢吡肟中盐酸头孢吡肟的有效含量，进而利于解决其相关制剂的稳定性和用药安全性问题。

本发明人对多个厂家生产的注射用盐酸头孢吡肟中的样品杂质进行了大量分析和总结，考察杂质的药品虽然均符合中国药典的质量要求，但原料杂质和生产过程中产生的杂质在成品中的残留，可能产生使成品制剂在储存过程中的稳定性进一步弱化的问题，因而从根本上减少杂质的产生是具有重要意义的。本发明人发现较普遍存在于产品中的杂质包括：

杂质A，其为生成盐酸头孢吡肟反应中，由于强酸的加入以及与水接触时间过长导致盐酸头孢吡肟的四元环不稳定而产生的杂质。

为减少杂质的产生和残留，本发明对盐酸头孢吡肟的合成工艺进行了改进，以ACLE·HCl(7β-氨基-3-氯甲基-3-头孢烯-4-羧酸对甲氧苄基酯盐酸盐)为起始原料，采用易脱去的甲酰基(-C＝OH)对7位氨基进行保护获得化合物1；脱去4位酯基后获得化合物2；化合物2在有机溶剂中与N-甲基吡咯烷(NMP，分子式:C₅H₁₁N，分子量:85.15)反应生成稳定的内盐型化合物3，再脱去7位氨基保护，得到盐酸头孢吡肟关键中间体化合物4。

采用廉价易得的2-(2-氨基-4-噻唑基)-2-(甲氧亚氨基)乙酸硫代苯并噻唑酯(简称AE-活性脂)与化合物4经7位酰化反应最终制得盐酸头孢吡肟5。

具体地，包括以下步骤：

步骤1)，取ACLE·HCl和反应溶剂I加入反应容器中，0～4℃下滴加活化剂，滴加完毕后进行升温反应，得到的反应液与甲酸反应，生成化合物1；

步骤2)，化合物1和反应溶剂II混合，在0～4℃下滴加三氟乙酸(TFA)，滴加完毕后升温反应，然后进行析晶，获得化合物2；

步骤3)，在0～4℃下向化合物2中滴加N-甲基吡咯烷，滴加完毕后升温反应，反应结束后，加入析晶溶剂中，得到化合物3；

步骤4)，化合物3脱去7位氨基保护，得到化合物4；

步骤5)，化合物4和反应溶剂III混合，在20～30℃下加入催化剂和AE-活性脂，反应完成后用盐酸调pH，经后处理，得到化合物5。

在本发明步骤1)中，取ACLE·HCl和反应溶剂I加入反应容器中，0～4℃下滴加活化剂，滴加完毕后进行升温反应，得到的反应液与甲酸反应，生成化合物1。反应式如下式(1)：

本发明以ACLE·HCl为反应原料，通过活化剂使ACLE·HCl形成游离ACLE盐酸盐，再实施氨基保护。其中，所述活化剂为三乙胺、吡啶和碳酸氢钠中的任意一种或其组合，优选为三乙胺。

活化剂的作用是将ACLE·HCl去质子化，理论上可以选用有机碱和无机碱，然而，一方面，ACLE·HCl中含有四元环，强酸或强碱均容易形成开环，影响原料的稳定性，故而不易使用过强碱，而若碱性过弱，则ACLE·HCl去质子化不完全；另一方面，当采用无机碱时，需要向体系中引入溶剂水，而在后续氨基保护过程中，体系中水的存在反而不利于反应的进行，故而，需要在后续氨基保护反应前，需要将去质子化过程中引入的水脱除，这相较于使用有机碱而言，无机碱的使用使得反应程序更加繁琐。本发明人综合多方面的考虑，活化剂选自三乙胺、吡啶和碳酸氢钠中的任意一种或其组合，优选为三乙胺。

在本发明中，所述反应溶剂I选自四氢呋喃(THF)、甲醇、或乙酸乙酯(EtOAc)中的一种或其组合，优选为四氢呋喃。本发明人惊奇地发现，采用四氢呋喃相较于乙酸乙酯等溶剂，更有利于提高化合物1的产率。原因可能在于，四氢呋喃的氧杂环结构赋予其极强的极性，这有利于ACLE·HCl的去质子化及维持去质子化后ACLE盐酸盐的稳定，进而促进7位氨基保护反应的进行。

