阅读说明：本技术 一种草莓果实的保鲜方法 (Strawberry fruit preservation method ) 是由 田世平 张占全 李博强 陈彤 徐勇 于 2020-05-19 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种草莓采后果实的保鲜方法。该方法包括下述步骤：将苯甲基异硫氰酸盐(BITC)溶液喷施于草莓果实表面。BITC溶液的浓度为50-200μg/mL；其喷施量为每千克草莓果实15-25mL。草莓果实自然发病率检测结果表明,BITC的喷雾处理可以有效抑制草莓果实采后病害(草莓灰霉病)的发生。(The invention discloses a method for preserving picked strawberries. The method comprises the following steps: spraying Benzyl Isothiocyanate (BITC) solution on the surface of strawberry fruit. The concentration of the BITC solution is 50-200 mug/mL; the spraying amount is 15-25mL per kilogram of strawberry fruits. The detection result of the natural disease incidence of the strawberry fruits shows that the spray treatment of the BITC can effectively inhibit the occurrence of the postharvest disease (strawberry gray mold) of the strawberry fruits.)

一种草莓果实的保鲜方法

技术领域

本发明属于果蔬贮藏保鲜领域，具体涉及一种草莓果实的保鲜方法。

背景技术

草莓(Fragaria ananassa)是蔷薇科草莓属多年生草本植物，草莓果实色泽鲜艳，风味独特，富含矿物质、膳食纤维、维生素C、维生素A、维生素E、维生素PP、维生素B1、维生素B2、胡萝卜素、鞣酸、花青素和黄酮等多种营养物质，尤其是维生素C含量比苹果、葡萄高7-10倍。草莓中富含的胡萝卜素与维生素A可缓解夜盲症，具有维护上皮组织健康、明目养肝、促进生长发育之功效，被誉为“水果皇后”，受到广大消费者的欢迎。但由于草莓果实属于浆果类，果皮脆弱、水分含量高，在收获和运输过程中极易受到机械损伤，造成病原真菌的侵染，从而引起腐烂变质。因此，采后保鲜期短成为限制草莓产业发展的关键因素。延长草莓果实货架期，提高其商品价值，是草莓贮藏保鲜中亟需解决的问题，也是果蔬贮藏保鲜领域的研究热点和难点。

异硫氰酸盐(isothiocyanate,ITCs)是十字花科植物中一种具有防癌抗癌作用的有机硫化合物，近年来受到营养学与预防医学界的高度重视。ITCs主要以葡萄糖异硫氰酸盐缀合物形式存在于十字花科蔬菜中，如西蓝花、卷心菜、芥蓝、花茎橄榄和抱子甘蓝等。现已发现约有100种ITCs，但在饮食中常接触并通过实验证明具有抗癌作用的ITCs主要包括苯甲基异硫氰酸盐(Benzyl isothiocyanate,BITC)、异硫氰酸烯丙酯(Allylisothiocyanate，AITC)、苯乙基异硫氰酸盐(phenethyl isothiocyanate，PEITC)和莱菔硫烷(Sulforaphane，SFN)。BITC是一种安全的植物源天然产物，目前并没有其在草莓保鲜领域应用的报道。

