阅读说明：本技术 一株可缓解和治疗冠心病的乳双歧杆菌Probio-M8及其应用 (Bifidobacterium lactis Probio-M8 capable of relieving and treating coronary heart disease and application thereof ) 是由 刘晓军 马杰 张凌宇 张建军 其木格苏都 杨慧娟 于 2020-05-25 设计创作，主要内容包括：本申请公开了一株可缓解和治疗冠心病的乳双歧杆菌Probio-M8及其应用。本申请通过临床人群试验表明,乳双歧杆菌Probio-M8安全性良好,可降低冠心病患者焦虑、抑郁情绪,缓解患者心绞痛症状,并降低血液中低密度脂蛋白胆固醇含量。对于缓解和治疗冠心病及焦虑、降低胆固醇水平具有明显效果,在制备缓解和治疗冠心病的产品和功能性产品中具有巨大的应用前景。(The application discloses a bifidobacterium lactis Probio-M8 strain capable of relieving and treating coronary heart disease and application thereof. Clinical population tests show that the bifidobacterium lactis Probio-M8 is good in safety, can reduce anxiety and depression mood of patients with coronary heart disease, relieve angina symptoms of the patients, and reduce the content of low-density lipoprotein cholesterol in blood. Has obvious effects on relieving and treating coronary heart disease and anxiety and reducing cholesterol level, and has huge application prospect in preparing products and functional products for relieving and treating coronary heart disease.)

一株可缓解和治疗冠心病的乳双歧杆菌Probio-M8及其应用

技术领域

本申请涉及微生物技术领域，特别涉及一株可缓解和治疗冠心病的乳双歧杆菌Probio-M8及其应用。

背景技术

冠状动脉粥样硬化性心脏病简称冠心病，是心血管疾病中常见的死亡原因之一。随着冠心病在全球范围内发病率的不断提高，其发病机制及治疗措施的研究也越发深入。以总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白水平过高以及高密度脂蛋白水平过低为特征的高脂血症会导致动脉粥样硬化，进而引起冠心病。通常，隐性冠心病或冠心病患者情绪具有起伏性，常见出现轻微抑郁或焦虑情绪。在冠心病的发生和发展中，血脂及炎症因子水平起着重要作用，血脂异常是冠心病发病最常见、最重要的因素，而动脉粥样硬化的形成则是在脂质沉积的基础上合并内皮细胞损伤的一种慢性炎症反应。目前冠心病的治疗方法主要有支架、搭桥、药物治疗等，不仅给患者带来巨大的经济负担，还会导致不同程度的副作用。

益生菌已允许用于许多疾病的临床治疗中，通常被定义为当机体从膳食中摄入足够量时，能够调节并改善肠道菌群，对人体健康具有促进作用的一类活性微生物。目前缺乏可有效缓解和治疗冠心病、改善患者焦虑和抑郁情绪和降低胆固醇水平的益生菌。

发明内容

本申请实施例提供一株可缓解和治疗冠心病的乳双歧杆菌Probio-M8及其应用，以解决缺乏可有效缓解和治疗冠心病、改善患者焦虑和抑郁情绪和降低胆固醇水平的益生菌的问题。

第一方面，本申请提供一株可缓解和治疗冠心病的乳双歧杆菌Probio-M8，所述乳双歧杆菌Probio-M8(Bifidobacterium lactis Probio-M8)分离自健康妇女母乳，该菌株保藏于在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.18610；分类命名为乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)；保藏时间：2019年09月20日；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；该菌株的检测结果为存活。

所述乳双歧杆菌Probio-M8为革兰氏阳性菌，琼脂平板生成直径为1-2mm的凸圆形乳白色菌落，边缘完整，表面光滑。细胞形态呈哑铃状杆菌，两端规则，有许多明显节点，所述双歧杆菌Probio-M8为异型发酵。

第二方面，本申请提供乳双歧杆菌Probio-M8在缓解和治疗冠心病中的应用。

进一步地，所述乳双歧杆菌Probio-M8在缓解和治疗冠心病产品中的应用，所述产品中所述乳双歧杆菌Probio-M8的活菌数不低于1.00×10⁶CFU/g或1.00×10⁶CFU/mL。