在本发明中，ACLE·HCl与活化剂的用量以ACLE·HCl与活化剂的摩尔比计，ACLE·HCl与活化剂的摩尔比为1:(1～2)。经过研究发现，在该用量范围内，能够有效实施ACLE·HCl的去质子化，这由化合物1的产率能够得到证实。当摩尔比小于1:0.5时，ACLE·HCl的去质子化效率低且不完全；若ACLE·HCl与活化剂的摩尔比高于1:2，则活化剂的用量较高，对ACLE·HCl的去质子化效率无明显提高，且增加原料成本。

在本发明中，活化剂滴加完毕后升温至20～35℃进行反应，反应过程中伴随搅拌，反应时间为0.5～1小时。

在本发明中，ACLE·HCl去质子化后的反应液与甲酸反应包括以下子步骤：

子步骤1-1)，将甲酸和乙酐在40～50℃搅拌反应0.5～2h；

子步骤1-2)，将ACLE·HCl去质子化后的反应液倒入子步骤1-1)的体系中，于40～50℃下搅拌反应0.5～2h，析出结晶；

子步骤1-3)，将上述反应体系降温，于0～4℃下搅拌0.5～1.5h，过滤，洗涤，得到化合物1。

本发明人在研究中发现，氨基保护反应过程中，原料中水分的存在会降低氨基保护的反应效率，这可能是因为氨基保护反应即为生成水的反应，原料中水的存在抑制反应的正向进行。为此，设计子步骤1-1)，通过加入乙酐，可以消耗甲酸中携带的水分并相应生成反应原料乙酸，提高反应原料浓度，还能够作为反应溶剂参与后续子步骤1-2)中反应；在子步骤1-2)中能够消耗氨基保护反应中生成的水分子，进一步促使反应向正方向进行。

优选地，乙酐的加入量以乙酐和ACLE·HCl的用量比计，乙酐与ACLE·HCl的摩尔量之比为(2～4)：1。

在本发明步骤2)中，化合物1和反应溶剂II混合，在0～4℃下滴加三氟乙酸(TFA)，滴加完毕后升温至20～35℃反应，反应完成后进行析晶，获得化合物2。反应式如下式(2)所示：

研究发现，在化合物2的合成中，三氟乙酸的用量对其产率有重要影响。三氟乙酸的用量以其与化合物1的摩尔用量比计，三氟乙酸与化合物1之比为5:1～20:1，优选为8:1～15:1。当两者之比小于5:1时，酯键水解不充分；当两者用量之比大于20:1时，对β-内酰胺四元环的稳定性产生影响。

在本发明一种优选实施方式中，反应溶剂II为二氯甲烷-苯甲醚复合溶剂，其中，二氯甲烷与苯甲醚的体积比为(1～1.5)：1。其中，苯甲醚属于低极性溶剂，有助于三氟乙酸溶剂参与反应。

在本发明一种优选实施方式中，通过将升温反应完成的反应液倒入析晶溶剂中实现的，该析晶溶剂为异丙醚-乙酸乙酯的复合溶剂，其中，异丙醚与乙酸乙酯的体积比为(0.5～2):1，优选为(0.9～1.1)：1。若异丙醚与乙酸乙酯的体积比小于0.5：1，则产物收率降低；若异丙醚与乙酸乙酯的体积比大于2：1，则析出的产物杂质偏多。这是因为，乙酸乙酯偏多会有更多的物质溶解进入乙酸乙酯，过滤时导致收率降低。

在本发明步骤3)中，在0～4℃下向化合物2中滴加N-甲基吡咯烷，滴加完毕后升温反应，反应结束后，加入析晶溶剂中，得到化合物3。反应式如下式(3)所示：

在一种优选的实施方式中，该反应的反应溶剂为四氢呋喃、甲醇或N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺中的一种或其组合，优选为四氢呋喃。原因可能在于，四氢呋喃的强极性结构，产物是极性产物，根据相似相容的原理，极性溶剂有助于生成更多的极性产物，利于极性化合物3的形成和稳定。