发明内容

本发明的一个目的是提供苯甲基异硫氰酸盐(BITC)的新用途。

本发明所提供的苯甲基异硫氰酸盐(BITC)的新用途包括下述至少一方面：

1)在防治灰霉病中的应用；

2)在制备防治灰霉病的产品中的应用；

3)在抑制灰葡萄孢菌中的应用。

所述灰霉病可由灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)引起。

所述灰霉病具体可为草莓灰霉病、葡萄灰霉病、苹果灰霉病等；更进一步可为草莓采后果实发生的草莓灰霉病。

所述产品可为杀菌剂。

所述抑制灰葡萄孢菌具体体现在下述a)和/b)：

a)抑制灰葡萄孢菌的孢子萌发和菌丝生长；

b)抑制由灰葡萄孢菌引起的草莓果实灰霉病病斑的扩展速率。

本发明的另一个目的是提供一种防治水果果实采后灰霉病的方法。

本发明所提供的防治灰霉病的方法，包括下述步骤：将苯甲基异硫氰酸盐(BITC)溶液喷施于果实表面。

所述水果果实可为草莓果实、葡萄果实、苹果果实等。

所述苯甲基异硫氰酸盐(BITC)溶液中苯甲基异硫氰酸盐的浓度为50-200μg/mL，具体可为100μg/mL。

所述苯甲基异硫氰酸盐(BITC)溶液由苯甲基异硫氰酸盐(BITC)母液用水稀释后得到。所述苯甲基异硫氰酸盐(BITC)母液的浓度为0.1-0.2g/mL，其溶剂为无水乙醇。

所述果实为草莓果实，所述苯甲基异硫氰酸盐(BITC)溶液的喷施量为每千克草莓果实15-25mL，具体可为20mL。

本发明的再一个目的是提供一种草莓采后果实的保鲜方法。

本发明所提供的草莓采后果实的保鲜方法，包括下述步骤：将苯甲基异硫氰酸盐(BITC)溶液喷施于草莓果实表面。

所述苯甲基异硫氰酸盐(BITC)溶液中苯甲基异硫氰酸盐的浓度为50-200μg/mL，具体可为100μg/mL。

所述苯甲基异硫氰酸盐(BITC)溶液由苯甲基异硫氰酸盐(BITC)母液用水稀释后得到。所述苯甲基异硫氰酸盐(BITC)母液的浓度为0.1-0.2g/mL，其溶剂为无水乙醇。

所述苯甲基异硫氰酸盐(BITC)溶液的喷施量为每千克草莓果实15-25mL，具体可为20mL。

所述方法还包括将苯甲基异硫氰酸盐(BITC)溶液喷施后的草莓果实置于灭菌塑料筐中，外套聚乙烯保鲜袋，置于15-25℃贮藏。

BITC对灰霉菌的孢子萌发和菌丝生长均有显著的抑制效果。在液体培养基PDB中，50μg/mL的BITC可以完全抑制灰霉菌孢子的萌发(图1A,B)，在PDA平板上50μg/mL对菌落生长的抑制率为42％，100μg/mL的BITC可以完全抑制菌落的生长(图1C)。这说明BITC对灰霉菌的萌发和生长有明显的抑制作用。

附图说明

图1为BITC对灰霉菌的抑制效果；A.BITC处理后灰霉菌孢子萌发情况观察；B.BITC处理后灰霉菌孢子萌发率统计；C.BITC处理后对灰霉菌菌落直径统计。

图2为BITC对草莓果实灰霉病的抑制效果；A.BITC处理后草莓果实灰霉病发病情况(3days post inoculation)；B.BITC处理后草莓果实灰霉病病斑直径统计。

图3为BITC对草莓果实自然发病的抑制效果；A.BITC处理后草莓果实自然发病情况；B.BITC处理后草莓果实自然发病率统计。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明进行说明，但本发明并不局限于此，凡在本发明的精神和原则之内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下述实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

实施例中所用BITC购自Sigma-Aldrich公司(货号：252492)

病原菌Botrytis cinerea的菌株编号为B05.10,由德国明斯特大学PaulTudzynski教授惠赠。记载于如下文献：Segmüller N,Kokkelink L,Giesbert S,OdiniusD,van Kan JAL,Tudzynski P.2008.NADPH oxidases are involved in differentiationand pathogenicity in Botrytis cinerea.Mol Plant Microbe Interact,21,808-819.