进一步地，所述产品包括食品、药品或保健食品。

进一步地，所述保健食品包括直投式发酵剂、益生菌固体饮料、压片糖果和功能性药物辅助材料。

进一步地，所述食品包括含有所述乳双歧杆菌Probio-M8的发酵剂生产得到的豆制品、乳制品或果蔬制品。

进一步地，所述药品包括含有所述乳双歧杆菌Probio-M8的药物载体和/或药用辅料。

进一步地，所述药用辅料包括溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、渗透促进剂、pH值调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂与反絮凝剂、助滤剂以及释放阻滞剂。

进一步地，所述药品的剂型包含颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液。

第三方面，本申请提供乳双歧杆菌Probio-M8在改善冠心病患者焦虑和抑郁情绪中的应用。

进一步地，所述乳双歧杆菌Probio-M8在改善冠心病患者焦虑和抑郁情绪产品中的应用，所述产品中所述乳双歧杆菌Probio-M8的活菌数不低于1.00×10⁶CFU/g或1.00×10⁶CFU/mL。

进一步地，所述产品包括食品、药品或保健食品。

进一步地，所述保健食品包括直投式发酵剂、益生菌固体饮料、压片糖果和功能性药物辅助材料。

进一步地，所述食品包括含有所述乳双歧杆菌Probio-M8的发酵剂生产得到的豆制品、乳制品或果蔬制品。

进一步地，所述药品包括含有所述乳双歧杆菌Probio-M8的药物载体和/或药用辅料。

进一步地，所述药用辅料包括溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、渗透促进剂、pH值调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂与反絮凝剂、助滤剂以及释放阻滞剂。

进一步地，所述药品的剂型包含颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液。

第四方面，本申请提供乳双歧杆菌Probio-M8在降低冠心病患者胆固醇水平中的应用。

进一步地，所述乳双歧杆菌Probio-M8在降低冠心病患者胆固醇水平产品中的应用，所述产品中所述乳双歧杆菌Probio-M8的活菌数不低于1.00×10⁶CFU/g或1.00×10⁶CFU/mL。

进一步地，所述产品包括食品、药品或保健食品。

进一步地，所述保健食品包括直投式发酵剂、益生菌固体饮料、压片糖果和功能性药物辅助材料。

进一步地，所述食品包括含有所述乳双歧杆菌Probio-M8的发酵剂生产得到的豆制品、乳制品或果蔬制品。

进一步地，所述药品包括含有所述乳双歧杆菌Probio-M8的药物载体和/或药用辅料。

进一步地，所述药用辅料包括溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、渗透促进剂、pH值调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂与反絮凝剂、助滤剂以及释放阻滞剂。

进一步地，所述药品的剂型包含颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液。

本申请提供一株可缓解和治疗冠心病的乳双歧杆菌Probio-M8及其应用。本申请通过临床人群试验表明，乳双歧杆菌Probio-M8安全性良好，可降低冠心病患者焦虑、抑郁情绪，缓解患者心绞痛症状，并降低血液中低密度脂蛋白胆固醇含量。对于缓解和治疗冠心病及焦虑、降低胆固醇水平具有明显效果，在制备缓解和治疗冠心病的产品和功能性产品中具有巨大的应用前景。

附图说明

为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为焦虑自评量表得分结果；

图2为抑郁自评量表得分结果；

图3为西雅图心绞痛量表中活动受限程度部分的得分结果；

图4为西雅图心绞痛量表中心绞痛稳定状态部分的得分结果；

图5为西雅图心绞痛量表中心绞痛发作情况部分的得分结果；

图6为西雅图心绞痛量表中治疗满意度评分部分的得分结果；

图7为西雅图心绞痛量表中认知程度评分部分的得分结果；

图8乳双歧杆菌Probio-M8对冠心病患者低密度脂蛋白胆固醇的影响；

图9乳双歧杆菌Probio-M8对冠心病患者血清白细胞介素6的影响。

具体实施方式

本申请提供一株可缓解和治疗冠心病的乳双歧杆菌Probio-M8，所述乳双歧杆菌Probio-M8(Bifidobacterium lactis Probio-M8)分离自健康妇女母乳，是一株具有良好的胃肠液和胆盐耐受性的益生菌菌株，该菌株保藏于在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.18610；分类命名为乳双歧杆菌(Bifidobacteriumlactis)；保藏时间：2019年09月20日；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；该菌株的检测结果为存活。