在一种优选的实施方式中，N-甲基吡咯烷的用量以其与化合物2的摩尔用量比计，N-甲基吡咯烷与化合物2之比为(2～3):1。

在一种实施方式中，所述析晶溶剂选自甲醇、异丙醇、甲醚、或乙酸乙酯中的一种或多种，优选为甲醇。

另外，将反应液倒入甲醇的过程，甲醇始终处于过量的状态，利于晶体析出。

在本发明中，基于步骤2)中反应，在步骤3)中能够直接利用化合物2中3-卤甲基的活泼性，直接实现3-氯甲基到3-N-甲基吡咯烷鎓甲基的转换，而无须经过中间体转换，简化了反应步骤，也避免了使用较昂贵的碘代试剂和不易储存的TMSI(氯代三甲基硅烷)。

在步骤3)中，因化合物3(季铵化合物内盐型结构)的存在，具有一定稳定性，增加对酸碱的耐受力，从而将大大降低头孢烯异构体杂质的存在。

在本发明步骤4)中，化合物3脱去7位氨基保护，得到化合物4。

该脱氨基保护的方法，可为本领域中常用的方法，优选采用如下方法：

将浓盐酸加入化合物3和甲醇的混合物中，搅拌3h，再将得到的混合液滴加到乙酸乙酯的溶液中，过滤得到白色固体化合物，再经丙酮-水处理后得到白色固体，即化合物4。

在本发明步骤5)中，化合物4(7β-氨基-3-(1-甲基-1吡咯烷鎓基)甲基-3-头孢烯-4-羧酸双盐酸盐)和反应溶剂III混合，在20～30℃下加入催化剂和AE-活性脂，反应完成后用盐酸调pH，经后处理，得到化合物5。反应式如下式(4)所示：

在本发明中，化合物4与AE活性脂的摩尔比为1:(1～2)，优选为1:(1.5～2)。在此用量范围内，结合催化剂和反应溶剂的选择，利于反应效率的提高。

在本发明中，所述反应溶剂III为水-N,N-二甲基甲酰胺的复合溶剂，水-N,N-二甲基甲酰胺的体积为(0.4～0.6)：1，优选为0.5:1。当水分过多时容易引起产物水解，导致杂质的产生。

在本发明中，步骤5)中催化剂为脂肪胺类，优选为吡啶、三乙胺、乙二胺、异丙胺、二异丙胺、正丁胺、异丁胺和1,4-丁二胺中一种或多种，最优选为三乙胺。

现有技术中，通常采用无机碱作为催化剂，反应温度要求在5℃以下，对生产上的动力和设备要求高，反应溶剂中需要提高水的比例。在不降低反应转化率的前提下，本发明人对此进行了大量研究，发现选用三乙胺作为催化剂，能够提高反应温度，放宽了对温度的要求。原因可能在于，有机碱特别是三乙胺，在实现促进化合物4与AE-活性酯反应的同时，相较于无机碱反应更为温和，降低了对低温的要求。

在一种优选的实施方式中，催化剂的用量以其与化合物4的摩尔比计，催化剂与化合物4的摩尔比为(1～3)：1。

在本发明中，加盐酸调pH至1～3。

在本发明步骤5)中，所述后处理包括以下步骤：将盐酸调pH后的反应液倒入析晶溶剂丙酮中，由于丙酮处于过量状态，室温下析出产物，反应迅速，节省反应时间和反应设备；过滤，再经水-丙酮(体积比1:1)洗涤，得到化合物5，化合物5即为盐酸头孢吡肟。

本发明中，反应溶剂III和析晶溶剂丙酮的体积比为1：(5～7)。

本发明人对通过上述方法制备得到的盐酸头孢吡肟进行了杂质分析，杂质A为生成盐酸头孢吡肟反应中，由于强酸的加入以及与水接触时间过长导致四元环不稳定而产生的杂质，其质量含量不高于0.2％，甚至不高于0.1％，甚至不高于0.05％，更甚至不高于0.01％。

本发明方法中，化合物4的转化率直接影响最终产物的收率和纯度，当反应条件为非优化条件时，化合物4存在残留在产物中的风险。

杂质B，其为化合物4在产品中的残留。由于产物为盐酸根离子，杂质B在酸性条件下以离子形式存在，其质量含量不高于0.2％，或者不高于0.1％，或者不高于0.05％，或者不高于0.01％。

本发明中，对于杂质A，我们在步骤5)中通过采用有机胺作为催化剂，降低反应体系中溶剂水的用量，进而降低后续调pH值时盐酸的用量，减缓了盐酸对四元环的冲击强度。研究发现，杂质A能够降低目标产物的产率，本发明中方法利于解决该问题。