实施例1、基于BITC的草莓采后果实保鲜方法

1方法：

1.1BITC溶液配制：先用无水乙醇将BITC配置成0.1g/mL的母液，之后用蒸馏水将母液分别稀释成10μg/mL，50μg/mL和100μg/mL的工作液。

1.2BITC的抑菌效果检测：

灰霉病是造成草莓果实腐烂损失的最主要病害之一，我们以草莓灰霉病的病原菌灰葡萄孢菌Botrytis cinerea(简称灰霉菌)为例检测BITC对病原菌的抑制效果。

1.2.1孢子萌发率检测：

用BITC母液配制浓度为10μg/mL和50μg/mL的PDA(Potato Dextrose Agar)培养基，在培养基上平铺一层灭菌玻璃纸。之后在每个培养基的玻璃纸上均匀涂布200μL浓度为5×10⁶个/mL的B.cinerea孢子悬浮液。之后分别在接种后的7小时和9小时在光学显微镜下检测分生孢子的萌发率，每个处理浓度检测3个视野，计算BITC对孢子萌发的抑制率。

1.2.2菌落生长速率检测：

同上，用BITC母液配制浓度为10μg/mL和50μg/mL的PDA培养基平板，不加BITC的PDA平板作为对照。在培养4天的灰葡萄孢菌PDA平板上用打孔器取出直径为5mm的菌饼接种在加入BITC的PDA平板的中央，之后每天采用十字交叉法测量菌落直径，计算BITC对菌落生长的抑制率。

1.3草莓果实灰霉病病斑扩展检测：

通过刺伤接种的方法检测BITC对草莓果实灰霉病的抑制率。用PDB(PotatoDextrose Broth)液体培养基配置浓度为10⁴个/mL的B.cinerea孢子悬浮液。用接种针在草莓果实的腰部刺伤(5mm深)，之后在伤口处接种5μL配置好的灰霉菌孢悬液。1小时后在伤口处注入不同浓度的BITC溶液，用灭菌蒸馏水作为对照。将接种后的草莓果实放入灭菌塑料筐中，外套聚乙烯保鲜袋，置于25℃贮藏。之后每天测量灰霉病病斑直径，用如下公式计算BITC对灰霉病的抑制率。

R:抑制率，D₀:对照病斑直径，D_B：BITC处理后病斑直径

1.4草莓果实自然发病率检测：

通过喷雾的方法检测BITC对草莓果实自然发病率的抑制效果。用灭菌蒸馏水将BITC母液稀释成100μg/mL的工作液。用喷雾器将BITC溶液均匀喷施在草莓果实表面，喷施量约为20mL每千克草莓果实。之后将草莓果实置于灭菌塑料筐中，外套聚乙烯保鲜袋，置于25℃贮藏，之后每天观察统计草莓果实的发病率，表面出现明显霉斑的草莓果实定义为发病果实。

2结果：

BITC对灰霉菌的孢子萌发和菌丝生长均有显著的抑制效果。在液体培养基PDB中，50μg/mL的BITC可以完全抑制灰霉菌孢子的萌发(图1A,B)，在PDA平板上50μg/mL对菌落生长的抑制率为42％，100μg/mL的BITC可以完全抑制菌落的生长(图1C)。这说明BITC对灰霉菌的萌发和生长有明显的抑制作用。

刺伤接种实验结果显示，BITC处理可以有效抑制草莓果实灰霉病病斑的扩展速率。在草莓果实接种灰霉菌后第3和第4天，10μg/mL BITC处理对草莓灰霉病的抑制率分别为43％和35％，50μg/mL BITC处理对草莓灰霉病的抑制率分别达到了74％和55％(图2)。

通过喷雾处理的方法进一步检测了BITC处理对草莓果实采后自然发病率的防治效果，施用浓度为100μg/mL。结果显示在贮藏2天和3天后，对照组的自然发病率分别为55.3％和82.3％，BITC处理组的自然发病率为13.3％和46.7％(图3)。BITC处理对草莓果实自然发病的抑制率在贮藏2天和3天后分别为75％和43％(图3)。这说明BITC的喷雾处理可以有效抑制草莓果实采后病害的发生。