本申请提供乳双歧杆菌Probio-M8在缓解和治疗冠心病中的应用。

进一步地，所述乳双歧杆菌Probio-M8在缓解和治疗冠心病产品中的应用，所述产品中所述乳双歧杆菌Probio-M8的活菌数不低于1.00×10⁶CFU/g或1.00×10⁶CFU/mL。

进一步地，所述产品包括食品、药品或保健食品。

进一步地，所述保健食品包括直投式发酵剂、益生菌固体饮料、压片糖果和功能性药物辅助材料。

进一步地，所述食品包括含有所述乳双歧杆菌Probio-M8的发酵剂生产得到的豆制品、乳制品或果蔬制品。

进一步地，所述药品包括含有所述乳双歧杆菌Probio-M8的药物载体和/或药用辅料。

进一步地，所述药用辅料包括溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、渗透促进剂、pH值调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂与反絮凝剂、助滤剂以及释放阻滞剂。

进一步地，所述药品的剂型包含颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液。

本申请提供乳双歧杆菌Probio-M8在改善冠心病患者焦虑和抑郁情绪中的应用。

进一步地，所述乳双歧杆菌Probio-M8在改善冠心病患者焦虑和抑郁情绪产品中的应用，所述产品中所述乳双歧杆菌Probio-M8的活菌数不低于1.00×10⁶CFU/g或1.00×10⁶CFU/mL。

进一步地，所述产品包括食品、药品或保健食品。

进一步地，所述保健食品包括直投式发酵剂、益生菌固体饮料、压片糖果和功能性药物辅助材料。

进一步地，所述食品包括含有所述乳双歧杆菌Probio-M8的发酵剂生产得到的豆制品、乳制品或果蔬制品。

进一步地，所述药品包括含有所述乳双歧杆菌Probio-M8的药物载体和/或药用辅料。

进一步地，所述药用辅料包括溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、渗透促进剂、pH值调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂与反絮凝剂、助滤剂以及释放阻滞剂。

进一步地，所述药品的剂型包含颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液。

本申请提供乳双歧杆菌Probio-M8在降低冠心病患者胆固醇水平中的应用。

进一步地，所述乳双歧杆菌Probio-M8在降低冠心病患者胆固醇水平产品中的应用，所述产品中所述乳双歧杆菌Probio-M8的活菌数不低于1.00×10⁶CFU/g或1.00×10⁶CFU/mL。

进一步地，所述产品包括食品、药品或保健食品。

进一步地，所述保健食品包括直投式发酵剂、益生菌固体饮料、压片糖果和功能性药物辅助材料。

进一步地，所述食品包括含有所述乳双歧杆菌Probio-M8的发酵剂生产得到的豆制品、乳制品或果蔬制品。

进一步地，所述药品包括含有所述乳双歧杆菌Probio-M8的药物载体和/或药用辅料。

进一步地，所述药用辅料包括溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、渗透促进剂、pH值调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂与反絮凝剂、助滤剂以及释放阻滞剂。

进一步地，所述药品的剂型包含颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液。

为了证明本申请的乳双歧杆菌Probio-M8可以缓解和治疗冠心病、改善患者焦虑和抑郁情绪和降低胆固醇水平，做了以下实验。

实验例1乳双歧杆菌Probio-M8治疗冠心病临床试验

乳双歧杆菌Probio-M8治疗冠心病人体试验共进行6个月，招募60名志愿者。试验分为益生菌组和安慰剂组，益生菌组服用冠心病基础治疗用药(阿司匹林、他汀类降脂药、美托洛尔、硝酸异山梨酯等)+乳双歧杆菌Probio-M8(3.00×10¹⁰CFU/日)，安慰剂组服用治疗冠心病基础用药(阿司匹林、他汀类降脂药、美托洛尔、硝酸异山梨酯等)+安慰剂。

临床数据包括焦虑和抑郁情况调查、心绞痛情况调查和低密度脂蛋白胆固醇、血清白细胞介素6、谷丙转氨酶、血尿素氮、肌酐及白细胞计数六项血液指标。分别于试验开始和结束时进行两次临床数据收集，使用Wilcoxon Test检验进行益生菌组和安慰剂组间的差异检验。