本发明中，对于杂质B，我们通过AE-活性酯用量过量、以及对催化剂的特定选择，提高化合物4的转化率，降低体系中化合物4的剩余。研究发现，杂质B能够使反应不充分，导致原料浪费，本发明中方法利于解决该问题。

本发明中，采用上述方法得到盐酸头孢吡肟晶体用于制备药物制剂，其可以是医药上可接受的任何制剂类型，包括注射剂、颗粒剂、片剂、滴丸剂、胶囊剂等或者负载在其他医学上可用的载体，优选为注射剂。

优选地，所述制剂中还可以包括药学上没有配伍禁忌的药用辅料，盐酸头孢吡肟制剂中包括：

盐酸头孢吡肟 10重量份；

药用辅料 0.1-10重量份；

所述药用辅料优选为渗透压调节剂、pH调节剂和抗氧化剂中的一种或多种。所述渗透压调节剂为氯化钠或葡萄糖；所述pH调节剂为L-精氨酸；所述抗氧化剂为维生素C、亚硫酸钠、焦亚硫酸钠中的任意一种或多种。

本发明中，包括药用辅料的盐酸头孢吡肟制剂通过以下步骤实现：按配方精密称取盐酸头孢吡肟和药用辅料，其中，盐酸头孢吡肟D90的粒径为10-50μm，进一步为20-40μm；所述辅料粒径为50-100μm，优选为50-80μm；按比例分装或混合后分装；优选将二者研磨混合后分装，不仅可以使药物和辅料混合均匀，还可以进一步降低药物的粒径，缩短使用时的溶解时间。优选使用球磨机进行研磨混合，由于球磨机的封闭操作，可以实现无菌操作，降低污染的可能性，提高安全性。

根据本发明提供的盐酸头孢吡肟或组合物、其制备方法、盐酸头孢吡肟制剂，提供了一种用于制备治疗中耳炎的药物方面的用途。

实施例

以下通过具体优选的实施例对本发明进行进一步说明。这些实施例仅是说明性的，并不应理解为对本发明的限制。

实施例1盐酸头孢吡肟的合成

化合物1的制备：

取160gACLE·HCl、320mL四氢呋喃依次加入反应容器中，冰浴下滴加55ml(0.39mol)三乙胺，滴毕，撤冰浴，室温搅拌1h。过滤，150mL四氢呋喃分3次洗涤，滤液待用

于另一个反应容器中，加入44ml甲酸，110ml(1.17mol)乙酐，于40～50℃搅拌反应0.5h，将上述待用滤液倒入，析出结晶，继续于45℃，反应0.5h。降温，冰浴搅拌1h，过滤，乙醇洗涤，得到119g化合物1，收率86％。

化合物2的制备：

将110g化合物1，330mL二氯甲烷-210ml苯甲醚(体积比为3：2)依次加入反应容器，冰浴下滴加213ml三氟乙酸，室温下搅拌1小时后，将反应液倒入装有1200mL异丙醚-1200mL乙酸乙酯的反应瓶中，过滤收集沉淀物即56g化合物2，收率73％。

化合物3的制备：

将50g化合物2和200mL四氢呋喃加入反应容器，冰浴下滴加47ml N-甲基吡咯烷，滴毕，室温下搅拌0.5h，将反应液倾入90mL甲醇中，过滤，得到41g化合物3，收率70％。

化合物4的制备：

将32mL浓盐酸加入40g化合物3和200mL甲醇的混合物中搅拌3h，再滴加到200mL乙酸乙酯中，过滤得到白色固体化合物，再经丙酮-水(体积比为1：1)处理后得到白色固体，即37g化合物4，收率81％，纯度98％。

化合物5的制备：

在反应容器中，依次加入30g化合物4、300mL水、600mL DMF，20℃下加入三乙胺22.8ml(0.16mol)，至反应液pH＝7后加入29gAE活性脂，室温下反应3小时，用浓盐酸调pH＝1，然后慢慢倒入6L丙酮中，过滤得白色固体，再经水-丙酮(体积比1:1)洗涤三次，得34g化合物5，收率73％，纯度99.88％。

实施例2盐酸头孢吡肟的合成

与实施例1的合成工艺相同，区别仅在于：化合物1的合成中，采用乙酸乙酯作为反应溶剂I。最终制备得到74.7g化合物1，收率54％，说明四氢呋喃作为反应溶剂I相较于乙酸乙酯利于原料转化率的提高。