志愿者情况：

A.益生菌组

a.共36人：男性19人，女性17人；

b.平均年龄：64.80±8.03岁；

c.平均BMI：25.08±2.13；

d.冠心病分型：24人为不稳定型心绞痛，9人为稳定型心绞痛，3人为急性心梗；

e.冠状动脉支架数量：16人未安装支架，6人一个支架，8人两个支架，6人三个支架。

B.安慰剂组

a.共24人：男性14人，女性10人；

b.平均年龄：66.29±10.30岁；

c.平均BMI：25.55±2.04；

d.冠心病分型：17人为不稳定型心绞痛，6人为稳定型心绞痛，1人为急性心梗；

e.冠状动脉支架数量：9人未安装支架，5人一个支架，7人两个支架，3人三个支架。

益生菌组与安慰剂组患者的年龄、BMI和平均支架数均无显著性差异。急性冠脉综合征(Acute Coronary Syndrome，ACS)为不稳定型心绞痛+急性心梗，益生菌组ACS比例为75.00％，安慰剂组ACS比例为75.00％，益生菌组与安慰剂组比例相同。

结果如下：

1.乳双歧杆菌Probio-M8改善冠心病患者焦虑和抑郁的症状

焦虑和抑郁情况分别使用焦虑自评量表(Self-RatingAnxiety Scale，SAS)和抑郁自评量表(Self-ratingdepressionscale，SDS)进行评估，SAS和SDS量表得分越高表示焦虑和抑郁的情况越严重，分别在试验开始和结束时进行两次临床问卷调查。

如图1所示，服用乳双歧杆菌Probio-M8至治疗结束时益生菌组(Probiotics)SAS量表得分极显著低于安慰剂组(Placebo)(P<0.0001)，益生菌组在治疗前和治疗后SAS量表得分显著降低(P<0.0001)，由治疗前的46.31分降低至治疗后的38.43分，降低17.01％，安慰剂组治疗前后得分降低的差异不显著。如图2所示，服用乳双歧杆菌Probio-M8至治疗结束时益生菌组SDS量表得分极显著低于安慰剂组(P<0.0001)，益生菌组在治疗前和治疗后SDS量表得分显著降低(P<0.0001)，由治疗前的49.34分降低至治疗后的38.95分，降低21.05％，安慰剂组治疗前后得分降低程度较小并且差异不显著。

其中，相同数据组左侧为治疗前(Before treatment)，右侧为治疗后(Aftertreatment)。

综上所述，服用乳双歧杆菌Probio-M8能显著缓解冠心病患者的焦虑和抑郁情绪。

2.乳双歧杆菌Probio-M8改善冠心病患者心绞痛症状

心绞痛情况调查采用西雅图心绞痛量表(SeattleAngina Questionnaiire，SAQ)进行评估。SAQ量表共由19道题组成，分为五大部分，第一部分为“活动受限程度”，第二部分为“心绞痛稳定状态”，第三部分为“心绞痛发作情况”，第四部分为“治疗满意度评分”，第五部分为“认知程度评分”，得分越低表示心绞痛症状越严重，治疗效果越差。

如图3-7所示，组内分析发现益生菌组和安慰剂组在治疗前与治疗后SAQ量表五个部分问题得分均极显著上升(P<0.0001)，表明益生菌组与安慰剂组患者所服用药物均可以缓解心绞痛症状。组间分析发现在治疗前“活动受限程度”(P＝0.015)和“认知程度评分”(P＝0.033)益生菌组与安慰剂间存在显著性差异，其余三个问题在治疗前益生菌组与安慰剂组间无显著性差异。服用乳双歧杆菌Probio-M8至治疗结束时益生菌组与安慰剂组间“活动受限程度”得分差异极显著(P＝0.00014)，但益生菌组得分上升44.40％，安慰剂组得分仅上升10.80％，表明乳双歧杆菌Probio-M8对冠心病患者活动受限程度改善优于安慰剂；治疗后益生菌组与安慰剂组的“认知程度评分”差异已不再显著，表明乳双歧杆菌Probio-M8对患者认知程度的改善优于安慰剂；在治疗后“心绞痛稳定状态”(P＝0.00015)、“心绞痛发作情况”(P<0.0001)和“治疗满意度评分”(P＝0.00090)得分均极显著高于安慰剂组。