实施例3～4盐酸头孢吡肟的合成

实施例3与实施例1的合成工艺相同，区别仅在于：化合物1的合成中，在采用甲酸实施氨基保护时，不涉及乙酐的加入。

实施例4与实施例1的合成工艺相同，区别仅在于：化合物1的合成中，在采用甲酸实施氨基保护时，乙酐的加入量为55ml(0.59mol)。

表1

实施例	乙酐用量	化合物1	收率
				实施例1	110ml	119g	86％
实施例3	无	50g	36％
				实施例4	55ml	86g	62％

表1说明，乙酐的加入利于原料转化率的提高，但若乙酐的用量过少，对于原料转化率的提高有限。

实施例5盐酸头孢吡肟的合成

与实施例1的合成工艺相同，区别仅在于：化合物2的合成中，三氟乙酸的用量为110ml(1.43mol)，与化合物1的摩尔量之比小于5:1。最终制备得到43g化合物2，收率56％，说明三氟乙酸的用量过少，不利于化合物1脱去4位酯基。

实施例6盐酸头孢吡肟的合成

与实施例1的合成工艺相同，区别仅在于：化合物2的合成中，三氟乙酸的用量为500ml(6.48mol)，与化合物1的摩尔量之比大于20:1。最终制备得到47g化合物2，收率61％，，说明三氟乙酸的用量过多，导致副产物的生成，进而影响化合物2的产率。

实施例7～9盐酸头孢吡肟的合成

与实施例1的合成工艺相同，区别仅在于：化合物2的合成中，反应溶剂II和析晶溶剂的选用不同。

表2

由表2可知，反应溶剂II二氯甲烷-苯甲醚复合溶剂与析晶溶剂异丙醚-乙酸乙酯复合溶剂的组合，利于化合物2的析出。

实施例10～11盐酸头孢吡肟的合成

与实施例1的合成工艺相同，区别仅在于：化合物3的合成中，反应溶剂和析晶溶剂的选择不同。

表3

实施例	反应溶剂	析晶溶剂	化合物3	收率
					实施例1	四氢呋喃	甲醇	41g	70％
实施例10	N，N-二甲基甲酰胺	甲醇	32g	55％
					实施例11	四氢呋喃	丙酮	35g	60％

由表3可知，反应溶剂四氢呋喃与析晶溶剂甲醇的组合，利于化合物2转化率的提高。

实施例12～14盐酸头孢吡肟的合成

与实施例1的合成工艺相同，区别仅在于：化合物5的合成中，加入反应体系中的AE活性脂的用量不同。

表4

由表4可知，化合物4与AE活性脂的摩尔比为1:(0.9～1.1)范围内，化合物5的收率较高，且成本较低。当摩尔比高于1:2时，产率无明显提升。

实施例15～17盐酸头孢吡肟的合成

与实施例1的合成工艺相同，区别仅在于：化合物5的合成中，丙酮的用量和/或搅拌速率不同。

表5

由表5可知，当反应溶剂III和析晶溶剂丙酮的体积比为1：(10～12)，搅拌速度为80～100转/分时，制得的头孢吡肟产率高，堆密度和休止角范围适宜工业上制剂制备。

实施例18盐酸头孢吡肟的合成

与实施例1的合成工艺相同，区别仅在于：化合物5合成中，依次加入30g化合物4、300mL水、600mL DMF，冰浴冷却下加入氢氧化钠固体至反应液pH＝7后加入29g AE活性脂，室温下反应3小时。即，催化剂选用NaOH，且相应增加了体系中水的用量。最终得到28g化合物5，收率60％，纯度98.93％。

实施例19盐酸头孢吡肟—L-精氨酸粉针剂

药用辅料L-精氨酸粉碎至D90为50-80μm，称取制备的粉碎后盐酸头孢吡肟10kg，药用辅料3.3kg，球磨机粉碎混合后，以头孢吡肟(C₁₉H₂₄N₆O₅S₂)计1g装量，密封，包装，得到盐酸头孢吡肟制剂。

实验例

实验例1盐酸头孢吡肟晶体品质测定

1.1)长期试验

根据2015年版药典盐酸头孢吡肟项下方法测定实施例1、13、16、18制得的盐酸头孢吡肟的含量和有关物质，储存条件为25±2℃，相对湿度60±10％，结果如下表6：