综上，服用乳双歧杆菌Probio-M8对心绞痛有更好的治疗效果和治疗满意度。

3.乳双歧杆菌Probio-M8对冠心病患者血液的影响

将血液样品进行前处理，通过LC-MS技术非靶向测定样品全谱，以确定不同治疗组间代谢差异物质。

血液指标共包括低密度脂蛋白胆固醇(Low Density Lipoprotein Chesterol，LDL-C)、血清白细胞介素6(Interleukin-6，IL-6)、谷丙转氨酶(Glutamate PyruvicTransami)、血尿素氮(Blood Urea Nitrogen)、肌酐(Creatinine)和白细胞计数(WhiteBlood Cell Count)。LDL-C是空腹血浆中的主要脂蛋白，是运输胆固醇到肝外组织的主要运载工具，其浓度与冠心病的发病率有明显正相关关系，因而其浓度越低冠心病的发病风险越低；IL-6是由活化的T细胞和成纤维细胞产生的淋巴因子，是重要的炎症标记物，作为预测急性冠状动脉综合征的早期基础病变及严重并发症的指标，IL-6血清浓度越高发生严重冠状动脉硬化及再发心绞痛的风险就越高。谷丙转氨酶主要存在于肝脏细胞内，在各种病毒性肝炎的急性期、药物中毒性肝细胞坏死时，谷丙转氨酶大量释放入血中，因此它是诊断病毒性肝炎、中毒性肝炎的重要指标。血尿素氮是血浆中除蛋白质以外的一种含氮化合物，从肾小球滤过而排出体外，是一项用于检查排尿功能是否正常的辅助检查方法。肌酐是肌肉在人体内代谢的产物，可以反映肾小球的滤过功能。白细胞具有吞噬异物并产生抗体的作用、机体损伤的治愈能力、抵御病原体入侵的能力、对疾病的免疫抵抗力等作用，白细胞计数越高，表明体内有细菌感染可能性越大，有炎症的表现。其中，谷丙转氨酶、血尿素氮、肌酐和白细胞计数是药物安全性指标。

如图8和图9所示，组内比较分析发现，益生菌组和安慰剂组在治疗前与治疗后血液中LDL-C和IL-6含量均极显著下降(P<0.0001)，表明益生菌组与安慰剂组冠心病患者服用药物均可以降低血液中胆固醇和炎症因子含量。组间分析发现在治疗前血液中LDL-C和IL-6含量无显著性差异，服用乳双歧杆菌Probio-M8至治疗结束时益生菌组血液中LDL-C和IL-6含量极显著低于安慰剂组(P<0.0001，P＝0.0014)。谷丙转氨酶、血尿素氮、肌酐和白细胞计数在益生菌组与安慰剂组间均无显著性差异，见表1。

表1血液指标

综上所述，服用乳双歧杆菌Probio-M8可降低冠心病患者血液中的LDL-C和IL-6，进一步降低冠心病的发病风险；乳双歧杆菌Probio-M8安全性良好，对肝功能、肾功能、血常规无负面影响。

由以上方案可知，本申请提供一株可缓解和治疗冠心病的乳双歧杆菌Probio-M8及其应用。本申请通过临床人群试验表明，乳双歧杆菌Probio-M8安全性良好，可降低冠心病患者焦虑、抑郁情绪，缓解患者心绞痛症状，并降低血液中低密度脂蛋白胆固醇含量。对于缓解和治疗冠心病及焦虑、降低胆固醇水平具有明显效果，在制备缓解和治疗冠心病的产品和功能性产品中具有巨大的应用前景。

本领域技术人员在考虑说明书及实践这里公开的申请后，将容易想到本申请的其它实施方案。本申请旨在涵盖本申请的任何变型、用途或者适应性变化，这些变型、用途或者适应性变化遵循本申请的一般性原理并包括本申请未公开的本技术领域中的公知常识或惯用技术手段。说明书和实施例仅被视为示例性的，本申请的真正范围和精神由下面的权利要求指出。

应当理解的是，本申请并不局限于上面已经描述并在附图中示出的精确结构，并且可以在不脱离其范围进行各种修改和改变。本申请的范围仅由所附的权利要求来限制。