表6

注：“未检出”是指质量含量低于0.01％。

1.2加速试验)

取实施例1、13、16、18样品，按照市售包装，在温度40±2℃，相对湿度75±5％的条件下放置6个月，分别在第1、3和6月末取样检测，结果如下表7所示。

表7

从加速试验结果可以看出，本发明所制备的盐酸头孢吡肟各项指标的检测无显著变化，说明该产品的稳定性较好。

实验例2

取实施例1、13、16中盐酸头孢吡肟按实施例19中方法制备的制剂进行内毒素/热原研究，结果发现，各制剂中内毒素/热原的水平均小于0.10EU/mg。

实验例3

实施例1、13、16中盐酸头孢吡肟按实施例19中方法制备盐酸头孢吡肟—L-精氨酸制剂，按照2015年版药典进行不溶性微粒的研究，结果如下表8：

表8

可见，实施例1、13、16中盐酸头孢吡肟制得的盐酸头孢吡肟制剂复溶性能非常好，25微米以上的不溶微粒很少，因而较少会引起临床过敏反应。

实验例4

在健康雌性小鼠(4周龄，体重18-20g)鼓膜穿刺分别接种大肠埃希菌1×10⁶/只，造小鼠中耳炎模型，得到具中耳感染的模型小鼠。

选用中耳感染小鼠60只，分为安慰剂组和观察组，每组30只。取实施例1中盐酸头孢吡肟按实施例19中方法制得的盐酸头孢吡肟—L-精氨酸制剂，对中耳感染分别以110mg/kg(以头孢吡肟计)的体重尾静脉注射给药，给药频率24h；治疗5天后，处死小鼠，解剖，检测中耳感染情况。

烦请补充治疗评判标准：

痊愈：炎症症状完全消失；

好转：炎症症状基本消失；

显效：炎症症状减轻；

无效：炎症症状基本无变化。

其中，中耳感染小鼠的治疗结果为：

观察组：痊愈20只，好转4只，显效3只，无效3只。

安慰剂组：痊愈3只，好转4只，显效7只，无效16只。

可见，观察组对小鼠中耳炎治疗效果明显好于安慰剂组。

实验例5

取健康小鼠雌性260只，取实施例1中盐酸头孢吡肟按实施例19中方法制得的盐酸头孢吡肟—L-精氨酸制剂，以350mg/kg(以头孢吡肟计)的剂量尾静脉注射给药，观察小鼠是否有兴奋不安、躁动、鼻翼煽动、抓鼻、呼吸急促、毛发耸立、四肢痉挛、跳跃等症状，记录是否有小鼠死亡。

经统计，结果如下：

出现上述症状的小鼠共有3只，无小鼠死亡。说明实施例1制备的盐酸头孢吡肟的安全性较高，致敏性较低。

实验例6

在健康雌性SD大鼠(体重180-220g)，腹腔麻醉大鼠，对外耳道进行消毒，用无菌注射器别接种大肠埃希菌1×10⁷/只，得到具有中耳感染的模型SD大鼠。

选取中耳感染SD大鼠100只，分为安慰剂组和观察组，每组50只。取实施例1中盐酸头孢吡肟按实施例19中方法制得的制剂A，对中耳炎感染分别以110mg/kg(以头孢吡肟计)的体重尾静脉注射给药，给药频率24h；治疗15天后，处死大鼠，解剖，检测中耳感染情况。

烦请补充治疗评判标准：

痊愈：炎症症状完全消失；

好转：炎症症状基本消失；

显效：炎症症状减轻；

无效：炎症症状基本无变化。

其中，中耳感染SD大鼠的治疗结果为

观察组：痊愈35只，好转6只，显效3只，无效6只。

安慰剂组：痊愈4只，好转7只，显效9只，无效30只。

可见，观察组对大鼠中耳炎治疗效果明显好于安慰剂组。

以上结合具体实施方式和范例性实例对本发明进行了详细说明，不过这些说明并不能理解为对本发明的限制。本领域技术人员理解，在不偏离本发明精神和范围的情况下，可以对本发明技术方案及其实施方式进行多种等价替换、修饰或改进，这些均落入本发明的范围内。本发明的保护范围以所附权利要求为准。